中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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抗酸性同功铁蛋白重组免疫细胞因子的制备及其特性研究
目的构建并表达抗酸性同功铁蛋白(acidic isoferritin, AIF)的免疫细胞因子,并研究其抗肿瘤特性. 方法在克隆小鼠趋化因子CXCL10全长基因的基础上,构建抗AIF单链抗体与CXCL10组成的重组免疫细胞因子,并在小鼠骨髓瘤细胞NSO中进行表达;使用流式细胞技术(FCM)和体外细胞趋化试验等方法来研究该重组蛋白的抗肿瘤特性. 结果重组免疫细胞因子(IP10-scFv)真核表达产物的相对分子质量(Mr)约为41.1×103,纯化后的蛋白浓度为68 mg/L,抗体亲和常数(KDIP10-scFv)为2.28×10-8 mol/L.IP10-scFv能够特异识别分泌AIF的SMMC 7721细胞,并能与激活后的小鼠T淋巴细胞表面CXCR3受体特异性结合,对小鼠激活的T淋巴细胞有较强的趋化作用. 结论成功地制备了抗AIF单链抗体与趋化因子CXCL10构成的重组免疫细胞因子,该免疫细胞因子是肿瘤治疗的潜在制剂.
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烫伤法克隆小鼠巨噬细胞来源的趋化因子基因
巨噬细胞来源的趋化因子(macrophage-derived chemokine, MDC)是1997年由Godiska R 等首次从人单核细胞来源的巨噬细胞cDNA克隆随机片段分离得到的,具有趋化单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和TH2细胞等功能.鼠MDC曾称为ABCD-1.MDC也称为CCL22,属于CC趋化因子家族,已经证实的MDC受体是CCR4.
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实验性脑脓肿组织中G蛋白信号系统相关基因的克隆
目的筛选和克隆实验性脑脓肿的早期相关基因,研究脑组织对病原菌的免疫反应过程中所涉及的分子机制. 方法通过脑组织内直接注射金黄色葡萄球菌获得大鼠脑脓肿,利用mRNA荧光差异显示PCR技术比较脑脓肿组脑组织中mRNA的表达与正常对照组、手术对照组之间的差异,获得的差异表达cDNA片段经克隆、测序及BLAST软件进行同源性比较分析,并采用Northern杂交和RT-PCR进行鉴定. 结果共获得25条差异表达的cDNA条带,经Northern杂交和RT-PCR鉴定其中17条为阳性(阳性率为68%).克隆和测序结果显示其中3个差异表达片段与G蛋白相关的细胞信号传导系统有关:片段G18-1代表的鸟苷二磷酸解离抑制因子3(GDI3)、片段G20-1代表的交集素(ITSN)以及片段C2-1代表的Ras相关蛋白(Rap1). 结论在实验性脑脓肿早期GDI3、ITSN和Rap1差异表达,推导G蛋白信号系统的激活可能与脑脓肿的发病相关.
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新型双启动子表达质粒pCMVnir的构建及其促进基因免疫效果的研究
目的构建一种新型双启动子表达载体pCMVnir,研究其与胞内寄生菌联合应用促进基因免疫效果的作用. 方法细菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB为厌氧诱导启动子,根据nirB启动子的结构,设计合成改良的nirB,置换三启动子载体pTriEx-4中的T7Lac和P10启动子,而保留其CMVie启动子,获得携带CMVie和nirB双种启动子的新型载体pCMVnir,或称为pCN.构建pCN-EGFP和pCN-DsRed两种报告质粒,分别转化S. SL3261、E.coli DH5α和CHO等细胞,检测报告基因的表达情况以确定两种启动子的活性.pCN-EGFP转化S. SL3261,接种BALB/c小鼠,定期解剖小鼠收集黏膜相关淋巴组织,观察重组细菌和载体DNA在细胞中的定植及稳定性.免疫接种小鼠,并定期收集小鼠血清和阴道分泌物,以重组rEGFP为抗原,用ELISA方法研究其增强免疫应答的能力.并构建人乳头瘤病毒L1E7双启动子pCN-16L1E7及对照单启动子载体pCMV-16L1E7和pNir-16L1E7,对比三者诱导黏膜免疫的差别. 结果双启动子表达载体pCMVnir可在细菌和真核细胞中有效表达报告基因,在细菌中可形成肉眼可见的荧光菌落和沉淀,转染CHO等真核细胞能够表达荧光蛋白,表明pCMVnir载体的两种启动子都有活性,其中nirB活性是受兼性厌氧调控的.pCMVnir与细菌有较好的相容性,重组细菌可在动物体内有限复制和定植达6周,质粒可在细菌中稳定存在.以rEGFP为抗原检测发现pCN-EGFP诱导的免疫反应高于常用的单启动子载体pCMV-EGFP.人乳头瘤病毒双启动子载体pCN-16L1E7诱导的免疫反应也高于其他单启动子载体. 结论双启动子表达载体pCMVnir与减毒胞内寄生菌匹配应用,能够提高抗原表达量及增强基因免疫反应的强度.并可作为一般基因克隆和表达载体,特别是作为原核表达载体,不用添加诱导物,即可获得大量表达.
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核因子-κB活化与细胞因子的平衡在实验性肺间质纤维化中的作用
特发性肺间质纤维化是一种原因不明的间质性肺炎,发病的机制不清,尚无有效的治疗方法.本研究探讨特发性肺纤维化过程中NF-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)的活化与TH1/TH2细胞因子平衡之间的关系.
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dinB基因表达对大肠杆菌的作用
dinB基因编码的Pol IV是一种错误趋向性(error-prone)DNA聚合酶.利用超表达(overexpression)方法对dinB基因的生物学意义进行了初步的探索.
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肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn的检测
目的研究耐药基因ermB、mefA、tetM与转座子整合酶基因intTn在携带肺炎链球菌的北京儿童中分布特点. 方法对185株呼吸道感染患儿鼻咽部分离的肺炎链球菌进行以下检测:E-test、琼脂稀释或纸片扩散法测定对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类等15种抗生素的药物敏感性.PCR检测大环内酯类耐药基因ermB和mefA,四环素耐药基因tetM以及转座子Tn1545的整合酶基因intTn. 结果 185株肺炎链球菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、四环素和复方磺胺甲基异唑的耐药率较高,分别为78.9%、76.2%、86.0%和78.7%,对阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢曲松和头孢呋辛耐药率较低,分别为2.2%、15.5%、2.8%和14.1%.所有红霉素耐药株均检出ermB和/或mefA,其中79.5%为ermB阳性,17.8%为ermB和mefA同时阳性,2.7%为mefA阳性.tetM基因在分离株中的阳性率是87%,四环素耐药组的tetM基因携带率是96.9%,高于敏感组(26.9%).四环素耐药株的红霉素耐药率(90.0%)亦高于敏感株组(11.5%).87.6%的肺炎链球菌存在intTn基因,intTn基因阳性组的红霉素、四环素、氯霉素、复方磺胺甲基异唑和环丙沙星的耐药率较intTn基因阴性组高.分离株常见的基因组合是intTn+tetM+ermB,占58.4%. 结论北京地区呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌耐大环内酯类抗生素的主要原因是ermB编码的23S rRNA甲基化酶致靶位改变.tetM基因编码蛋白质的核糖体保护作用,是肺炎链球菌四环素耐药的重要机制.接合性转座子Tn1545的存在与菌株的红霉素和四环素耐药关系密切,可能是肺炎链球菌多重耐药的重要机制之一.
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嗜肺军团菌在武钢青山地区的发现及其检测和防治对策
军团病是因1976年在美国费城退伍军人年会中首次发现急性发热性肺部疾患而被命名的.患者以呼吸道感染为主,死亡率较高.嗜肺军团菌(Legionella pneumophila, Lp)是军团菌属的代表种,是近20年来新发现的传染病之一.我们对武钢青山地区10家单位使用1个月后中央空调系统冷却塔水中的嗜肺军团菌进行检测调查,首次发现嗜肺军团菌的存在,并了解其分布特征和菌型特征,制定出相应的防治策略.
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HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变菌株的构建及其功能研究
目的构建HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变株,初步研究EAggEC菌株携带的耶尔森菌HPI毒力岛合成铁载体Ybt的功能. 方法以EAggEC17-2为出发菌株,irp8基因部分序列作为同源重组的一侧序列,irp5基因序列作为同源重组的另一侧序列,中间插入有氯霉素(Cm)抗性基因(cat基因)标记.通过接合转移和同源重组,构建了缺失约24 kb的HPI毒力岛功能核心区区域EAggEC17-2的全岛缺失株EA85.应用流式细胞技术(FACS)检测指示菌株WA-CS irp1::KN(pCJG3.3N)荧光强度的变化情况,对EA85缺失株和出发菌株进行了合成Ybt的功能比较研究.结果成功构建了EAggEC17-2 HPI全岛缺失株EA85.EAggEC17-2菌株具有表达Ybt的功能,而缺失株EA85丧失了合成Ybt的能力. 结论 EAggEC17-2 HPI毒力岛的缺失,使Ybt的合成彻底阻断.EAggEC 17-2具有的合成Ybt的功能是由其染色体携带的HPI毒力岛所决定的.
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松辽平原达乌尔黄鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌基因分型
为了研究松辽平原达乌尔黄鼠鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)的基因组成,采用PCR技术对分离自该疫源地88株鼠疫菌进行了基因分型,其中黑龙江4株、吉林43株、辽宁4株、内蒙37株,鼠疫菌DNA均由青海省地方病预防控制所鼠疫菌专业实验室提供.
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肺炎克雷伯菌DHA-1型质粒AmpC酶全编码基因克隆、表达及序列分析
目的以我院临床分离的肺炎克雷伯菌KP1为研究对象,对其所产生的质粒AmpC酶编码基因的序列进行研究. 方法采用聚合酶链反应(PCR),用DHA-1型AmpC酶引物扩增KP1接合子中AmpC酶全编码基因,并克隆到pUC118载体中进行表达,对PCR产物进行测序,分析其基因型别. 结果肺炎克雷伯菌KP1菌株的转移接合子所含有的质粒AmpC酶为DHA型,编码基因序列与GenBank中DHA-1编码基因序列的同源性为100%. 结论哈尔滨地区临床分离肺炎克雷伯菌有可转移性DHA-1型AmpC酶的存在.
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VNTR技术用于安徽省耐药结核分支杆菌基因分型的初步研究
目的探讨VNTR(variable number of tandem repeat)技术在安徽省耐药结核分支杆菌基因分型中的应用. 方法初步选取13个分型效果较好的VNTR基因位点.应用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,建立检测耐药结核分支杆菌DNA指纹多态性的方法,分析耐药结核分支杆菌DNA多态性. 结果共对78株耐药结核分支杆菌的13个VNTR位点进行了检测,根据这些菌株的指纹多态性特征,共分为4个基因型(Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型),分别为Ⅰ型3.8%(3/78)、Ⅱ型6.4%(5/78)、Ⅲ型10.3%(8/78)、Ⅳ型所占比例大,为79.5%(62/78).在Ⅳ型菌中,耐药菌株主要为耐多药(结核分支杆菌至少耐异烟肼和利福平两种药)和单耐利福平菌株,其所占比例分别为45.8%和22.6%. 结论本资料分析表明,安徽省耐药结核分支杆菌的传播似以Ⅳ型菌株为主,应加强此型菌株流行的监控.
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天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因片段克隆和序列分析
目的了解天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 S基因的分子特征. 方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒,命名为TJJ16,提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RNA,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR扩增S基因片段,纯化后克隆于pMD-18T载体,测定核苷酸序列并进行分析. 结果天津地区首次从社鼠中分离出汉坦病毒TJJ16,其S基因片段全序列长为1701 nt.只有1个编码N蛋白的开放读码框架(ORF),起始密码子为第37 nt,终止于1326 nt,推导其编码的蛋白长为429个氨基酸.经核苷酸系统发生树分析,TJJ16株应归属为汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与HTN型新亚型A16株同属一个亚型. 结论 TJJ16病毒株的分离与S基因片段序列分析,证实在天津市鼠间存在HTN型汉坦病毒感染,对临床和流行病学的研究具有重要意义.
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G145R突变后HBsAg"a"决定簇合成肽的免疫学特性分析
目的研究G145R突变后乙肝表面抗原(HBsAg)"a"决定簇合成肽的免疫学特性改变情况. 方法首先合成2条短肽P1-wt和P2-145R,分别代表野毒株和G145R突变后HBsAg"a"决定簇合成肽.然后用β-巯基乙醇(2-ME)变性试验以及用乙肝疫苗标准品制备的小鼠多抗血清研究2条合成肽的空间构象以及抗原性异同.后用等量合成肽免疫小鼠,用酶免疫法、竞争抑制试验和Western blot试验等研究G145R突变后"a"决定簇合成肽的免疫原性改变.结果合成肽P1-wt和P2-145R用2-ME温和变性后,PAGE结果表现为相对分子质量(Mr)为4×103左右的单一条带,而变性前2条合成肽均表现为Mr是从4×103到30×103的弥漫条带,主带位置在5×103和10×103,分别相当于二聚体和四聚体位置;用HBsAg的多克隆抗体(anti-HBs)检测合成肽的抗原性,结果在固定抗原量的前提下,在抗体1∶32 000稀释时仍可检测到P1-wt的阳性结果,而当同一抗体稀释到1∶8000时,P2-145R检测结果即为阴性.合成肽P2-145R免疫小鼠产生的抗体与P1-wt合成肽的反应滴度比与P2-145R合成肽本身的反应低4~8倍. 结论针对HBsAg"a"决定簇合成肽可自发形成一定的空间构象,G145R突变株的HBsAg"a"决定簇的抗原性和免疫原性与野毒株相比发生了明显改变,为正确评价G145R变异株的流行危害以及现行疫苗的保护效果提供了实验依据.
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呼吸道合胞病毒逃逸株对单克隆抗体预防的抗性比较
目的 Palivizumab(PZ)是目前临床使用的惟一一个预防人类感染性疾病的单克隆抗体,本研究评估不同逃逸株在棉鼠体内对PZ预防的抗性. 方法在细胞培养系统中筛选获得PZ逃逸株,测定其全长F基因序列,用微量中和法评估逃逸株对PZ的抗性,在棉鼠模型体内观察逃逸株对PZ预防的抗性差异. 结果筛选获得的PZ逃逸株于F蛋白内第268位氨基酸(F212)和272位氨基酸(MP4、MS312、MS412和MS512)发生替换.用Western blot检测发现所有逃逸株PZ识别位点抗原性改变.F212复制能力受损,而其他逃逸株复制能力与A2母株接近.与A2原型株比较,MP4和MS412在体内外对PZ的中和活性具完全抗性.F212体外对PZ中和活性显示不完全抗性,但大剂量PZ在棉鼠体内仍能有效预防F212感染. 结论不同PZ逃逸株体内对PZ的预防效应可能具有不同程度的抗性,某些逃逸株即使在PZ筛选压力下产生,亦不一定导致临床后果.
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乙型脑炎病毒TaqMan PCR检测方法的建立及初步应用
目的利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)实时荧光PCR检测方法,初步应用于蚊虫媒介的JEV监测. 方法根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其NS5基因区段设计JEV特异的引物与探针;优化Mg2+浓度和引物浓度比例,并利用11株JEV和7株相关病毒株考核检测体系的保守性、特异性、灵敏性和稳定性;利用体外转录的病毒RNA和定量的病毒样品,建立相应的定量分析模型;初步应用于蚊虫媒介的监测与检测分析. 结果 Mg2+优化浓度为5 mmol/L,上下游引物浓度比例为4:1,引物探针具有良好的保守性和特异性,灵敏度为10 PFU/ml,稳定性分析表明,同一样品Ct值的重复检测5次,变异系数均小于5%;绘制两种标准曲线,构建了JEV基因拷贝数、病毒滴度为分析指标的定量分析模型,检测蚊虫标本结果显示,TaqMan PCR方法较病毒分离法敏感、快捷、简便. 结论本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的JEV TaqMan PCR检测方法,为蚊虫媒介检测奠定了基础,为乙型脑炎的预防控制和脑炎相关疾病的诊断与鉴别诊断提供了一种技术手段.
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抗γ公共链抗体抑制T淋巴细胞增殖的试验
目的探讨抗γ公共链抗体体外抑制T细胞增殖的机理. 方法分离BALB/c、C57BL/6脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养(MLC).第1组于MLC同时加入抗γ公共链抗体;第2组于MLC第3天加入抗γ公共链抗体.MLC为阳性对照,单独BALB/c小鼠脾细胞培养为阴性对照.1~5 d取培养细胞,检测培养细胞的增殖(羧基荧光素乙酰乙酸CFSE染色)、细胞凋亡(PE-CD3, FITC-annexin-Ⅴ)、细胞周期(PI).脾细胞survivin表达通过免疫细胞染色方法检测. 结果阳性对照在第3天开始检测到明显的分裂峰而第1、2组都未出现分裂峰.第1、2组在第1~2天未发现细胞凋亡增加,分别于第3、4天检测到部分T细胞凋亡、M期细胞数下降及凋亡细胞数增加;第2组与阳性对照组M期细胞的百分比例差异有统计学意义[(25.97±12.85)% vs (6.36±4.81)%, P=0.008)].MLC第3天后,在阳性对照组检测到survivin表达;阴性组及试验组均未检测到survivin,其中阳性对照组与第1组的survivin阳性细胞数百分比差异有统计学意义[(18.00±14.13)% vs (1.57±1.61)%, P=0.043]. 结论阻断γ公共链可以通过诱导同种反应性T细胞凋亡途径从而抑制T细胞增殖.
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SARS病毒N蛋白特异性单链抗体的筛选
目的利用大容量人源性SARS单链抗体库筛选N蛋白的特异性单链抗体. 方法利用RT-PCR的方法克隆了SARS病毒的N蛋白基因,克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中进行表达并经离子交换色谱纯化后得到了纯度达95%以上的N蛋白,然后以此蛋白包被25 cm2组织培养瓶,对SARS单链抗体库进行先松弛,后严谨的筛选、富集,进行4轮筛选后对所筛的抗体进行ELISA鉴定. 结果经过4轮的筛选、富集,得到了1株高亲和力的N蛋白单链抗体N18. 结论在对SARS疾病的早期检测或筛查、SARS病毒的生活周期及发病机理的研究中N18将起到重要的作用.
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从噬菌体库中筛选抗SARS病毒S蛋白的Fab中和活性抗体研究
目的从SARS病毒噬菌体抗体库中筛选出具有中和活性的抗S蛋白Fab片段抗体. 方法 ELISA方法对抗体库进行富集筛选及人源抗体克隆结合活性的测定,竞争ELISA初步筛选有中和活性的抗体,中和试验进一步确定中和活性,进而对其序列进行测定和分析. 结果特异性富集了抗S蛋白噬菌体抗体,竞争ELISA筛选出两株抗体可部分阻断中和抗体2C5与S蛋白的结合,中和试验确定其具有一定中和活性,编号为M1A和P8A,测序结果表明它们为两株不同的抗体克隆. 结论筛选获得了两株抗体可部分中和SARS病毒活性,它们的获得为探索SARS病毒感染的被动免疫治疗打下了一定基础.
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IL-7对中国HIV/AIDS患者病程的影响
目的了解IL-7对中国HIV/AIDS患者病程的影响. 方法应用超敏感酶免法对66例中国HIV/AIDS感染者及8例健康对照者血浆IL-7水平进行定量检测,分析其与CD4+ T细胞绝对值、血浆病毒载量及HIV表型的相关性;并且在体外研究rhIL-7对人PBMC中T淋巴细胞增殖及CXCR4表达的影响. 结果中国HIV/AIDS患者血浆IL-7水平高于健康对照(P<0.05),与CD4+ T细胞绝对值负相关(P<0.01),与血浆病毒载量正相关(P<0.05).rhIL-7可在体外促进T淋巴细胞增殖反应及CXCR4表达. 结论中国HIV/AIDS患者血浆IL-7水平升高,且与疾病进展密切相关,可作为疾病进展的相关标志之一.
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塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节
目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus, SFV)衣壳蛋白5'翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响. 方法将SFV衣壳蛋白(capsid, C蛋白)基因的5'端102 bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMV-RepC.将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag.同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag.Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响.用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答. 结果衣壳蛋白5'翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平.结论 SFV C蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应.
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经血感染HIV/AIDS患者pDCs与艾滋病疾病进展关系的研究
目的了解中国HIV/AIDS患者外周血中类浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cells, pDC)绝对值的变化,分析其与HIV感染及疾病进展的关系. 方法采集56例未经治疗的HIV/AIDS患者及34例健康人抗凝静脉血,采用流式细胞仪单平台检测技术,分析计算三色荧光抗体标记的全血中pDC(Lin1-/HLA-DR+/CD123+)绝对值. 结果 AIDS组pDC绝对值为3.31个/μl(0.31~6.46个/μl),显著低于正常对照组、HIV慢性感染组及HIV感染疾病长期不进展(long term non-progressors, LTNP)组(P<0.01).HIV慢性感染组pDC绝对值为5.27个/μl(2.25~9.80个/μl),显著低于正常对照组及LTNP组(P<0.01).LTNP组pDC绝对值为9.95个/μl(6.16~20.88个/μl),显著高于正常对照组(7.84个/μl, 3.45~13.97个/μl, P<0.01).56例HIV/AIDS患者pDC绝对值与CD4+ T淋巴细胞绝对值及百分率呈显著正相关(r=0.422, P<0.01; r=0.488, P<0.01),与病毒载量呈显著负相关(r=-0.444, P<0.05). 结论 HIV/AIDS患者pDC数量减少,并且随疾病进展逐渐下降;HIV感染LTNP的血pDC数量显著高于HIV慢性感染者及AIDS患者,甚至高于正常对照.提示外周血pDC在控制HIV感染方面有重要作用,与艾滋病疾病进展明显相关.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 03 04 06 |
1998 | 01 02 03 04 05 06 |