中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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肿瘤患者外周血细胞毒性CD3-CD56+ NK细胞的扩增
如何提高NK细胞体外增殖效率和细胞毒活性是其应用于临床需要解决的一个主要问题.近Carlens等人建立了一种较为简单的从健康成人PBMC中诱导大量扩增CD3-CD56+ NK细胞的方法,并将获得的以CD3-CD56+ NK细胞为主的细胞群体称为细胞因子诱导的自然杀伤细胞 (cytokine-induced natural killer,CINK).本研究在此基础上用改进的方法从恶性肿瘤患者PBMC中扩增CINK细胞,并比较了其与CD3单抗活化杀伤细胞(CD3AK)或细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抗肿瘤活性的作用.
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6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间的黏附性增强
目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对人T淋巴母细胞Jurkat生物学行为的影响. 方法采用反义核酸技术抑制细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达.用PCR检测转导基因在基因组中的整合.用单抗6A8作探针,Western印迹和免疫荧光染色流式细胞术检测细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达状况.用Con A结合试验检测细胞蛋白质的糖基化改变.普通光学显微镜观察细胞的形态.用DNA芯片技术分析AS细胞和M细胞mRNA表达的差异.用RT-PCR和免疫荧光染色流式细胞术验证基因芯片结果的可靠性. 结果制备了6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS).与对照细胞(野生型细胞W和转导空载体的细胞M)相比,AS细胞在培养中黏附成大团块.DNA芯片分析见与M细胞相比,AS细胞中有19个基因的表达上调,20个基因的表达下调.上调的基因中有一些与细胞间黏附相关,如CD54、CD11a、CD24、CD82、整合素αX、整合素α7、整合素αE、IL-1R、IL-2Rγ和TNFSF9.RT-PCR肯定了DNA芯片分析的可靠性.免疫荧光染色流式细胞术进一步肯定了CD54和CD11a在AS细胞表达的上调. 结论 6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Jurkat细胞间黏附增强,CD54和CD11a等黏附分子表达的增高可能与此相关.
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干扰素及其诱导蛋白在系统性红斑狼疮患者中的表达
应用寡核苷酸表达基因芯片技术检测了10例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞的基因表达谱,与正常对照外周血的基因表达谱作了比较分析.
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抗CⅡTA RNaseP(M1-3408-GS)的生物学活性
目的通过抗CⅡTA RNaseP抑制HeLa细胞表面MHCⅡ分子的表达. 方法 M1-RNA是RNaseP的催化活性单位,从包含M1-RNA的pTK117质粒克隆抗CⅡTA RNaseP(M1-3408-GS),定向插入腺相关病毒载体psNAV(psNAV-M1-3408-GS); 以RT-PCR从Raji细胞株克隆靶基因模板,插入pGEM-7zf(+)载体(pGEM-3176).psNAV-M1-3408-GS和pGEM-3176分别进行体外转录和体外切割实验.通过纳米载体介导psNAV-M1-3408-GS质粒稳定转染HeLa细胞,应用流式细胞术检测其表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA mRNA水平. 结果 M1-3408-GS与pGEM-3176体外切割产物电泳见预期切割条带.M1-3408-GS+HeLa细胞与对照组比较,其表面HLA-DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了79.21%、90.31%及48.30%;同时诱导型CⅡTA mRNA含量减少. 结论抗CⅡTA核糖核酸酶P(M1-3408-GS)有可能发展为新一代抑制自身免疫疾病的核酸药物.
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VEGF受体结合抑制肽的筛选及其特性鉴定
目的筛选能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体结合的VEGF模拟短肽,探讨小分子短肽作为血管内皮细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗的可行性. 方法以抗-VEGF单克隆抗体分别对噬菌体随机7肽、12肽库进行筛选.通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定.用噬菌体克隆免疫小鼠检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体,研究小鼠抗血清、噬菌体表达的7肽和12肽以及人工合成7肽对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)生长的抑制作用. 结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:GWYYDAL、VASAVFYSALVE.这两种噬菌体短肽免疫小鼠能激发产生高效价的抗-VEGF抗体.噬菌体表达的7肽和12肽对HUVEC的生长有明显的抑制作用.由短肽GWYYDAL阳性克隆免疫的抗血清对VEGF诱导的内皮细胞生长起抑制作用,人工合成的7肽(GWYYDAL)呈剂量依赖性阻拮VEGF促HUVEC增殖作用. 结论从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽GWYYDAL、VASAVFYSALVE模拟了VEGF的抗原表位,为研究VEGF受体结合抑制肽和设计肿瘤疫苗奠定了实验基础.
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小鼠TLR3真核表达质粒的构建及其活性初步鉴定
目的克隆、表达小鼠TLR3并进行功能鉴定. 方法用聚合酶链反应技术扩增得到mTLR3 cDNA,经酶切后将其克隆到真核表达质粒pBabe-puro,转染L929细胞,细胞裂解液经免疫沉淀后,SDS-PAGE和免疫印迹检测蛋白表达,并用免疫组化技术观察polyI∶C刺激、经TLR3介导的对IRF3的激活作用. 结果克隆得到mTLR3 cDNA,构建重组体后转染细胞后表达的蛋白质相对分子量与预计相符,并能识别双链RNA类似物polyI∶C,诱导IRF3核转位. 结论表达的小鼠TLR3具有生物学活性,为进一步研究TLR3介导的信号通路及其在抗病毒免疫中的作用打下基础.
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中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定
目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因,克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体的基因组DNA,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPL1表达情况.分别用兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性.分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPL1血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用. 结果上述17株钩体均具有OmpL1基因,但至少可分3种基因型:OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3.与文献报道比较,所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3基因核苷酸序列同源性分别为93.87%～94.08%、89.82%～100%和80.89%～81.72%,其氨基酸序列同源性分别为93.13%～98.75%、91.87%～100%和85.63%～88.44%.IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1-E.coliBL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E.coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%.rOMPL1/1和rOMPL1/2均能与兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应,免疫家兔可获得抗体.兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1∶2～1∶32,1∶2～1∶16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A.1细胞. 结论所检测的钩体均有OmpL1基因,但至少可分为3种不同的基因型.所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性.rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集抗体,并具有钩体黏附阻断的作用.
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儿童幽门螺杆菌感染的T淋巴细胞亚群变化
幽门螺杆菌(H.pylori)是上消化道疾病的主要致病菌,与慢性活动性胃炎、胃十二指肠消化性溃疡的发生密切相关.为研究H.pylori感染对儿童免疫功能的影响,对98名6～14岁儿童采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹法联合检测H.pylori抗体以了解H.pylori感染状态,并通过流式细胞分析仪进行外周血的T淋巴细胞亚群测定,旨在了解H.pylori感染时儿童的免疫功能状态,供制订防治策略参考.
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嗜酸乳杆菌对链霉素处理小鼠感染大肠杆菌O157∶H7的预防和治疗作用的观察
目的观察嗜酸乳杆菌对小鼠感染大肠杆菌O157∶H7的可能治疗作用. 方法使用口服链霉素处理的BALB/c小鼠为模型,在大肠杆菌O157∶H7 88-2364感染前或后,在不同时间经口给以嗜酸乳杆菌LAI,观察试验小鼠的临床症状、肠道和肾脏的病理改变、排菌时间以及粪便中志贺毒素对Vero细胞的毒性作用等. 结果发现口服嗜酸乳杆菌可以明显降低感染了大肠杆菌 O157∶H7小鼠的死亡率,降低通过粪便排泄病原菌的时间,以及降低粪便标本对Vero细胞的毒性作用. 结论口服嗜酸乳杆菌对感染大肠杆菌O157∶H7的小鼠有预防和治疗作用.
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幽门螺杆菌cagE基因在不同胃肠疾病中的分布及其临床意义
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)的cag致病岛(cag pathogenecity island, cag PAI)被认为是主要的疾病相关毒力因子,与胃上皮细胞IL-8的分泌相关.研究表明,cagE基因位于cag PAI的下游,是cag PAI存在的标志,与H.pylori感染后胃黏膜细胞因子IL-8的合成释放及严重的胃黏膜炎症相关[1].cagE基因在我国患者中的分布特点及与胃肠道疾病的关系尚未完全明确,我们应用两对不同引物扩增临床分离菌株cagE片段并观测胃黏膜的炎症程度,初步评价该基因与不同H.pylori相关胃肠道疾病的关系.
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活性氮类自由基参与SARS病毒感染猕猴肺损伤
重症急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome, SARS)的病原体已得到确认[1],但SARS发病机理尚不清楚,自由基在SARS发病过程中的作用缺乏直接的实验证明.本文主要就SARS病毒感染猕猴引起肺损伤中的活性氮类自由基(reactive nitrogen species, RNS)作用进行初步探讨.
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博尔纳病病毒与慢性格林-巴利综合征
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是单股负链RNA病毒,能引起多种动物持续性中枢神经系统感染,导致免疫介导的脑脊髓炎,并与某些人类神经精神疾病有关.本研究旨在探讨BDV感染与格林-巴利综合征(GBS)发病的关系.
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乙型肝炎病毒基本核心启动子及前C区突变与基因型的关系
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基本核心启动子(BCP)及前C区突变与基因型之间的关系. 方法随机选取113例慢性HBV感染者外周血,采用INNO-LiPA法测定BCP T1762/A1764双突变及前C区A1896突变,测定HBV S基因序列明确基因型. 结果在C基因型感染者中BCP T1762/A1764双突变率明显高于B基因型感染者,差异有显著性(34.2%∶10%,χ2=6.74,P＜0.01),而前C区A1896突变率在B基因型和C基因型感染者中差异无显著性(2.5%∶4.1%,χ2=0.00,P＞0.05). 结论与B基因型相比,C基因型感染者更易发生BCP T1762/A1764双突变.
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乙型肝炎病毒多表位抗原基因的设计、合成及表达
目的设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗. 方法设计并合成一条乙型肝炎病毒(HBV)多表位抗原基因(P/T),该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列,和分别来自乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎DNA聚合酶的其它4个连续的HLA限制性抗原表位的核苷酸序列.基因合成后克隆入载体质粒pWR450-1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导P/T基因与载体质粒的β-半乳糖酐酶基因融合表达. 结果成功合成并拼接出乙型肝炎多表位抗原基因P/T,阳性重组子PWR/HBV-P/T构建成功,并在大肠杆菌中融合表达出相对分子质量(Mr)约75×103的碱性蛋白质. 结论初步设计成功HBV多表位抗原基因,在大肠杆菌中可表达出具有良好抗原性的重组融合蛋白,可能是较理想的HBV预防、治疗性疫苗候选物.
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徐州地区乙型肝炎病毒基因型分布及其意义
选择我院门诊和住院病例HBV DNA阳性者共150例,其中无症状携带者、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化和肝癌各30例.其诊断均符合2000年第十次全国传染病与寄生虫病学会和肝病学分会联合修订的病毒型肝炎防治方案.150例采取静脉血,分离血清,-20℃保存.HBV DNA定量检查用Roche Lightcycler荧光定量扩增仪,试剂由深圳匹基公司提供,以104copy/ml为阳性;HBV-M用上海荣盛公司ELISA试剂;ALT的检验用英国朗道试剂.HBV基因分型方法采用微板核酸杂交-ELISA技术,由广州蓝星公司提供,其所用引物为:prime 1:3′-CCC TTC TTC GTC TGG GGT TCC-5′和prime 2:3′-ACC AAT TTA TGC CTA CAG CCTC-5′.结果判断:P/N≥3.0为阳性,P/N＜3.0为阴性(阴性对照A值小于0.05,按0.05计算).P/N值=标本A值/阴性对照A值.质量控制:选择对乙肝病毒DNA的S区序列分析所确定的B、C、D和B+C、C+D基因型病人血清作为阳性对照物,并做重复试验以证实该方法的可靠性和准确性.150例各类HBV DNA阳性乙型肝炎病人基因分型结果见表1.
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SARS定点医院工作人员红细胞CR1数量及EIIAF的变化
对我院与SARS救治相关工作人员的红细胞天然免疫黏附功能和红细胞补体Ⅰ型受体的数量进行研究,同时设立院外教师及战士等非医务人员作为对照.结果发现,SARS病区及门诊、检验医务人员的红细胞天然免疫黏附功能(EIIAF)显著低于非SARS病区医护人员及机关工作人员,密切接触未被感染的医务人员的红细胞CR1数量全部显著高于正常人群平均水平,现将具体资料报告如下:
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SARS患者血清HA、PⅢNP的测定及其临床意义
目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)的肺纤维化程度与血清纤维化指标透明质酸(HA) 、Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)的关系. 方法用放免法动态测定我院2003年2～5月收治的56例SARS患者血清HA、PⅢNP.同时结合临床特点,胸部X光片,病理切片等,分析上述血清学指标水平与肺组织纤维化之间的关系. 结果 SARS重症患者急性期、恢复期以及痊愈等不同时期,血清HA、PⅢNP水平均不同程度高于对照组(P<0.01) ,并且与一些炎症指标呈正相关关系.SARS轻症患者急性期血清HA与对照组有显著性差异(P<0.01),而恢复期及随访血清HA与对照组均无显著性差异,SARS轻症患者各期血清PⅢNP与对照组均无显著性差异. 结论对血清中HA、PⅢNP水平同时测定,可有助于SARS患者肺纤维化的诊断、活动性的观察及研究肺纤维化的发病机理.
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SARS患者特异性SARS-CoV抗体变化的观察
目的研究SARS患者特异性SARS-CoV抗体IgG、IgM动态变化规律,探讨机体感染SARS-CoV后免疫应答的可能模式及流行病学意义,为科学的防治SARS提供理论依据. 方法 ELISA测定北京地区早感染SARS-CoV的3条传播链的SARS患者47例,124份血清中SARS-CoV特异性抗体IgG、IgM.其中,山西链9人,13份血清;香港链31人,84份血清;北京链7人,27份血清. 结果 3条传播链SARS患者IgM阳性率73%,IgG阳性率86%.IgM早于发病第6天出现,阳性率高峰在病程2～3周;持续时间短,1月后60%患者IgM逐渐阴转.IgG早也可在发病第6天出现,阳性率高峰在病程3～4周,3月后IgG抗体阳性率减少.机体感染SARS-CoV后,抗体出现有3种模式. 结论机体感染SARS-CoV后,近90%患者可出现特异性IgG,病程3～4周阳性率高;特异性IgM抗体在病程2～3周阳性率高,但多数只持续20～30 d.特异性IgG抗体表现3种免疫应答模式.
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变应性鼻炎患者免疫治疗前后IL-5、ECP的动态观察
在变应性鼻炎(AR)的发病过程中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、IL-5都起到了很重要的作用,而特异性免疫治疗能否改善患者体内这些细胞因子的状况,尚未见报道.我们对只有尘螨过敏的13例常年性变应性鼻炎(PAR)患者进行了特异性免疫治疗前、后血清和鼻灌洗液中ECP、IL-5和尘螨SIgE、TIgE的检测,并对其进行了相关的分析及临床意义的探讨.
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细菌进化中的基因横向转移
越来越多的证据表明,通过横向基因转移(lateral gene transfer, LGT)而获得外源DNA是细菌中的普遍现象,在很多情况下,有可能是细菌进化的关键因素[1-12].随着基因组序列信息的大量增加和基因芯片等基因组学技术的不断进步,人们已经能够追踪亲缘关系较近的细菌中某些基因的出现、消失与再现,从而探讨细菌基因组进化的一些基本规律.近年来这方面研究在沙门菌(Salmonella)属的细菌中多有报道[6,12-20].沙门菌属的细菌虽然在遗传上互相非常接近,但是在宿主和临床表现上可有很大差异,因此,特别适合于细菌基因组进化的研究.3株沙门菌的全基因组测序工作已经完成,还有一些目前正在测序之中(表1).通过序列比对就有可能找出LGT新获得的基因,并可发现不同的细菌在基因组整体水平上的差异.本文中,我们将简要地介绍沙门菌分类学的变迁及细菌基因组进化研究的新成果,然后以沙门菌为例集中探讨LGT,包括概述检测LGT的方法,后讨论LGT对进化的意义.
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抗核糖体P蛋白抗体的检测及其与系统性红斑狼疮的相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的系统性自身免疫病.以往研究提示血清中抗核糖体P蛋白抗体(anti-P)与SLE密切相关,且可能与狼疮中枢神经系统病变(CNS-SLE),尤其是狼疮精神症状有关[1].本研究将同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫双扩散法(ID)和免疫印迹法(IBT)对血清中anti-P进行检测,比较其敏感性和特异性,并评价其在SLE及CNS-SLE诊断中的价值.
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银屑病患者外周血单核细胞衍生的树突状细胞的检测
研究证明,皮肤中的DC与外周血单核细胞衍生的树突状细胞(MoDC)的细胞表型一致,由此认为银屑病皮损中数量增加的DC主要由外周血单核细胞游走到局部组织并分化而成.我们近的研究发现银屑病患者的外周血单核细胞向DC分化的能力增强.在此,我们进一步探讨银屑病患者的MoDC的吞噬功能,以正常人为对照评价它们在抗原摄取阶段的改变.
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应用emm基因序列分析对104株A群链球菌分型
目的通过emm基因序列分析对A群链球菌(GAS)进行分型,探讨T型与emm型的对应关系. 方法用引物以PCR法扩增GAS M蛋白的N末端并进行测序,确定GAS的emm型,并与T分型对照比较. 结果 (1) 104株菌株中,emm1所占比例大,为29.8%,然后依次是emm18(9.6%),emm12(7.7%),和emm69(5.8%)等.(2) T1、T12和T14/49与emm基因对应关系好,T1 16株全部对应emm1型(100%),T12对应emm12,符合率83.3%,T14/49 2株均对应emm49型;其它菌型对应关系差;同一T型可对应数个emm基因型,同一emm基因型可对应不同的T型.(3) 发现1株新的emm型菌株,序列已递交GenBank,注册号为AY347259. 结论 emm基因分型方法具有准确、快速、分辨力高的优点;我国部分地区A群链球菌emm基因分型主导型为emm1、18、12、69、110等菌型.
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胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法的建立
目的采用时间分辨荧光免疫分析技术建立高灵敏的胃蛋白酶原Ⅰ的快速全自动检测方法. 方法以PGⅠ单克隆抗体8003#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记PGⅠ单克隆抗体8016#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.采用平衡饱和法建立PGⅠ时间分辨荧光免疫分析,数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理. 结果方法的批内和批间CV分别为1.9%和4.7%,平均回收率为102.65%,灵敏度为0.05μg/L,可测范围为3.5～328μg/L,ED20、ED50和ED80分别为11.34μg/L、38.73μg/L和132.3μg/L.Eu3+标记抗体-20℃保存8个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定,临床结果与免疫放射分析法的结果相符. 结论胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法是目前胃蛋白酶原Ⅰ检测中灵敏的方法,该分析法稳定性好,具有很好的应用前景.
关键词： 时间分辨荧光免疫分析 胃蛋白酶原Ⅰ -
抗人肝癌基因工程嵌合抗体的构建及在Sp2/0细胞的稳定表达
目的构建抗人肝癌嵌合抗体,并在Sp2/0细胞中进行稳定高效表达.方法分别将HAb18轻、重链可变区基因克隆入真核表达载体pDHL构建重组载体pDHL/chHAb18.酶切及测序鉴定后,转染Sp2/0细胞,经甲氨蝶蛉(MTX)筛选获得抗性克隆.采用有限稀释法单克隆化后持续MTX加压培养.通过ELISA筛选高效表达的单克隆细胞株.表达产物纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测其抗原结合特异性. 结果成功构建了重组嵌合IgG抗体chHAb18的真核表达载体pDHL/chHAb18.转化Sp2/0细胞后,初步筛选得到了高效表达chHAb18的细胞株.经MTX加压培养,1株细胞的chHAb18表达量达到10mg/L.SDS-PAGE和Western blot检测结果表明:目的蛋白分子质量约为160×103,还原后为2条带,分子质量约为52×103和27×103.上述蛋白条带均与羊抗人IgG抗体特异结合. 结论成功构建了抗人肝癌基因工程嵌合抗体chHAb18,并在骨髓瘤细胞中获得高效表达.为其进一步的应用研究奠定了基础.
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抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡及其机制探讨
目的研究抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡的效应及其机制. 方法台盼蓝拒染法观察抗CD71人-鼠嵌合抗体对K562细胞生存的影响;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K562细胞的作用;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K562细胞凋亡,以Annexin Ⅴ检测其凋亡率及进行细胞周期分析;并检测胞浆中细胞色素C和活化的caspase-8的相对含量. 结果抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K562细胞的增殖作用,且二者抑制作用差异无显著性(P＞0.05).经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K562细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变,细胞周期分析可见其将细胞周期阻止在G1期,胞浆中细胞色素C含量增加而活化的caspase-8的含量不增加. 结论抗CD71人-鼠嵌合抗体可通过线粒体死亡途径诱导K562人红白血病细胞凋亡,其诱导凋亡可能与其干扰细胞铁离子转运有关.
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小鼠趋化因子受体CXCR3胞外N末端的原核表达、抗体制备及初步应用
趋化因子受体为与G蛋白偶联、含有7个跨膜区的跨膜蛋白,依其结构特点又可分为多个亚类,其中CXCR3主要表达于激活的T细胞、B细胞和NK细胞表面,其高表达是淋巴细胞发生定向迁移和募集的重要条件,在炎症浸润、细胞迁移、血管形成、移植排斥反应和某些肿瘤的发生中都起着重要的作用.1
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抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体的胞内可溶表达、纯化及体外活性测定
目的研究抗人卵巢癌(ovarian carcinoma, oc)×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体(single chain trispecific antibody, scTsAb)在大肠杆菌中的可溶表达与纯化及纯化后产物的活性测定,从而为其应用于卵巢癌治疗的临床研究打下基础. 方法将已构建的scTsAb表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) Star菌株,采用低温(30℃)、低剂量IPTG(0.2mmol/L)诱导,进行胞内可溶表达.根据抗卵巢癌三特异抗体(oc TsAb)等电点较高(pI9.0),而菌体蛋白大多为酸性蛋白的特点,利用DEAE弱阴离子交换层析(pH8.0)进行一步纯化,并利用ELISA及FACS的方法检测纯化后抗卵巢癌三特异抗体的活性. 结果 (1) SDS-PAGE鉴定低温诱导时可溶比例达到56%.(2) 绝大多数菌体蛋白被DEAE层析柱吸附,而抗卵巢癌三特异抗体在穿透液中流出, SDS-PAGE检测纯度达到90%.(3) ELISA结果显示纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与重组CD28纯抗原,Jurkat(CD3+)细胞膜提取抗原,SKOV3细胞膜提取抗原均有特异性结合.(4) FACS结果证明纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与Jurkat(CD3+)活细胞、SKOV3活细胞有特异性结合. 结论低温诱导胞内可溶表达的抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体经弱阴离子交换层析一步纯化后仍保持原有免疫学活性,这为大量制备样品,用于进一步生物活性鉴定及临床实验提供了技术基础,也为制备类似的基因工程抗体提供了参考.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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