利用CRISPR技术下调T细胞功能负调节基因PD-1表达的研究

目的：探索慢病毒介导的成簇的规律间隔短回文重复序列( CRISPR)技术下调原代T细胞PD-1基因的可行性。方法将多个PD-1靶向序列作为sgRNA序列体外合成后,分别插入带有cas9基因的慢病毒载体 pLentiCRISPR 中,包装慢病毒并感染原代 T 细胞,通过流式细胞术分析CRISPR技术敲除对PD-1表达的影响。结果构建了6个靶向基因PD-1不同位点的pLentiCRISPR载体A1~A6,并且包装病毒。发现原代T细胞的激活状态与PD-1的表达相伴随,以及PD-1高表达细胞群中存在CD25共表达现象。含有靶向基因PD-1的CRISPR病毒分别感染T细胞后,A2和A6对PD-1高表达的细胞群敲除效率好,分别为19%和29%。结论 CRISPR技术可在原代T细胞中有效敲除PD-1。

B7-H4介导小鼠间充质干细胞株C3 H10 T1/2对EAE小鼠T细胞亚群的作用

目的：探讨负性共刺激分子B7-H4在小鼠间充质干细胞株C3H10T1/2(以下简称C3H10)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠免疫调节的作用及其机制。方法体外试验：构建小鼠B7-H4靶向shRNA稳定转染的C3H10细胞(C3H10-B7-H4细胞)，将转染前后的细胞分别与植物血凝素( PHA)激发的小鼠脾脏淋巴细胞共培养，用ELISA法检测培养上清细胞因子的分泌。体内试验：制备小鼠EAE模型，将50只小鼠分为5组：正常对照组、EAE组、C3H10组(移植 C3H10细胞)、C3H10-NC组(移植shRNA对照质粒转染的C3H10细胞)、C3H10-B7-H4组(移植C3H10-B7-H4细胞)，并在免疫后第6天，各组细胞以1×106个/只小鼠尾静脉输注，每日对各组小鼠进行神经功能缺损评分；用ELISA法检测小鼠外周血IL-2、IL-17、IFN-γ、IL-4的表达变化。结果体外试验：B7-H4靶向shRNA转染C3H10可抑制B7-H4的表达；下调表达B7-H4的C3H10细胞对脾细胞分泌IL-2、IL-17、IFN-γ的抑制作用减弱，而对IL-4无明显影响；体内试验：下调表达B7-H4的C3H10细胞对EAE小鼠的治疗作用减弱，表现在神经功能缺损评分增高，发病时间及发病高峰时间均较C3H10组提前。下调表达B7-H4的C3H10细胞治疗EAE小鼠后对血浆中IL-2、IL-17、IFN-γ的表达抑制作用减弱，但对IL-4的表达无影响。结论负性协同刺激分子B7-H4介导了C3H10移植治疗EAE的免疫调节，这一过程可能是调节Th1、Th17等炎性效应性T细胞间接发挥作用。

布拉氏酵母菌对猪螺杆菌感染后胃黏膜相关淋巴样组织形成的影响

目的：研究布拉氏酵母菌对猪螺杆菌( Helicobacter suis, H. suis)感染后该细菌在胃内定植与胃黏膜相关淋巴样组织(MALT)形成的影响。方法 C57BL/6野生型小鼠60只随机分为6组：A、B两组小鼠分别给予无菌蒸馏水、布拉氏酵母菌灌胃2次后感染H. suis 1周；C、E两组小鼠给予无菌磷酸盐缓冲液灌胃1周后分别给予无菌蒸馏水和布拉氏酵母菌灌胃,D、F两组小鼠感染H. suis 1周后亦分别给予无菌蒸馏水和布拉氏酵母菌灌胃,均为每周2次,共处理12周；收集各组小鼠血清与胃组织。结果B组小鼠胃黏膜中 H. suis的数量较 A组明显减少；在血清与胃组织分泌型 IgA(sIgA)含量及胃黏膜IFN-γmRNA的表达水平方面,两组无显著差异；D、F组小鼠胃黏膜中均检测到H. suis 16S rRNA的表达与胃淋巴滤泡的形成,且血清与胃组织中sIgA含量及胃黏膜IFN-γmRNA、CXCL13 mRNA的表达水平分别较C、E两组明显增高；与D组相比,F组小鼠胃黏膜H. suis的数量及单位长度胃黏膜MALT的数量明显减少,血清及胃组织中sIgA的含量显著增加,胃黏膜中IFN-γ mRNA与CXCL13 mRNA的表达水平亦明显减少。结论布拉氏酵母菌可抑制H. suis感染后该细菌在胃内的定植与胃MALT的形成。

雌激素化小鼠感染普雷沃菌引起细菌性阴道病的模型研究

目的：利用雌激素化小鼠构建普雷沃菌( Prevotella)感染引起细菌性阴道病( bacterial vaginosis, BV)的动物模型。方法17β-戊酸雌二醇芝麻油溶液腹腔注射小鼠,然后用对数期普雷沃菌稀释液定量接种小鼠阴道,于不同时间点取小鼠阴道洗液分离培养普雷沃菌,并测定洗液中唾液酸酶活性；接种后2 d、7 d和21 d分别扑杀10只小鼠,取子宫角、膀胱和肾脏,匀浆后分离培养普雷沃菌。结果普雷沃菌可在雌激素化小鼠阴道中感染14 d以上,21 d时可观察到分离菌数的明显下降；感染小鼠阴道分泌物中唾液酸酶活性明显增高,并可查见线索细胞；高剂量感染时细菌可扩散到小鼠子宫角。结论雌激素化小鼠可作为BV 的一种实验动物模型。

基因组编辑技术在1型单纯疱疹病毒研究中的作用和意义

病毒基因组编辑技术对研究病毒基因的功能及病毒感染性疾病的治疗有着不可或缺的作用。随着基因工程技术的发展，多种病毒基因组突变技术应运而生。传统的同源重组技术一直用于编辑病毒基因组，然而，该技术的重组频率极低。此后，基因组较大的病毒如单纯疱疹病毒1型(HSV-1)可以通过细菌人工染色体质粒系统进行编辑，但是将较大的病毒基因组克隆到细菌人工染色体质粒费力费时，并且质粒的部分基因或药物选择标记物可能残留在病毒基因组内而影响病毒基因的功能。2013年发现的CRISPR-cas9系统可以完成对各类DNA病毒高效准确的定点基因编辑，而且该系统在对病毒基因组进行编辑过程中不会遗留系统自身的遗传物质。本文就同源重组技术、细菌人工染色体和CRISPR-cas9系统这三类基因组编辑技术在 HSV-1相关研究中的应用进行简要综述。

肠道菌群与癌症关系研究进展

共生微生物栖息在多细胞生物各组织器官表面，与宿主协同进化、相互适应，并对宿主的免疫和非免疫功能产生重要影响，从而影响到疾病的发生和发展。肠道菌群是一类重要的共生微生物，近年来大量研究表明，肠道菌群在癌症的发生、发展以及治疗中发挥着重要作用。找出癌变过程中发挥重要作用的特定肠道微生物或菌群结构、揭示宿主、肠道菌群与环境之间的相互关系，并应用到癌症的预防、诊断和治疗中，是全球关注的一个热点。本文就肠道菌群与癌症发生、发展以及在癌症治疗中的调控作用进行综述。

高毒力肺炎克雷伯菌的致病机制研究进展

高毒力肺炎克雷伯菌( hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)主要感染健康人群并导致严重感染,包括肝脓肿、脑膜炎、坏死性筋膜炎、眼内炎和严重的肺炎等。研究发现hvKP的毒力强于普通肺炎克雷伯菌,表现为产生较多的荚膜多糖、携带magA、rmpA和活性铁摄取系统等毒力因子。 hvKP在宿主体内存活能力和抗中性粒细胞吞噬能力较强,导致感染的扩散和转移。本文对hvKP的毒力因子、hvKP的定植与感染以及机体对hvKP免疫力作一综述。

基于黑猩猩型腺病毒载体AdC68的新型狂犬病疫苗研究

目的：探索一种基于复制缺陷型黑猩猩腺病毒载体的新型狂犬病疫苗AdC68-rab. gp的遗传稳定性、免疫应答及免疫保护效果。方法构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组腺病毒AdC68-rab. gp,通过酶切病毒基因组、病毒感染细胞、免疫小鼠、测定中和抗体滴度以及攻毒试验等研究AdC68-rab. gp的遗传稳定性和对小鼠的免疫保护效果。结果经过15次连续传代的重组腺病毒基因组稳定；单次免疫AdC68-rab. gp 4周,小鼠血清中可检测到高滴度的抗狂犬病病毒中和抗体；免疫6个月后,小鼠血清中的中和抗体滴度仍维持高水平；并且单次免疫小鼠100%拮抗致死剂量狂犬病病毒的攻击感染。结论新型狂犬病疫苗AdC68-rab. gp具有较好的遗传稳定性,并能诱导理想的免疫保护效果,具有很大的应用价值。

一株气管炎疫苗生产菌株的鉴定更名

目的：对中国医学细菌保藏管理中心库藏气管炎疫苗生产菌株重新鉴定并更名。方法同时培养库藏待检菌株CMCC(B)29108和对照用模式株DSM30007T,比较二者的形态、生理生化、脂肪酸成分等特性,对16S rRNA和rpoB基因进行系统进化分析以及DNA-DNA同源性测定。结果16S rRNA基因序列比对结果显示CMCC(B)29108与不动杆菌属(Acinetobacter)相近,与模式株鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)DSM30007T 相似性高,形态学特性、生理生化特性以及脂肪酸成分构成均与DSM30007T 十分相似,仅存在个别差异。基于Acinetobacter属所有成员的16S rRNA和rpoB基因的系统进化分析均显示CMCC(B)29108与DSM30007T 稳定聚类成一个独立分支,且二者的DNA-DNA同源性为100%。结论基于表型、系统进化学以及化学成分的鉴定研究结果,CMCC (B)29108为鲍曼不动杆菌种内区别于模式株的一株菌,可用于气管炎疫苗生产,建议更名为鲍曼不动杆菌( Acinetobacter baumannii)。

人血小板CD36转染细胞的建立及在CD36抗体检测中的应用

目的：通过TA克隆和细胞转染技术建立稳定表达人CD36的转染细胞,并应用于CD36抗体检测。方法提取人血小板总RNA,逆转录为cDNA,经PCR扩增获得人血小板的CD36基因片段；TA克隆后转化TOP10 E. coli,蓝白斑筛选获得阳性重组子pcDNA3.1/V5-CD36,提取质粒DNA进行序列测定；将序列一致的质粒DNA在Effectene(Invitrogen)作用下转染HEK293T细胞；通过流式细胞仪分选建立稳定表达人血小板CD36的转染细胞,并利用该转染细胞对9份CD36抗体阳性标本进行流式和抗体捕获法(ACA)检测。结果获得稳定表达人血小板CD36的HEK293T转染细胞；与单克隆抗体捕获血小板抗原技术( MAIPA)相比,利用CD36转染细胞建立的流式和抗体捕获法( ACA)均可检出9份CD36抗体阳性标本,且操作简便。结论稳定表达人血小板CD36转染细胞的建立,为临床上CD36抗体的检测提供了有利工具,也为今后CD36在其他疾病中作用机制的研究提供实验资料。

3种市售消毒剂对人感染高致病性禽流感H5亚型病毒杀灭效果的定量评价

目的：评价3种市售消毒剂对人感染高致病性禽流感H5亚型病毒的杀灭效果。方法通过定量悬浮试验来确定消毒剂的有效性,即定量病毒后,使用105半数组织培养感染剂量( TCID50)的病毒与不同浓度的消毒剂结合,在不同作用时间和有机物存在与否的情况下,MDCK细胞上终点滴定剩余病毒的活性。混合物加入 MDCK细胞孵育1 h后,换病毒稀释液,继续培养18~20 h,然后用ELISA方法来定量检测病毒的TCID50值。研究人感染高致病性禽流感H5病毒的同时,选择人感染H9N2低致病性禽流感作对照。结果1%的Virkon 消毒剂与100μl含有105 TCID50的病毒液作用1 min,可以将3种病毒的活性降低到检测值以下,即1.0 lgTCID50/100μl；而0.5%Vir-kon液作用1 min,H9N2和 H5N1病毒降低到检测值以下,H5N6病毒滴度降低至1.75 lgTCID50/100μl。当作用时间延长至5 min,除上述两个浓度外,0.25%Virkon液也对部分病毒有杀灭效果。10%、5%和2.5%稀释84消毒剂组在作用1 min后均将3种病毒活性降低到检测值以下。而1.25%稀释的84消毒剂将病毒的活性降至1.25~2.50 lgTCID50/100μl。1%稀释的84消毒剂在作用1 min后,对3种病毒的杀灭效果是无效的,即使将作用时间延长到5 min 作用效果也非常有限。SOLARSEPT消毒液组的原液组,1∶2、1∶4稀释组均将3种病毒活性降低到检测值以下；1∶8稀释组无效,作用时间延长至5 min得到同样结果。用胎牛血清模拟环境污染的有机物,1%的Virkon,10%和5%稀释的84消毒剂,SOLARSEPT消毒液及其50%稀释后的SOLARSEPT消毒液在作用1 min后可以将3种病毒活性降低到检测值以下。将作用时间增加到5 min,病毒的杀灭效果没有明显增加。结论即使在有机物存在的条件下,1%Virkon、10%稀释的84消毒剂以及SOLARSEPT消毒液都可以快速杀灭H5病毒。当消毒剂的杀灭病毒能力被病毒饱和作用后,即使延长作用时间消毒效果也不明显。3种消毒剂对H5亚型及H9亚型病毒的杀灭效果没有显著差异。

基于核酸功能化的氧化石墨烯技术快速检测含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的研究

目的：探索建立简单、高效、低成本的检测含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的新方法。方法利用羧基荧光素( FAM)修饰的核酸探针( FAM-P)与氧化石墨烯( GO)非共价偶联成功构建了FAM-P/GO碳纳米生物传感器。考察该体系对不同浓度靶序列基因和含该靶基因的不同浓度菌体样品检测的灵敏性,并通过碱基错配试验和种属特异性试验验证其特异性。结果实验表明,该纳米生物传感器对靶标序列SSeC基因检测的低下限为0.05μmol/L,而且在0.05~1.0μmol/L范围内呈现良好的线性关系(R2=0.9921),对目标菌检测的低下限为103 CFU/ml,在103~108 CFU/ml范围内呈良好的线性关系(R2=0.9987),此外,该方法对实验组的信噪比要远远大于对照组,因此具有很高的特异性。结论成功构建了FAM-P/GO碳纳米生物传感器,为含SSeC基因鼠伤寒沙门氏菌的快速检测提供了一种可能的新方法。

2014-2015年云南省健康儿童肠道病毒带毒状况调查

目的：了解2014—2015年云南省健康儿童中肠道病毒( enterovirus, EV)带毒情况和病毒型别,并对埃可病毒6型(echovirus type 6, ECHO6)、ECHO25和ECHO11的基因特征进行分析。方法采集3个内地州(市)6~7个县及5个边境州8~9个县<15岁健康儿童粪便标本共921份进行病毒分离和基因测序定型,其中2014年共采集453份(均为单份便,其中内地儿童213份,边境儿童240份),2015年共采集468份(内地儿童195份,边境儿童273份)。结果2014年,从内地儿童粪便标本中分离到EV 20株,分离率为9.39%(20/213),从边境儿童中分离到EV 16株,分离率为6.67%(16/240)。2014年病毒总体分离率为7.95%(36/453)。从病毒型别来看,B种病毒分离率高(88.89%,32/36),其次为A种病毒(11.11%,4/36),未分离到C种(包括脊髓灰质炎病毒)和D种病毒。2015年,从内地儿童粪便标本中分离到EV 13株,分离率为6.67%(13/195),从边境儿童中分离到EV 33株,分离率为12.09%(33/273)。2015年病毒总体分离率为9.83%(46/468)。从病毒型别来看,B 种病毒分离率高(78.26%,36/46),其次为 C 种病毒(19.57%,9/46)和 A 种病毒(2.17%,1/46),未分离到 D 种病毒。两年共从921份粪便标本中检测到 EV 82株(分离率为8.90%,82/921),其中,从内地儿童分离到33株,分离率为8.09%(33/408),从边境儿童中分离到EV 49株,分离率为9.55%(49/513)。82株EV中,脊髓灰质炎病毒(poliovirus, PV)9株(阳性率为0.98%,9/921),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒；检测到非脊灰肠道病毒(non-poliovirus, NPEV)73株(阳性率为7.93%,73/921)。结论2014年,内地儿童病毒分离率(9.39%)高于边境儿童(6.67%),而2015年边境儿童分离率(12.09%)高于内地儿童(6.67%),两年的病毒型别均以B种病毒为主。未分离到脊灰野病毒和肠道病毒D种,云南省维持无脊灰状态良好。

2011-2015年安阳地区手足口病相关人肠道病毒B种病原组成及柯萨奇病毒B2、B5 VP1基因特征分析

目的：调查2011—2015年安阳地区手足口病( hand,foot and mouth disease, HFMD)相关人肠道病毒B种(HEV-B)病原组成,对柯萨奇病毒B2(CVB2)和柯萨奇病毒B5(CVB5)VP1基因特征进行研究。方法使用实时荧光逆转录 PCR 和半巢式逆转录 PCR 法对柯萨奇病毒 A16(CVA16)、肠道病毒71(EV71)以及其他肠道病毒进行鉴定,以获得完整的手足口病病原组成,统计出HEV-B病原种类及阳性比例。针对HEV-B病原中阳性病例数较多的CVB2和CVB5病原,分别以其VP1基因为靶段设计引物 PCR扩增测序后获得 VP1基因核苷酸序列全长。使用 MEGA7.0和BioEdit7.2软件对本研究获得的CVB2、CVB5序列以及GenBank数据库已收录的全部相关VP1序列构建系统发育树并进行系统发育分析。使用DateMonkey在线分析程序对我国近年来流行的CVB2和CVB5毒株的VP1基因进行选择压力分析。结果2011—2015年安阳地区共鉴定出手足口病相关HEV-B病原14种,HEV-B阳性标本57份。 HEV-B病原占手足口病全部病原种类的比例为56%, HEV-B阳性标本占总肠道病毒阳性标本的比例为3.06%。绝大多数HEV-B病原引起的手足口病呈高度散发,个别病原如 CVB2、CVB5在特定时间内的病例较为聚集。经过测序获得安阳地区8条CVB2和9条CVB5 VP1序列。构建的系统发育树显示,CVB2毒株可分为A~D四个基因型,各基因型的组间平均进化距离介于0.191~0.208,核苷酸序列相似性介于79.7%~85.8%。 CVB5毒株可分为A~F六个基因型,各基因型的组间平均进化距离介于0.170~0.285,核苷酸序列相似性介于76.0%~86.8%。 CVB2 VP1基因氨基酸序列第157、263位,CVB5 VP1基因氨基酸序列第75、90、95位在不同基因型毒株中的残基有较大差异。安阳地区CVB2序列均属于D基因型,且集中于1个分支内；CVB5序列均属于F基因型,分布于其中2个分支内。中国大陆地区近年流行的CVB2( D基因型)和CVB5(F基因亚型)毒株的进化选择压力ω值分别为0.037、0.036,未发现CVB2 VP1基因的正选择氨基酸位点,但在CVB5 VP1基因中发现6处正选择氨基酸位点。结论 HEV-B是安阳地区2011—2015年手足口病病原谱的重要组成。 CVB2、CVB5在安阳地区手足口病HEV-B病原中占有一定优势,其中CVB5 VP1基因比CVB2 VP1基因具有更为复杂和活跃的进化特征。

中华医学会2016年全国临床微生物与免疫学术年会征文通知

《中华微生物学和免疫学杂志》书写规范

1.根据GB/T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。

远程投稿系统作者常见问题

问题1：作者如何投稿？
　　(1)注册网站会员，邮箱获得登录名和密码；(2)申请成为杂志作者，需要给哪个杂志投稿，就申请成为哪个杂志的作者，一个作者可以同时申请成为多个杂志的投稿作者；(3)进入系统，点击左侧菜单栏【期刊管理系统】，点击之后系统会列出期刊系统作者的所有功能，点击【作者投稿】，按步骤一步步往下操作，后点击【投稿】，完成投稿操作。

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《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事