中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞的比较研究
目的 利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响.方法 分离BALB/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF、IL-4、Flt3L以及不同浓度细胞因子组合的培养液,培养7 d后荧光抗体标记行流式细胞术,检测DC表面CD11c、MHCⅡ、CD86分子的表达水平.平行组加入脂多糖(LPS)刺激后行流式细胞术检测.结果 Flt3L/GM-CSF/IL-4组可诱导90%骨髓细胞高表达CD11c,此时各细胞因子浓度分别为20 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml;100 ng/ml Flt3L诱导骨髓细胞表达CD11c达88%.Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组诱导髓源树突状细胞表达MHCⅡ分别为35.4%和36.1%,其中各组Flt3L与GM-CSF浓度均为20 ng/ml.LPS刺激后Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组表达MHCⅡ分子水平分别为58.1%和59.6%,增幅为22.7%和23.5%.GM-CSF/Flt3L/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组树突状细胞CD86表达为7.1%与5.5%.LPS刺激后20 ng/ml Flt3L组与GM-CSF/IL-4组CD86表达增幅达7.1%与6.2%.结论 Flt3L和GM-CSF对髓源树突状细胞的分化与成熟发挥主导作用,故20 ng/ml Flt3L联合20 ng/ml GM-CSF可成为DC基础研究的优选方案.
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甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用
目的 研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节.方法 MBL基因敲除型(MBL-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×107 CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3 d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7 d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγt mRNA的表达;取小鼠脾脏CD4+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平.结果 成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL-/-感染组小鼠体内转录因子RORγt mRNA表达升高,转录因子Foxp3 mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少.结论 在C.albi-cans感染中,MBL促进了CD4+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡.
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鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株的构建及其相关功能研究
目的 构建鼻疽诺卡菌IFM10152哺乳动物侵袭基因4A(mammalian cell entry 4A,mce4A)缺失株,并分析该基因在鼻疽诺卡菌感染宿主细胞中发挥的作用.方法 采用无抗生素标记的框内缺失法构建鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,通过PCR及测序的方法进行验证.进行体外生长实验、用THP-1(人白血病单核细胞系)作为体外模型进行巨噬细胞杀菌试验以及用HeLa(宫颈癌上皮细胞系)细胞进行体外黏附侵袭试验来分析mce4A基因在鼻疽诺卡菌与宿主细胞相互作用中发挥的功能.结果 成功构建无抗生素标记的mce4A基因框内缺失株,命名为△mce4A;缺失株与野生株生长速度无明显差异.通过实验证明,mce4A基因敲除后,鼻疽诺卡菌抵抗巨噬细胞杀伤能力明显减弱,且鼻疽诺卡菌的黏附侵袭能力也明显减低.结论 成功构建了鼻疽诺卡菌mce4A基因缺失株,mce4A基因在鼻疽诺卡菌黏附侵袭宿主细胞及巨噬细胞内存活过程中可能发挥了重要作用.
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猩红热患儿A组链球菌耐药特征的研究
目的 探讨天津市猩红热患儿A组链球菌(GAS)对抗菌药物的耐药特征,以便指导临床用药.方法 连续6年采集猩红热患儿咽拭子标本进行GAS菌株分离,对276株GAS进行药物敏感性试验,并用PCR方法进行emm分型.结果 276株GAS对青霉素、头孢唑啉和万古霉素敏感率均为100%,对氯霉素和左氧氟沙星敏感率均为98.2%,对阿奇霉素耐药率高达97.8%,其次为红霉素(97.1%)、克拉霉素和克林霉素(均为94.2%)、四环素(79.3%).耐药模式中GAS对红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、克林霉素和四环素联合耐药占73.2%.来源于不同年份的的GAS菌株对四环素、克林霉素、克拉霉素、红霉素和阿奇霉素的耐药率差异均有统计学意义.emm12型GAS对四环素的耐药率为84.0%,高于emm1型GAS对四环素的耐药率(59.5%),差异有统计学意义(χ2=13.820,P=0.000).结论 天津市猩红热患儿分离的GAS以耐大环内酯类抗生素、克林霉素和四环素为主,提示临床谨慎选择该类药物.GAS感染仍首选青霉素,对青霉素过敏者可选头孢菌素类抗生素替代.
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球形孢子丝菌vps34基因序列的获得及其在双相型表达差异的初探
目的 获得球形孢子丝菌液泡分选蛋白34(vacuolar protein sorting 34,Vps34)编码基因全长序列,并探讨vps34基因在球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)由菌丝相向酵母相转换中的作用.方法 利用快速扩增cDNA末端技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法分别扩增球形孢子丝菌vps34基因3′端和5′端序列,序列拼接后进行生物信息分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析vps34基因在菌丝相和酵母相的表达差异.结果 球形孢子丝菌vps34基因全长共3228 bp,其中CDS区长度为3000 bp,编码999个氨基酸,相对分子质量(Mr)为111.49×103,等电点为6.38,包含C2 PI3K classⅢ、PI3KaⅢ、PI3KcⅢ共3个结构域;qRT-PCR检测结果显示,24 h时,球形孢子丝菌酵母相的vps34表达量高于菌丝相(P<0.05),48 h时差异大(P<0.01).结论 vps34基因参与了球形孢子丝菌双相型转换的过程,而球形孢子丝菌vps34基因全长的获得为进一步研究Vps34p的功能提供实验资料.
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嵌合人偏肺病毒表位的重组流感病毒毒株的构建
目的 构建和拯救重组嵌合表达人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)表位的流感病毒株.方法 将通过生物信息学软件预测的hMPV B细胞表位、CTL表位和Th表位串联为不同表位组合,将其表位蛋白基因分别插入A/PR/8/34(PR8)流感病毒非结构蛋白NS1基因,利用8质粒系统共转染293T/MDCK细胞,拯救重组流感病毒毒株,全基因组测序鉴定重组流感病毒.同时测定重组病毒的血凝素(HA)活性和半数细胞感染量(TCID50)及生长曲线.结果 在hMPV不同表位间引入间隔序列GPGPG和KK,构建串联多表位抗原,将该抗原基因插入PR8流感病毒非结构蛋白NS基因,经反向遗传学成功拯救出3株重组流感病毒毒株.经MDCK细胞传代3次,鸡胚传代1次,3株重组流感病毒毒株增殖稳定.流感病毒全基因组测序证实,重组的3株流感病毒毒株分别嵌入了hMPV的B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位,命名为rFLU/hMPV/B、rFLU/hMPV/CTL-Th、rFLU/hMPV/B-Th.HA滴度分别为128、128、256,TCID50分别为107.0/ml、106.8/ml和107.0/ml.生长曲线试验结果表明重组流感病毒毒株可在MDCK细胞中有效复制.结论 成功拯救出3株嵌合有hMPV B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位的重组流感病毒株,为后续评价该重组病毒株的免疫效果及是否有潜在疫苗应用价值提供实验资料.
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2012-2017年杭州地区甲型H3N2流感病毒HA和NA基因遗传进化分析
目的 了解2012—2017年杭州地区甲型H3N2流感病毒的流行情况以及血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化特征.方法 收集2012年1月至2017年12月间杭州地区流感样病例12185例,实时RT-PCR检测甲型H3N2流感病毒,同时选取部分甲型H3N2流感病毒阳性样本,用特异性引物扩增HA和NA基因,进行基因测序并分析其遗传进化特征.结果 自2012年以来,杭州地区每年都有甲型H3N2流感病毒的流行.不同年龄段人群发病率存在统计学差异,趋势性卡方检验发现,随着年龄增长,发病率显著提高(Z=81.039,P<0.05).2012年以来,杭州地区流行的甲型H3N2流感病毒主要属于3C.3a和3C.2a两个进化簇.HA和NA基因的序列一致性均为96.7% ~100%,但在多个抗原位点发生了突变.结论 甲型H3N2流感病毒在杭州地区流感流行中具有重要地位.2012—2017年,杭州地区甲型H3N2流感病毒抗原变异明显,但目前并未发现耐药株的出现和流行.
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靶向乙型肝炎病毒HBP-TP蛋白的多肽筛选与鉴定
目的 筛选与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶TP区(HBP-TP)相互结合的特异性多肽并研究其对HBV复制水平的影响.方法 以大肠杆菌原核表达的HBP-TP重组蛋白为底物,对噬菌体多肽展示文库进行筛选获得特异性噬菌体并测序其多肽区.统计重复率大于10%的多肽序列进行商品化合成.将合成多肽作为药物处理HBV表达细胞后检测HBV复制水平的变化.结果 从噬菌体多肽展示文库中筛选出8条靶向HBP-TP重组蛋白的多肽,在细胞水平的检测中发现其中有1条多肽对HBV的复制有明显的抑制作用.结论 获得1条对HBV复制水平具有抑制作用的靶向HBP-TP蛋白特异性多肽.
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2012-2015年深圳市重症手足口病患儿柯萨奇病毒A6型VP1~VP4基因特征分析
目的 了解2012-2015年深圳市手足口病重症患儿柯萨奇A6型肠道病毒(CVA6)VP1~VP4基因特征.方法 对2012-2015年深圳市重症手足口病样本中所有CVA6阳性样本进行VP1~VP4全长序列扩增和测序,运用DNASTAR6.0和MEGA6.02软件进行系统进化分析.结果 深圳市2012—2015年共有4例重症手足口病是由CVA6病毒感染引起的,临床表现均为发热、疱疹和无菌性脑炎等中枢神经系统症状.其中2013年深圳市CVA6重症株与2012年深圳重症株核苷酸的同源性为98.8% ~98.9%,氨基酸同源性为99.3% ~99.8%,共有2个氨基酸突变(VP2区的G73E和VP1区的S13G).2015年深圳市CVA6重症株与2013年重症株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.0%和99.3%,共发现6个氨基酸突变(分别为VP2区的E73G和VP1区的T5A、S27N、A30V、N137S和V242I).进化分析表明,2012-2015年深圳市引起无菌性脑炎的CVA6重症株均属于D3亚型,其中深圳市2012年CVA6重症株与2012年长沙市分离株(KJ156349)进化关系近,深圳市2013年CVA6重症株与上海市2013年CVA6分离株(KJ612513)进化关系近,而深圳市2015年CVA6重症株与山东省2014年潍坊株(KX752785)属于同一进化分支.结论 2012-2015年引起深圳市重症手足口病的CVA6重症株均属于D3亚型,其中2015年CVA6重症株VP1区S27N、A30V的氨基酸突变位点均位于线性B细胞抗原表位区域,V242I氨基酸突变位点位于细胞受体PSGL-1结合区域,这可能会影响CVA6重症株与细胞受体的结合力及其对人群的感染力.
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血管内皮生长因子表达及其对肝癌细胞侵袭转移的促进作用
血管内皮生长因子(VEGF)是特异性作用于内皮细胞糖基化的细胞有丝分裂素,增强血管的渗透性、诱导血管新生,促进肝癌细胞生长和侵袭转移,且VEGF高表达患者预后差.负性调节VEGF可明显抑制肝癌细胞恶性增生,改善患者预后.本文系统综述VEGF表达及其对与肝癌细胞侵袭转移促进作用和基于VEGF靶向药物治疗拮抗肝癌患者病灶的血管新生的新研究进展,为延缓患者病情进展提供新思路.
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从人类基因组发现新细胞因子的研究进展
细胞因子是具有重要生理病理功能的小分子分泌蛋白,在新药开发领域,细胞因子药物取得了巨大的成功,2017年全球前十位畅销药物中有5个是细胞因子或其受体抑制剂.细胞因子研究中具原创性和挑战性的工作是发现新的具有重要功能和药物开发前景的新细胞因子.在后基因组时代,利用反向生物学技术,国际上已经发现了一批新细胞因子,数个新细胞因子药物被批准上市.本综述重点介绍笔者实验室从人类基因组发现的10个新细胞因子,包括CTRP4、CCDC134、PSMP、VSTM1-v2、FAM3D、TMEM98、CSBF/C10orf99、FAM19A4、FAM19A5、FAM19A1.其中一些新细胞因子已经显示具有重要的生理病理功能,鉴定了功能性受体,或开展了临床标本分析及动物体内实验,为进一步临床应用研究奠定了基础.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
1999 | 01 02 03 04 06 |
1998 | 01 02 03 04 05 06 |