中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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TLR3途径诱导多发性骨髓瘤细胞株增殖抑制和凋亡机制研究
目的 研究聚肌苷酸胞苷酸( polyI:C)激活的TLR3通路对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制和凋亡相关的生物学作用及相关机制.方法 RPMI8226细胞培养于RPMI 1640培养基,以不同浓度的polyI:C与该细胞作用不同的时间.收集细胞后,分别利用CCK-8和流式细胞术分析其增殖抑制和凋亡情况,同时抽提总RNA,相对定量PCR测定TLR3通路相关基因表达.结果 PolyI:C对RPMI8226的增殖抑制效应随着作用剂量的增加和时间的延长而增加,24h:12.30%±2.04%、22.50%±2.20%、37.90%±1.30%;48h:17.80%±1.52%、29.60±0.85%、45.80%±1.68%;72 h:25.10%±1.01%、34.60%±1.27%、60.50%±2.08%,差异有统计学意义(P<0.05).浓度为50、100、200μg/ml的polyl:C与RPMI8226作用48 h后,细胞凋亡率分别为5.60%±1.06%、8.71%±1.06%、13.93%±1.17%,差异具有统计学意义(P<0.05),而且随着polyI:C作用浓度增加,RPMI8226细胞中TLR3和TRIF mRNA相对于内参β-actin的表达均显著增高,TLR3:1.41±0.10、2.24±0.16、4.08±0.13;TRIF:1.07±0.16、1.97±0.13、3.56±0.19,各组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 TLR3途径可以有效地抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并且诱导其凋亡,对多发性骨髓瘤的生物治疗具有潜在应用价值.
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Siglec-1与自身免疫性肝炎的相关性研究
人Siglec-1表达于特定组织巨噬细胞上,当单核巨噬细胞受到炎症刺激时,Siglec-1表达迅速上调,说明Siglec-1在巨噬细胞促炎症反应中起重要作用.本研究分别从蛋白和基因转录水平观察Siglec-1在自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者外周血的表达变化,并探讨其在AIH发生发展中的意义.
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人软骨糖蛋白-39对CIA大鼠淋巴细胞外增殖作用的研究
目的 观察人软骨糖蛋白-39( HCgp39)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠淋巴细胞激活的影响,探讨其在类风湿关节炎(RA)发病中的作用.方法 建立CIA大鼠模型,分别在建模1、2、3、4、5、6、7、8周后,分离、培养大鼠脾淋巴细胞,CCK-8法检测HCgp39对淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测血浆中抗HCgp39抗体及COMP的分泌水平,分析指标之间相关性.结果 建模2周后,HCgp39抗原特异性T细胞与对照组比较出现明显增殖反应(P均<0.01),与建模时间、抗HCgp39抗体水平显著正相关,与血管翳和滑膜炎症评分显著负相关.各组抗HCgp39抗体水平和COMP水平较对照组显著增高(P均<0.01),且抗HCgp39抗体水平与建模时间及COMP呈显著正相关.结论 HCgp39可刺激CIA大鼠脾淋巴细胞的体外异常增殖,初步提示HCgp39抗原短肽在CIA早期及后续的发病过程中可能起着一定作用.
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雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者DC细胞功能及成熟的影响
目的 通过体外实验研究雷公藤内酯醇(triptolide)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从SLE患者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选DC,加入0、5、10、30μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24h后收集上清液,ELISA检测IFN-α、IL-6、TNF-α量,5d后收集细胞,流式细胞仪检测DC表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著减低活动期与非活动期SLE患者IFN-α、IL-6、TNF-α量,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P<0.05);雷公藤内酯醇可抑制SLE患者DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P<0.05).结论 雷公藤内酯醇能够减弱SLE患者DC的功能,并抑制其分化和成熟.
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含不同启动子的重组9型腺相关病毒载体转染大鼠心肌细胞表达效率的差异
9型腺相关病毒( AAV9)作为基因治疗心脏疾病的佳载体之一而成为近年来研究的热点[1],但影响AAV9转导效率的因素很多,其中载体上的启动子和受体细胞是否合适是直接影响到目的基因的转录效率和表达水平的重要因素[2],本研究分别选用含CMV启动子和CBA启动子的rAAV9携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染心肌细胞,比较两个启动子在心肌细胞的转录活性以及对细胞生长的影响,从而为AAV9携带靶基因高效转染心肌细胞以及应用于心脏疾病的基因治疗提供实验资料.
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耐药肺炎克雷伯菌中发现碳青霉烯酶KPC基因新的变异型
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)是医院感染的重要致病菌.我们从医院分离到一组(15株)耐药肺炎克雷伯菌(均分离自2010年3月-2010年5月浙江大学附属第一医院住院患者临床样本).来源为:痰液6份,中段尿3份,血液和引流液各2份,脑脊髓液和咽拭子各1份.进行了A类、B类、C类、D类等4类41种B-内酰胺酶基因(阳性株全部作DNA测序并比对)与β-内酰胺酶活性检测,结果发现了肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase,KPC)基因新的变异型,现报告如下.
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大肠杆菌qseC基因敲除及其缺陷株生物被膜形成的研究
目的 通过Red同源重组法构建qseC基因缺失的大肠杆菌突变株,并探讨qseC基因对大肠杆菌生物被膜形成的影响.方法 PCR扩增两翼与目的基因上下游同源、含有氯霉素抗性基因片段,电击转化人大肠杆菌MC1000,在Red同源重组酶作用下,用含同源臂的氯霉素抗性片段置换目的基因qseC,并利用FLP位点专一性重组将氯霉素抗性基因删除.结晶紫染色半定量法分析qseC基因缺失株生物被膜形成能力的变化.结果 PCR及DNA测序结果表明,qseC基因已被成功敲除.在LB培养基中,qseC基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异.MC1000与MC1000 △qseC基因缺失株生物被膜形成能力半定量A值的结果分别为1.00±0.15和0.47±0.10.结论 成功构建大肠杆菌qseC基因缺失突变株,且qseC基因对细菌生物被膜的形成具有调控作用.
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体外建立及扫描电镜观察腹膜透析留置管大肠杆菌生物被膜模型
细菌生物被膜(biofilm,BF)是指细菌吸附于惰性物体如生物医学材料或机体黏膜表面后,分泌多糖基质将细菌体克隆聚集缠绕其中形成的膜样物.腹膜透析(PD)是慢性肾功能衰竭尿毒症期患者肾脏替代治疗的方式之一.腹膜炎是腹膜透析患者的严重并发症之一,大肠埃希菌是导致腹膜炎的常见G-菌.细菌从腹膜透析的导管出口部位侵入并可在透析液中繁殖能够在腹透管上成长为小菌落生物膜,腹膜透析病人中这些细菌及菌膜与反复发作性腹膜炎可能有关.本研究拟以腹膜透析管为载体,建立体外静置BF模型;然后采用银染法鉴定,扫描电镜观察BF形成能力,为寻找大肠杆菌BF相关感染的治疗方法并提供临床参考,以便制定出相应防治策略对于改善腹膜透析患者预后具有重要意义.
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创伤弧菌感染树突状细胞的定位及对细胞骨架影响的实验研究
目的 探讨创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)感染小鼠树突状细胞株的侵袭过程、定位及其对细胞器的损伤与影响.方法建立Vv1.1758株侵入DC2.4细胞模型,电子显微镜观察不同时间段细菌定位、细胞形态及细胞器的变化过程;荧光显微镜观察细胞骨架—微丝、微管重排情况.结果 Vv1.1758株以双位点胞饮方式成内体侵入细胞,定位于DC2.4胞膜内侧1~2 μm处,25%、50%、75%感染率时分别为1.27h、1.87 h、3.43h,1h形成吞噬体,2h染色质明显活跃,4h染色质聚集,6h细胞损伤明显,内质网、线粒体、溶酶体高度肿胀变形.DC2.4突起状微丝逐渐减少,并向胞膜内侧由点状向线状聚集;伸展微管消失,微管向细胞核膜外侧重排明显.结论 DC2.4在受Vv感染时,Vv定位于DC2.4胞膜内侧,微丝由胞质内向胞膜移动,而微管则由突触及胞膜处向核膜外侧移动,Vv感染DC时可触发细胞骨架重排.
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肺炎克雷伯菌耐药遗传元件样本和指标聚类分析初探
我们从新生儿中分离到1组(19株)厄他培南等碳青霉烯类药物耐药的多重耐药肺炎克雷伯菌( multidrugresistant Klebsiella pneumoniae,MDRKPN),对该组菌株进行了β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类等药物的耐药相关基因和多药外排泵基因,以及毒力基因、可移动遗传元件的遗传标记检测,并对检测结果作了样本和指标聚类分析,以探讨菌株的亲缘性和耐药基因与可移动遗传元件相互关系.
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儿科患者中对碳青霉烯类不敏感肠杆菌科细菌耐药性和耐药基因的研究
目的 研究儿科临床分离的对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌耐药性和产生碳青霉烯酶的耐药基因特征.方法 收集2008年1月至2010年12月北京儿童医院住院患儿分离出的46株对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌.使用琼脂稀释法进行药敏试验,测定抗菌药物的低抑菌浓度(MIC)值,按照临床实验室标准化研究所(CLSI) 2011年推荐标准判断结果.使用改良Hodge试验和双纸片协同试验,进行产碳青霉烯酶的表型确证.使用PCR方法进行碳青霉烯酶相关耐药基因的检测.采用WHONET5.6软件进行数据分析.结果 46株对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌,26株为肺炎克雷伯菌,占56.5%,13株为阴沟肠杆菌,占28.3%,7株为大肠埃希菌,占15.2%.对亚胺培南和美罗培南不敏感率分别为肺炎克雷伯菌69.2%和80.8%,阴沟肠杆菌76.9%和100%,大肠埃希菌85.7%和100%.46株肠杆菌科细菌,改良Hodge试验阳性40株(87.0%),双纸片协同试验阳性41株(89.1%).IMP基因阳性38株(82.6%),其余8株均未扩增出特异性条带检测均为阴性.结论 目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中,肺炎克雷伯菌多,占56.5%.肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素亚胺培南不敏感程度低于美罗培南,对碳青霉烯不敏感肠杆菌科细菌主要产生B类金属酶,均为IMP基因型.
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对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肠杆菌科细菌耐药机制的研究及流行病学调查
目的 对临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌进行耐药机制研究及流行病学调查.方法 收集2010年1月至2010年8月,对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肠杆菌科细菌18株,全自动微生物鉴定仪检测细菌对常见抗生素低抑菌浓度(MIC),纸片法检测细菌产超广谱β-内酰胺酶、头孢菌素酶、碳青霉烯酶的情况,并用PCR扩增、DNA测序确定所产碳青霉烯酶基因型.脉冲场凝胶电泳对耐药菌进行同源性分析.结果 8株耐药菌全部检出ESBLs酶、AmpC酶,17株检出KPC-2酶,3株EDTA纸片法阳性提示产其他金属碳青霉烯酶,其中两株合并产KPC-2.脉冲场凝胶电泳结果显示15株肺炎克雷伯菌分为6种带型.结论 KPC-2碳青霉烯酶是造成肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的主要原因,并在我院局部短暂流行,携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因.
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siRNA干扰铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达的研究
目的 探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响.方法 设计并合成4条小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4)序列,构建干扰RNA( short hair pin RNA,shRNA)表达载体,将带有siRNA质粒电转入PAO1和临床耐药株PAO3.应用E-test方法检测PAO1和PAO3抗生素MIC的变化.用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化.结果 经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功,并明显提高PAO和临床耐药株PAO3对抗生素的敏感性.RT-PCR结果显示干扰后的PAO1和临床耐药株PAO3 mexB基因表达明显下降(P<0.05).结论 siRNA成功干扰MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性,为临床上治疗铜绿假单胞菌感染,降低其耐药性提供了新的思路.
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鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究
目的 检测鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)蛋白酶样活性因子(chlamydial protease-like activity factor,CPAF)免疫优势区基因在E.coli BL21中高效表达的产物在Cps感染诊断中的应用,为建立Cps感染的快速诊断奠定实验基础.方法 利用生物信息学软件筛选出Cps CPAF免疫优势区基因序列(CPAFm,A196~A450),设计特异性引物,PCR扩增目的基因,将其克隆入pGEX6p-2载体后转化E.coli BL21,利用IPTG诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定重组蛋白.以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法;同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本,将检测结果进一步用Western blot方法验证.结果 构建原核重组质粒pGEX6p-2/CpsCPAFm,表达相对分子质量约为54×103的目的蛋白产物.以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清,其阴、阳性符合率均为100%;与肺炎嗜农原体(C.pneumoniae,Cpn)、沙眼衣原体(C.trachomatis,Ct)无交叉反应.对180份可疑病鸭血清标本进行检测,与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较,以Western blot方法作对照,自建的ELISA法符合率均为100%,Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77.5%~95.0%.结论 以Cps CPAF免疫优势区(A196~A450)作为诊断抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值.
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外排泵抑制剂对泛耐药铜绿假单胞菌作用的体内研究
铜绿假单胞菌(Psedumonas aeruginosa,PA)是主要的医院内感染致病菌,对抗假单胞菌作用的所有药物全部耐药的即为泛耐药PA[1](pandrug-re-sistance,PDR).主动外排系统的过度表达是导致PA耐药的重要机制.Henrichfreise等[2 ]报道多耐药的22株PA中,有82%的菌株高表达MexXYOprM.衣美英等[3 ]发现主动外排系统在多耐药PA中表达超过60%.
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2008-2009年广东手足口病非CA16非EV71肠道病毒株的鉴定及其VP1基因分型研究
目的 探讨2008-2009年广东省手足口病非CAI6非EV71肠道病毒株的流行情况以及毒株型别.方法 从2008-2009年广东省手足口病粪便样本中采用RD细胞和HEp-2细胞分离病毒毒株,待出现细胞病变后收集上清采用RT-PCR进行鉴定.非CA16非EV71毒株再进行VP1测序分析,序列通过BLAST程序鉴定型别,用MEGA4.0软件进行基因进化分析.结果 共分离到22株非CA16非EV71毒株,通过BLAST程序鉴定犁别.2008年9株非CA16、非EV71的毒株有CA2型、CA4、CB3型;2009年13株有EV80、E13、E30、CB5、E24、PV1、CA10、CA6和CA2.各毒株间同源性低,各毒株分别归属CoxA、CoxB、埃可肠道病毒、新型肠道病毒和脊灰病毒组.结论 广东省2008-2009年两年来,手足口病除了CA16和EV71占主导地位外,并不存在其他的优势株,其他型肠道病毒分布比较广,既有CoxA组病毒、CoxB组,也有E13、E24、E30、新型病毒EV80和脊髓灰质炎病毒PV1,儿组病毒伴随流行.
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新型乙肝疫苗CpG-BW006佐剂对鼠脾B细胞表型和功能的影响
乙型肝炎病毒(HBV)感染是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的重要原因,目前尚无治疗HBV感染的特效方法.乙肝疫苗是预防HBV感染安全、有效的手段.然而,接种乙肝疫苗后的免疫应答受多种因素的影响,约有10%的人群对该疫苗反应低下或无反应[1].CpG为近年来佐剂研究的热点.由于CpG-ODN具有同时提高细胞免疫和体液免疫的特点,在体内主要诱导Th1型免疫应答,因此被认为是一种有潜力的新型免疫佐剂[2].本研究用一种新设计合成的含有CpG基序的寡核苷酸( BW006)联合HBsAg对B细胞表型和功能的影响进行研究,目的是探讨CpG作为乙肝疫苗佐剂诱导机体免疫应答的机制,为新型预防和治疗性乙肝疫苗的研发提供依据.
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HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响
目的 探讨HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响.方法 构建pGL3-DcR3-luc( -1010 bp- +114 bp)荧光素酶报告基因;利用脂质体介导的方法将pGL3 -DcR3 -luc转染到MT-2、TaxP、Jurkat细胞中,48h后检测DcR3荧光素酶报告基因的活性;利用脂质体介导的方法将梯度剂量的pCMV -Tax转染入Jurkat细胞,48 h后提RNA逆转录,real-time PCR检测DcR3 mRNA 的表达的变化;选用流式细胞技术检测MT-2、TaxP、Jurkat细胞表面DcR3蛋白的表达.结果 成功构建DcR3基因调控序列荧光素酶报告基因pGL3-DcR3-luc;荧光素酶活性的检测显示,与对照组相比,MT2细胞荧光素酶活性升高了32.07± 12.43倍,TaxP细胞荧光素酶活性升高了13.27±4.04倍,Jurkat细胞荧光素酶活性升高了1.26±0.49倍.与Jurkat细胞相比,MT2细胞和TaxP细胞的相对荧光素酶活性明显升高(P<0.01);Real-time PCR结果显示,4组Ct内参/Ct目的基因的值依次是0.40±0.02、0.44±0.01、0.47±0.02、0.53±0.02; DcR3 mRNA的表达与转染pCMV-Tax存在着剂量依赖性(P<0.05).流式细胞技术检测,MT2和TaxP细胞实验组DcR3蛋白的表达较对照组Jurkat细胞表达的高(P<0.05).MT2细胞的结果是33.1 ±9.9,TaxP细胞的结果是35.1 ±4.8,Jurkat细胞的结果是16.9±2.3.结论 Tax蛋白能够促进DcR3基因在T细胞中的表达.
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巨细胞病毒感染后雄鼠生殖细胞凋亡与睾丸NF-κBp65的表达
目前,大多学者认为人巨细胞病毒(HCMV)是引起男性不育的病原微生物之一.本文建立睾丸鼠巨细胞病毒(MCMV)感染模型,采用Hoechst 33258染色法对MCMV感染不同时期睾丸组织进行生殖细胞凋亡检测,同时采用免疫组化染色(S-P法)检测MCMV感染不同时期睾丸组织生殖细胞内核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)的表达情况,探讨MCMV感染对雄鼠生殖细胞凋亡的影响,研究睾丸组织NF-κBp65表达与生殖细胞凋亡的相关性,揭示NF-κBp65对生殖细胞凋亡的调控机制及NF-κBp65在MCMV致病机制及机体抵御MCMV感染中的可能作用.
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细菌持留状态研究进展
目前国内对持留菌的认识多来源于结核分枝杆菌.通常认为结核分枝杆菌在宿主内以非增殖方式存在而造成病程的延缓及导致复发的潜伏状态为细菌的持留状态(persistence),引起这种现象的菌群则为持留菌(persisters).国际上对持留菌的研究并不仅限于结核菌.为此本文就持留菌的发现、研究历程及现阶段研究进展等加以概述,以便对细菌持留现象有更深刻的理解.
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布鲁菌通过干扰自噬途径实现免疫逃逸
布鲁菌病是一种人畜共患传染病,其致病菌属于兼性厌氧胞内寄生菌.人类因接触病畜产品而感染.布鲁菌通过黏膜进入机体,并扩散到网状内皮系统及其他组织(肝、脾、淋巴结及骨关节等)长期定居、繁殖、产毒致病.患者表现为波浪热,少数还并发关节和骨的炎症[1].布鲁菌这种长期的“定居”行为,显示其能够突破机体免疫防御系统,具有强大的生存和致病能力.因此,深入探讨布鲁菌逃避免疫系统的识别和清除机制,对于治疗、预防和控制布鲁菌病有一定意义.
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我国HIV亚型研究进展
人类免疫缺陷病毒( human immunodeficiency virus,HIV)显著的特点是其高度变异性,HIV在传播过程中产生了许多具有相对独立基因序列特征的组和亚型,对我国为重要的是M (main)组,M组可以分为A~D、F~H、J和K这9个亚型[1]和若干流行重组型.亚型研究可以了解HIV流行毒株的种类、来源和流行时间,对了解HIV传播规律和流行趋势、指导艾滋病预防控制工作具有重要的意义.
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黄热病减毒活疫苗的研究进展
黄热病毒疫苗17D (yellow fever attenuated live vaccine-17D,YF-17D)问世于20世纪30年代,至今已有70多年的使用历史,接种人群超过6亿.我国早在20世纪50年代就按照WHO规范开展了黄热病疫苗YF-17D的生产,已有近60年的历史,主要供潜在暴露危险的人群使用;至今我国仍保持年均生产数万份YF-17D疫苗的规模用于计划接种.由于黄热疫苗的安全性高、保护性好,已被国际公认为成功疫苗的典范.新兴的系统疫苗学(systemic vaccinology)是一门综合学科,采用完整的设计、全方位的试验,以及系统地组织和分析各类研究数据,通过总结归纳疫苗引起的生物反应的特征和规律来探求有效疫苗的免疫保护机制的方法.因此近些年,利用系统疫苗学手段研究黄热病毒减毒活疫苗接种后激活的免疫应答类型,将使我们利用YF-17D这一成功的疫苗深入研究免疫系统识别、活化机制,并为以YF-17D为载体的嵌合疫苗研究以及其他病毒性疾病疫苗的设计提供新思路.
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HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核杆菌的应用研究
目的 采用HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌,评价其优缺点.方法 收集浙江、安徽等地74株临床非结核分枝杆菌,采用HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌,并用16S rRNA基因测序方法对其进行比较和评价.结果 74株非结核分枝杆菌HAIN基因分型试剂盒鉴定结果为:31株胞内分枝杆菌,12株脓肿分枝杆菌,8株偶发分枝杆菌,6株堪萨斯分枝杆菌,5株鸟分枝杆菌,3株耻垢分枝杆菌,2株草分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,另外有4株菌株只能鉴定为分枝杆菌属,不能鉴定到种.8株结核分枝杆菌鉴定准确.与16SrRNA基因测序相比较,HAIN基因分型试剂盒除了4株菌株只能鉴定为分枝杆菌属以外,其余70株非结核分枝杆菌均能鉴定到种,鉴定符合率为94.59%;并且它能进一步区分脓肿分枝杆菌和龟分枝杆菌,以及堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌.如果单纯鉴定HAIN基因分型试剂盒菌株范围之内的临床常见非结核分枝杆菌菌株,鉴定符合率为100%.结论 HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌时间短、操作简单、结果准确,可在临床推广使用.
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parC检测在解脲支原体基因分型中的临床应用
目的 根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和Up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用.方法 依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分Uu和Up的特异性引物与和探针;通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株(Uu 12株,Up38株),7种阴道常见分离菌以鉴定该方法的特异性;留取70例性病门诊非淋球菌性泌尿生殖道炎症患者和71例妇科正常体检者的标本,分别进行解脲支原体培养和基因分型鉴定,以比较两种方法的敏感性,并应用统计学分析Uu、Up在性病和正常人群中分布的差异.结果 应用parC基因分型法成功将serovar1标准株、serovat4标准株、Uu和Up临床分离株鉴别,Uu、Up两生物群之间以及7种阴道常见菌均未出现非特异性扩增;基因分型方法的敏感性显著高于培养法(P<0.05);在70例性病门诊患者中,Uu和Up的检出率分别为8.57%和61.40%,两者混合感染为24.30%;在71例妇科体检人群中Uu和Up检出率分别为7.04%和67.60%,两者混合感染为8.45%,性病门诊病人中解脲支原体感染率显著高于体检人群(P<0.05),Uu和Up单纯感染在两群体中的分布差异无统计学意义(P>0.05),而混合感染在性病门诊病人中显著增加(P<0.05).结论 解脲支原体在性病患者中的感染率显著高于健康体检者,且混合感染在性病患者中明显增加,而Uu和Up单纯感染在两人群中分布差异无统计学意义,因此解脲支原体的致病可能与其不同基因型的混合感染有关.
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肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究
目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.
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4种国产和3种进口第4代HIV抗原抗体检测试剂的质量评价
目的 对4种国产和3种进口第4代HIV诊断试剂的质量进行评价.方法 利用HIV抗体阴性样品库和核酸阳性样品库、BBI阳转血清盘样品等,对4种国产和3种进口第4代试剂的敏感性和特异性、检测HIV-1早期感染的能力进行分析.结果 7种第4代试剂的敏感性均为100% (95% CI:99.86%~100%),且1份HIV-1感染窗口期样品均检测为阳性,其中1种进口试剂“8+”值较大(1.0892),其余6种试剂的“δ+”值均比较小(0.0836 ~0.3003).对阴性样品,7种试剂均存在不同程度的假阳性(特异性为97.80% ~ 99.60%,“δ-”值为-1.3803 -0.4778).对BBI阳转血清盘样品,国产试剂的阳转血清相对敏感性系数为-0.500~0,2种进口试剂则为-0.600和-0.700.结论 7种试剂均具有较高的敏感性和特异性,第4代HIV试剂用于血液筛查可发现HIV感染窗口期样本,对减少HIV传播的风险有一定的意义.但进口第4代试剂检测HIV-1早期感染的能力强于国产第4代试剂.
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医者典范 总编楷模
我国著名的心血管病及老年医学专家,北京医院名誉院长,中国共产党的优秀党员,中华医学会系列杂志杰出的总编辑钱贻简教授,因病于2011年7月6日在北京逝世,享年86岁.7月12日清晨,全国各界的代表和中华医学会系列杂志的编辑们前往北京医院送别钱老,在告别室中摆放着中华医学会、中华医学会杂志社以及众多中华医学会系列杂志送来的花圈.7月21日,北京医院隆重召开了缅怀钱贻简教授座谈会.卫生部副部长黄洁夫、北京医院院长林嘉滨、笔者等近百人参加了座谈会.
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