中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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c-Jun氨基末端激酶在小鼠T细胞增殖中的作用
目的 研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在小鼠T细胞增殖中的作用.方法 以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激下评价小鼠T细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析JNK的一种新的特异性抑制剂SP600125存不同剂量、不同时间对T细胞增殖的影响,并应用CellQuest软件分析增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)及抑制指数(HI).采用碘化丙锭染色分析不同剂量SP600125对Con A或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的作用.结果 随着SP600125浓度从1.0μmol/L逐渐增至16.0 μmol/L,Con A对T细胞的促增殖作用逐渐减弱,以8.0～16.0 μmol/L的抑制作用为明显,呈剂量依赖关系(r=0.98,P＜0.01);选择佳剂量8.0 μmol/L,SP600125对T细胞增殖的抑制作用随时间从24 h递增至96 h而逐渐增强;进一步发现SP600125能使PDB加Ion刺激的小鼠T细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,且阻止作用随上述浓度的增加而增强,呈明显剂量依赖关系(S期:r=-0.98,P＜0.01;G2/M期:r=-0.88,P＜0.05);SP600125也呈剂量依赖性地使ConA诱导的T细胞停滞于F0/G1期,阻止其进入S期(r=-0.90,P＜0.05).结论 JNK信号通路的活化在小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用.
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利用基因敲除小鼠研究维生素D在免疫功能发育中的作用
目的 25羟维生素D-1α羟化酶基因敲除小鼠(1-apha hdroxylase gene knockout,1-α(OH)ase-/-)体内无维生素D的活性形式--1,25(OH)2D3,研究这种小鼠的免疫功能,分析维生素D在免疫功能发育中的作用.方法 实验分3组,(1)普通饲料组;(2)高乳糖饲料组;(3)野生型对照组.用生化分析仪测定小鼠血钙浓度.用流式细胞仪分析淋巴细胞CD4、CD8、CD19等亚群.用3H掺入法检测淋巴细胞增殖能力.同时检测外周血白细胞计数和腹腔巨噬细胞的吞噬功能.结果 与野生型小鼠相比,普通饲料组1-α(OH)ase-/-小鼠外周血白细胞计数、CD4和CD8淋巴细胞阳性率、腹腔巨噬细胞吞噬指数以及脾脏淋巴细胞增殖能力显著下降(P＜0.05),而在高乳糖饲料组1-α(OH)ase-/-小鼠中,以上各项异常均恢复正常.CD19淋巴细胞阳性率在各组之间无明显变化.结论 维生素D缺乏会导致小鼠外周血白细胞计数下降,淋巴细胞CD4、CD8阳性率明显降低.体液免疫(B淋巴细胞)无明显变化.提示低血钙在1α羟化酶基因敲除小鼠免疫功能异常中占重要作用.
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以Ad SIINFEKL-Luc为抗原研究免疫反应的量效关系
目的 定量地探讨腺病毒载体编码的已知抗原与其诱发的抗原特异性细胞免疫反应的量效关系.方法 用不同MOI的编码鸡卵清蛋白MHCⅠ多肽SIINFEKL(OVAp257-264)与荧光素(luciferase,Luc)融合蛋白的腺病毒(Ad SIINFEKL-Luc)感染小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),在不同的时间点定量检测DC中Luc的表达;相应地,用表达不同水平SIINFEKL-Luc融合蛋白的DC皮下免疫C57BL/6小鼠,通过体内CTL杀伤试验和细胞内γ干扰素(IFN-γ)染色(ICS)定量分析CTL杀伤活性及其产生IFN-γ的能力.结果 Luc在DC中的表达水平与Ad SIINFEKL-Luc所用剂量具有剂量效应关系,Ad SIINFEKL-Luc一次感染后在DC中持续4 d仍然检测得到Luc的表达.分别用0.1、1、10和100MOI的Ad SIINFEKL-Luc/5×105 DC免疫小鼠1周,体内CTL杀伤试验分析小鼠脾细胞4 h CTL杀伤率分别是14.4%±2.3%、32.6%±4.5%、86.7%±3.8%和99.8%±0.3%.ICS分析脾脏IFN-γ产生的CD8+T细胞占总CD8+T细胞比率分别是0.49%±0.12%、1.74%±0.21%、4.12%±0.34%和9.53%±0.58%.结论 Ad SIINFEKL-Luc表达抗原水平的高低与其诱发特异性细胞免疫反应的强弱明显相关.在一定范围内,抗原表达高低与其诱发的抗原特异性细胞免疫反应的强弱呈正相关.
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VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析
通过阻断肿瘤血管新生的相关因子与受体的结合抑制肿瘤血管的形成,已成为近年肿瘤治疗的重要研究策略.VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是促进血管内皮细胞生长重要的因子.本研究前期工作中已通过筛选噬菌体随机肽库,获得阳性克隆之一7P419(所带肽序列为GWYYDAX,X代表一特定氨基酸),该短肽具有明显的抑制VEGF的活性.本文将7P419与硫氧还蛋白Trx融合表达,检测该融合蛋白的抑制效果,并与人工合成肽7P419比较.
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螺杆菌感染与NF-κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义
目的 研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系,从而探讨在人食管癌发生中的意义.方法 随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,随机选4例测序及同源比较.阳性者再扩增幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)的特异基因相对分子质量(Mr)26×103的种特异性抗原和相关功能基因(CagA,VacA).并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况.结果 32.5%(13/40)的食管癌组织中发现有螺杆菌16S rRNA基因存在,正常人食管组织无一例阳性.4例测序及同源比较,食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的16S rRNA序列有99%～100%同源性.阳性标本均扩增出Hp特异基因Mr26×103种特异性抗原,但仅2例扩增出CagA基因,3例扩增出VacA基因.免疫组化法染色显示,16SrRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100%(13/13),而16S rRNA阴性食管癌组织表达率仅占18.5%(5/27),二者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染,该螺杆菌可能为Hp.螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加,可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一.
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黄芩水煎液对生物被膜的抑制作用及对左氧氟沙星的增效作用
生物被膜(biofilm,BF)使细菌能够逃逸抗生素的杀菌作用和机体免疫系统的清除,造成感染的反复发作.铜绿假单胞菌(Pa)在院内获得性感染中检出率较高,也是BF相关感染的重要病原菌.本文探讨黄芩水煎液和左氧氟沙星(LFX)联用以后,对Pa的BF内细菌的抗菌活性的影响.
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深圳市中央空调冷却塔军团菌核糖体基因型研究
军团病(Legionnaires'disease)是由军团菌感染引起的以肺炎为主要症状的急性呼吸道传染病,嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)是引起军团病的主要菌群.目前研究发现军团菌广泛存在于自然界的土壤和各种水环境中,中央空调冷却塔是军团菌主要的传染源,近30年来军团病大的暴发多与中央空调冷却塔被军团菌污染有关.
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双歧杆菌的完整肽聚糖对大鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的调控
双歧杆菌定植于人体肠道内,对维持肠道的微生态平衡和人体的健康起重要作用.完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)是双歧杆菌细胞壁中的多糖,能激活巨噬细胞,增强其吞噬能力,提高其能量代谢水平以及细胞毒功能.此外,WPG也能促使巨噬细胞分泌多量的IL-1、IL-6、IL-12、IL-18、TNF-α和NO.本文以Westem blot和凝胶迁移电动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测了分叉双歧杆菌的WPG对大鼠腹腔巨噬细胞PKC、IκBα和NF-κB的影响,旨在探讨WPG激活巨噬细胞的信号途径.
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大肠杆菌O157∶H7 OI115岛的多态性分析
目的 研究大肠杆菌O157:H7测序菌株EDL933的OI115岛在肠杆菌科细菌中的分布.方法 用PCR和杂交方法检测OI115岛的21个基因,同时进行该岛序列测定.结果 OI115岛和SPI-1毒力岛的分布特点相似,具有种属局限性.仅在大肠杆菌中存在,在EPEC、ETEC、EAggEC均可检测到该岛的缺失形式,在沙门菌、志贺菌、耶尔森、摩根菌等其他肠杆菌科细菌中未发现该岛的存在.在不同类别的致泻性大肠杆菌中,OI115岛也各有特点,共检测到该岛的3种存在形式.产生志贺毒素的大肠杆菌O157:H7菌株、2株EAggEC和2株不典型大肠杆菌均具有完整的OI115岛.在不产生志贺毒素的大肠杆菌O157中具有H5、H12、H29、H42、H11、H19、H26、H10、H21鞭毛型的菌株缺失了第3基因簇,具有H16鞭毛型的菌株第2、第3基因簇同时缺失.结论 本研究发现,OI115岛在致泻性大肠杆菌中分布广泛,可能和病原菌的进化有关.
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铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究
目的 利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A(PE),为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础.方法 应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因,将其克隆于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;制备融合蛋白包涵体,并采用Ni-NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白;采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性,MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性.结果 通过对PCR反应体系的优化,扩增到了PE全长结构基因.所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为66×103,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达.经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95%.MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为2.13 μg/ml、2.58 μg/ml.结论 通过对PE的表达纯化,获得了具有细胞毒活性的重组PE,为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础.
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我国脑膜炎奈瑟菌孔蛋白PorA、PorB的多态性分析
目的 以蛋白质组学研究为基础,分析2003-2005年我国流脑暴发流行期间C群脑膜炎奈瑟菌菌株特征,建立以致病性相关蛋白多态性为目标的新分型方法.方法 利用双向电泳和MALDI-TOF质谱鉴定分析2003-2005年流脑流行期内分离的66株C群脑膜炎奈瑟菌菌株及2株参考菌株的蛋白表达,重点分析与致病性相关的蛋白多态性特征.结果 根据孔蛋白PorA、PorB在双向电泳中的多态性,建立了12个特征菌型.安徽菌株的PorA和PorB蛋白电泳谱型显示出了高度的一致性,而其他地区的菌株则显示出高度的多态性.结论 PorA和PorB蛋白2-DE电泳谱型可以作为一种新的菌株分型方法,可能在菌型变迁检测和流脑暴发预警中具有重要应用前景.
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采用杆状病毒表达系统表达EGFP标记的HPV-16L1病毒样颗粒
目的 制备增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)病毒样颗粒,为研究HPV-16L1的生物学活性提供一种方法.方法 采用Xbal+HindⅢ双酶切pGEM-T-HPV-16质粒,获得HPV-16L1基因片段,用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因片段,NcoⅠ+SalⅠ双酶切,依次克隆入杆状病毒转移载体,获得重组pFB-EGFP-HPV-16L1转移载体;在DH1OBac内通过转座子Tn7的介导,获得重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒;感染Sf-9昆虫细胞;荧光显微镜、激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法确定融合蛋白的荧光特性及细胞学定位;利用Western blot分析融合蛋白的表达;电子显微镜观察病毒样颗粒(VLP)的形成;利用小鼠红细胞凝集试验及凝集抑制试验分析生物学活性.结果 重组pFB-EGFP-HPV-16L1辅助表达载体及重组杆状病毒中EGFP-HPV-16L1融合基因构建正确;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染重组杆状病毒Ac-EGFP-HPV-16L1的Sf-9细胞核内可见耀眼的绿色荧光,免疫组织化学证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白主要位于Sf-9细胞核内;Western blot证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白相对分子质量(Mr)为83×103,与理论值一致;透射电子显微镜观察发现感染重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒的Sf-9细胞核内和裂解上清内均可发现大量形态均一的VLP形成;小鼠红细胞凝集试验证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白可引起小鼠红细胞凝集,且可被抗HPV-16L1单克隆抗体抑制.结论 杆状病毒表达系统表达的EGFP标记的HPV-16L1蛋白既能自组装成病毒样颗粒、具有构象依赖性生物学活性,又能发射易于检测的绿色荧光,有可能用于HPV-16L1蛋白的生物行为研究,并实时可视化追踪其在宿主细胞内的转运过程.
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c-myc基因在EBV转化人胃上皮细胞中的作用
目的 研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后c-myc基因的表达状况及转化作用,以探讨c-myc基因在Epstein-Barr病毒(EBV)相关胃癌发生中所起的作用.方法 用携带NEOr基因的重组EBV产生细胞系Akata 1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,采用脂质体介导法将c-myc基因转染至同一细胞,以pcDNA3空载体质粒转染同一细胞为对照;经G418筛选获得感染或转染的抗性细胞克隆;采用免疫细胞化学法测定EBNA1的表达以鉴定EBV感染细胞克隆,测定EBV感染和c-myc基因转染细胞中C-myc蛋白的表达;通过形态学观察、细胞生长曲线测定及流式细胞分析等方法观察细胞生物学特性的变化.结果 与对照组相比,EBV感染及c-myc转染后细胞发生明显的形态学变化,生长速度明显加快,S期细胞比例显著提高,分别为(70.96±0.91)%和(60.67±3.06)%vs(34.74±1.03)%,P＜0.05,表明EBV感染及c-myc基因转染均使细胞增殖加快.结论 EBV感染及c-myc基因转染可使人胃上皮细胞的增殖速度加快,细胞恶性程度增强,但并未导致肿瘤的发生.EBV对人胃上皮细胞的转化作用可能与c-myc基因的过度表达有关.
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小干扰RNA对人乳头状瘤病毒6bE7基因表达的沉默作用
目的 研究靶向人乳头状瘤病毒HPV-6b型E7基因的二聚体小干扰RNA(siRNA-HPV-6bE7)对靶基因表达的沉默作用.方法 建立并筛选稳定表达HPV-6bE7基因的B16和293T转染细胞株,用脂质体转染法将体外合成的siRNA-HPV-6bE7转染上述细胞株,采用实时荧光定量PCR分析靶基因HPV-6bE7的mRNA表达情况.结果 用不同浓度的siRNA-HPV-6bE7转染细胞48 h,50nmol/L浓度对B16细胞中靶基因表达的抑制作用强(抑制率87.05%),1 nmol/L抑制作用较低(9.14%);而在293T细胞,10 nmol/L的siRNA对靶基因表达的抑制效应大(78.87%),1 nmol/L仍有一定抑制作用(46.92%).50 nmol/L siRNA-HPV-6bE7转染B16细胞后,靶基因的mRNA表达在24 h内开始受抑制(32.47%),48 h作用强(74.72%),96 h作用很低(8.91%);25 nmol/L和10 nmol/L的siRNA转染293T细胞后,均在24 h内起效(26.66%、20.31%),抑制作用至少能维持72 h(65.93%、35.23%).结论 siRNA-HPV-6bE7对B16和293T细胞外源性靶基因表达均有较强的特异性沉默作用,在不同细胞株达到大抑制效应的siRNA浓度不同,但时效曲线的变化趋势基本一致,siRNA均在24 h内起效,48～72 h达到高峰,抑制作用至少能维持72 h.本研究结果为下一步在动物或临床进行siRNA干扰试验提供了实验依据.
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McAb胶乳凝集试验检测流行性出血热抗原研究与临床应用
McAb胶乳凝集试验具有特异性强、敏感性高、反应速度快、作用时间短、结果稳定、重复性好等特点.我们自1990年开始研究McAb胶乳凝集试验检测EHF抗原的方法,经多年来在当地市、县级医院和疾病控制中心共计收到的541份标本检查结果表明,McAb胶乳凝集试验检测EHF抗原具有简便、快速、特异、敏感等特点,特别适合基层医院推广.
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重型肝炎相关的人纤维介素基因启动子的克隆及功能分析
目的 明确在病毒蛋白HBc和HBx作用下,hfgl2基因5'端非编码区对转录激活起重要作用的转录调控序列.方法 运用基因重组的方法,构建一系列5'端缺失而保留共同3'端的hfgl2基因启动子虫荧光素酶报告质粒,将其分别与病毒蛋白HBc和HBx真核表达质粒共转染CHO细胞和HepG2细胞,检测各组细胞的相对荧光素酶活性.结果 酶切鉴定以及DNA测序等证实一系列hfgl2基因启动子虫荧光素酶报告基因质粒构建成功,系列启动子缺失试验证实:在hfgl2基因启动子-817位至-467位(相对于转录起始点)之间存在着激活该基因的调控序列.结论 在HBV病毒蛋白HBc及HBx作用下,hfgl2基因的启动子区存在一个与其转录表达有关的调控序列,探讨了重型肝炎相关的hfgl2基因高度表达的分子机制,为下一步研究相关的顺式作用元件及反式作用因子奠定了基础.
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类风湿关节炎T细胞亚群4-1BB的表达与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系
目的 探讨体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达,及与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系.方法 应用流式细胞术检测体外培养的30例RA患者和20例正常对照者T细胞活化前后4-1BB的表达,并且应用ELISA方法检测培养上清液中IFN-γ、IL-4水平.结果 RA患者CD4+T和CD8+T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56%±4.08%和10.33%±2.13%;1.24%±0.12%和0.87%±0.09%,P＜0.01),经抗CD3单抗体外刺激后CD4+T和CD8+T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21%±4.29%和21.35%±8.12%,P＜0.01).RA患者CD4+T/CD8+T比值明显升高,而且与4-1BB+CD4+T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P＜0.01),RA患者T淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4均高于正常对照组(P＜0.05),经抗CD3单抗体外刺激后上清液中IFN-γ及IL-4均明显高于活化前,以IFN-γ升高为显著(P＜0.01).而且抗CD3单抗刺激前后4-1BB+CD4+T细胞数与培养上清液中IFN-γ水平均呈正相关关系(r=0.721,r=0.487,P＜0.05).结论 类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4+T细胞活化,促使TH1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤.
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鼻息肉组织TH细胞亚群与嗜酸性粒细胞浸润
鼻息肉的发生机制尚不确定,细菌、真菌感染,变态反应可能作为触发因素.鼻息肉组织含大量嗜酸性粒细胞和淋巴细胞,可能在鼻息肉发生中起重要作用.功能不同的TH细胞存在的证据对基础和临床免疫学产生了重大影响.本研究通过流式细胞术测定不同类型鼻息肉组织TH1及TH2细胞百分率,HE切片嗜酸性粒细胞计数,以评价感染因素和变态反应因素在鼻息肉发生中的作用,明确TH细胞与嗜酸性粒细胞增多的关系,指导鼻息肉分型和治疗.
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核不均一性胞核核糖核蛋白Ⅰ(hnRNPI)抗原表位在系统性硬化症中临床意义的研究
目的 探讨核不均一性胞核核糖核蛋白Ⅰ(hnRNPI)抗原表位多肽在系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)中的临床意义,初步建立简便快捷的ELISA检测方法,为系统性硬化症的早期诊断寻找新的临床指标.方法 根据已知的hnRNPI蛋白的氨基酸序列,应用不同的蛋白质抗原表位图谱分析软件对其进行表位分析,经比对筛选后,化学合成hnRNPI短肽序列2个,分别命名为Ⅰ-1264-292及Ⅰ-2441-461,作为抗原对临床上包括硬皮病在内的多种结缔组织病患者血清相应抗体进行ELISA检测,包括SSc 42例、系统性红斑狼疮(SLE)102例、干燥综合征(SS)26例、混合型结缔组织病(MCTD)16例、未分化结缔组织病(UCTD)13例,其他结缔组织病(CTD)30例、类风湿关节炎(RA)26例及正常对照54例.结果 抗hnRNPI-1及抗hnRNPI-2多肽抗体在SSc组中阳性率均明显高于其他疾病组(P＜0.05),在SSc中敏感性分别为47.62%及38.1%,特异性分别为93.43%及91.08%,二者之间差异无统计学意义(P＞0.05).另外,除了与SSc患者病程相关外,该二抗体均与发病年龄、临床症状、器官受累、ESR、抗Scl-70抗体、抗着丝点抗体及抗核仁抗体之间未发现有统计学意义的相关性(P＞0.05).结论 I-1及I-2分别是位于hnRNPI蛋白表面的抗原表位之一,具有抗原性,其抗体对SSc的临床诊断具有较高的敏感性及特异性,且在病程早期具有更高的阳性率,有助于SSc的早期诊断.
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黑龙江地区肾综合征出血热患者中病毒基因检测及流行病学意义
目的 进一步了解黑龙江地区HFRS患者中汉坦病毒的基因类别,同时对该病近年来的流行病学特征进行初步分析.方法 采用RT-PCR技术对31份肾综合征出血热(HFRS)患者早期血清中的病毒进行基因分型,并根据患者发病季节分成两个感染时段,即冬季(2003年11月一2004年2月),春夏季(2004年4月-2004年9月),再结合临床症状综合分析.结果 31份血清中,共有22份血清检测阳性,其中冬季感染时段14份血清,有8例检出阳性(Ⅰ型5例,Ⅱ型3例);春夏季感染时段17份血清,有14例检出阳性(Ⅰ型5例,Ⅱ型9例).结论 黑龙江地区不仅存在汉坦病毒基因Ⅰ型,且同时存在Ⅱ型;冬季以Ⅰ型为主,春夏季以Ⅱ型为主.
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中国HIV-1感染者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与疾病进展相关性研究
目的 对中国HIV-1感染者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平及与疾病进展相关性进行研究,探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在HIV-1疾病进程中发挥的作用.方法 选取35名HIV-1感染者及14名健康对照,应用流式细胞仪胞内染色技术在单细胞水平检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达及淋巴细胞活化、凋亡水平.结果 中国HIV-1感染者CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平与CD4+T细胞显著负相关(r=-0.544,P=0.001),与病毒载量明显正相关(r=0.484,P=0.026),与CD4+T细胞凋亡(CD95表达)水平明显正相关(r=0.431,P=0.011).艾滋病人CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平明显高于无症状HIV感染者(P＜0.05),与健康人相比差异无统计学意义.艾滋病人CD4+、CD8+T细胞凋亡水平明显高于无症状HIV感染者及健康人(P＜0.05),艾滋病人及无症状HIV感染者CD4+、CD8+T细胞活化明显高于健康人(P＜0.05).结论 中国HIV-1感染者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平与疾病进展明显相关.
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SARS愈后2年T淋巴细胞亚群的研究
严重急性呼吸综合症(SARS)是由冠状病毒的一个新的变种引起的严重的高致病的病毒性传染病[1],传染性强、发病快,病情严重威胁人类的健康和生命.其发病早期出现CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞下降,随病情好转多数患者的细胞免疫功能指标逐渐回升,为了解SARS患者愈后2年的细胞免疫功能的状态,我们于2005年5月对100例SARS确诊病例(SARS血清抗体阳性)愈后2年进行随访调查,对其T淋巴细胞亚群进行分析研究,探讨SARS愈后2年T淋巴细胞亚群现状及影响因素.
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问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测
寻找钩体属特异性保护抗原,对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值.Cullen等[1]首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因.我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因[2].已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫[3].我们采用显微镜凝集试验(MAT)检测了156份钩体病人血清的凝集效价,并建立rLipL21-IgM/IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测.
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中国北方汉族人群强直性脊柱炎与HLA-B27亚型关联性研究
强直性脊柱炎(AS)患者131例,根据患者民族、籍贯挑选出北方汉族群体,临床均符合1984年AS纽约修订诊断标准.男女比例2.68:1,年龄5～69岁,平均25岁;采用微量淋巴细胞毒实验,筛选出118例HLA-B27阳性样本;正常对照组,从4202名中国北方汉族群体,主要包括北京、河北、河南、山东、辽宁、黑龙江、山西、陕西等近10个省市造血干细胞供者中,采用流式反向PCR-SSO(One Lambda RSSOIA,RSSO1B,RSSO2B1)方法检测出150名HLA-B27阳性样本.采用PCR-SSP方法,以中国北方汉族HLA-B27(+)的AS患者为研究对象,150例北方汉族HLA-B27(+)正常健康人为对照,对B27基因亚型与AS关联性进行分析.
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口服鼠疫F1-Ⅴ重组融合蛋白活菌疫苗的构建及免疫效果的初步研究
鼠疫耶尔森菌能产生很多由染色体或质粒编码的毒力因子,包括pgm、pst、Yops、F1抗原、Ⅴ抗原等[1].F1和V抗原已被证实为主要保护性抗原,且存在属间保守性,F1-Ⅴ融合抗原分子在免疫原性和免疫保护性上具有叠加效应,将两者联合接种可保护小鼠抵抗109 LD50强度攻击[2].在鼠疫杆菌基因组、蛋白组和功能基因组研究的基础上,F1和Ⅴ是鼠疫新型疫苗研究首选的保护性抗原分子的靶标.
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蛋白体佐剂及用于鼠疫F1-Ⅴ抗原的免疫效果
目的 以蛋白体(proteosomes)佐剂,非共价结合鼠疫F1-V重组蛋白为免疫原,探讨滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答和免疫保护效果.方法 佐剂与鼠疫F1-Ⅴ重组蛋白为免疫原非共价结合,滴鼻免疫BALB/c小鼠4次后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-Ⅴ的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-Ⅴ的黏液分泌型IgA;并用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化.第4次免疫后7 d,用100 LD50的鼠疫141强毒株进行腹腔攻毒.结果 (1)以蛋白体为佐剂的鼠疫F1-V抗原与单纯的F1-V组相比,蛋白体疫苗组诱导血清IgG、IgA抗体显著升高(P＜0.01),同时蛋白体疫苗组能诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内多个黏膜部位特异性IgA抗体的产生,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P＜0.01);(2)蛋白体疫苗组主要引起IgG1型抗体,主要诱导TH2型免疫反应;(3)蛋白体疫苗组NALT和SP中CD4+/CD8+比值比PBS对照有显著增高(P＜0.01),MLN和PP中CD4+/CD8+比值与PBS对照差异无统计学意义(P＞0.05).(4)小鼠在100 LD50的鼠疫141强毒株腹腔攻毒后鼠疫F1-V重组蛋白组小鼠免疫保护率为0,而蛋白体佐剂疫苗组小鼠免疫保护率为67%.结论 以自制的蛋白体为鼠疫F1-V抗原的佐剂滴鼻免疫小鼠,蛋白体不仅提高鼠疫F1-V抗原的系统免疫应答,而且能诱导小鼠呼吸道、消化道和生殖道局部黏膜免疫应答.蛋白体佐剂鼠疫疫苗对100 LD50的鼠疫141强毒株腹腔攻毒具有一定的免疫保护作用,这为鼠疫黏膜疫苗的研制提供候选材料,也为鼠疫黏膜疫苗深入研究奠定了基础.
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基于Ii分子的HCV-NS3内源性靶向基因疫苗的构建及免疫应答研究
目的 构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗并在真核细胞中表达,用构建的基因疫苗免疫BALB/c小鼠,研究免疫后小鼠的体液和细胞免疫应答.方法 通过3轮PCR以HCV-NS3的TH1表位(1248～1261 AA)取代Ii链CLIP片段编码基因,构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗,并在Cos-7细胞中表达;30只6～8周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为5组,用内源性靶向基因疫苗(pHCV-NS3-TH1)和非靶向疫苗(pHCV-NS3)于股四头肌进行免疫,生理盐水、pCI-neo和以I-neo-Ii作为研究对照,经过5次免疫后,取外周血对小鼠的体液免疫进行检测,取小鼠脾脏细胞对细胞免疫进行检测.结果 内源性靶向基因疫苗在Cos-7细胞中得到高效表达;对BALB/c小鼠的免疫结果显示,只有HCV-NS3免疫组小鼠可以检测到针对NS3的特异性抗体,抗体滴度达到1/1024;pHCV-NS3和pHCV-NS3-TH1免疫的小鼠都可以检测到CD4+细胞的增殖,但pHCV-NS3-TH1免疫的小鼠CD4+细胞的增殖强度要明显大于pHCV-NS3免疫的小鼠(P=0.002);在细胞因子的检测中,只有pHCV-NS3-TH1免疫组小鼠检测到IFN-γ,浓度达到33.65 pg/ml;只有HCV-NS3免疫的小鼠产生IL-4,浓度达到4.55pg/ml.结论 基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗能够在真核细胞中表达并刺激小鼠产生CD4+TH1类型的细胞免疫,为HCV的疫苗开发提供了一个新思路.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
