中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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IL-21联合IL-6增强脐血CIK细胞杀伤K562及HL-60细胞的作用
目的 探讨IL-21联合IL-6对脐血来源的CIK细胞杀伤K562及HL-60白血病细胞系效应的影响.方法 Ficoll法分离脐血单个核细胞,加入细胞因子诱导培养CIK细胞并分为4组:对照组,IL-21组,IL-6组,IL-21 +IL-6联合组.流式细胞术检测CIK细胞免疫表型及Treg细胞的表达;CCK-8法检测细胞的增殖活性;LDH释放法检测CIK细胞对K562及HL-60细胞的杀伤作用.结果 在细胞培养的第7天,与对照组相比,IL-21组CIK细胞的产生由(7.30±1.20)％上升至(12.52±1.45)％,IL-6组升至(11.01±1.04)％,IL-21 +IL-6组升至(20.80±2.33)％,而IL-21组Treg细胞表达由(26.18±1.03)％降至(10.95±1.49)％,IL-6组降至(17.91±1.95)％,IL-21 +IL-6组降至(5.25±0.54)％;在第14天,IL-21与IL-6组的CIK细胞比例为对照组的2倍,IL-21 +IL-6组为对照组的2.5倍,而Treg细胞比例在IL-21组由(9.24±0.42)％降至(1.48±0.06)％,IL-6组降至(3.96±0.11)％;IL-21 +IL-6组Treg细胞降至(0.83±0.08)％.在效靶比为20∶1时,对照组细胞对K562及HL-60细胞的杀伤率[(29.31±0.58)％、(20.14±1.27)％]均明显低于各实验组(P＜0.01),而IL-21 +IL-6联合组对两种细胞的杀伤率[(63.79±0.91)％、(41.53士1.43)％]均高于IL-21组[(52.99±1.26)％、(33.04±1.68)％]和IL-6组[(53.05±1.52)％、(32.18±3.83)％](P＜0.01),IL-21与IL-6组间差异无统计学意义.结论 IL-21和IL-6可增强脐血来源的CIK细胞增殖与杀伤活性,同时可显著降低Treg细胞的表达,从而间接增强CIK细胞的功能;而且,二者协同使用效果更强,使CIK细胞对K562及HL-60白血病细胞系发挥更强大的杀伤作用,具有潜在的临床应用价值.
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HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白抗肿瘤作用的实验研究
目的 通过BALB/c小鼠肿瘤模型观察HBcAg-VEGF1(血管内皮生长因子)抗原表位融合蛋白的抗肿瘤作用.方法 将接种了106个CT-26结肠癌细胞的BALB/c肿瘤小鼠随机分为HBcAg-VEGF1组、HBcAg组和生理盐水(NS)组,每组10只.HBcAg-VEGF1组、HBcAg组分别肌肉注射含铝佐剂的HBcAg-VEGF1、HBcAg蛋白各20μg/100μl每只;NS组注射生理盐水,每周1次共免疫4次.检测小鼠血清中抗VEGF抗体和VEGF浓度的变化趋势、肿瘤体积、生存率、肿瘤重量及微血管密度等指标,分析其抗肿瘤效果.结果 在其抗肿瘤实验中,HBcAg-VEGF1组血清中产生了较高滴度的抗VEGF抗体,其VEGF浓度显著低于HBcAg组和NS组;肿瘤体积、生存率等指标与HBcAg组和NS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);HBcAg-VEGF1组、HBcAg组和NS组的肿瘤组织微血管密度分别为(18.6±2.7)、(39.8±4.9)和(38.4±6.1),肿瘤重量分别为(3.937±0.370)g、(6.039±1.016)g和(6.363±0.941)g,HBcAg-VEGF1组与其他两组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白能够刺激肿瘤小鼠机体产生免疫应答,产生特异性的抗VEGF抗体,并且能够通过减少血管新生来抑制CT-26肿瘤组织的生长.
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巨噬细胞应激的铜绿假单胞菌磷酸化蛋白质组分析
目的 鉴定巨噬细胞应激的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)磷酸化蛋白质组,分析磷酸化修饰在该菌应答应激中的作用.方法 采用强阳离子交换层析和固相金属离子亲和层析(SCX-IMAC)富集应激细菌的磷酸化肽段,并利用纳升级液相色谱-质谱联用技术(nano LC-MS/MS)进行鉴定和分析其磷酸化蛋白质组.结果 在应激细菌中鉴定到14个磷酸化肽段,对应于12个磷酸化蛋白质,其中膜蛋白占50％,提示膜蛋白的磷酸化修饰在这一过程中具有关键作用.蛋白质功能分析显示这些磷酸化蛋白质主要涉及应激应答、铁摄取转运、厌氧呼吸、过氧化氢的应激应答、磷酸化介导的信号转导等生物过程.结论 铜绿假单胞菌的蛋白质磷酸化修饰对其转导应激信号及应答巨噬细胞内的缺铁、缺氧和氧化应激等不利生存环境具有关键作用,该结果为深入理解该菌的毒力及致病机制提供新的思路.
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β-内酰胺抗生素诱导大肠埃希菌ESBLs基因表达及其抑制机制
目的 了解大肠埃希菌临床菌株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因及其携带模式、β-内酰胺类抗生素诱导以及组氨酸激酶抑制剂抑制细菌蛋白磷酸化和ESBLs基因表达的作用机制.方法 采用PCR和测序法确定大肠埃希菌主要ESBLs基因(KPC、TEM、SHV、CTX-M)及其携带模式.采用E-test和微量试管稀释法分别测定低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).采用固定化金属螯合层析法、细菌蛋白磷酸化检测试剂盒及实时荧光定量RT-PCR分别检测1/4 MIC青霉素和头孢噻肟诱导或组氨酸激酶抑制剂(氯氰碘柳胺、自行设计的溴化或碘化甲基咪唑)抑制大肠埃希菌耐药菌株蛋白磷酸化和ESBLs基因mRNA水平升高的作用.结果 183株β-内酰胺类抗生素耐药大肠埃希菌临床菌株中,TEM和CTX-M基因检出率(83.1％和77.1％)高于其他基因且以两者同时携带模式为主(65.0％)(P＜0.05).1/4 MIC青霉素和头孢噻肟钠能诱导大肠埃希菌耐药菌株蛋白磷酸化及TEM、SHV、CTX-M基因mRNA水平显著升高(P＜0.05).200 μmol氯氰碘柳胺、2或10μmol溴化甲基咪唑、20或50 μmol碘化甲基咪唑无抑制或杀灭大肠埃希菌的作用,但能抑制上述抗生素诱导的细菌蛋白磷酸化和ESBLs基因mRNA水平升高(P＜0.05),也能提高大肠埃希菌耐药菌株对青霉素和头孢噻肟的敏感性(P＜0.05).结论 TEM和CTX-M是本地区β-内酰胺类抗生素耐药大肠埃希菌临床菌株优势ESBLs基因,TEM+CTX-M是ESBLs基因优势携带模式.亚致死量β-内酰胺类抗生素可经TCSS上调大肠埃希菌ESBLs基因表达水平,但可被组氨酸激酶抑制剂所抑制.
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江苏海安地区分离金黄色葡萄球菌分子特征及耐药性分析
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是医院和社区感染常见的病原体之一,可引起严重的感染,甚至死亡.本研究对南通大学附属海安医院分离的金黄色葡萄球菌的分子流行病学特征及其耐药性进行分析.2011年7月到2012年7月分离到的金黄色葡萄球菌43株.应用菌落形态、涂片镜检和生化实验进行鉴定.采用纸片扩散法进行药物敏感试验;检测万古霉素的小抑菌浓度;根据头孢西丁和苯唑西林的药敏结果区分甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).以下金黄色葡萄球菌作为SCCmec分型的阳性对照菌株:NCTC 10442(type Ⅰ),N315(typeⅡ),85/2082(typeⅢ),JCSC4744(typeⅣ)和D12(type V).采用引物1113F(5'-TAAAGACGATCCTTCGGTGAG-3')和1514R(5'-CAGTAGTGCCGTTGCTT-3')扩增金黄色葡萄球菌A蛋白基因(spa);pvl-1(5'-ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA-3')和Npvl-2(5'-GCATCAASTGTATTGGATACCAAAAGC-3')扩增PVL杀白细胞素基因(pvl).采用SAS8.2对数据进行统计分析,双侧Chi-square检验或Fisher确切概率法,P＜0.05为差异具有统计学意义.
关键词： -
在非多重耐药阴沟肠杆菌临床分离株中检出质粒介导的blaNDM-1基因
产碳青霉烯酶尤其是A类中的KPC酶和B类中的金属酶(MBLs)是革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制[1].有研究认为NDM-1金属β-内酰胺酶可导致细菌严重的耐药性,且耐药基因可通过质粒传递[2],引起了全球范围的广泛关注.本研究对我院碳青霉烯类抗生素敏感性下降的菌株进行检测,发现了一株产NDM-1的阴沟肠杆菌,现报道如下.
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广州市环境及空调冷却水中釜山军团菌的分离与鉴定
目的 对广州市环境水源及中央空调冷却水中分离的两株疑似嗜肺军团菌进行分子生物学鉴定.方法 通过培养特征、生化反应特性、军团菌属特异性引物PCR鉴定、PCR-酶切分型方法,16S rRNA基因、mip基因和rpoB基因序列分析,确定两株疑似嗜肺军团菌的分类地位.结果 两株疑似嗜肺军团菌均为革兰氏阴性杆菌,在BCYEα平板上生长,36℃培养48 h可见白色菌落,氧化酶、明胶液化与马尿酸水解实验均为阳性,尿素酶、硝酸盐还原实验阴性,按表型特征极易鉴定为嗜肺军团菌.军团菌属特异性引物PCR扩增阳性,PCR-酶切分型结果为单一226 bp片段.16S rRNA基因、mip基因和rpoB基因序列比对与系统进化分析显示两株菌与釜山军团菌相似.结论 这是我国首次分离得到釜山军团菌,且同时存在于自然环境中和空调冷却塔水中;由于其生化特征,易错误鉴定为嗜肺军团菌,PCR-酶切分型与多基因鉴定的方法可有效鉴定釜山军团菌.
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艾滋病痴呆综合征患者体内HIV-1 Nef氨基酸位点变异分析
目的 研究艾滋病痴呆综合征(ADC)患者体内不同部位HIV-1nef基因变异导致氨基酸位点的改变,为研究ADC发病机制提供思路.方法 克隆1例ADC病例尸检标本的外周(脾)和中枢神经系统(基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶)共5个部位HIV-1 nef基因并测序,利用Bioedit、MEGA4等生物学软件与HIV-1标准株HXB2 Nef氨基酸序列进行比对,分析氨基酸位点变异情况.结果 该ADC患者Nef蛋白某些氨基酸位点发生改变,且外周组织与中枢神经系统间及中枢神经系统不同部位间的变异情况不同,某些变异为外周和中枢所共有,某些变异仅发生在外周脾,而某些变异仅发生于中枢神经系统.这些变异可能不同程度地改变Nef蛋白某些生物学活性及功能,进而影响到HIV-1病毒的复制、感染及凋亡等.结论 ADC患者体内的HIV-1 nef基因变异可导致Nef蛋白某些氨基酸位点改变,且可能对其生物学活性造成影响,这些变异是否与ADC的发病机制有关有待进一步研究.
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单种及联合靶向EV71 VP1～VP4基因的shRNA干扰病毒复制的研究
目的 检测单种及2种联合靶向EV71病毒衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4基因(VP1～ VP4)的shRNA干扰病毒复制的效果.方法 靶向EV71病毒的VP1～VP4基因序列设计及合成shRNA,并分别将其克隆到慢病毒质粒表达载体pLOV.CMV.EGFP中.重组表达质粒同psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞,3d后收集上清中的重组病毒颗粒.用荧光定量RT-PCR法(real-timeqRT-PCR)和Western blot检测单种及2种联合shRNA干扰EV71 mRNA的表达水平及病毒蛋白的表达水平.结果 靶向EV71 VP1～VP4基因的shRNA对本研究的毒株(含死亡病例、重症病例、普通病例,FY0805)复制干扰差异无统计学意义(P＞0.05),对EV71病毒的抑制率分别约为:sh-VP1-1(51.6％),sh-VP1-2 (85.1％),sh-VP1-3(76.4％),sh-VP2-1(57.5％),sh-VP2-2(81.4％),sh-VP2-3(79.5％),sh-VP3 (68.9％),sh-VP4 (56.7％),且有剂量依赖性.干扰病毒效率高的为sh-VP1-2联合sh-VP2-2,抑制率可达96.6％,联合组均比单种加倍剂量的抑制率高.结论 本研究设计的单独及联合靶向EV71病毒衣壳蛋白每个基因区均筛选到抑制率均大于50％的shRNA,且联合shRNA可以增强其干扰复制的能力.
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甲基苯丙胺对HIV-1感染人巨噬细胞的影响
目的 研究甲基苯丙胺(METH)是否促进HIV-1感染人巨噬细胞及其机制.方法 采集健康成人新鲜外周血,分离单核细胞,再经贴壁法培养纯化为巨噬细胞.用METH和/或多巴胺受体D1阻滞剂对巨噬细胞作预处理,加进HIV Bal病毒感染细胞,收集细胞,检测细胞中HIV RNA的水平;同时,采用实时荧光定量PCR检测巨噬细胞多巴胺受体D1的表达,探讨METH在HIV-1感染人巨噬细胞中的作用及可能机制.结果 METH处理可增强HIV Bal在人巨噬细胞中的感染和复制,呈剂量依赖和时间效应关系;机制研究表明METH是通过细胞的多巴胺受体发挥作用,用多巴胺受体D1阻滞剂(SCH23390)可以阻断METH处理导致的人巨噬细胞感染HIV Bal的增强.此外,METH处理可以上调细胞多巴胺受体D1的表达,有助于HIV在细胞中的感染和复制.结论 METH可能通过诱导巨噬细胞多巴胺受体D1的表达,促进HIV在巨噬细胞中的感染和复制,是HIV感染的协同因子.
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艾伯特埃希菌研究进展
埃希菌属(Escherichia)包括大肠埃希菌(E.coli)(Castellani and Chalmers.1919)、蟑螂埃希菌(E.blattae)(Burgess et al.1973)、费格森埃希菌(E.fergusonii)(Brenner et al.1983)、脆弱埃希菌(E.vulneris)(Brenner et al.1983)、赫曼埃希菌(E.hermannii)(Farmer et al.1985)以及近发现和命名的E.albertii(艾伯特埃希菌,暂译名)(Huyset al.2003)[1-2].大肠埃希菌(俗称大肠杆菌)是埃希菌属初的模式种,也是临床上常见的致病菌,特别是致泻性大肠埃希菌,可引起人类肠道感染相关疾病.艾伯特埃希菌是2003年Huys等[2]发现并命名的一个新的埃希菌种,它可引起胃肠道疾病,如血性/非血性腹泻、呕吐、脱水、发热、腹胀等,是一种重要的潜在新发食源性致病菌.
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戊型肝炎病毒ORF2蛋白的研究进展
戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),主要经粪-口途径传播,临床症状类似于甲肝,为急性、自限性肝炎,但器官移植和免疫抑制患者感染HEV后可发展为慢性感染.HEV主要流行于卫生条件差的发展中国家,发达国家中有散发病例.1983年Balayan等通过免疫电镜发现HEV,其属于戊型肝炎病毒科戊型肝炎病毒属[1-2].到目前为止,HEV主要分为1～4四个基因型,其中1和2型主要感染人,3和4型既感染人又感染猪.同时,在禽、兔、野猪、大鼠、白鼬及蝙蝠中也发现了HEV[3-8].禽、鼠和兔HEV与1～4型的基因差异较大,有可能成为新的基因型.
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组蛋白去乙酰化修饰与白念珠菌相关研究进展
白念珠菌的耐药现象日益严峻,寻找合理、有效的治疗方法是临床亟需解决的问题.有学者提出,染色体的修饰异常可介导肿瘤细胞的可逆性耐药,该研究发现耐药的肿瘤细胞能被曲古菌素A选择性杀灭,抑制组蛋白去乙酰化酶(histone deacety-lases,HDAC)的活性并能够阻止耐药性的发展1].白念珠菌的耐药机制与肿瘤细胞有类似之处,如外排泵功能的活跃[1-2].近年已有一些针对组蛋白去乙酰化修饰与白念珠菌的毒力、体外敏感性相关性的研究,本文将其相关研究进展进行综述.
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人H7N9禽流感疫苗抗血清参考品的快速制备及初步应用
目的 以重组H7N9禽流感病毒血凝素(HA)免疫动物后制备抗血清,以应用于单向免疫扩散试验(SRID)对H7N9禽流感疫苗抗原定量.方法 以真核表达的HA蛋白免疫绵羊,通过酶联免疫试验及双向免疫扩散试验检测抗体效价.通过优化抗血清使用浓度,建立检测H7N9禽流感疫苗抗原含量的方法.结果 经4次免疫后,抗体滴度达到高值,效价分别为1∶1 000000(酶联法)和1∶32(双扩法).以制备的抗血清进行SRID试验,当H7N9病毒抗原浓度为10 μg/ml ～ 40μg/ml时,能够形成清晰的沉淀环,其直径与抗原浓度相关性良好.以该法检测6批次H7N9疫苗原液中抗原含量,结果与SDS-PAGE方法结果一致.结论 通过免疫重组抗原,及时制备了抗血清参考品,可初步应用于H7N9禽流感疫苗的抗原定量.
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幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL优势T-B联合抗原表位的鉴定
目的 筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T-B)联合抗原表位.方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS-PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况.Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC 11637和SS1株中GroEL分布.Triton X-114法提取上述菌株外膜蛋白样本,采用Western blot法检测外膜蛋白样本中的GroEL.采用专业生物信息学软件预测GroEL的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统.采用Western blot法和ELISA分别检测含T-B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T-B联合表位肽的免疫反应性.结果 幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株groEL基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97.68％～99.63％.所构建原核表达系统能有效表达可溶性rGroEL.GroEL定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜.GroEL168、GroEL258、GroEL288、GroEL365、GroEL396和GroEL438六个主要的预测T-B联合抗原表位中,GroEL168显示了很强的阳性杂交信号.ELISA结果显示,GroEL168免疫反应性强(P＜0.01),其次为GroEL258和GroEL288 (P＜0.05).结论 GroEL是幽门螺杆菌外膜蛋白.GroEL168是GroEL的优势T-B联合抗原表位,可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗.
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应用套式PCR提高肺炎支原体P1-RFLP基因分型检测敏感性
目的 探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式PCR-P1-RFLP基因分型方法并对其应用进行评价.方法 参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2/3序列,分别在两个序列内部设计4条内套引物,采用文献报道的外套引物及新设计内套引物进行套式PCR扩增,扩增产物混合后用HaeⅢ酶切,根据不同的酶切图谱结果判断其型别,同时采用测序验证;对标准株DNA及临床标本DNA倍比稀释后进行检测,验证新改良方法敏感性;收集2012年肺炎支原体感染阳性标本,采用研究新改良的方法进行分型检测并与现有方法进行比较.结果 经测序验证,以套式PCR为基础的P1-RFLP基因分型方法能够对临床标本进行很好的扩增;与现有的分型方法相比,新改良方法敏感性提高103倍,差异有统计学意义;北京地区2012年儿科肺炎支原体流行基因型为Ⅰ型.结论 套式PCR-P1-RFLP基因分型方法敏感性高,能够对临床标本进行很好的扩增.
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一种伯氏疏螺旋体表达质粒的构建
目的 构建一个具有较强遗传可操作性的大肠杆菌-伯氏疏螺旋体表达穿梭质粒,以期作为工具质粒在疏螺旋体中实现外源基因的可诱导表达.方法 利用源自大肠杆菌的lac表达/诱导系统,在已有的穿梭质粒的基础上,通过分子生物学技术加入多克隆位点和HA、FLAG蛋白表达标签,增加其遗传可操作性.结果 成功构建工具质粒pJ J275,可以用于伯氏疏螺旋体的基因可控制表达.以rpoS基因为例,将其克隆至pJJ275并转入疏螺旋体中,获得的菌株在IPTG存在的条件下可诱导表达目的蛋白RpoS及其控制下的OspC.结论 构建的工具质粒易于分子生物学操作,可以实现疏螺旋体中外源基因的可控制表达.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
