沉默Annexin-A1对小胶质细胞BV-2生长和迁移能力的影响及其机制

目的 探讨沉默Annexin-A1(Anxa1)基因对小胶质细胞系BV-2细胞生长、迁移能力的影响及其可能机制.方法 采用RT-PCR和Western blot法从基因和蛋白水平验证小干扰RNA(siRNA)对小胶质细胞系BV-2细胞内Anxa1的沉默效率,采用MTT法检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞增殖的作用,膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染流式细胞术检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞凋亡的影响,应用Transwell小室检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞迁移能力的影响,Western blot法检测细胞周期和迁移相关信号通路蛋白的表达.结果 Anxa1 siRNA干扰组在24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率分别为(16.9±2.1)%、(23.1±3.6)%和(42.4±1.7)%,与siRNA-NC组[分别为(1.35±0.5)%、(2.06±0.7)%和(8.65±0.9)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05),沉默Anxa1对BV-2细胞的增殖发挥抑制作用;转染后48 h Anxa1 siRNA组细胞凋亡率为(18.4±2.1)%,明显高于siRNA-NC组(5.2±0.3)%和空白对照组(4.3±0.2)%;Anxa1 siRNA干扰组细胞迁移能力(28.7±5.2)明显低于siRNA-NC组(173.4±11.4,P<0.01),Anxa1 siRNA干扰可显著下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平和激活p38与JNK信号通路.结论 siRNA沉默Anxa1基因可抑制小胶质细胞的生长、迁移能力,分别通过下调Cyclin D1和激活p38与JNK信号通路来实现.

肝癌患者血清中共刺激分子sB7-H3和炎症因子IL-17、IL-8相关性及临床诊断研究

目的 研究肝癌患者血清中共刺激分子sB7-H3与炎症因子IL-17、IL-8的相关性及其在肝癌临床诊断中的应用价值.方法 收集原发性肝细胞癌患者的血清标本,以同期健康体检人员外周血标本作为正常对照.采用ELISA法检测肝癌组和正常对照组血清中sB7-H3、IL-8、IL-17的水平;运用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)统计学分析比较三者对肝癌的诊断效能,logistic回归获得sB7-H3、IL-8、IL-17三者联合诊断的模型预测肝癌.结果 原发性肝癌患者血清中sB7-H3、IL-17和IL-8的含量均明显高于正常对照组.sB7-H3与IL-17呈正相关,但与IL-8不相关.IL-8与IL-17之间呈负相关.ROC分析sB7-H3、IL-17和IL-8预测肝癌的AUC值分别为0.832、0.657和0.953,对诊断肝癌三者差异均有统计学意义.通过Logistic逐步回归得出的回归模型预测肝癌的曲线下面积(area under the curve,AUC)值、敏感度、特异度分别为0.960、91.30%和94.29%均较单独诊断时高.结论 原发性肝细胞癌患者外周血中sB7-H3与IL-17呈正相关,sB7-H3、IL-17和IL-8联合回归模型在肝癌的早期诊断中具有潜在的应用价值.

2012年深圳地区轻重症手足口病患者肠道病毒71型VP1~VP4区基因特征分析

目的 了解2012年深圳地区手足口病重症和轻症患儿肠道病毒71型(EV71)分离病毒株VP1~VP4区的基因特征.方法 对来自2012年深圳地区重症与轻症手足口病患儿(各5株)EV71分离株进行VP1~VP4区全序列RT-PCR扩增和测序,并与美国国立生物技术信息中心公布的EV71 A、B、C基因型代表株进行核苷酸、氨基酸比对分析和系统进化分析.结果 轻、重症患儿的EV71分离株之间VP1~VP4基因的核苷酸同源性为95.1%~98.2%;氨基酸同源性为99.2%~100%.轻、重症患儿的EV71分离株与C基因型代表株比较接近,VP1~VP4区核苷酸同源性分别为87.9%~97.8%,氨基酸同源性分别为97.3%~99.9%,其中与2008年安徽省阜阳市的EV71流行株和江西省景德镇市重症株(C4a亚型)VP1~VP4区核苷酸同源性高,进化关系近.同时发现3例重症患儿分离株均在VP1区出现N31 D的变异.结论 2012年深圳地区10例轻、重症手足口病患儿中分离的EV71流行株均属C基因型的C4a亚型;EV71病毒株VP1区N31D的氨基酸突变可能与深圳地区手足口病患儿的临床表现差异有关.

山东省环境污水和脑炎病例中埃可病毒6型的监测和关联

目的 探索山东省2014年急性脑膜炎/脑炎症候群(acute meningitis/encephalitis syn-drome,AMES)病例和2013—2014年环境污水监测中埃可病毒(echovirus,E)6型的基因特征及其关联.方法 对2014年的AMES病例标本和2013—2014年的环境监测标本进行肠道病毒(enterovir-us,EV)分离,阳性分离物采用分子生物学方法鉴定型别,并对E-6 VP1区序列进行同源性和系统进化学分析.结果 2013年AMES病例中未检出E-6,2014年分离到47株E-6,占EV分离株的29.56%.环境污水监测结果显示E-6从2013年夏季开始频繁出现并一直持续到2014年底,2013年分离到40株E-6,占总EV分离株的7.87%;2014年分离到139株E-6,占总分离株的26.18%.系统进化树分析表明本研究分离株属于A、C两个基因簇,各簇之内的环境和AMES分离株之间有密切的亲缘关系.在A基因簇中,2014年AMES分离株之间的核苷酸同源性是98.3%~100%,2013—2014年环境分离株之间的同源性是96.6%~100%,二者之间为97.1%~100%,C基因簇的以上核苷酸同源性分析结果分别是100%、98.7%~100%和99.1%~100%.结论 2014年山东省发生了两条E-6传播链导致的病毒性脑炎的流行;在E-6相关的病毒性脑炎流行之前,通过环境监测敏感地监测到E-6在本地的潜在流行,证明环境监测具有对相关疾病的早期预警能力.

北京市2015年风疹病毒发现2B基因型流行株

目的 了解北京市流行的风疹病毒基因型特征和变异趋势,为风疹传染病防治工作提供科学依据.方法 选取北京市风疹实验室诊断病例咽拭子标本提取病毒核酸,采用RT-PCR方法扩增风疹病毒E1基因739个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.同WHO风疹病毒基因型代表株构建基因进化树,分析基因型特征、核苷酸和氨基酸的变异.结果 获得10株可用于分子流行病学研究的靶核苷酸序列.在基于WHO基因定型靶序列739个核苷酸片段构建的基因进化树上,10株风疹病毒均属于2 B基因型,相对于参考株形成一个独立分支.10株风疹病毒大部分核苷酸突变为无义突变,氨基酸序列高度保守,除了1株风疹病毒在E1蛋白血凝抑制和中和位点区域第282位氨基酸发生Ser→Phe突变,其他病毒株无重要抗原位点改变.结论 北京地区发现风疹病毒2B基因型流行株.

人季节性流感病毒H1、H3、B型PCR-ELISA分型检测方法的建立及应用

目的 建立快捷灵敏的季节性流感病毒PCR-ELISA检测技术.方法 根据甲型流感病毒M基因(M)、H1和H3亚型的HA基因(H1-HA、H3-HA)、乙型流感病毒的NS基因(B-NS)保守序列设计引物探针,通过生物素与地高辛的特异性标记,后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)判断PCR扩增的有无.结果 M、H1、H3、B-NS四个基因片段所能检测的低拷贝数分别为:1.43?103、8.67?102、3.86?103、5.45?103拷贝/μl,其敏感度比普通PCR扩增提高了10倍,且不同流感病毒亚型之间、不同种属病毒之间均不存在交叉反应现象.另外还检测了104份临床标本,本文所建立的PCR-ELISA方法的检测结果与细胞培养完全一致.结论 本文通过特异性和敏感性实验显示此方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,可以广泛地应用于流感病毒的实验室检测.

胃肠炎病毒环境监测研究进展

环境监测作为一种新兴的病毒学监测方法,目前已在脊髓灰质炎病毒等肠道病毒监测方面得到成功应用.由于我国胃肠炎病毒病例监测的缺失,环境监测有望成为胃肠炎病毒的重要监测途径.目前国内关于胃肠炎病毒环境监测的研究较少,而国外已进行较深入的探索.本文将结合国内外研究情况,对胃肠炎病毒环境监测的方法、应用等方面进行综述,为其在国内的开展提供依据.

HIV-1 gp140蛋白疫苗的设计及其免疫原性研究

目的 设计HIV-1 gp140蛋白疫苗并进行免疫原性初步研究.方法 构建包含不同信号肽的gp140蛋白表达克隆,对表达效率和信号肽切割效率进行比较筛选,同时对不同长度C末端的gp140进行比较,终获得优化的HIV-1 gp140免疫原.采用不同的免疫方式免疫豚鼠,通过特异性结合抗体检测和中和抗体检测进行免疫效果评价.结果 设计的信号肽具有较好的分泌、切割效率,重组HIV-1 gp140抗原获得良好的表达.重组蛋白疫苗单独免疫就能诱导很强的结合抗体和中和抗体反应,反应强度高于重组DNA疫苗以及痘苗病毒载体疫苗的联合免疫.不同C末端长度的gp140蛋白免疫效果没有显著的差异,但长C末端的gp140蛋白免疫效果稍好.结论 优化设计了HIV-1 gp140蛋白疫苗,设计的重组疫苗获得较好的免疫效果.

新疆野生一枝蒿粗多糖作为流感病毒疫苗佐剂的免疫效果

目的 初步探讨新疆野生一枝蒿粗多糖(wild Artemisia rupestris L.crude polysaccha-rides,WARCP)对流感病毒疫苗(influenza virus vaccine,IVV)的免疫增强效果和节约疫苗用量的作用.方法 将0.3μg或1.5μg的流感病毒疫苗与200μg的WARCP配伍后,分别在第0天和第14天皮下免疫ICR小鼠,间接ELISA法检测免疫后血清抗体水平,MTT法检测淋巴细胞的增殖,并观察小鼠生长状况.结果 WARCP对小鼠生长并无显著影响(P>0.05);WARCP能够显著提高流感疫苗特异性IgG及其IgG1、IgG2a的抗体水平(P<0.05);WARCP配伍低剂量流感疫苗的IgG抗体水平显著高于高剂量流感疫苗单独组(P<0.05),WARCP能显著性地增强淋巴细胞的增殖(P<0.05),可以至少节约流感疫苗用量的80%.结论 新疆野生一枝蒿粗多糖具有较好的安全性,作为佐剂增强了流感病毒疫苗的体液免疫和细胞免疫水平,并且可以节约流感疫苗用量.

基于丙型肝炎病毒结构基因的DNA疫苗初免重组腺病毒疫苗加强免疫小鼠后可诱导交叉保护

目的 探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法 用表达HCV河北株(1b亚型)结构蛋白(Core,E1,E2)的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析(ICS)方法分析了特异性T细胞免疫应答特点与交叉保护效果.结果 DNA疫苗与重组腺病毒疫苗联合免疫小鼠后,针对Core、E1、E2都可产生较强细胞免疫应答;ELISPOT结果表明:联合免疫针对E1的反应强,明显高于DNA疫苗同源免疫;ICS结果显示:针对E1抗原特异的CD4+T细胞分泌的TNF-α水平与CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平以及E2抗原特异的CD4+T细胞与CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平均高于三针DNA疫苗免疫组.在表达2a亚型HCV(JFH1)全长ORF的重组痘苗病毒替代攻击小鼠模型中,复制型DNA疫苗与重组腺病毒联合免疫可表现出交叉保护效应.结论 本研究为HCV新型疫苗研制及免疫保护机制研究提供了一定参考.

本刊使用的医学缩略语

儿童水痘减毒活疫苗和甲肝减毒活疫苗联合接种免疫原性及安全性的研究

目的 了解水痘减毒活疫苗和甲肝减毒活疫苗联合接种的免疫原性和安全性,为制订水痘疫苗的免疫程序和策略提供科学依据.方法 选择686名18~24月龄儿童分为3组:水痘和甲肝疫苗联合接种组、水痘疫苗接种组和甲肝疫苗接种组,分析免疫前后水痘抗体和(或)甲肝抗体水平和疫苗接种安全性;水痘血清抗体检测采用膜免疫荧光法测定血清中的抗体水平,甲肝血清抗体检测使用酶联免疫竞争法测定.结果 水痘甲肝联合接种组与水痘接种组免疫后水痘抗体阳转率均为100%,抗体几何平均滴度(GMT)分别为33.37和20.00,二者差异有统计学意义(P<0.001),水痘甲肝联合接种组与甲肝接种组免疫后甲肝抗体阳转率均为100%,组间免疫前、免疫后甲肝抗体水平差异均无统计学意义(P=0.94,P=0.77);水痘甲肝联合接种组、水痘接种组、甲肝接种组接种疫苗后不良事件发生率分别为23.63%、19.08%、28.49%,均为发热和红肿,3组之间差异无统计学意义.结论 水痘和甲肝疫苗联合接种的免疫原性和安全性评价不低于两种疫苗单独接种,两者联合接种具有可行性.

乙脑减毒活疫苗加强免疫与水痘减毒活疫苗联合接种的免疫效果及安全性研究

目的 观察乙脑减毒活疫苗加强免疫与水痘减毒活疫苗联合接种的安全性和有效性,为两种疫苗联合接种的可行性提供科学依据和指导意见.方法 选择广州市海珠区439名满足入选排除标准的儿童进行临床研究,200名受试者单独接种乙脑减毒活疫苗,239名受试者联合接种水痘减毒活疫苗和乙脑减毒活疫苗,分别在乙脑减毒活疫苗加强免疫前和免疫后35~42 d采集静脉血检测乙脑中和抗体,比较两组的阳转率、抗体几何平均滴度和不良反应情况.结果 加强免疫前,接种乙脑疫苗组和联合接种水痘及乙脑疫苗组的乙脑中和抗体阳性率分别为89.78%和63.06%,差异有统计学意义(χ2=38.797,P<0.001).接种乙脑疫苗组的乙脑中和抗体几何平均滴度水平高于联合接种水痘及乙脑疫苗组,分别为1-19.117和1-7.129(t=6.618,P<0.001).免疫后,接种乙脑疫苗组和联合接种水痘及乙脑疫苗组的乙脑中和抗体阳转率分别为96.774%和97.297%,差异无统计学意义(χ2=0.097,P=0.755).接种乙脑疫苗组的乙脑中和抗体几何平均滴度水平高于联合接种水痘及乙脑疫苗组,分别为1-453.693和1-285.692(t=3.548,P<0.001).按非易感人群(免疫前乙脑检测抗体滴度≥1-10的个体)和易感人群(免疫前乙脑检测抗体滴度<1-10的个体)进行分层分析,两个人群中加强免疫后两组的乙脑中和抗体阳转率以及乙脑中和抗体几何平均滴度均无统计学差异.在安全性方面,接种乙脑疫苗组和联合接种水痘及乙脑疫苗组的受试者不良反应发生率分别为8.0%和12.6%,组间差异无统计学意义(χ2=2.405,P=0.121),未观察到严重不良事件.结论 单独接种乙脑减毒活疫苗,或同时接种乙脑减毒活疫苗与水痘减毒活疫苗,均能获得良好的乙脑免疫效果和安全性.

水痘减毒活疫苗与麻疹流行性腮腺炎风疹联合疫苗同时接种的免疫效果和安全性观察

目的 了解同时接种水痘疫苗和麻疹流行性腮腺炎风疹联合疫苗(measles,mumps and rubella vaccine,MMR)的有效性和安全性,为合理安排水痘疫苗和MMR疫苗的接种时间提供依据.方法 选择3组17~24月龄,符合纳入条件的健康儿童,分别联合接种水痘和MMR疫苗或仅接种水痘疫苗或MMR疫苗,分别在接种疫苗前和接种后35~42 d采集血液标本进行抗体水平监测,每组至少完成100人.入组对象在疫苗接种后24 h、48 h、72 h及第7、14和30天以自填观察表的形式进行观察.用χ2检验或Fisher′s精确性检验进行率的比较,用非参数检验进行抗体水平比较.结果共有445人完成抗体水平检测,450人完成安全性观察.3组在完成接种后,水痘、麻疹、流行性腮腺炎和风疹抗体水平均较接种前上升,且差异具有统计学意义.联合免疫组接种后的水痘抗体阳性率、4倍增长率和抗体滴度均高于接种水痘疫苗组.接种前流行性腮腺炎抗体阴性者在本次接种后接种MMR疫苗组的流行性腮腺炎抗体浓度较联合免疫组高,且差异具有统计学意义.接种前风疹抗体阳性者在本次接种后接种MMR疫苗组的风疹抗体浓度较联合免疫组高,且差异具有统计学意义.共报告23名对象发生不良反应,报告率为5.11%,均为中度和重度发热,1例伴随发生皮疹.各组间不良反应发生率差异无统计学意义.结论 本研究结果表明,在18~23月龄同时接种水痘疫苗和MMR疫苗与分别接种这两种疫苗均可使阳性率和抗体水平显著上升;两组的不良反应报告发生率无显著性差异;联合免疫组的水痘抗体水平显著高于仅接种水痘疫苗组,麻疹、风疹和流行性腮腺炎抗体水平与仅接种MMR疫苗组没有显著性差异,但由于本研究存在局限性,组间的差异尚需进一步研究验证.

水痘减毒活疫苗与百白破疫苗联合免疫的安全性和免疫原性观察

目的 了解水痘减毒活疫苗与百白破联合疫苗(DTP)联合接种的安全性和免疫原性,为科学制定相关免疫策略提供依据.方法 2013—2014年在浙江省衢州市、丽水市选择734名约18月龄儿童,分为联合接种组、单独接种水痘减毒活疫苗组和单独接种DTP组.接种后研究人员定期开展主动随访评价疫苗安全性,并采集免疫前、免疫后35 d血清采用膜抗原荧光抗体法和酶联免疫吸附试验分别检测水痘和百白破抗体水平,评价疫苗免疫原性.结果 3组对象接种后仅有红肿、低热发生(发生比例<3%),均无严重异常反应发生.单独接种水痘疫苗组与联合接种组比,免疫后水痘抗体阳性率(100%vs 100%)、阳转率(56.13%vs 61.01%,P=0.311)、几何抗体滴度水平(20.55 IU/ml vs 23.69 IU/ml,P=0.118),差异均无统计学意义.单独接种DTP组与联合接种组比,白喉、破伤风和百日咳的抗体阳性率均大于95%,两组比较差异无统计学意义(P=0.23;P=0.16);但联合接种组百日咳抗体阳转率略高(41.9%vs 90.6%,P<0.001),单独接种组白喉阳转率略高(89.53%vs 77.36%,P<0.001),而破伤风抗体阳转率(18.02%vs 14.47%,P=0.381)差异无统计学意义;单独接种DTP组的白喉与破伤风的抗体滴度水平显著高于同时接种组(2.04 vs 1.32,P<0.001;3.48 vs 2.62,P<0.001).结论 适龄儿童联合接种或单独接种水痘减毒活疫苗与DTP具有较好的安全性和免疫原性.