钩端螺旋体 LPS 和外膜蛋白诱导巨噬细胞凋亡及其与 Fas／FasL 相关性研究

目的：了解致病性问号钩体螺旋体（简称钩体）脂多糖（ L-LPS）和外膜蛋白（ L-OMP）诱导J774A．1小鼠巨噬细胞死亡及其与Fas/FasL相关性。方法分别采用酚水法和Triton X-114法从问号钩体黄疸出血群赖型赖株中提取L-LPS和L-OMP。采用流式细胞术检测紫外线灭活前后问号钩体赖株、多黏菌素B（PMB）处理前后L-LPS、蛋白酶K（PK）作用前后L-OMP诱导J774A．1细胞凋亡及坏死情况。采用siRNA沉默J774A．1细胞Fas或FasL基因并用实时荧光定量RT-PCR检测靶基因沉默效果。采用流式细胞术测定L-LPS或L-OMPs诱导Fas或FasL基因沉默J774 A．1细胞凋亡的作用。结果紫外线灭活前后问号钩体赖株可引起相似的J774A．1细胞早期凋亡率（55．6％和47．1％）和晚期凋亡/坏死率（7．9％和7．6％）。100 ng L-LPS或100μg L-OMP作用1×105 J774A．1细胞4 h后，早期凋亡率和晚期凋亡/坏死率分别为40．4％和34．0％、7．5％和6．9％，但等量PMB预处理L-LPS或PK预处理L-OMP诱导细胞凋亡或坏死的作用消失。 Fas或FasL基因沉默后，L-LPS诱导的J774A．1细胞早期凋亡率均显著下降（P＜0．05），L-OMP仅使Fas基因沉默J774A．1细胞早期凋亡率有所下降（P＜0．05）。结论 L-LPS和L-OMP可诱导Fas/FasL相关巨噬细胞凋亡，从而有利于问号钩体在宿主体内建立有效感染。

支原体巨噬细胞活化脂肽2诱导单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶1及其机制研究

目的：观察支原体巨噬细胞活化脂肽2（macrophage-activating lipopeptide-2， MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（hemeoxygenase，HO-1），并探讨其相应的调控机制，以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制。方法体外培养THP-1细胞，用不同浓度的MALP-2作用12 h， Western blot检测HO-1的表达；THP-1细胞经TLR2和TLR6中和抗体孵育，或构建TLR2和TLR6负显性突变体转染细胞，以明确TLR2和TLR6在介导HO-1表达中的作用；Western blot检测Akt磷酸化情况，并采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞，以证实PI3K参与HO-1表达。同时，分别采用EMSA和免疫荧光观察核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位，并采用Nrf2 siRNA干扰其表达后，Western blot检测HO-1表达。后，采用siRNA干扰HO-1表达，或采用HO-1的激动剂钴原卟啉（ cobalt protoporphyrin ，CoPP）处理THP-1细胞，ELISA检测细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。结果 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1。且TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后，HO-1表达水平显著降低；此外，MALP-2能激活PI3K，PI3K抑制剂能抑制HO-1表达；MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位，PI3K抑制剂处理后，Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低。 RNA干扰Nrf2后，HO-1表达显著降低。沉默HO-1表达后，TNF-α和IL-1β分泌增高，而CoPP处理能进一步降低TNF-α和IL-1β水平。结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1，其机制可能受TLR2、6/PI3K/Nrf2通路调控。 HO-1的表达可在一定程度上负调控细胞因子过度分泌。

替加环素体外药敏试验方法学评价及抗菌活性分析

替加环素是甘氨酰四环素类中首个应用于临床的药物，其对肠球菌、葡萄球菌、链球菌以及绝大部分革兰阴性杆菌都有较强的抗菌活性，由于其抗菌谱广、抗菌作用强，已经成为治疗多重耐药菌株的重要选择。但是由于该药物理化特性不稳定（如见光易分解），因此进行体外药敏试验对环境的要求比较高，且目前美国临床和实验室标准协会（ CLSI ）标准中尚无替加环素体外药敏检测的操作指南和结果判定标准，本研究旨在评价各种体外药敏试验方法检测替加环素药敏结果的可靠性并了解其对临床主要革兰阴性杆菌的耐药特性，为临床合理使用抗菌药物提供依据。

深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶和／或AmpC 酶奇异变形杆菌的流行及其分子特征

目的：调查深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶（ ESBL ）和/或AmpC酶奇异变形杆菌的流行及其分子特征。方法使用ESBL表型初筛和确证试验以及AmpC酶纸片法检测产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌。 PCR扩增和DNA测序确定ESBL、AmpC酶基因型及其上游插入序列、质粒介导喹诺酮类耐药（ PMQR）基因型和染色体gyrA、gyrB和parC基因的喹诺酮类耐药决定区（ QRDRs）突变位点，以及整合酶基因和1类整合子基因盒。脉冲场凝胶电泳（ PFGE）分析菌株的同源性。结果2004-2010年我院临床共分离130株奇异变形杆菌，13株（10％）产 ESBL，3株（2．3％）产AmpC酶；产ESBL菌从0％～9．1％（2004-2009年）迅速上升至29．4％（2010年）。常见ESBL基因型为 blaCTX-M-14（n＝7），其他 ESBL 基因型包括 blaCTX-M-65（n＝3）、blaCTX-M-55（n＝1）、blaCTX-M-24（n＝1）和blaPER-1（n＝1），系国内首次临床分离出携带blaPER-1奇异变形杆菌；2株产AmpC酶菌基因型为blaCMY-2，1株产AmpC酶菌基因型未知。91．7％（11/12）奇异变形杆菌的blaCTX-M上游和1株blaCMY-2上游均携带ISEcp1；1株blaPER-1上游携带ISPa12。66．7％（10/15）产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌携带qnrD（n＝5）和/或aac-Ib-cr（n＝8）。12株环丙沙星耐药产ESBL和/或AmpC酶菌在QRDRs中均携带GyrA上1个点突变（S83I）和ParC上1个点突变（S80I或S80R），其中6株还同时携带GyrB上1个点突变（E466D）。86．7％（13/15）产ESBL和/或AmpC酶菌携带1类整合子。15株产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌共获14种不同PFGE型别。结论产CTX-M型酶是我院奇异变形杆菌对超广谱头孢菌素耐药的主要机制，产ESBL和/或AmpC酶奇异变形杆菌大多携带qnrD和/或aac-Ib-cr基因。

胃黏膜标本中幽门螺杆菌克拉霉素常见耐药位点PCR直接检测分析

幽门螺杆菌（ Helicobacter pylori， HP ）是定植于人类胃部的螺杆状革兰氏阴性菌，人群感染率超过50％。 HP感染与胃炎、消化性溃疡及胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病密切相关。克拉霉素是根除HP应用广泛的抗生素之一，耐药率的不断增高严重影响着含克拉霉素 HP 根除治疗方案的成功率［1］。现已证实，23 S rRNA V 区的点突变（ A2142 G／C， A2143 G）是引起HP产生克拉霉素耐药的主要因素［2］。本研究通过23 S rRNA V区PCR产物测序方法直接检测胃黏膜组织中HP相关基因特征从而快速获得克拉霉素耐药情况，并分析与相关菌株耐药表型测定（ E-test 药敏方法）结果的一致性。

贵州地区感染外阴阴道念珠菌病的白念珠菌微卫星多态性研究

目的：调查贵州地区感染外阴阴道念珠菌病（ vulvovaginal candidiasis ， VVC）的白念珠菌CAI区微卫星基因型分布及其与当地VVC流行病学之间的关系。方法收集贵州地区90株引起VVC的白念珠菌菌株，对其进行CAI区单链构象多态性（ single strand conformation polymorphism ， SS-CP）及GeneScan分析，对贵州地区VVC患者白念珠菌进行了基于CAI区微卫星分型，运用SPSS19．0软件对分离的白念珠菌进行基因多态性及聚类分析，并采用logistic 回归模型分析白念珠菌CAI区微卫星基因型分布与VVC的关系。结果90株VVC来源的白念珠菌中共有27种CAI-SSCP 图谱，结合GeneScan 分析结果证实为27种基因型，3种主要优势基因型30-45、32-46、30-46以及其他7种与其非常接近的基因型共63株，占70．0％；聚类分析将贵州地区白念珠菌分为3个群系（ ClusterⅠ～ClusterⅢ），其中优势基因型全部聚类为Cluster Ⅱ；logistic 回归分析显示，白念珠菌优势基因型对VVC具有高危险度比值比（OR＝4．3）。结论贵州地区感染VVC的白念珠菌的CAI基因型呈明显的优势分布，这些优势基因型与贵州地区VVC的发生高度相关。

国产水痘减毒活疫苗株即刻早期基因ORF62的特征

目的：通过比较国产水痘减毒活疫苗株（ vOka ）与其父系株（ pOka ）即刻早期基因（ IE） ORF62启动子区序列及其启动活力、编码区序列及其反式激活力差别，探讨vOka株ORF62突变在其减毒机制中的可能作用。方法分别构建pOka株、长春百克生物科技股份公司vOka-BK株、上海生物制品研究所vOka-SH株和葛兰素史克公司vOka-GSK株（对照） ORF62启动子-报告子质粒和ORF62编码区表达质粒，通过测序分析ORF62启动子区和编码区序列差异，再应用基因转染瞬时表达技术分析3株vOka与pOka株ORF62启动子活力及ORF62编码IE62对即刻早期基因ORF4、早期基因ORF28和晚期基因ORF67启动子的反式激活力差异。结果与pOka株比较，3株vOka 一致存在ORF62启动子区110050位点T缺失突变，该突变未导致启动子区的转录因子结合基序改变，但3株vOka ORF62启动子的启动活力显著低于pOka株；3株vOka ORF62编码区存在一致的碱基置换突变并分别产生SmaⅠ、NaeⅠ和BssHⅡ新酶切位点；除vOka-SH株IE62在CV-1细胞中对ORF4启动子的反式激活力显著低于pOka株外，3株vOka IE62在CV-1和MeWo细胞中对ORF4、ORF28、ORF67启动子的反式激活力均显著高于pOka株。结论3株vOka ORF62启动子区110050位点T缺失突变可能是启动子活力降低和IE62反式激活力改变的原因之一，vOka与pOka株ORF62启动子活力和IE62反式激活力差异与转染细胞类型关系不大。

《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事

《中华微生物学和免疫学杂志》为中华医学会主办。1981年创刊，主要报道医学微生物学和免疫学方面的研究论文、简报、评论、综述、国内外学术动态、书评及消息等。

人冠状病毒 NL63中国株的全基因组克隆与序列分析

目的：对来自北京儿童医院的两份人冠状病毒NL63（human coronavirus NL63， HCoV-NL63）阳性样本进行病毒全基因组序列测定和分析。方法以荷兰株（NL63_Amsterdam 1）为参考株，设计18对包含重叠区域的、覆盖全长基因组的引物，采用病毒RNA提取、RT-PCR分段克隆测序的方法获得NL63国内株全长基因组序列；通过与其他毒株的比对分析，构建其系统发生树。结果NL63国内株基因组全长27538 bp，与参考株核苷酸相似性为99．1％，其中在1a区有连续15个碱基的缺失。系统发生分析表明，NL63目前可分为A型、B型、C型和D型共4个基因型，而国内株处在新的基因型（ D型）。结论本研究首次获得了两株NL63国内分离株的全基因组序列，进一步阐明了基因组的结构特征，对其遗传进化作了系统分析，为国内NL63病毒的分子流行病学研究提供参考。

环二鸟苷酸信号系统研究进展

所有生命体都会通过信号转导感应环境改变，并反映在代谢、生理及行为适应等方面。这些调控网络非常复杂，并依赖于许多不同组分之间的相互作用来协调产生适合的生化反应，其中一个重要的成分即是第二信使分子，第二信使通过细胞表面受体感受第一信使信号并传递给细胞内大分子。在细菌中c-di-GMP是参与调控细菌主要生理功能的第二信使分子之一，是由两分子的GTP在鸟苷酸环化酶作用下形成。生物信息学分析发现编码 c-di-GMP的基因广泛分布于原核生物尤其是革兰氏染色阴性的细菌中。

纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛会议通知

由中国微生物学会临床微生学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院主办，台湾检验医学发展协会、宁波大学和海南省临床微生物学检测与研究中心协办的“第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛”定于2014年9月13至15日在宁波阳光豪生大酒店举行。欢迎相关领域工作人员积极参会交流。

细菌生物膜清除策略研究进展

细菌生物膜（ biofilm，BF）是指细菌在生长过程中黏附于有生命或无生命物体表面，由其自身分泌的胞外多聚体（ exopolysaccharide ， EPS ）及其基质网组成的三维结构的菌细胞群体。美国国立卫生研究院（ NIH）的调查结果显示，80％以上的细菌性感染与生物膜有关［1］。当人体免疫系统受损时，细菌容易在皮肤、尿道等人体组织或中心静脉导管、导尿管等医疗设备形成生物膜［2］，引起诸如败血病、难治性肺部感染和内膜炎等疾病［3-4］。据流行病学调查显示，气管插管24 h后95％气管表面会出现生物膜，常见的细菌是鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌［5］。因导管相关念珠菌生物膜感染导致的死亡率高达30％［6］。

人腺病毒分型及分子进化研究进展

人腺病毒（human adenovirus， HAdV）1953年首次分离自呼吸道感染的婴儿扁桃体腺［1］。腺病毒可以感染多种黏膜组织，如胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道及眼角结膜等，导致自限性的黏膜感染甚至严重的致死性感染［2-18］。腺病毒感染还和肥胖症相关［2］，部分型别腺病毒可以致瘤。腺病毒载体被广泛用于遗传、癌症和感染性疾病的预防和治疗研究，目前除了常用的5型腺病毒载体外，已有多种其他血清型腺病毒载体在研发中［19］。近年来，越来越多新的HAdV型别被发现，目前HAdV已有68个基因组型别。病原体的进化是和宿主相互作用的复杂过程，病毒进化可能改变病毒的组织嗜性、传染性、产生新的疾病特征，腺病毒是DNA病毒分子进化研究的有用模型。对腺病毒进化的理解将有助于腺病毒感染暴发的预测、预防，有助于腺病毒作为基因治疗和疫苗载体应用的研究［3］。本文就HAdV的进化研究和新型腺病毒的研究作一综述。

人3型腺病毒衣壳六邻体嵌合乙肝病毒preS1双抗原表位重组体的构建及其抗原性的初步鉴定

目的：通过构建在六邻体中嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的人3型重组腺病毒，鉴定应用此策略所展示表位的抗原性。方法利用overlap PCR技术扩增出在HVR1和HVR2中分别引入乙肝病毒表面抗原中和表位KR359和KR127的嵌合六邻体基因，酶切后连接入穿梭质粒pBR322-L/R，然后与骨架质粒pBRAdΔE3GFP共转化至BJ5183中重组，得到阳性克隆pBRAdΔE3GFP-preS1。将其线性化后转染293细胞拯救病毒，再大量扩增并纯化。同时应用表达载体pGEX-4T3表达融合蛋白GST-KR359KR127，将重组病毒和GST融合蛋白分别免疫BALB/c小鼠获得多抗血清。 ELISA、Western blot实验鉴定嵌合表位的抗原特性。结果人3型腺病毒载体成功的在衣壳六邻体表面展示了乙肝病毒表面抗原中和表位KR359和KR127，并且诱导产生的多抗血清能识别GST融合表达抗原以及天然的乙肝病毒表面抗原。结论衣壳融合策略置换高变区来展示外源中和表位的方法可行，并且可以通过同时置换多个高变区来达到加强免疫效果或者多价抗原免疫保护的作用，为人3型腺病毒六邻体嵌合载体系统在疫苗研究中的应用奠定基础，同时也为新型乙肝疫苗的研制奠定基础。

人脑膜炎球菌参考血清 Men10的制备及其抗A、C、Y、W135群脑膜炎血清群荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验滴度

目的：制备人脑膜炎球菌参考血清，对其中A、C、Y、W135血清群的抗荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验（ serum bactericidal assay ， SBA）滴度进行定值。方法用4价A、C、Y、W135群脑膜炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人，采集免疫后的血浆进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干，得到人脑膜炎球菌参考血清Men10。在兰州生物制品研究所有限责任公司（ LIBP ）实验室，用标准检测人血清中抗脑膜炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法，以国际标准血清CDC1992为标准，对其中4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量定值；以临时定值的Men10和CDC1992分别为标准检测12份美国疾病预防控制中心（ CDC）的校正血清、56份4价多糖疫苗免疫后的血清，通过比较对定值的准确性进一步验证。同时以体外杀菌试验测定针对4个血清群的SBA滴度。结果制备了4000支（0．5 ml/支）冻干人脑膜炎球菌参考血清Men10。该血清HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体检测均阴性，残留水分含量2．3％。以Men10为标准检测的12份CDC校正血清和56份4价多糖疫苗免疫后的血清群抗荚膜多糖抗体结果，与以CDC1992为标准检测的结果均具有良好的直线相关关系（ r＝0．99，P＜0．05）；以Men10为标准检测的CDC1992的4个血清群抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较，各血清型的误差均＜10％。同时确立了Men10中各血清群的体外杀菌试验滴度。结论 LIBP成功制备了人脑膜炎球菌参考血清Men10并完成了对其中的4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值，并确定了其中各群别抗体的体外杀菌试验滴度。

3种免疫学方法对肺炎球菌结合物及其中间品的多糖抗原性研究

目的：对肺炎球菌结合物及其制备过程中间品进行多种方法抗原性监控，以期对肺炎球菌结合物制备过程中多糖抗原性进行差异分析，进而为制备工艺参数的选择提供重要参考指标。方法用已建立的免疫双扩散法、抑制ELISA、速率比浊法对23 F型肺炎球菌结合物制备过程中间品和结合物进行抗原性分析；对不同方法结果比较、综合分析23 F型肺炎球菌结合物制备过程中的多糖抗原性变化。结果建立分析抗原性变化的抑制ELISA和速率比浊法；3种方法均可用于肺炎球菌结合物制备过程中的多糖抗原性分析；其中抑制ELISA可监控制备过程中抗原性的微小改变并可量化。结论用多种方法对23 F型肺炎球菌结合物制备过程中的多糖抗原性进行分析，为结合物制备过程中多糖抗原性的监控提供了多层面的有效方法，并为抗原性监控提供可量化的方法。

本刊使用的医学缩略语

为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下（按英文首字母顺序排列），本刊在论文中将不再注释。

本刊启用稿件远程管理系统

为顺应当今期刊网络化、数字化的发展趋势，更好地为广大作者、读者提供高质量的服务，中华医学会杂志社开发了稿件远程管理系统。该系统根据中华医学会系列杂志稿件处理流程、编辑加工规范、审稿制度、管理规范等业务需求设计，采用先进的数据库及网络技术，具有强大的数据处理和分析能力。稿件远程管理系统将协助作者、编辑、审稿专家、编委、定稿会专家、总编等相关人员多位一体地进行稿件业务处理，解决编辑部对稿件网络化流程管理的需要，并实现各类查询功能。2009年9月，本刊正式启用稿件远程管理系统，访问中华医学会网站（http：／／www．cma．org．cn）首页上方“业务中心”进行稿件处理操作。

第七次全国暨第六届亚洲支原体学术会议征文通知

为加强支原体研究的国际间交流与合作，促进我国该领域科技发展和人才培养。由中华医学会微生物学与免疫学分会、亚洲支原体学组织联合举办的“第七次全国暨第六届亚洲支原体学术会议”拟于2014年8月22-25日在湖南省张家界市召开。届时将有日本、韩国、印度和中国台湾等国家和地区的专家学者出席交流，欢迎国内外从事支原体相关研究、临床检验与诊疗、相关疾病防治及动植物检验检疫等相关工作的专家和同仁踊跃投稿参加。

中华医学会2014年全国微生物学与免疫学学术年会征文通知