中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用
目的 研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路发挥的作用,以及沉默TLR4基因后,对TLR2信号通路的影响.方法 利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,将细胞随即分为正常组(N组)、正常+烟曲霉孢子刺激组(N+Af组)、正常+TLR4-siRNA组[TLR4(RNAi)组]、正常+TLR4-siRNA+烟曲霉孢子刺激组[ TLR4(RNAi) +Af组],RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白的表达变化.结果 (1)TLR4基因沉默前:与N组比较,N+Af组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达量均显著升高(P＜0.05).(2)TLR4-siRNA( 100nmoL/L)转染RAW264.7细胞,沉默效率达83％.(3)TLR4基因沉默后:与N组比较,TLR4( RNAi)组TLR2、MyD88 mRNA的表达量均显著降低(P＜0.05);与N+Af组比较,TLR4( RNAi)+Af组的TLR2、MyD88 mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低(P＜0.05);与TLR4( RNAi)组比较,TLR4(RNAi)+ Af组MyD88 mRNA表达量显著升高(P＜0.05),而TLR2 mRNA及TNF-α蛋白表达量却无显著变化(P＞0.05).结论 RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,TLR2和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用;当沉默TLR4基因后,TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用,可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用.
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β1-肾上腺素受体自身抗体对大鼠B淋巴细胞增殖的影响
目的 探讨β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)对大鼠B淋巴细胞增殖的影响.方法 本研究以主动免疫大鼠的方法获得β1-AA阳性的IgGs (pIgGs);免疫磁珠分选技术获得大鼠B淋巴细胞;CCK8法检测B淋巴细胞的增殖能力.结果 β1-AA(0.1 μmol/L pIgGs)促进LPS刺激的大鼠B淋巴细胞增殖(A值:0.739±0.036 vs 0.533±0.032,P＜0.05),且有浓度依赖性的趋势;该效应可以分别被β1/β2-肾上腺素受体(β1/β2-AR)阻断剂部分阻断,被两种阻断剂共同作用完全阻断;pIgGs对静息的大鼠B淋巴细胞无增殖作用.结论 β1-AA可能通过B淋巴细胞表面的β1-AR和/或β2-AR信号通路促进激活的B淋巴细胞增殖.
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Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响
目的 探讨Pyrin重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道炎症的抑制作用及机制的研究.方法 40只雄性清洁级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组10只.分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、Pyrin重组蛋白治疗3d组和Pyrin重组蛋白治疗7d组.在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,Masson三色染色;用图像分析软件测定支气管壁厚度(WAt/Pbm)、支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)及胶原纤维面积;用酶联免疫吸附法( ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量;用RT-PCR检测肺组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达;用Western blot方法检测核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-kB)的表达.结果 哮喘模型组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高和IFN-γ水平降低;肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-kB表达水平均显著高于生理盐水对照组(P＜0.05).Pyrin重组蛋白3d和7d干预组小鼠BALF中细胞总数、IL-4、IL-5、TNF-α水平和肺组织支气管管壁厚度、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、NF-kB表达水平显著降低,与哮喘模型组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),而BALF中IFN-γ水平明显上升,与哮喘模型组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);Pyrin重组蛋白7d干预组CTGF、TGF-β1的转录和表达水平显著低于哮喘组(P＜0.05).结论 我们推测Pyrin重组蛋白可能部分是通过抑制NF-kB信号途径来阻断TGF-β1和CTGF的过度表达而实现抑制气道炎症,进而抑制气道重构的发生.
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肾上腺素对生物材料表面大肠埃希氏菌qseC缺陷株生物被膜形成的影响
目的 探讨肾上腺素( EPI)对生物材料表面大肠埃希氏菌 qseC 缺陷株生物被膜形成的影响.方法 以大肠杆菌MC1000、MC1000△qseC为实验菌株,对两菌株在不同培养基(LB或LBEPI)中的运动能力进行比较;同时分别将两菌株和PVC材料片在不同培养基(LB或LB+EPI)中培养,用激光共聚焦显微镜(CLSM)和扫描电镜(SEM)观察EPI对PVC表面细菌生物被膜形成的影响.结果 在LB培养基中,qseC缺陷株的细菌生物被膜形成能力较野生菌株明显减弱(P＜0.05).MC1000菌株在LBEPI培养基中的运动力较之在LB培养基中明显增强(P＜0.05),而qseC缺陷株的变化不明显.CLSM和SEM对PVC表面细菌生物被膜的检测结果表明,EPI增强MC1000菌株生物被膜形成能力,而对qseC缺陷株的影响不大.结论 肾上腺素促进大肠埃希氏菌在生物材料表面细菌生物被膜的形成,该作用由qseC介导.
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一组泛耐药鲍曼不动杆菌中发现拓普异构酶Ⅳ编码基因新的变异型
目的 调查一组泛耐药鲍曼不动杆菌中喹诺酮类耐药相关基因的存在与变化状况.方法 收集南通大学附属医院2011年1月-2011年4月患者标本中分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析喹诺酮类药物作用靶位基因gyrA与parC,以及可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因[ qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac( 6')-Ⅰ b-cr].结果 本组20株鲍曼不动杆菌均检出gyrA基因第83位密码子TCA→TTA有义突变(氨基酸序列Ser→Leu).parC基因第80位密码子TCG→TTG有义突变(氨基酸序列Ser→Leu),并同时存在3个同义突变(第40位密码子CCC→CCT同义突变;第41位密码子GTA→GTT同义突变;第44位密码子CGT→CGC 同义突变),且本组parC基因序列为新的变异型.可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6’)-Ⅰ b-cr均没有检出.结论 本组鲍曼不动杆菌耐喹诺酮类药物可认为主要与喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变相关,发现parC基因新的变异型国内未见报道.
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甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用
目的 构建甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rSpaO-OmpA免疫保护作用.方法 采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因,构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO-OmpA表达情况及其产量.采用免疫扩散法、微量肥达和Western blot法鉴定rSpaO-OmpA 抗原性和免疫反应性.采用小鼠感染模型了解rSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用,实验中采用重组表达的SpaO( rSpaO)及OmpA(rOmpA)作为对照.结果 所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA.rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号,免疫家兔后可产生特异性抗体.100 μg或200 μgrSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66.7％ (8/12)和83.3％ (10/12),明显高于等量rSpaO及rOmpA( P＜0.05).rSpaO-OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1∶5 ～ 1∶40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO-OmpA免疫双扩散效价为1∶1 ～1∶16.结论 人工融合重组抗原rSpaO-OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强.
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腺病毒5型和7型感染诱导呼吸道上皮细胞黏蛋白1表达的差异性研究
目的 为探讨人类呼吸道腺病毒感染自限性的分子机制,对人类常见呼吸道腺病毒5型(Ad5)和7型(Ad7)感染对呼吸道上皮细胞抑炎分子——黏蛋白1(MUC1)表达的影响进行初步研究,并探讨两者差异性.方法 分别用Ad7和Ad5感染呼吸道上皮细胞A549构建感染模型.qRT-PCR和Western blot分别检测感染后MUC1 mRNA转录水平及蛋白表达水平变化.结果 Ad5感染A549细胞后MUC1 mRNA转录水平及MUC1蛋白表达水平均可见上调,且呈一定的时间效应;而Ad7感染后未观察到此现象,延长Ad7感染时间后,仍未观察到MUC1 mRNA转录上调.结论 人类呼吸道Ad5感染呼吸道上皮细胞初期,可诱导上调抑炎分子MUC1表达,提示MUC1全部或部分参与到Ad5感染的自限性过程.但Ad7感染不能诱导上调MUC1表达,其感染的自限性来源于其他机制.
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检测基孔肯雅病毒ELISA方法的建立
基孔肯雅病毒( CHIKV)为重要的虫媒传播性传染病病原,2006年以来席卷南亚诸岛国及印度,并迅速向欧洲、加拿大、加勒比海、美洲南部和美国扩散,导致数百万人染病,对公共卫生安全造成严重威胁[1].2010年9月底,我国首次在东莞市暴发基孔肯雅热,并迅速导致数百人发病,作为一种新发传染病引起了媒体的广泛关注及民众的恐慌[2].我国南方各省区地处热带、亚热带,气候炎热潮湿,广泛存在基孔肯雅病毒的宿主与传播媒介,随着全球范围内人员及经济往来日益频繁,存在再次输入、暴发的可能.因此,提前开展其快检技术的研究及产品储备,对公共卫生安全保障具有十分重要的意义.
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Th17细胞在小鼠巨细胞病毒感染急性期的作用研究
目的 整体水平观察Th17细胞在小鼠巨细胞病毒(MCMV)播散性感染急性期的作用.方法 建立MCMV播散性感染模型,病毒接种后第3、7、14和28天各处死3只小鼠;同时设模拟感染鼠作为对照.应用real-time PCR法检测MCMV感染鼠脏器MCMV DNA载量;HE染色观察MCMV感染后脾组织病理损伤变化;流式细胞术检测脾细胞中CD4+IL-17A+T细胞比率;ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-17A蛋白浓度.结果 感染急性期唾液腺组织中MCMV DNA于感染后14 d高;脾组织病理损伤也于感染后14 d严重;与模拟感染对照鼠相比,MCMV感染鼠脾细胞中CD4+IL-17A+T细胞比率呈升高趋势(均P＜0.01),且于感染后14 d达峰值[(1.14±0.09)％ vs (0.19±0.04)％,t=17.551,P=0.000];病毒特异性IL-17A浓度也于感染后14 d达峰值[(81.98±12.37) pg/ml vs (44.96±8.44) pg/ml,t=4.281,P=0.006];脾细胞培养上清中病毒特异性IL-17A水平与唾液腺组织中MCMV DNA载量呈正相关(r=0.54,P＜0.05);脾组织病理损伤越重,脾细胞培养上清中IL-17A浓度越高.结论 Th17细胞主要通过IL-17A参与MCMV播散性感染急性期免疫应答,直接或间接的促进病毒复制或脾组织局部病理损伤,可能是MCMV持续性感染的重要原因之一.
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类风湿关节炎患者外周血Tfh及Th9的变化及临床意义
目的 观察类风湿关节炎(RA)患者外周血中滤泡辅助性T细胞(Tfh)及T辅助细胞9(Th9)的变化,并与病情活动性及脏器受累等临床资料进行相关性分析,探讨Tfh及Th9在RA发病过程中可能的免疫学发病机制.方法 选择36例RA患者和22例健康对照.根据病情活动度不同将病例组分为病情高度活动组(22例)、病情中度活动组(14例),流式细胞仪检测RA和正常对照组外周血单个核细胞( PBMCs)中CD4-FITC、CXCR5-PE、ICOS-APC标记的CD4+ CXCR5+ ICOS+(Tfh)及CD8-FITC、CD3-APC、IL9-PE标记的CD3+CD8-IL-9+( Th9)比例.分析Tfh及Th9与RA患者的血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、关节压痛数、肿胀数及骨质破坏等指标的相关性;分析Tfh与Th9的关系.结果 RA患者的Tfh表达率明显高于对照组(Z=-6.082,P=0.000),RA患者Th9的表达率亦高于对照组(0.989±0.498 vs 0.213 ±0.084,t=13.063,P=0.000);RA重度活动组Tfh表达率亦高于中度活动患者的表达率(3.880±1.255 vs 2.678±1.022,t=2.990,P=0.005),且两组Tfh的表达率均高于对照组(P均＜0.01);RA重度活动患者Th9表达率高于中度患者(1.181±0.523 vs 0.686±0.254,t=4.043,P=0.000),且两组Th9的表达率亦均高于对照组(P均＜0.01); Tfh 细胞数与RA患者DAS28(r=0.571,P=0.000)、ESR(r=0.375,P=0.029)、CRP(r=0.357,P=0.032)、关节压痛数(r=0.598,P=0.000)、RF(r=0.421,P=0.023)及抗CCP滴度(r=0.421,P=0.023)正相关;与病程、晨僵、关节肿胀数、骨质破坏、心电图异常无相关性.Th9表达的百分率与RA患者的DAS28( r=0.461,P=0.005)、ESR(r=0.347,P=0.042)、CRP(r=0.384,P=0210)、关节压痛数(r=0.341,P=0.042)、关节肿胀数(r=0.347,P=0.038)及RF(r=0.379,P=0.025)正相关,与病程、晨僵时间、抗CCP滴度、心电图异常及骨质破坏无相关性;Tfh与Th9在外周血中的表达率呈正相关(r=0.727,P=0.000).结论 RA患者外周血Tfh及Th9的比例显著升高,且与疾病活动度及相关炎症指标明显相关,提示Tfn及Th9可能参与RA的发病及病情发展.
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CHB患者CD4+ T细胞ICOS表达及其与干扰素治疗的相互关系
目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者经干扰素治疗前后外周血CD4+T细胞上可诱导共刺激分子( inducible costimulator,ICOS)表达水平的变化情况.方法 CHB患者56例,其中聚乙二醇(PEG)干扰素α2a治疗28例,拉米夫定治疗28例,以健康志愿者20例为正常对照组.采集两治疗组治疗前及治疗后24、48周的患者外周血,以流式细胞技术检测ICOS+ CD4+T细胞在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的频数变化;采用real-time PCR法检测患者HBV DNA载量变化.结果 CHB患者CD4+T细胞ICOS表达水平明显高于正常对照者(P＜0.001).干扰素治疗后患者ICOS表达水平下降,同拉米夫定组差异有统计学意义(P＜0.05).干扰素治疗后患者ICOS改变值同HBV DNA载量变化值呈正相关(r=0.972,P＜0.001),而拉米夫定组则未发现相关性(r=-0.101,P=0.608).结论 CHB患者存在着细胞免疫紊乱,其CD4+T细胞ICOS的表达升高.干扰素可下调CD4+T细胞ICOS的表达,纠正细胞免疫偏移,发挥抗HBV作用.
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系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25high Tr和 CD4+CD25low T细胞PD-1表达的分析和意义
目的 探讨PD-1(programmed death-1)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)和CD4+ CD25lowT细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血CD4+ CD25high Tr和CD4+ CD25lowT细胞表面PD-1表达水平,同时收集SLE患者临床表现、实验室检查数据,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4+ CD25 high Tr和CD4+CD25lowT细胞表PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果 (1)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 high Tr和CD4+ CD25lowT细胞的百分率均低于对照组.(2)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 highTr表达PD-1的百分率均高于对照组.SLE稳定组和对照组外周血CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率均高于活动组.(3)狼疮肾炎患者外周血CD4+CD25highTr表达PD-1的百分率高于无狼疮肾炎患者.而狼疮肾炎患者CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率低于无狼疮肾炎患者.(4) CD4+CD25high PD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈正相关;CD4+ CD25high Tr、CD4+CD25lowPD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈负相关.结论 SLE患者外周血中CD4+ CD25high Tr、CD4+ CD25lowT细胞以及它们表面PD-1表达异常,并且与疾病活动性相关,PD-1/PD-L1信号通路可能对CD4+CD25highTr、CD4+CD25lowT细胞的数量和功能有影响.
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干扰素及干扰素诱导剂与人乳头瘤病毒致尖锐湿疣的治疗
尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的皮肤黏膜病变,主要引起皮肤黏膜的良性增生,某些型别HPV所致皮损易反复发作,甚而导致癌变,故去除疣体、防止复发和癌变是尖锐湿疣治疗的目的.干扰素(interferon,IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子.IFN用于治疗尖锐湿疣已近20年,取得了一定的临床疗效,但尚存一定问题,本文就干扰素在尖锐湿疣中的应用作一综述.
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APRIL调节基质金属蛋白酶的表达对结直肠癌细胞转移侵袭能力的影响
目的 研究增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞转移侵袭能力和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)表达的影响,以进一步明确APRIL在CRC转移中的作用.方法 APRIL基因的小干扰RNA质粒载体(siRNAAPRIL)转染人CRC细胞SW480,APRIL重组蛋白(rhAPRIL)刺激CRC细胞HCT-116,Transwell小室转移及侵袭试验分析APRIL对CRC细胞转移及侵袭能力的影响;RT-PCR、ELISA检测MMPs的表达变化.结果 siRNA-APRIL转染的SW480细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著减少(P＜0.05),rhAPRIL刺激的HCT-116细胞Transwell小室试验转移及侵袭细胞数显著增多(P＜0.05);MMP-2、MMP-9及TIMP-1 mRNA,分泌型的MMP-2、MMP-9蛋白表达在转染或刺激前后差别均有统计学意义(P＜0.05);MMP的抑制剂GM6001处理后,SW480对照组和rhAPRIL刺激后的HCT-116细胞Transwell小室侵袭细胞数显著减少(P＜0.05).结论 APRIL通过调节MMPs的表达促进结直肠癌的侵袭和转移,可为结直肠癌转移的干预及治疗提供新的靶点.
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人源抗HER2单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的表达、纯化及鉴定
在人类乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2 (HER2)和受体趋化因子4(CXCR4)的表达成正相关,由于HER2与CXCR4/CXCL-12轴在乳腺癌骨转移中的重要作用,使其成为可供选择的肿瘤治疗靶点.本研究将HER2单链抗体(ScFv)与鱼精蛋白截短体(tP)融合,以期获得同时具有抗原与核酸结合活性的ScFv-tP融合蛋白,核酸与该融合蛋白结合后,有望实现小分子干扰RNA( siRNA)的靶向递送,对HER2与CXCR4/CXCL-12轴进行RNA干扰(RNAi),为新型抗肿瘤药物应用于临床提供资料.
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人外周血单个核细胞和肿瘤细胞中吲哚胺2,3双加氧酶mRNA水平的实时定量RT-PCR分析
目的 定量分析HIV-1感染者及高危人群外周血单个核细胞(PBMC)和人源肿瘤细胞在Toll样受体(TLR)配体刺激前后吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达水平.方法 建立人IDO mRNA的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法;检测HIV-1阳性个体和高危人群PBMC中IDO mRNA水平;检测TLR4、TLR7/8、TLR9配体刺激前后人黏膜(T84、Caco2、Hela)和白细胞(THP-1、MT-4)来源肿瘤细胞中IDO mRNA的水平.结果 HIV-1阳性个体PBMC中IDO mRNA水平较高危人群高(103.42拷贝IDO mRNA/106拷贝GAPDH mRNA);但也有部分高危人群个体的PBMC含有较高水平的IDO mRNA;肿瘤细胞在TLR配体刺激后IDO mRNA的水平可以显著升高,因细胞系和TLR配体种类不同而异.结论 本研究表明IDO可能在我国HIV-1感染者体内病毒免疫逃逸和肿瘤发生中起作用,值得深入研究.
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γH2AX在HPV16阳性宫颈鳞癌组织中的表达及意义
目的 探讨γH2AX在HPV16阳性宫颈鳞癌组织中的表达及意义.方法 对74例宫颈鳞癌组织通过DNA提取,PCR检测,分析HPV的感染情况并筛选HPV16阳性宫颈癌组织;进而对HPV16阳性的宫颈癌石蜡组织连续切片HE染色明确组织型别,进行HPV16 DNA原位杂交检测HPV定位、免疫组化检测γH2 AX和p16蛋白的表达;后选取30例典型的包括从正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变到宫颈原位癌渐变的组织切片,对比HPV DNA定位与γH2 AX和p16蛋白的表达,分析γH2 AX作为HPV感染导致宫颈癌发生过程中生物标记物的可行性.结果 经PCR扩增证明HPV感染率为98.65％,HPV16是常见的型别占74.32％;原位杂交结果显示正常宫颈组织和CIN Ⅰ检测不到HPV16 DNA的存在,CINⅡ中HPV主要为游离型存在,随着宫颈病变的加重,HPV16 DNA逐渐出现整合形式;p16和γH2AX的表达均随着宫颈上皮病变级别的增加其阳性表达率增高,HPVDNA和γH2AX的表达均以颗粒细胞层和棘细胞层为主,定位具有一致性,HPV DNA和p16的表达定位不具有一致性.结论 γH2AX作为DNA损伤激活的重要蛋白,可作为HPV16感染致宫颈癌发生过程中的生物标记物.
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钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究
目的 了解钩端螺旋体毒素-抗毒素系统中毒性蛋白VapC的功能及其对宿主细胞的毒性作用.方法 以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板,采用PCR扩增全长vapB、vapC、vapBC基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rVapB和rVapC 表达情况,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVapB和rVapC.检测rVapB和rVapC有无水解问号钩体赖株及THP-1细胞DNA或RNA活性.分别采用实时荧光定量PCR和Western blot试验,检测问号钩体赖株感染THP-1细胞前后vapB和vapC基因转录及表达水平的变化.构建vapB和vapC基因真核表达载体并转染细胞,采用CCK-8试剂检测VapB和VapC蛋白对细胞活性的影响.结果 所克隆的vapB和vapC基因核苷酸及氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能分别表达rVapB 和rVapC.rVapC可水解RNA,但不水解DNA.问号钩体赖株感染THP-1细胞后,vapB和vapC基因 转录及表达水平均显著上调,部分毒性蛋白VapC外分泌.转染vapC基因的人肾小管上皮细胞HEK293大量死亡.结论 问号钩体赖株VapC蛋白为RNA酶,可在感染宿主细胞过程中外分泌并对细胞有明显毒性.
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E型沙眼衣原体重组主要外膜蛋白诱导恒河猴的交叉免疫效应
目的 探讨E型重组主要外膜蛋白(rMOMP)对恒河猴诱导产生的衣原体交叉免疫应答效应.方法 恒河猴分3组,每组2只,分别为佐剂蛋白组、佐剂组、对照组.于第0、2、4周双侧肱三头肌注射.末次免疫后两周,ELISA检测恒河猴血清中沙眼衣原体特异性IgG抗体和细胞因子IFN-γ,MTT法检测恒河猴淋巴细胞特异性增殖反应,观察恒河猴的迟发型超敏反应,以及恒河猴的血清抗体中和试验.结果 佐剂蛋白组产生了较强的抗rMOMP反应和高水平细胞因子.淋巴细胞特异性增殖反应、迟发型超敏反应明显强于对照组,抗体中和试验蛋白佐剂组血清能抑制D/E/H/L2型沙眼衣原体生长.结论 沙眼衣原体rMOMP能刺激恒河猴产生有效的交叉免疫.
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内体及其功能研究进展
内体(endosome)是真核细胞中膜包裹的囊泡结构,主要参与以蛋白质为主的大分子的分选、运输和降解,是细胞膜泡运输过程中内膜系统的重要成分之一.自1983年被首次定义以来,内体的关注度日益增强,本文就内体的分类、生成及功能作一综述.一、内体的分类内体通常分为早期内体( early endosome)、晚期内体( late endosome)和循环内体(recycling endosome).
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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