中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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FTY720对淋巴细胞的细胞周期阻滞作用
FTY720为中药冬虫夏草提取成分经化学修饰后的产物,是典型的新的免疫抑制剂,能够有效抑制免疫功能,毒副作用较小.对于其对细胞周期的影响的研究多集中于肿瘤细胞的研究.我们运用随机、对照的方法,研究了FTY720对小鼠胸腺和淋巴结的淋巴细胞细胞周期的阻滞作用.
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TRAF2在活化B淋巴细胞NF-κB信号传导系统中的作用
目的 肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor associated factor 2,TRAF2)是介导B淋巴细胞表面CD40信号传导的重要因子.目前对TRAF2如何介导CD40核转录因子(NF-κB)信号系统各环节下传还了解不多.本研究利用人B细胞株模型对这方面进行了初步探讨.方法 将人类B淋巴细胞株RAMOS细胞转染融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,过夜培养后用流式细胞仪分离YFP阳性细胞,然后通过激酶实验、Western blot以及ELISA等方法对NF-κB通路的活化进行包括IκB激酶、IκB磷酸化和降解以及NF-κB的细胞核内转录等多方面的研究.结果 过度表达WT-TRAF2可诱导IκB激酶(IKKα和IKKi/ε)对IκBα(Ser32,36)的磷酸化和降解以及对p65/RelA的磷酸化和p65、p50、c-Rel的核内转录.然而,过度表达DN-TRAF2只抑制p65的核内转录,而不抑制p50和c-Rel.TRAF2也可通过诱导RAMOS B细胞分泌IgM而影响其功能.结论 TRAF2可选择性地激活人B淋巴细胞CD40介导的NF-κB信号传导系统中的重要因子,在B细胞活化分化中起重要作用.
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FTY720介导的淋巴细胞归巢作用对外周淋巴细胞的影响
FTY720是由ISP-I衍生而来的一类新型免疫抑制剂[1].近年来的研究显示,FTY720在器官移植排斥以及自身免疫性疾病的一系列模型中显示出良好的治疗效果[2-3].
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IL-4RA基因转染对哮喘模型的干预性作用研究
目的 IL-4RA基因转染对哮喘模型过敏性炎症的干预性研究.方法 选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,随机分为5组(每组10只):空白对照组、哮喘模型组、空载体(104 CFU/ml pLNC-laz)干预组、激素治疗组、目的基因(104 CFU/ml pLNC-IL-4RA)干预组.各组在后一次激发后24 h放血杀死小鼠,检测血中嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)计数,用ELISA检测支气管肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage fluid,BALF)中的各种细胞因子水平,并对BALF中各种炎症细胞计数,肺组织切片做HE染色.结果 哮喘模型鼠BALF中有大量嗜酸性粒细胞浸润,肺组织病理切片可见大量炎症细胞浸润、杯状细胞增生、黏膜壁破坏.哮喘模型的这些改变在激素和基因干预后明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01),而在空载体干预后则无明显的变化(P＞0.05).空白对照组的BALF中IL-5、IL-13低于检测水平,哮喘模型组BALF中IL-5、IL-13水平明显增高,而基因治疗组和激素治疗组IL-5、IL-13水平明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01),空载体干预组BALF中细胞因子水平与哮喘模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过逆转录病毒转染的IL-4RA的基因高表达成功地阻止在哮喘模型鼠气道由IL-4和IL-13诱发的气道嗜酸性粒细胞浸润,另外,逆转录病毒介导的IL-4RA在气道的表达明显地阻止了哮喘模型气道黏液的分泌,同时也减少了过敏性哮喘相关的TH2细胞因子水平,因此,基因治疗可能会成为治疗慢性哮喘气道炎症和哮喘症状的极有潜力的药物.
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沙眼衣原体CPAF免疫活性区域重组蛋白的表达及在临床诊断中的应用
目的 分析沙眼衣原体(Ct)蛋白酶样活性因子(CPAF)免疫优势区的免疫活性,探讨其在Ct感染诊断中的应用价值.方法 构建原核表达重组质粒pGEX-6p-2/CPAF',异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用该纯化的表达产物包被酶标板,建立间接ELISA检测病人血清中的Ct特异性IgM和IgG抗体,同时与晶美公司Ct ELISA试剂盒检测结果进行对比分析.结果 含pGEX-6p-2/CPAF'的大肠杆菌BL21大量表达相对分子质量(Mr)约为43×103的目的蛋白,用该重组蛋白包被酶标板,建立间接ELISA检测Ct IgM、IgG阴性和阳性参考血清各50份,符合率均为100%;同时检测250份临床血清标本,与晶美公司ELISA试剂盒检测结果的符合率IgM为96.8%,IgG为98.4%.结论 表达的Ct CPAF免疫优势区(AA200～AA338)重组蛋白具有良好的免疫反应活性,可望用于Ct感染的临床诊断.
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变色硅胶用作菌种冷冻干燥的脱水剂
冷冻干燥法保存细菌的菌种和病毒的毒种,不仅保存时间长,而且可以避免变异,可保持原细菌和病毒的生物特性.冷冻干燥技术在生物学领域中占有重要的地位,是保存生物制剂及其标准品的优良方法.
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ISEcp1-like插入序列与CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的水平播散
20世纪90年代后,中国多个地区不断发现产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(CTX-M-ESBL)肠杆菌科细菌的流行.近年,在4组CTX-M-ESBL(CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9和CTX-M-25)基因上游均发现存在ISEcp1-like插入序列,其对CTX-M-19、CTX-M-2以及氨基糖苷类耐药基因rmtC的转移能力亦得到证实.目前CTX-M-ESBL在我国临床菌株中的传播与ISEcp1-like插入序列的关系尚不清楚.本文旨在探讨ISEcp1-like序列与CTX-M-ESBL在肺炎克雷伯菌临床株中传播的关系进行研究.
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B族链球菌表面蛋白LrrG的分段表达及其免疫原性和功能研究
目的 研究LrrG蛋白不同片段的免疫原性及保护功能,为B族链球菌(GBS)蛋白疫苗及组分疫苗的研究奠定基础.方法 采用生物信息学的方法预测LrrG蛋白的抗原表位,结合该蛋白的一级结构特征构建3个多肽片段(Gn、Gr、Gc)并重组表达;通过免疫动物及萃取组织液检测其免疫原性;体外调理吞噬试验检测各多肽片段的保护功能.结果 成功构建和表达纯化了Gn、Gr、Gc多肽片段,且3个多肽片段均可在小鼠血清诱导产生较高水平的特异性IgG抗体,Gn免疫原性好于Gr、Gc.Gr、Gc 30 μg剂量的免疫原性均好于其10 μg和50 μg剂量.除了Gr在肺、直肠组织产生的IgA抗体有较明显升高外,Gn、Gc对黏膜及血清IgA无明显刺激作用.体外调理吞噬试验表明3个多肽片段的抗体均具有促进吞噬细胞对GBS的吞噬功能.Gr、Gc的调理吞噬活性高于Gn,与B细胞表位预测结果相符.结论 重组多肽片段均具有较强的免疫原性,在一定免疫剂量范围内,血清特异性IgG水平呈剂量依赖关系;皮下免疫对黏膜免疫影响不大;调理吞噬作用可能是LrrG蛋白具有保护作用的机制,3个多肽片段均具有潜在保护作用,支持将其作为GBS蛋白疫苗及组分疫苗的候选成分.
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炭疽芽孢杆菌IS605插入位点在细菌检测与基因分型中的应用研究
目的 研究并分析我国炭疽芽孢杆菌(Ba)中IS605的分布,探讨以插入序列IS605检出Ba和对其进行分型的可能性.方法 按照已发表的Bacillus anthracis str.'Ames Ancestor'全基因序列全部7个位置的IS605设计引物,对90株Ba进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分析,得到了相应的分布,终通过测序确定差异的性质.结果 此次研究中90株Ba的IS605完全一致.但对5、6、7这3个位置与Ba近缘的细菌比较发现仅Ba出现阳性扩增结果.结论 IS605在Ba稳定存在,研究范围内所有菌株仅5、6、7这3个位置均有插入,因此这3个位置可以作为Ba与其他芽孢杆菌识别的特征;IS605定位不适合作为Ba的分型指标.
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不同接种方式感染单纯疱疹病毒的比较
由于单纯疱疹病毒(HSV)感染多呈隐匿、散发等特点,在临床研究中存在病例收集困难、诊断标准难以统一等难点,所以需要建立相关的动物模型,但既往的动物实验结果不尽一致,我们考虑是否与动物品种的差异有关,为此本研究对3种不同接种方式感染HSV进行了比较观察.
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锁核酸捕获TaqMan探针实时PCR和PCR-RFLP检测乙型肝炎病毒基因变异的研究
目的 评价锁核酸捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应(PCR)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测乙型肝炎病毒(HBV)基因变异的特点.方法 分别用直接测序法、锁核酸(LNA)捕获TaqMan探针实时PCR和PCR-RFLP检测77例接受拉米夫定(LAM)治疗6个月以上的慢性乙型肝炎患者的血清样本.结果 锁核酸捕获TaqMan探针实时PCR和PCR-RFLP都能检测HBV野生型YMDD及其变异型YIDD和YVDD.此外,两种方法尚能鉴定HBV野生型和变异型混合种群.更为重要的是,在检测HBV野生型和变异型共生变异方面,锁核酸捕获TaqMan探针实时PCR比PCR-RFLP更敏感、更省时.结论 锁核酸捕获TaqMan探针实时PCR是一种检测HBV YMDD变异的灵敏度和特异性都高的快速法,在监测HBV患者LAM抗病毒治疗的疗效及发现新耐药病毒基因型等方面具有广泛的应用前景.
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重型肝炎小鼠模型肝组织凋亡相关蛋白的表达及其促肝细胞凋亡的研究
目的 研究肝凋亡相关蛋白在重型肝炎小鼠模型肝组织中的表达及其促肝细胞凋亡的作用.方法 100 PFU鼠3型肝炎病毒(MHV-3)分别感染敏感鼠BALB/cJ系和耐受鼠A/J系,感染后24、48、72 h取小鼠肝组织,固定后石蜡包埋并切片,常规HE染色病理诊断计算肝组织炎症活动度积分(HAI);采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞凋亡;免疫组化SP法检测mfgl2、Fas、TNFR1蛋白的表达及纤维素的沉积;Western blot法检测小鼠肝组织Bcl-2类蛋白的表达,并计算Bax/Bcl-2的值.结果 MHV-3感染后BALB/cJ鼠肝组织出现大量炎性细胞浸润和肝细胞凋亡和坏死,而A/J鼠肝组织炎性反应轻微,且仅有少量肝细胞凋亡和坏死,两者差异有统计学意义(P＜0.01);感染后24 hBALB/cJ鼠肝组织出现大量mfgl2、Fas、TNFR1阳性细胞,并有大量纤维素沉积出现,而A/J鼠无阳性细胞和纤维素的沉积;感染后24 h BALB/cJ鼠肝组织Bax蛋白的相对表达水平要远高于A/J鼠(P＜0.01),Bcl-2蛋白的相对表达水平差异无统计学意义,BALB/cJ鼠肝组织Bax/Bcl-2值要远高于A/J鼠(P＜0.01).结论 肝组织凋亡相关蛋白的表达及其促肝细胞凋亡在重型肝炎的发病机理中具有重要作用.
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慢性乙型肝炎转化生长因子β1基因单核苷酸多态性及单倍型分析
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因单核苷酸多态性(SNP)及其单倍型与慢性乙型肝炎易感性之间的关系.方法 以155例慢性乙型肝炎患者和170例健康对照者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA测序的方法对TGF-β1基因-509C/T、869T/C(Leu10Pro)单核苷酸多态性进行基因分型,同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TGF-β1水平.用SHEsis软件分析TGF-β1基因的连锁不平衡及单倍型频率.结果 TGF-β1基因869T/C(Leu10Pro)多态性在慢性乙型肝炎组和正常人群中的分布差异无统计学意义(P＞0.05),而TGF-β1基因-509C/T多态性在两组人群中的分布差异有统计学意义(P＜0.05),等位基因频率的相对风险分析发现,T等位基因携带者患慢性乙型肝炎的风险是C等位基因的1.507倍(OR=1.507,95% CI:1.106～2.054);携带T等位基因的慢性乙型肝炎患者血清TGF-β1水平显著高于不携带者(P＜0.05).联合基因型分析发现,TGF-β1基因-509C/T、869T/C单核苷酸多态性存在着强烈的连锁不平衡(|D'|=0.891),与-509C/869T单倍型携带者比较,-509T/869C单倍型携带者显著增加了慢性乙型肝炎的发病风险(OR=1.663,95% CI:1.193～2.320).结论 TGF-β1基因-509C/T多态性和-509T/869C单倍型与慢性乙型肝炎的发病具有相关性,其中T等位基因可能是慢性乙型肝炎的遗传易感基因,携带T等位基因的个体可能通过促进TGF-β1的高度表达进而增加了慢性乙型肝炎的发病风险.
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卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究
目的 探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在CD4+T细胞的分布,分析CD4+CD25+Treg与卵巢癌患者临床病理与生理特征的关系;研究CD4+CD25+Treg与TH1、TH2类细胞因子的关系.方法 流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+Treg比例,TH1类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和TH2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的水平.结果 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于卵巢良性疾患(12.57%±5.12%)和健康对照组(10.77%±3.02%),P均＜0.001;良性疾患与健康对照组比较差异无统计学意义;手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于手术后的患者(16.41%±5.84%),P＜0.001.(2)CD4+CD25+Treg与患者的年龄、职业没有关系;卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+Treg为23.58%±7.08%,明显高于混合性瘤(18.30%±5.46%),差异有统计学意义(P＜0.05);与黏液性腺癌(22.06%±6.08%)差异无统计学意义;Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+Treg比值(28.79%±4.26%)明显高于Ⅲ期(20.01%±6.27%)和Ⅰ～Ⅱ期患者(17.97%±4.50%),P均＜0.001;CD4+CD25+Treg与肿瘤的远处转移(23.61%±6.52%)、淋巴结转移(24.05%±6.74%)、腹水的形成(24.06%±6.73%)有关(P＜0.05);低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(25.05%±5.96%)与高分化患者(16.03%±0.80%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而与中分化(21.82%±6.53%)比较差异无统计学意义.(3)卵巢癌患者TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平[(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml)、(7.56±2.25)pg/ml]明显低于健康对照[(2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml],P均＜0.001.而TH2类细胞因子IL-6的水平[(86.28±55.92)pg/ml]与对照组[(5.04±2.69)pg/ml)]比较显著升高(P＜0.001),而IL-4[(4.86±2.94)pg/ml]、IL-10[(1.07±2.30)pg/ml与健康人[(5.42±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml]之间差异无统计学意义.通过相关分析,卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ存在负相关,相关系数分别为r=-0.658,P＜0.05;r=-0.591,P＜0.05;r=-0.695,P＜0.05.与TH2类细胞因子IL-6存在正相关,相关系数r=0.784,P＜0.001.结论 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg数量显著增加,这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因;(2)CD4+CD25+Treg数量与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关.(3)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子之间存在着负相关,而与TH2类细胞因子IL-6之间存在正相关.CD4+CD25+Treg可能通过TH1、TH2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用.
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HIV/HCV合并感染者淋巴细胞活化及第二受体表达的研究
目的 了解中国不同疾病进展阶段人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒(HIV/HCV)合并感染者T淋巴细胞与自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)数量变化及T淋巴细胞活化、受体表达情况,并探讨HCV感染对HIV感染免疫指标及疾病进展的影响.方法 应用流式细胞术分析228例不同疾病进展阶段的HIV/HCV合并感染者及101例单纯HIV感染者外周血T淋巴细胞、NK细胞数量及T淋巴细胞活化受体(HLA-DR、CD38)、第二受体(CCR5、CXCR4)表达情况.结果 (1)HIV/HCV合并感染组中,CD4+T淋巴细胞、NK细胞数量随疾病进展持续下降,其中艾滋病组(AIDS)明显低于无症状HIV感染组(HIV)(P＜0.05),HIV组明显低于长期不进展组(LTNP)(P＜0.01),LTNP组与健康对照组差异无统计学意义.LTNP组、HIV组及AIDS组CD4+、CD8+T细胞表面活化受体HLA-DR、CD38的表达依次升高,其中各组间CD8/CD38的升高差异均有统计学意义(P＜0.05),AIDS组CD4/HLA-DR、CD8/HLA-DR的升高明显高于LTNP组和HIV组(P＜0.01).LTNP组、HIV组及AIDS组CD4+、CD3+T细胞表面CCR5的表达亦依次升高,各组问差异均有统计学意义(P＜0.05);CD3+T细胞表面CXCR4的表达依次升高,AIDS组明显高于HIV组和LTNP组(P＜0.01).(2)HIV/HCV合并感染组与单纯HIV感染组相比,AIDS组NK细胞明显下降(P＜0.05),CD4+T细胞下降,但无统计学意义,CD4/HLA-DR、CD8/HLA-DR、CD4/CXCR4、CD3/CXCR4明显升高(P＜0.01);HIV组NK细胞明显下降(P＜0.01),CD4/CXCR4明显升高(P＜0.05);LTNP组各项指标与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义.(3)HIV/HCV合并感染组的HIV病毒载量随疾病进展不断升高,与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义;HCV病毒载量在疾病不同阶段差异无统计学意义(P＞0.05).结论 随疾病进展,HIV/HCV合并感染者的免疫功能逐渐下降,HIV病毒载量逐渐升高.与单纯HIV感染相比,合并HCV感染可通过破坏机体天然免疫功能、促进免疫系统活化和受体表达,加速HIV感染的疾病进展.
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中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上TLR4表达和血浆TNF-α水平
目的 观察中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞上Toll样受体4(TLR4)表达水平和血浆TNF-α浓度,初步探讨TLR4在HIV感染中的作用.方法 分别运用流式细胞术、ELISA法测定46例HIV/AIDS患者和30例健康对照者的外周血单核细胞上TLR4的表达及血浆TNF-α浓度,采用t检验和相关分析进行数据分析.结果 HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4的表达率、血浆TNF-α浓度分别是52.19%±4.37%和(35.79±5.08)pg/ml,均显著高于健康对照组;单核细胞上TLR4的表达率与血浆TNF-α浓度、HIV-1病毒载量的相关系数分别是0.645和0.708,呈正相关.结论 中国HIV/AIDS患者外周血单核细胞TLR4表达上调,并且与患者体内HIV复制存在一定的相关性.
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北京市部分艾滋病患者的耐药性分析及对抗病毒治疗效果的影响
目的 了解北京市部分艾滋病患者抗病毒治疗后耐药发生情况及其对抗病毒治疗效果的影响.方法 以北京市部分未经抗病毒治疗的艾滋病患者(17人)以及经抗病毒治疗的患者(51人)为研究对象,通过问卷调查了解一般情况、服药方案、服药依从性及抗病毒治疗前后的临床表现等.同时采集10 ml EDTA抗凝静脉血,检测CD4/CD8细胞数、病毒载量及基因型耐药性.结果 未服药患者耐药性突变位点主要有118位密码子;服药患者耐药性突变位点和突变的频次显著增加,发生率大于10%的突变位点有103位、118位、151位、181位、184位和190位密码子,并发现TAM突变(M41L、K70R)和Q151复合体突变(A62V、V75I、F77L、F116Y和Q151M).病毒耐药谱表现为出现对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)类药物(DLV、EFV和NVP)和核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)类药物(AZT、DDI、D4T、DDC)具有高度耐药性的毒株,及对NRTI和蛋白酶抑制剂(PI)具有中度和低度耐药性的毒株.未服药人群的耐药性毒株的流行率为6.7%,服药患者为45.0%,交叉耐药和多重耐药严重.抗病毒治疗后没有发生耐药患者病毒载量对数的平均值为1.9 log(拷贝/ml),明显低于耐药组病人的3.8 log(拷贝/ml).结论 北京市部分HIV感染者耐药性毒株的流行已经达到较高的水平,并且多重耐药严重.耐药发生后影响治疗效果,规范治疗及提高服药依从性是治疗取得良好效果的重要因素.
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西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究
目的 研究西尼罗病毒(WNV)多表位基因的融合表达及其免疫保护作用.方法 利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列,确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因.采用重叠PCR方法扩增该基因,构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M,进行融合表达和纯化.将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验,观察其保护作用.结果 分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M,表达和纯化了融合蛋白Nus-M,该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击.结论 构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达,表达产物有较弱的免疫保护反应,为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料,但需要进一步改进.
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淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答
1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原.我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用.
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HCV多表位基因重组BCG的筛选及对其诱导的免疫应答研究
目的 将丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG,筛选重组BCG(rBCG),免疫BALB/c小鼠,研究其诱导的免疫应答.方法 培养并制备BCG感受态,将重组穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG,筛选rBCG.rBCG免疫小鼠,同时进行基因免疫,测定血清中特异性抗体,分离小鼠脾淋巴细胞,体外测定淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和进行CTL杀伤实验,观察rBCG在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答.结果 筛选出HCV多表位基因rBCG,免疫小鼠后在小鼠体内诱导出特异性的体液和细胞免疫应答,免疫应答水平均高于重组的基因免疫.结论 构建的HCV多表位抗原rBCG活疫苗优于基因疫苗.
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重组耻垢分枝杆菌制剂预防幽门螺杆菌感染的作用机理的初步探讨
目的 探讨重组耻垢分枝杆菌实验制剂(recombinant Mycobacterium smegmatis,rMs)预防幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的作用机理.方法 实验制剂免疫BLAB/c小鼠4周,用Hp攻击后4周,取血清、胃、脾组织,RT-PCR检测小鼠胃黏膜和脾组织的TH1型细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-12)与TH2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10);用ELISA检测针对Hp的特异性血清IgG、IgG1、IgG2a和IgA水平;用免疫组化方法检测胃黏膜固有层IgA表达;用MTF检测脾淋巴细胞增殖.结果 免疫后BALB/c小鼠特异性抗体显示rMs制剂诱导Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高,以IgG2a占优势.用Hp抗原刺激后各免疫组小鼠脾淋巴细胞均有明显增殖.免疫组化显示各免疫组小鼠胃黏膜固有层IgA阳性标记腺体数明显高于对照组.RT-PCR证实,Hp攻击之前,各免疫组胃和脾组织已出现了IFN-γ、IL-12、IL-2表达而无IL-4、IL-6、IL-10表达.PBS对照组和单纯耻垢分枝杆菌(Ms)组胃黏膜和脾组织各细胞因子均无表达;Hp攻击后,PBS和单纯Ms组胃组织出现以TH1细胞IFN-γ为主的增生,IFN-γ水平显著高于rMs组(P＜0.05);而3个rMs制剂组脾脏则出现以TH2细胞(IL-4)为主的增生,IL-4水平显著高于对照组(P＜0.05).提示该制剂的作用机制是诱导TH1/TH2平衡型免疫应答.结论 成功地建立了BALB/c小鼠的Hp感染模型,对rMs制剂的免疫保护机理研究结果显示,rMs能产生以TH1细胞和TH2细胞协同作用的保护性免疫应答.
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重组小鼠Galectin-9在大肠杆菌中的表达以及体外功能检测
本研究旨在构建重组Galectin-9(半乳糖凝集素9)原核表达质粒,并对表达蛋白进行纯化和功能学鉴定.通过常规RT-PCR技术扩增小鼠Galectin-9基因序列,并将其插入质粒pET-11a的多克隆位点之间,构成重组表达质粒pET-11a-Galectin-9.
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小鼠CD4+记忆性T淋巴细胞的产生、纯化、鉴定及皮肤移植的检测
目的 建立CD4+记忆T细胞(memory T lymphocytes,Tm)的免疫磁珠分离方法,并检测其体外部分功能.方法 借助小鼠皮肤移植模型,制备受鼠脾细胞悬液,运用免疫磁珠方法分离CD4+Tm,用台盼蓝染色法和流式细胞仪检测分选所得细胞的活性和纯度,并在体外用ELISPOT技术检测其不同抗原刺激时IFN-γ活性分泌频数.结果 小鼠皮肤移植皮片平均存活时间为(13.6±0.9)d;分离所得CD4+Tm的活细胞百分率为(98.4±0.7)%;流式细胞术检测表型,其中CD4+CD8-细胞比例占(96.06±2.49)%,CD44+CD62L-细胞比例占(94.13±2.36)%,CD4+CCR7-细胞比例占(96.39±1.93)%;在无刺激物作用或者大鼠脾细胞、供体脾细胞、刀豆素A等刺激物作用时,IFN-γ活性分泌频数分别为3±1、6±3、339±14、108±9个/104,差异有统计学意义.结论 通过小鼠皮肤移植模型及免疫磁性分离技术,可制备高纯度无菌的CD4+Tm,其细胞活力不受影响,作用具有良好的供体特异性.这为深入研究Tm在移植物免疫方面的作用提供了技术资料.
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对ELISPOT室间质控及其检测样品要求的初步探讨
目前检测细胞免疫常用的方法是ELISPOT方法,ELISPOT方法结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术,能够在特异性细胞免疫应答过程中检测产生细胞因子的细胞数目,在单细胞水平分析细胞因子的分泌情况,具有灵敏度高、操作简便以及可检测活细胞功能等优点[1].
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双抗体夹心ELISA检测屋尘螨2组变应原方法的建立
过敏性疾病是临床上的多发病和常见病,尘螨是常见的过敏原.业已清楚尘螨主要的致敏成分是Der 1、Der 2变应原,近年文献报道发现Der 2变应原比Der 1变应原更稳定及耐降解,Der 2与Der1的含量一样高[1],从而引起了对Der 2的更深入的研究,并认为对环境中尘螨含量的监测及评价回避措施有效性等方面用Der 2含量更合适[2].
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缢蛏泛变应原原肌球蛋白的克隆表达、纯化及其免疫学特性研究
原肌球蛋白(tropomyosin)作为泛变应原广泛存在于无脊椎动物体内,本研究从缢蛏中克隆出一个原肌球蛋白基因.缢蛏(Sinonvacula constricta)购于深圳市水产品市场.
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王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定
目的 克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin).方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因,由675个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸.经分析,这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白,等电点为4.86,相对分子质量(Mr)约为14.2×103.此序列已被GenBank收录,登录号为EF173599.重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功克隆和表达了王棕花粉profilin,为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础.
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HLA-A*0201/HPV-18E77-15五聚体的构建及其初步应用
目的 构建人乳头状瘤病毒18型(HPV-18)特异性HLA-A2肽五聚体,为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的检测提供直接、有效的方法,并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL的检测.方法 构建含有HLA-A2-BSP和β2M基因的原核表达载体,并进行表达、复性、鉴定及纯化.再将特异性短肽与HLA-A2-BSP和β2M在体外进行耦合,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化.生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成五聚体.运用所构建的五聚体,通过流式细胞仪检测宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL,并与正常对照组进行比较分析.结果 所构建的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体的表达高效而且稳定,纯度达90%以上.HPV-18阳性宫颈癌患者体内抗原特异性CTL计数明显高于对照组(P＜0.05).结论 在五聚体复合物的构建中,高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体是构建成功的基础.所构建的MHC Ⅰ类分子五聚体和传统的四聚体相比,作为体内、外HPV-18E7抗原特异性CTL检测的有效工具,具有一定优势.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
