中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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雷公藤内酯醇对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响
目的探讨雷公藤内酯醇（TP）体内外对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法采用卵蛋白（OVA）致敏并反复刺激建立过敏性气道炎症模型，24只SD大鼠随机分为正常组、阳性对照组和TP处理组，每组8只。用TUNEL原位末端标记法，DNA电泳及电镜等方法，观察体内外TP对致敏大鼠淋巴细胞凋亡的影响及机制。结果致敏大鼠BALF中嗜酸性粒细胞（Eos）、淋巴细胞均较正常组明显增高(P<0.05)。体内应用TP可减少致敏大鼠BALF中Eos、淋巴细胞数目，同时可增加其BALF中淋巴细胞凋亡百分率。体外实验显示，不同剂量TP呈剂量依赖性（10-7～10-5g/ml）的促进OVA抗原刺激的脾淋巴细胞凋亡，该效应随作用时间延长而增强，并促进Fas/FasL表达；DNA电泳呈现梯形带，凋亡细胞呈典型凋亡改变；10-7g/ml TP可明显促进10-6mol/L地塞米松(DXM)的促凋亡作用。结论 TP可明显促进致敏大鼠肺及脾淋巴细胞凋亡，可能是其抗炎机制之一，并可能是通过Fas/FasL途径发挥作用；同时TP可明显增加DXM的促淋巴细胞凋亡作用。为阐明TP对抗哮喘气道炎症的作用机制和探讨激素依赖性哮喘治疗的新途径提供了有意义的实验资料。
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STAT3反义表达载体的构建、稳定表达及对M1白血病细胞表型的影响
目的探讨JAK/STATs通路在IL-6信号转导中的功能。方法将含起始密码子在内的约1.2kb STAT3 cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中，采用电穿孔法将重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中，进行G418筛选。结果 G418筛选出抗性克隆后，基因组DNA PCR扩增表明STAT3反义基因片段已导入M1细胞中并在基因组中整合。STAT3反义RNA不影响M1细胞的生长动力学特征，但可显著拮抗IL-6诱导的STAT3激活，并拮抗IL-6对M1细胞的生长抑制效应。结论 STAT3反义RNA能够在M1细胞中稳定表达，成为进一步研究JAK/STATs途径功能的新模型。
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用流式细胞术分析1例无关脐血移植后的免疫重建
脐血移植后的早期免疫重建不仅受到移植脐血状况和移植时患者状态的影响，而且与GVHD、感染、免疫抑制剂及G-CSF、GM-CSF的使用都有着重要的关系。我们利用流式细胞术，研究了国内罕见的4岁急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿HLA 2个位点不相合的无关脐血移植后3个月免疫重建的过程。 患儿，男，4岁，体重14.5kg，血型为AB型，ALL，第二次完全缓解(CR)。经搜寻，供者编号980229，移植脐血48ml，有核细胞数25.9×107/kg，血型O型。HLA配型采用BU/CY/ATG预处理方案。移植脐血样本于42℃水中快速复温，通过中心静脉输注，有核细胞回收率85%，活率80%，CD34+细胞5.014×107/kg，CFU-GM 8.319×105/kg。使用环孢霉
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IgA Fc受体介导的中性粒细胞脱颗粒反应的机理研究
目的对IgA Fc受体（FcαR）介导的中性粒细胞脱颗粒行为进行研究。方法分别用IgA免疫复合物(IgA IC) 和单克隆抗体（MIP8a）交联中性粒细胞表面的FcαR，用细胞释放的乳铁蛋白作为脱颗粒反应的指示剂，比较不同交联物激活细胞后产生的脱颗粒现象。结果 MIP8a交联FcαR后中性粒细胞发生迅速脱颗粒反应，在胞外无钙离子的情况下，该反应减弱。但是在胞外无镁离子的情况下，反应不受影响。IgA IC交联FcαR后仅引起缓慢的脱颗粒反应，在胞外无钙离子或无镁离子的情况下，都不能发生反应。结论 FcαR 作为受体（由IgA IC交联FcαR）和FcαR作为抗原（由MIP8a交联FcαR）介导的中性粒细胞脱颗粒反应不同。
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成纤维细胞生长因子受体1配体精细结合位点的确定
目的确定人成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）的配体精细结合位点。方法合成肽文库筛选，定向点突变，原核细胞重组蛋白质表达及受体-配体结合实验。结果采用125I标记的酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)，自合成肽文库中筛选到一个五肽序列（WGPGM），其序列及立体结构和FGFR1细胞外段的一个基序（WTSPEKM）相似。为了证明FGFR1的WTSPEKM基序是结合FGF的重要结构，采用定向突变技术将WTSPEKM基序中的P（CCA）突变成A（GCA），并在原核细胞中表达了野生型和突变型FGFR1细胞外段重组蛋白质，受体-配体结合实验显示突变的FGFR1细胞外段结合aFGF的能力明显降低。结论 FGFR1的 WTSPEKM基序是配体结合的一个重要部位。
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人造血液基质聚合牛血红蛋白的抗原性研究
目的通过动物实验，推导人造血液基质聚合牛血红蛋白(poly-BHb)输入人体后可能引起的免疫反应。方法制备兔抗人Hb、兔Hb和poly-BHb的抗体，研究对兔而言这3种Hb的抗原性的强弱和它们之间抗原性的交叉程度。将大量poly-BHb溶液输入家兔体内，观察家兔的免疫反应。通过计算机模拟，比较天然人、兔、牛Hb之间氨基酸序列、空间结构和抗原位点的差异。结果天然牛Hb与人Hb分子的构象几乎一致，poly-BHb与人Hb有高度相似的抗原性。poly-BHb反复大量输入家兔体内未能测出抗体。结论从结果初步推论，poly-BHb溶液有限次数输入人体，引起免疫反应的可能性较小，但尚需要更多的试验及人体安全性试验加以证实。
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癌基因p21ras、raf和细胞外信号调节蛋白激酶参与刺激Jurkat细胞产生TNF-β和IL-2
目的明确p21ras-细胞外信号调节蛋白激酶(the extracellular signal-regulated protein kinase, ERK)系列是否参与调节Jurkat细胞产生TNF-β和IL-2。方法用负向突变基因p21ras(ras17N或ras15A)，raf-1(raf1～130)及ERK1(erk1K71R)或活性结构p21ras(H-ras61L)和raf(raf22W)转染细胞，以PMA/PHA刺激细胞，ELISA法检测细胞因子。结果 PMA/PHA刺激细胞产生较正常对照细胞约2倍的TNF-β和IL-2(P<0.001)。负向突变基因去除了PMA/PHA增加细胞因子分泌的作用。活性突变基因本身不影响TNF-β和IL-2产生，但明显增强细胞对PMA/PHA的应答(P<0.05)。结论 p21ras-ERK系列在调节Jurkat细胞在PMA/PHA刺激下产生TNF-β和IL-2中起重要的作用。
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沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究
采用P1基因PCR扩增产物酶切图谱分析方法对沈阳地区分离的肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)菌株进行分型，以便了解本地区MP的流行情况，为临床诊断提供依据。 MP临床分离株的分离和鉴定：取临床诊断为肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子标本放3ml支原体肉汤培养基置37℃培养7～10?d，分别转种于支原体肉汤培养基和支原体固体培养基，用血球吸附实验和MP生长抑制试验鉴定分离株。结果：6株临床分离株血吸附实验结果阳性。用MP感染阳性患者的血清做MP生长抑制实验，6株分离株亦均呈现阳性结果。
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肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞触发宿主细胞酪氨酸蛋白磷酸化
目的探讨细胞内信号传导与肺炎链球菌侵袭、致病的关系，在体外研究Ⅲ型肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞(A549)是否能触发细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)信号传导途径，以及触发该信号传导可能的细菌亚组分。方法用FITC荧光标记肺炎链球菌，在体外观察肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞的粘附动力学特征；用免疫组织化学和ELISA方法观察完整细菌触发的细胞内酪氨酸蛋白磷酸化，用各种因素预处理肺炎链球菌后，观察触发细胞内酪氨酸蛋白磷酸化可能的细菌亚组分。结果证实了上述粘附过程存在剂量依赖和时间依赖关系，而且是特异的过程；细菌粘附使细胞内酪氨酸蛋白磷酸化，且磷酸化蛋白的产生与粘附具有时间和剂量依赖性。进一步实验证实：细胞内蛋白酪氨酸磷酸化由细菌表面蛋白质介导。结论肺炎链球菌粘附肺Ⅱ型上皮细胞能触发细胞内信号传导，且细菌表面蛋白质在触发胞内酪氨酸蛋白磷酸化信号传导中起着重要作用。
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幽门螺杆菌ureB基因的克隆及序列分析
目的对幽门螺杆菌（Hp）ureB核苷酸序列及推定氨基酸序列进行同源性比较分析，确定Hp菌株的ureB基因差异性，为疫苗的研究和诊断用品的评价提供依据。方法自行设计引物，PCR扩增来自国内不同病人的4株Hp菌株的ureB基因，与pGEM-T载体克隆连接、测序；进一步同GenBank上发表的其他4株国外Hp菌株ureB的全基因序列进行比较分析。结果 8株Hp菌株的ureB基因序列出现了3种长度，CAPM F3和CPM630分别为1?269bp和1?680bp，其他为1?710bp。6株1?710bp的ureB基因序列的分析表明，国外3株Hp的ureB同源性较高，三者氨基酸的同源性达到100％。而国内3株Hp的ureB变异较大，推定氨基酸同源性为98.7％～98.9％。结论 UreB作为保护性抗原时存在免疫保护覆盖率问题，研究疫苗和诊断用品时要注意选择使用在人群中流行占优势的Hp菌株的高度保守的UreB抗原肽，使其具有更高的覆盖率。
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黑曲霉菌pyrG基因的克隆与黑曲霉菌同源转化系统的建立
黑曲霉菌(Aspergillus niger)是一种不产生黄曲霉毒素的丝状真菌，它有生长迅速、易于培养、可大量产生分泌性蛋白质的特点，因此它除了在生产各种真菌代谢物及酶类的发酵工业上被广泛应用外，在基因工程中作为宿主菌生产蛋白质产物方面也受到很大重视和应用。为了将待表达的基因导入宿主菌，首先需要建立一个稳定有效的基因转化系统。以乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶(pyrG)基因作为标志基因并以该基因的缺陷株真菌作为受体菌的转化系统已被证明是一种十分行之有效的基因转化系统。乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶是尿嘧啶核苷酸合成中一种关键性酶，缺乏该酶的pyrG缺陷株不能在不含尿嘧啶核苷的培养基上生长。通过基因转化，向其导入含pyrG基因的质粒，可使其获得在不含尿嘧啶核苷培养基上生长的能力。如果将要导入的基因连接在该质粒上，此时pyrG可作为基因是否导入的标志。我们首次从黑曲霉菌ATCC 12049野生型菌株的基因文库中克隆获得全长pyrG基因，并在此基础上构建了表达性质粒载体，建立了pyrG基因为标志基因，以同型黑曲霉菌pyrG基因缺陷株为受体菌的同源基因转化系统。
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葡萄球菌肠毒素B突变体基因表达和功能的初步研究
目的应用PCR致变及基因克隆技术,获得抗原性保留，但超抗原毒性明显下降的葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体,用作新型淋巴细胞激活分子和超抗原疫苗的研究。方法用PCR和PCR致变技术,从SEB标准株扩增SEB(SEB-N)和SEB突变基因(SEB-M),分别与原核表达质粒pTrc99A重组,转化大肠杆菌JM109,经筛选获得重组质粒pTrcNb和pTrcMb,用双脱氧链终止法作序列分析。表达的SEB-N和SEB-M蛋白,经双向免疫扩散试验作抗原性鉴定后,刺激小鼠脾细胞并由ELISA法检测培养上清中IL-2的水平。结果 SEB-N 150位苏氨酸(密码子ACT)非定向突变为丙氨酸(密码子GCT),SEB-M 23位天冬酰胺(密码子AAT)定向突变为丝氨酸(密码子AGT)。两种突变基因表达的蛋白均与抗SEB形成明显沉淀线,与天然SEB刺激小鼠脾细胞产生IL-2水平相比,SEB-N和SEB-M突变体蛋白分别下降12.5倍和40倍。结论获得了能表达SEB-N和SEB-M突变体蛋白的2株工程菌。表达的突变体蛋白具有良好的免疫反应性,但刺激小鼠脾细胞产生白细胞介素2的超抗原生物学活性明显下降。
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超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究
按质粒所携带编码基因同源性的不同，将超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrum β-lactamases,ESBLs)分为4类，即TEM型、SHV型、TEM/SHV混合型和非TEM/非SHV型(包括PER、TOHO、CTX-M、OXA型等)。本文报告绍兴地区产ESBLs细菌基因分型的初步结果。 临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ESBLs的细菌42株(其中大肠埃希菌26株，肺炎克雷伯菌16株)。用PCR进行酶基因分型。PCR扩增引物，根据TEM-1和SHV-1编码基因序列设计，TEM引物序列分别为：5′-TCGGGGAAATGTGCG-3′和5′-TGCTTAATCAGTGAGGCACC-3′；SHV引物为5′-TCGGCCTTCACTCAAGGATG-3′和5′-TCCCGCAGATAAATCACCA-3′。待测菌株用碱裂解法提取质粒DNA。PCR反应体积为100μl，含1×PCR反应缓冲液，3.5mmol/L Mg2+,200μmol/L dNTPs,500μmol/L引物，1.6U Taq酶(Promega)，10～100ng质粒DNA模板。
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铜绿假单胞菌生物被膜引起小白鼠病理变化的动物实验
日本学者小林在1990年提出生物被膜病，认为能形成生物被膜的细菌在自然界广泛存在，对抗生素抵抗性很强。所以它在感染性疾病的治疗中已受到临床关注。细菌生物被膜至今仍难以清除，成为临床医学亟待解决的课题。本文对悬浮铜绿假单胞菌和生物被膜铜绿假单胞菌引起小白鼠的病理变化进行了观察。 6周龄，体重20～30克，雄性清洁级小白鼠分别用生物被膜状态的铜绿假单胞菌和悬浮铜绿假单胞菌在气管内接种，然后在接种后的不同时间观察相应的组织病理学改变。
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幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究
随着对幽门螺杆菌(H.pylori)疫苗、致病机理、药物筛选等方面研究的深入，人们越来越多地需用动物模型。我们用含有cagA和vagA基因阳性的Hp株sydney strain1(SS1)感染BALB/c小鼠，作Hp慢性感染小鼠的动物模型，试验用空肠弯曲菌琼脂基础培养基培养，微需氧条件下37℃培养3～5?d。SPF级BALB/c小鼠40只，雌性，7～8周龄，重17～20克，分实验组、对照组。实验组动物模型灌喂H.pylori菌液，0.4ml/只(每ml约含Hp 109条)，连续5次，10?d完成，对照组动物则不作相应处理。
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幽门螺杆菌毒力基因cagA、vacA与胃十二指肠疾病的关系
国际上已有很多国家对本国幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)分离株的vacA基因进行了研究和分析。Atherton等曾提出Hp vacA基因镶嵌型模型，将信号序列分为三型，中间序列分为两型〔1〕，但来自欧洲和日本的报告显示不同地区Hp分离株具有较高多态性，具有地区、人群相关性特点。然而，目前国内尚未见这方面的研究报告。为了解我国Hp临床分离株vacA基因型特点以及不同vacA基因同胃、十二指肠疾病的关系以及cagA基因同Hp毒力的关系，本实验进行了以下研究。
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双歧杆菌表面分子诱导大肠癌细胞分化的研究
目的研究双歧杆菌表面分子完整肽聚糖（whole peptidoglycan, WPG）、脂磷壁酸（lipoteichoic acid, LTA）和多糖（polysaccharides, PS）的直接抗肿瘤作用。方法采用MTT、形态学、流式细胞仪分析、荧光偏振以及特征性分化酶检测等方法观察了它们对培养的LoVo细胞生长的抑制作用及可能的机理。结果 LTA抑制LoVo细胞的生长，将细胞阻滞于G0/G1期。50μg/ml LTA使细胞核与细胞浆向成熟细胞分化，并且降低细胞膜的流动性。LoVo细胞特征性分化酶——肠型碱性磷酸酶的合成亦显著增加。LTA还诱导细胞内钙离子浓度增加，增加的钙离子来自于外钙内流而非内贮钙释放。结论 LTA作用于LoVo细胞后，直接抑制了该细胞的生长，并诱导LoVo细胞向成熟细胞分化，钙离子内流引起的信号传导在此过程中可能发挥了重要的作用。
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人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达及初步纯化
现有的IgM血清学试验对HCMV的诊断存在敏感性和特异性较差问题，其主要原因是迄今采用的抗原仍为从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质或粗提的病毒全抗原成分。近几年来人们致力于探讨能替代HCMV全病毒抗原的基因工程抗原，以完善IgM特异性血清学试验。本文通过构建HCMV DNA结合蛋白的一段基因的原核表达克隆，从而对表达产物的抗原性进行初步分析。 通过Oligosis软件设计UL57基因(aa540～604)两端引物，并在引物的5′端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ内切酶识别序列及保护位点。引物序列如下：P1：CTGGGATCCCCCAAAGGTGACGAC P2：GTGAATTCTCAGCGATTGAGGA。从感染的人胚肺成纤维细胞中提取和纯化HCMVAD169基因组，以纯化的核酸为模板，加入PCR反应体系进行UL57基因的扩增。
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戊型肝炎病毒Ⅳ型全基因序列的分析
目的分析戊型肝炎病毒（HEV）Ⅳ型的全基因序列以比较与其他基因型的差异。方法设计PCR引物对全基因进行分片段扩增，并对两个末端采用末端快速扩增方法(RACE)进行扩增，对扩增产物进行克隆及测序。结果 HEV-T1全序与Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的核苷酸同源性分别为（74.8～75.5）%、74.5%和（75.3～76.3）%。ORF1与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型氨基酸同源性分别为（85.0～86.7）%、85.0%和（88.5～88.7）%；ORF2与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为（91.6～92.4）%、90.1%和（91.9～93.0）%；ORF3与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为（75.9～77.8）%、75.0%和（79.6～83.3）%。结论这一研究为今后发展戊型肝炎诊断试剂及戊型肝炎疫苗提供了新的、重要的分子生物学基础。
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不同基因型HCV膜区（E2）基因克隆及亲、疏水性分析
目的研究丙型肝炎病毒（HCV）不同基因型膜区序列变异及其变异规律。方法克隆不同基因型HCV的膜区基因，序列测定，核苷酸和氨基酸序列比较和分析。结果不同基因型膜区基因相似性不同，从同一血清样本获得的不同克隆间，其同源性核苷酸大于99.2%，氨基酸大于99.9%。相同亚型核苷酸和氨基酸同源性大于80%。同型基因核苷酸和氨基酸同源性分别为（63.9～75.0）%和(64.9～72.8)%。异型基因同源性核苷酸为（59.4～67.0）%，氨基酸为（56.5～66.3）%。氨基酸序列变化在某些部位有一定保守性。不同基因HCV高变区（HVR）的亲水性和疏水性变化小于其下游3′端区域。结论 HCV基因变化可能有一定规律性。
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新型戊型肝炎病毒ORF2部分基因的构建表达及表达产物的抗原性分析
目的对新型戊型肝炎病毒ORF2的3′端部分基因进行重组质粒构建及融合表达，并对表达蛋白进行抗原性分析。方法用PCR方法从含有HEV ORF2基因的pGEM-T载体上扩增表达片段，双酶切后与原核表达载体pThioHisA构建重组质粒pThioHisA-T11。诱导表达后进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。并用纯化的融合蛋白建立EIA检测方法，对40份抗-HEV IgG国家参比血清进行检测。结果含有pThioHisA-T11重组质粒的菌株表达相对分子质量为40×103的可溶性融合蛋白T11，免疫印迹证明融合蛋白T11能与抗HEV IgG发生特异反应。EIA检测结果显示，阳性参比血清符合率为80%(8/10)，阴性参比血清符合率为87%(26/30)，总符合率为85%。结论表达了新型HEV ORF2羧基端278氨基酸并证明有抗原活性，为今后提高HEV检出率奠定了基础。
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我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建
目的构建我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA，为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性，阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法根据登革2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列，利用DNASTAR软件设计覆盖登革2型病毒43株基因组的6对重叠引物。从感染登革2型病毒43株的乳鼠脑中提取病毒基因组RNA，采用RT-PCR分别扩增6条基因片段，并将其分别与pGEM-T载体进行连接。重组质粒用PCR进行快速鉴定，并在377A型自动测序仪进行序列分析。然后利用单一酶切位点，分别自阳性重组子上切下各基因片段，在体外分别进行5′半分子和3′半分子的连接，后将5′和3′半分子连接成基因组全长的cDNA。扩增各接头两侧长约457～691bp的基因片段，连接至T载体后测序，从而对全长cDNA进行鉴定。结果共扩增出6条约1.5～2.5kb的基因片段，并在体外进行连接，获得了全长cDNA。结论通过测序证实成功地构建了我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明我国登革病毒株的毒力及致病机理奠定基础。
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丙型肝炎病毒武威地方株核心区全基因片段的克隆与分析
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus)是一种高度异质性的单股正链RNA病毒，不同地区所克隆的HCV株，无论是核苷酸序列，还是氨基酸序列都有很大不同。对各地HCV流行株核苷酸序列的克隆，可为开展HCV的分子流行病学研究、HCV的基础研究工作及其疫苗的研制提供资料。本文克隆了武威地方株HCV核心区基因全片段，对其进行了序列测定，并与河北株、美国株进行了比较。现将结果简报如下。用兰州生物制品研究所诊断用品二室提供的抗-HCV ELISA诊断试剂盒，从武威地区献血员供血中筛选出抗-HCV阳性血清，再从此阳性血清中用HCV PCR试剂盒(购自华美生物工程公司)筛选出HCV RNA阳性血清，按酚/氯仿法用Trizol(Gibco-BRL)试剂提取病毒RNA。用Random Primer，参照HCV-Hebei、HCV-Tai、HCV91序列，选取保守序列，用oligo 4.0设计待扩增区域引物。
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从MT2、HeLa细胞DNA及人和黑猩猩PBMC DNA中扩增GBV-C核苷酸
目的检测MT2和HeLa细胞DNA、6例人和1例黑猩猩PBMC DNA中是否存在与GBV-C同源的核苷酸序列。方法直接以上述DNA为模板、采用GBV-C 5′-NCR和NS3区引物的直接套式PCR（dPCR）、核苷酸序列分析、引物介导原位扩增（PRINS）NDA序列特异荧光标记技术。结果从MT2和HeLa细胞DNA、4例人PBMC DNA标本中获得5′-NCR引物扩增片段，从MT2和HeLa细胞DNA、5例人和黑猩猩PBMC DNA标本中获得NS3区引物扩增片段。这些扩增产物的核苷酸序列与GBV-C同源性分别为74.29%～77.14%和73.80%～79.15%。PRINS检测结果显示，dPCR阳性的PBMC及其染色体上有荧光着色。结论 MT2和HeLa细胞DNA、人和黑猩猩PBMC DNA中存在与GBV-C 5′-NCR和/或NS3区同源性较高的核苷酸序列，这些序列可能位于dPCR阳性的PBMC染色体上。
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用猴的类DPB基因诱导的PCR指纹图对HLA-DP基因快速相容性测定
目的将PCR指纹图用于个体间HLA-DP的基因水平交叉配型，确定供-受体间DPB基因的相容性。方法引入猴的类DPB等位基因的扩增产物作通用性异源双链生成物（UHG），使原不能产生PCR指纹图的DPB基因扩增产物在非变性PAGE中显示特定的“卫星条带”，从而可用于供-受体间HLA-DP基因的相容性测定。结果 11株HLA纯合的B淋巴细胞系和随机个体进行PCR-DPB指纹图及交叉配型分析，能敏感地反映个体间DP基因的差异，特别是在纯合子DPB*0201和杂合子DPB*0402/0501中初步发现了可能存在着未能被PCR-RFLP区分的新的亚型或新的等位基因，但是尚不能区分DPB*0201和DPB*0402两个等位基因，有待今后进一步探索。结论初步表明该技术可有效判别供-受体DPB基因匹配性，并有简单、快速等优点。
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志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株的毒力因子检测
目的研究志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157血清群菌株可能携带的毒力因子，以确定其致病群类型。方法对8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157血清群菌株及分离自美国和我国江苏的EHEC O157菌株，应用PCR技术检测stx、hly、EPEC和EHEC共有的eaeA、EHEC特异的eaeA，ELISA检测ETEC的耐热和不耐热肠毒素，HEP-2细胞粘附试验测定细菌与上皮细胞的粘附能力，并进行菌株质粒图谱分析。结果 8株志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株均未检出stx、hly、EHEC特异的eaeA以及ETEC的耐热和不耐热肠毒素，仅其中2株菌株携有EPEC和EHEC共有的eaeA，另3株菌株对HEP-2细胞有集聚性粘附能力。结论目前我国检获的大肠埃希菌O157菌株其致病类型表现为多样性，部分菌株尚不能明确其毒力因子。EHEC O157的鉴定必须重视毒力因子的检测。
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血清HIV抗体阴性静脉药瘾者肝组织HIV DNA测定
为评估HIV抗体阴性HIV感染高危人群潜在的HIV传播性，本研究对来自德国的38例HIV抗体阴性的静脉药瘾者肝组织样品进行常规DNA抽提，用HIV不同结构区(gag,pol,env)6对引物同时扩增HIV DNA。结果发现38例肝组织中有30例在HIV gag区(M667/sk03c,M661/sk01c)发生特异性扩增。10例对HIV env区(env526/C02,envC01/571K)发生特异性扩增。进一步分析发现38例中有3例同时在gag、pol、env 3个区域产生特异性扩增，12例分别对HIVgag和pol区或gag、env区产生特异性扩增，17例产生单一gag或pol或env特异性扩增，6例在gag、pol、env区均阴性。对env阳性的部分标本经荧光标记自动测序仪测序并与国际HIV标准株比较，其感染HIV株与欧美B亚型同源性为86%。此研究提示，抗HIV阴性的静脉药瘾者为潜在HIV感染的高危人群，加强对这类人群“窗口期”的监测，对预防HIV的传播有重要意义。
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采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术进行HBV DNA基因分型的研究
目的采用PCR微板核酸杂交-ELISA技术对HBV DNA进行基因分型研究。方法采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术，首先将HBV DNA进行PCR扩增，并将扩增产物加入预先包被HBV通用探针的微孔板，再加入HBV各基因型显色探针，同时进行微板核酸夹心杂交-ELISA显色，对152例临床诊断为不同程度乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型。结果 152例不同临床表现的肝炎患者血清中的HBV DNA的基因型大多集中在B、C和D这3种基因型，其所占比例分别为：B型28.29%（43/152）、C型37.50%（57/152）、D型18.42%（28/152）；A型、E型、F型所占比例很少，各只有3.29%（5/152）。还存在一定比例的混合基因型，B、C、D三型不同组合的混合型共占10.53%(16/152)。结论 PCR微板核酸杂交-ELISA方法可以准确、快速、简便进行HBV基因分型，在探讨HBV的流行病学及观察各基因型毒力强弱及致病性大小方面有重要意义。
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116例脐血PCR-SSP和PCR-SSOP的HLA-DR分型结果分析
脐血中富含造血干细胞。造血干细胞移植是治疗多种危重病患者的有效手段。移植前的HLA分型是决定其移植成功的重要环节之一。器官移植供受者间HLA-DR不相容可引起急性移植物抗宿主反应(GVHD)。因此，脐血移植中需有精确的HLA-DR基因分型。 本研究从1999年1月至7月对脐血库的116例标本分别用PCR-SSP和PCR-SSOP法检测，分析结果如下。材料和方法标本来源：116例标本来自本院脐血库中的脐血标本。 标本的DNA提取：脐血标本为ACD-B抗凝血，取200μl作盐酸胍法抽提DNA〔1〕。 PCR-SSP方法：采用美国莱姆德公司的Micro SSPTM试剂盒。操作方法按试剂盒说明书进行。PCR产物常规琼脂糖电泳后，EB染色，自动成像仪照相。利用人工和电脑软件同时判读实验结果。
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NK细胞用于肿瘤免疫治疗的研究进展
NK细胞是具有多种免疫学功能的淋巴样细胞。NK细胞的描述可以追溯到25年前，但有关NK细胞识别转化细胞和病毒感染细胞的机制至今仍令人困惑。缺乏真正意义的特有标志也是NK细胞研究的一大难题，目前多采用“阳性筛选”(NK细胞具备相对特异的标志)和“阴性排除”(NK细胞绝对不具备的标志)相结合的办法来给NK细胞定性。人类NK细胞为CD56和CD16阳性，CD3、CD4和CD19为阴性。少部分NK细胞可以为CD8阳性。小鼠NK细胞为NK1.1和ASGM1阳性，CD3、CD4和CD8为阴性。NK细胞杀伤肿瘤细胞不受MHC限制，也不需预先与抗原接触或显示任何记忆反应。NK细胞对肿瘤的杀伤优势表现为直接溶解和分泌细胞因子两个方面，其杀伤肿瘤既可通过穿孔素又可通过Fas配基。NK细胞可以产生TNF-α、IFN-γ和IL-1，这些细胞因子在NK细胞抗癌反应中有十分重要地位。NK细胞具有对异体骨髓快速排异的能力，但并不介导实体组织的移植排异〔1，2〕，NK细胞对异体骨髓的排异功能可以追溯到30年前，但NK细胞对造血干/祖细胞杀伤的机制仍不清楚，可以肯定地说并不仅限于NK细胞的杀伤功能〔1〕。
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人CD40-Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达与纯化研究
目的建立稳定表达CD40-Ig融合蛋白的工程细胞株，获得大量融合蛋白以研究靶向阻断CD40∶CD40L途径防治移植物抗宿主病（GVHD）策略的应用潜力。方法自真核瞬时表达载体pIG/40Ig中切下CD40-Fc融合基因，插入pcDNA3.1载体中构建稳定表达载体。利用脂质体Lipofectamine将该载体转染CHO细胞，G418筛选抗性克隆；夹心ELISA法检测上清中CD40-Ig融合蛋白的表达；Western blot法鉴定其免疫学活性。利用有限稀释法对筛选出的混合克隆单克隆化。滚瓶法无血清大批培养工程细胞，Protein A亲和层析法纯化，SDS-PAGE后薄层扫描分析纯度。利用流式细胞术检测该蛋白与Jurkat细胞表面CD40L的结合功能。结果 CD40-Fc融合基因插入pcDNA3.1载体后构建成功稳定表达载体p3.1/40Ig，转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达CD40-Ig融合蛋白的基因工程细胞株，命名为B2。Protein A亲和层析纯化后融合蛋白纯度达95 %以上，该融合蛋白可特异结合Jurkat细胞表面的CD40L。结论 CD40-Ig融合蛋白可模仿天然分子与其配基结合，为研究靶向CD40∶CD40L途径的治疗制剂在防治GVHD中的潜在应用提供了有用的工具。
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供体脾细胞输注诱导小鼠移植耐受及其机理的研究
目的以持续供体脾细胞输注的方法建立异基因嵌合体动物模型，并探讨移植耐受形成的机制。方法 BALB/c（H-2d）小鼠经尾静脉注入C57BL/6（H-2b，B6）脾细胞5×107，2?d后，给BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺（Cy）150mg/kg体重，注射Cy后1?d，开始给BALB/c小鼠静脉注射B6源小鼠的脾细胞1次/d，107/次，共持续5?d。之后，通过皮肤移植、混合淋巴细胞反应(MLR)确定移植耐受的状态，并通过过继转移实验、嵌合体检查及耐受和排斥小鼠脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况，进一步探讨耐受形成的机制。结果耐受小鼠获得供体特异性移植耐受；耐受可以被过继转移；耐受小鼠体内嵌合程度与耐受程度有一定相关性；IL-2、IFN-γ等TH1型细胞因子在耐受小鼠脾细胞中较对照小鼠明显降低，IL-10在耐受小鼠中的表达明显升高，但IL-4在耐受小鼠中的表达与排斥小鼠差异无显著性。结论供体脾细胞＋Cy＋持续供体脾细胞输注可以诱导供体特异性耐受；多种耐受机理，包括嵌合体形成、抑制细胞以及TH1/TH2型细胞的偏移都对耐受形成起作用。
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小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响
目的在体外用抗CD3单抗、抗CD28单抗和白细胞介素2(IL-2)扩增肿瘤特异性CTL，为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。(1) 抗CD3单抗刺激48?h后，加入抗CD3单抗和20U/ml rIL-2(抗-CD3+IL-2组); (2) 抗CD3单抗和抗CD28单抗同时刺激48?h后，加入抗CD3单抗、抗CD28单抗和20U/ml rIL-2(抗-CD3+抗-CD28+IL-2组)。分别检测2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果抗-CD3+IL-2组细胞的3H-TdR掺入量在第6天、12天、20天分别为22?126、5?426、2?072，抗-CD3+抗-CD28+IL-2组细胞的3H-TdR掺入量在第6天、12天、20天分别为32?168、12?922、3?265，后者明显高于前者。在培养12?d时，抗-CD3+IL-2组细胞对FBL-3的大杀伤活性为66.4％，抗-CD3+抗-CD28+IL-2组细胞对FBL-3的大杀伤活性为77.8％。细胞表型FACS分析结果表明，抗-CD3+抗-CD28+IL-2组培养12?d后的细胞90％以上为Thy1.2+细胞，且CD25+细胞在抗-CD3+抗-CD28+IL-2组、抗-CD3+IL-2组分别为23.00%、8.15%。结论抗CD3单抗、抗CD28单抗和低剂量IL-2同时非特异性刺激，可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。
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结核病小鼠病理学与TH1/TH2细胞动力学及iNOS表达关系的研究
目的从分子病理学角度探讨结核病小鼠病理学与免疫学的相关性。方法将BALB/c小鼠随机分为两组：结核病模型组(A)和正常对照组(N)。经尾静脉注射H37RV建立结核病小鼠模型。采用免疫组化染色和常规HE染色，探讨IFN-γ、IL-4、iNOS表达与肺脏组织损伤的类型和程度的关系。免疫组化结果采用图象分析计算阳性细胞面密度。结果结核病小鼠病程中可观察到两个阶段：感染2周内为急性炎症期，以肺泡-毛细血管间质内和血管周围炎性渗出为特征，可观察到明显的TH1细胞占优势，免疫组织化学染色结果显示，在炎性渗出区内IFN-γ阳性细胞较IL-4阳性细胞明显增多；感染第4周到实验结束为慢性进展期，以肺实质内广泛肺炎伴灶性干酪坏死为特征，免疫反应表现为TH0平衡，在肺损伤组织中IFN-γ和IL-4阳性细胞基本相当。iNOS表达在急性期增多慢性期减少。结论结核病感染过程中TH1／TH2细胞动力学和iNOS表达的变化与组织损伤的类型和程度关系密切。
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儿童呼吸道合胞病毒感染的研究
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴儿和体弱成人下呼吸道感染的主要病原之一，每年在世界范围内流行。RSV A、B亚型和基因型划分的流行病学意义尚未明确。有关RSV A、B型在我国流行情况尚未见报道，本文对10年来患RSV感染住院儿童RSV各亚型、基因型进行分析。材料与方法对象与鼻咽分泌物(NPS)标本：NPS标本取材于北京儿童医院①1997年11月～1998年5月145例RSV感染住院患儿，年龄从0.4至146.8月龄，平均8.6月龄，男101例，女44例；②1999年1月～3月16例RSV感染住院患儿，年龄从0.5至36.0月龄，平均8.3月龄，男10例，女6例。③1990年11月～1991年5月10名RSV感染住院患儿，年龄0.1～123.2月龄，平均7.2月龄，男6例，女4例。由于门诊呼吸道感染患儿NPS标本取材和病情观察不便，故对此部分患儿没有进行检测。
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抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞免疫学特性影响的研究
目的研究特异性抗HPV16E6核酶的转染对宫颈癌细胞免疫学特性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。流式细胞仪分别检测3种细胞HLA-1、HLA-2、B7-1和B7-2基因的表达，分析CaSKi细胞转染核酶后免疫学特性的变化。诱导制备NK、LAK、CD3AK和肿瘤细胞共激活杀伤细胞，检测各种免疫细胞对CaSKi-R、CaSKi-P、CaSKi细胞的杀伤效应。结果 CaSKi和CaSKi-P细胞中HLA-2、B7-1、B7-2表达都很低，两者差异无显著性。CaSKi-R中HLA-2、B7-1、B7-2表达率均明显升高。3种细胞中HLA-1表达率都很高。NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi-R细胞杀伤率显著高于CaSKi细胞，CaSKi、CaSKi-R分别与rIL-2共激活杀伤细胞（称CASKI和CASKI-R）的杀伤活性无明显差别，对CaSKi-R的杀伤活性高于CaSKi细胞。而各种免疫细胞对CaSKi-P细胞的杀伤率与CaSKi细胞差异无显著性。结论抗HPV16E6-ribozyme的导入能使宫颈癌CaSKi细胞易于被机体免疫系统识别杀伤，难于免疫逃避，但不能增强其免疫原性。
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脉冲场凝胶电泳应用于医院感染阴沟肠杆菌的分子流行病学
目的建立一种快速、可靠和准确的分子分型方法来研究医院感染阴沟肠杆菌分子流行病学。方法利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）结合低频限制性内切酶技术对阴沟肠杆菌染色体DNA进行分析。细菌包埋在低熔点琼脂糖中，经染色体DNA的原位纯化后，用低频限制性内切酶XbaⅠ进行染色体DNA的原位消化。使用PFGE对限制性酶切片段分离。通过对染色体DNA限制性内切酶谱比较，确定菌株亲缘关系。结果 28株医院感染阴沟肠杆菌呈17种克隆的多克隆构成。1998年1月至6月未曾发生阴沟肠杆菌医院感染的大规模暴发流行，但在3月5日到5月15日间有2次小型的克隆传播，即A、B克隆，分别都涉及5株菌。结论 PFGE具有分辨力高、重复性好的特点，是微生物实验室调查阴沟肠杆菌分子流行病学较好的方法。
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幽门螺杆菌致T细胞凋亡：Fas/FasL介导的T细胞无反应性
目的评价幽门螺杆菌（Hp）致T细胞死亡的方式和机制，探讨这种作用与Hp感染致宿主产生免疫耐受的关系。方法应用Annexin V染色流式细胞术检测Hp致T细胞死亡的方式；应用细胞毒实验（JAM技术）和Fas IgG抗体、caspase 8抑制剂阻断实验评价T细胞凋亡与Fas/FasL作用的关系，并通过流式细胞术直接检测Hp对T细胞FasL表达的上调作用及其与T细胞产生凋亡的时效关系。结果 Annexin V 染色和JAM技术证实Hp致T细胞死亡是以凋亡方式进行的。这种细胞凋亡能被抗Fas抗体和caspase 8抑制剂阻断，因而是Fas依赖的，TH2细胞较TH1样T细胞对这种作用更敏感。由于Hp能直接上调T细胞的FasL表达且其发生时间与凋亡出现时间吻合，证实Hp是通过调节T细胞之间Fas/FasL相互作用而致其凋亡的。结论 Hp能通过调节Fas/FasL作用而负调节T细胞的生长，这可能是Hp感染致宿主发生T细胞耐受的机制之一。
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慢性乙型肝炎患者TH1/TH2细胞因子应答状况
IL-10和IFN-γ分属于TH1、TH2类细胞因子，它们在乙型肝炎病毒(HBV)持续感染的发生机理中起重要作用。为了探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV抗原特异性TH1/TH2类细胞因子应答情况，我们选择43名此前未行免疫治疗或抗病毒治疗并经肝脏穿刺活检证实的CHB患者，并以年龄近似的10名体健者作为正常对照。常规分离外周血单核细胞(PBMC)，以106/ml的密度接种于24孔板，加入终浓度为1μg/ml的rHBcAg刺激培养72?h，用ELISA法检测培养上清中IL-10(pg/ml)和IFN-γ(pg/ml)的含量。结果表明，CHB病人PBMC培养上清中IFN-γ水平与正常对照组比较无明显差异(501.02±131.73 vs 534.46±121.33)，IL-10水平则增高，与正常对照组相比差异非常显著(398.74±79.55 vs 279.45±67.93,P<0.001)。将CHB病人按血清病毒定量分为A(HBV DNA定量<20pg/ml)、B(HBV DNA定量为20～200pg/ml)、C(HBV DNA定量>200pg/ml) 3组，各组IFN-γ平均值为618.13±97.01，469.82±80.11，405.38±98.98，B、C组与A组比较P<0.01;IL-10水平依次为，330.51±59.73，400.44±69.52，466.11±71.49，可见在高病毒量组IL-10水平明显较高，A组与C组比较，P<0.001;B组与C组比较，P<0.01。
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经血传播肝炎患者卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒感染的血清学研究
卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)，为近来发现的一种新的疱疹病毒，又称人类疱疹病毒8型(HHV-8)。国外研究发现该病毒主要经性途径传播，作者近报道了我国静脉吸毒者中有较高的KSHV感染，KSHV可经静脉吸毒传播。为进一步摸清我国KSHV的感染情况和感染途径，我们用抗原性、特异性强的KSHV ORF65基因重组蛋白作抗原，用ELISA法对1999年3月～12月间浙江省部分经血传播肝炎患者144例(乙型肝炎病人52例，丙型肝炎病人32例，非甲-庚肝炎病人60例)，正常献血员241例进行了KSHV感染的血清学研究，并初步分析KSHV感染与HBV、HCV复制的关系。
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链替换技术提高抗角蛋白人Fab抗体的亲和力
目的通过链替换技术对一株人源性抗角蛋白Fab单抗进行体外亲和力成熟。方法分离、扩增多样性人免疫球蛋白轻链基因和IgG/IgM重链Fd段基因，分别构建轻链库和重链库。先以原始克隆的重链与轻链库随机搭配进行轻链替换，对形成的换链库采用解离速率筛选法（off-rate selection）选取亲和力提高的克隆；然后再将获得的轻链基因与重链库基因重组进行重链替换，筛选亲和力进一步提高的克隆并进行亲和力测定、可变区基因序列分析等一系列鉴定。结果替换轻链后所获抗体的亲和力提高到原来的10倍；替换重链后亲和力进一步提高达到7.9×1010/mol/L，是原始克隆的近23倍。结论链替换技术是提高抗体库中所获Fab抗体亲和力的有效手段。
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胃癌相关抗原模拟表位的筛选及鉴定
噬菌体表面呈现技术作为一种揭示蛋白质相互作用的快捷有效工具，已受到广泛重视，并在抗原表位的确定及多肽疫苗的设计中显示出优势〔1,2〕。噬菌体随机肽文库是基于上述技术而构建的。噬菌体其被认为是配体的“万能库”，这些配体不一定和天然配体完全相同，但能模拟天然配体与受体的结合特性。因此，在抗原表位-抗体的识别研究中，可以从肽库中直接筛选出能和抗体结合的表位，这些表位既可以是线性表位，也可以是模拟的构象性表位。
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人单链抗体亲和力成熟研究
目的探索基因工程抗体亲和力体外成熟新技术，获得抗血管内皮生长因子高亲和力的抗体，使之成为肿瘤血管靶向治疗的载体。方法采用错配PCR和单链重叠延伸法，随机突变抗体重链可变区，建立次级噬菌体单链抗体突变库，并从中筛选出高亲和力单链抗体突变株。结果抗体突变株不仅保留了母体抗体的特异性，而且亲和力明显提高。根据基因序列分析，高亲和力突变株中有4个氨基酸发生了改变，分别是Trp38→Cys38，Gln45→Arg45，Lys107→Arg107，Arg109→Leu109。抗体立体结构模拟显示其中3个氨基酸突变位于抗原结合部位。结论实验结果为抗血管内皮生长因子人源单链抗体的应用奠定了基础，同时为抗体结构与功能研究以及抗体亲和力体外成熟提供了参考模型。
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
