5-氟尿嘧啶对肝癌小鼠髓系抑制性细胞表达及功能的影响

目的：研究5-氟尿嘧啶（5-FU ）对原位肝癌小鼠组织中髓系抑制性细胞（ myeloid-derived suppressor cells ，MDSCs）的分布、比例变化及免疫功能的影响作用。方法采用H22细胞株原位移植法建立小鼠原位肝癌模型，造模后第7天将模型小鼠随机分为4组，分别给予0．4 ml PBS，10、30和50 mg/kg剂量的5-FU，连续给药10 d，同时设正常对照组，停药后采用免疫组织化学染色法测定小鼠肝脏中MDSCs的分布，用流式细胞术检测小鼠脾脏中MDSCs的比例，ELISA法检测小鼠血清中高表达精氨酸酶 I（Arginase -I，Arg-I）及IFN-γ的含量，化学比色法检测小鼠血清中一氧化氮合酶（ nitric oxide synthetase ，NOS）的活性，MTT法比较各组小鼠T细胞的增殖功能。结果模型小鼠随着给药剂量的升高，肿瘤体积缩小，肝脏与腹腔粘连程度减弱；模型组小鼠肝脏及脾脏中MDSCs比例均高于正常对照组（P＜0．05），其中PBS组比例高，随着5-FU剂量的升高，MDSCs比例逐渐下调，除肝脏PBS组与10 mg/kg组外，其他组间差异有统计学意义（P＜0．05）；模型组Arg-I的含量及NOS的活性均高于正常对照组（P＜0．05），其中PBS组含量高，随着5-FU剂量的升高，二者逐渐下调，组间差异有统计学意义（P＜0．05）；模型组血清IFN-γ的含量均低于正常对照组（P＜0．05），其中PBS 组含量低，随着5-FU剂量的升高，IFN-γ含量逐渐上调，除PBS组与10 mg/kg组外，其他组间差异有统计学意义（P＜0．05）；T细胞增殖试验，脾细胞培养24 h时各组间增殖指数差异均无统计学意义，48 h时模型组均低于正常组，其中PBS组低，随着5-FU剂量升高，增殖指数逐渐升高，除PBS组与10 mg/kg组外，其他组间差异有统计学意义（P ＜0．05）；肝、脾MDSCs比例与 Arg-I含量及NOS活性呈正相关，与血清IFN-γ含量及48 h T细胞增殖指数呈负相关。结论5-FU在一定程度上减少肝癌小鼠肝脏、脾脏中MDSCs的数量，缓解MDSCs对肝癌小鼠的免疫抑制作用，提高肝癌小鼠的免疫功能，抑制肿瘤的生长，并在该实验剂量范围内具有一定的量效依赖性。

甲型副伤寒沙门菌 h1 a-spaO 融合基因构建及其表达产物免疫保护作用

目的：构建甲型副伤寒沙门菌h1a-spaO融合基因及其原核表达系统，确定重组表达产物rH1a-SpaO免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接引物PCR构建并扩增h1a与spaO基因的融合基因h1a-spaO，T-A克隆后测序。采用常规基因工程方法构建h1a-spaO融合基因原核表达系统，SDS-PAGE检测其rH1a-SpaO表达情况。采用Western blot鉴定rH1a-SpaO抗原性和免疫反应性，微量肥达试验确定rH1a-SpaO抗血清凝集甲型副伤寒沙门菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1a-SpaO对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的保护作用并与等量单一重组表达蛋白H1a（ rH1a）及SpaO （rSpaO）比较。结果所构建的h1a-spaO融合基因与单一h1a或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。 h1a-spaO融合基因原核表达系统能高效表达rH1a-SpaO。 rH1a-SpaO能与rH1a或rSpaO抗血清结合， rH1a-SpaO抗血清也能识别rH1a和rSpaO并经H抗原凝集甲型副伤寒沙门菌。100μg rH1a-SpaO 对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率（93．3％）明显高于等量 rH1a （60．0％）及rSpaO（53．3％）（P＜0．05）。结论重组融合蛋白抗原rH1a-SpaO免疫保护作用较等量单一rH1a或rSpaO更强，可作为甲型副伤寒两价基因工程疫苗或伤寒/副伤寒荚膜多糖-蛋白结合疫苗的有效抗原。

鲍曼不动杆菌多位点序列分型及 blaOXA-51-like基因的基因型分析

目的：对广州地区3家教学医院的鲍曼不动杆菌菌株进行分子流行病学分型及blaOXA-51-like基因的基因型分析，以了解鲍曼不动杆菌菌群结构及流行菌株。方法收集非重复鲍曼不动杆菌52株，多位点序列分型（MLST）进行分子分型，eBURST分析菌株亲缘性，将序列型（STs）归类为克隆复合体（CC）， PCR扩增blaOXA-51-like基因全长并测序确定blaOXA-51-like基因型。结果 MLST将52株鲍曼不动杆菌分为5个已有ST型及7个新ST型，其中STn4包含新发现的gpi位点的等位基因G1，其与gpi 111的差别在于第3个碱基的T→C突变，STn5包含新发现的gltA的等位基因A1，其与gltA 1的差别在于第156位碱基的A→C突变及159位碱基的A→C突变。 ST195及ST208常见，占到了总数的69．2％， eBURST分析显示其属于CC92。52株菌株中只有1株携带OXA-199，其余51株菌株均携带OXA-66。结论鲍曼不动杆菌CC92在广州地区广泛流行，携带OXA-66基因。

Th17和 Treg 细胞及相关细胞因子在手足口病患儿外周血中的变化

目的：研究手足口病患儿感染初期外周血中Th17与调节性T细胞（ Treg细胞）及相关细胞因子的水平变化。方法采用流式细胞术检测75名手足口病患儿（分为重症病例组和普通病例组）和30例正常儿童外周血中（ CD3＋CD8-IL-17＋） Th17及（ CD4＋CD25＋Foxp3＋） Treg细胞的变化，采用ELISA方法检测血清中IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β1的水平。结果手足口病患儿各组与正常对照组相比，Treg细胞百分率、Treg/Th17比率及TGF-β1、IL-10水平均明显降低（ F＝5．580、6．205、0．000、0．014，P均＜0．05），重症病例组中Th17细胞百分率明显升高（F＝3．189，P＜0．05），IL-17有增高趋势，但差异不大，各组IL-23差异也无统计学意义（ P＞0．05）；重症病例组IL-6的含量与普通病例组、正常对照组相比明显升高（F＝7．318，P＜0．05）。结论手足口病患儿感染初期外周血Treg/Th17细胞及相关细胞因子的水平出现变化，通过减少Treg细胞，增加Th17细胞，扩大炎症反应，促进抗病毒作用。

肺癌患者外周血调节性T细胞的变化及其与临床病理因素的关系

目的：探讨肺癌患者外周血CD4＋CD25＋CD127low调节性T细胞（Treg）水平变化的意义及其与临床病理因素的关系。方法采用流式细胞术测定160例肺癌患者组和60例健康对照组外周血中CD4＋、CD8＋、自然杀伤细胞（ NK）以及Treg细胞等不同淋巴细胞亚群的比例，比较两组间的差异，同时分析不同临床病理因素下Treg细胞的差异，选取其中60例患者比较术前和术后一个月Treg细胞的变化。结果肺癌组血浆CD4＋和NK 细胞比例以及CD4＋/CD8＋比值均显著低于健康对照组，而Treg细胞显著高于健康对照组，且在不同的TNM分期中，Ⅲ、Ⅳ期组患者的Treg细胞比例要显著高于Ⅰ、Ⅱ期，差异有统计学意义（ P均＜0．05）；手术后Treg细胞比例显著下降，差异亦有统计学意义（P＜0．01）。结论肺癌患者中Treg细胞抑制了正常的抗肿瘤功能，并与肺癌的分期和进展有关，在肺癌预后判断以及疗效监测中有重要意义。

IFN-γ对人胎盘源间充质干细胞上 PDL2表达及诱导外周血 CD8＋IL-10＋T 细胞亚群分化的调节作用

目的：探讨IFN-γ对人胎盘源间充质干细胞（ human placenta mesenchymal stem cells ， hPMSCs）上程序性死亡配体2（programmed death ligand 2，PDL2）的表达及诱导外周血CD8＋IL-10＋T细胞亚群分化的调节作用。方法应用酶消化法分离hPMSCs；RT-PCR 和 FCM 分析 hPMSCs 上PDL2的表达，以及IFN-γ对PDL2表达的影响；Ficoll密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（ PBMC），并用E花环法纯化T细胞；FCM分别检测PDL2单克隆抗体（ McAb）阻断及IFN-γ刺激条件下，hPMSCs对 PHA 和 CD3/CD28 McAb 活化的 T 细胞中 CD8＋IL-10＋T 细胞亚群变化。结果hPMSCs高表达PDL2，IFN-γ能够上调hPMSCs上PDL2的表达；FCM分析结果显示，hPMSCs可诱导CD8＋IL-10＋T细胞亚群的分化，在PHA和CD3/CD28 McAb活化条件下，外周血T细胞中CD8＋IL-10＋T细胞亚群比例在有hPMSCs存在组明显高于无hPMSCs存在组（P＜0．01）；阻断PDL2的表达后， hPMSCs对T细胞向CD8＋IL-10＋T细胞亚群诱导分化能力明显下降；IFN-γ刺激后的hPMSCs对外周血中CD8＋IL-10＋T细胞亚群的诱导作用明显上调。结论 hPMSCs 能够诱导外周血中T细胞向CD8＋IL-10＋T细胞亚群分化，PDL2能够协同hPMSCs诱导CD8＋IL-10＋T细胞亚群形成；IFN-γ通过上调hPMSCs对PDL2的表达，促进hPMSCs对外周血T细胞向CD8＋IL-10＋T细胞亚群转化的调节作用。

肠杆菌科细菌碳青霉烯类抗生素耐药检测方法的研究进展

碳青霉烯类抗生素是20世纪70年代后期在沙纳霉素基础上研发出来的一类抗菌谱广，抗菌活性强的非典型β-内酰胺类抗生素［1-2］，对质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs ）、染色体及质粒介导的头孢菌素酶（ AmpC酶）均具有高度稳定性，已经成为治疗严重细菌感染主要的抗菌药物之一。碳青霉烯类抗生素通过抑制胞壁黏肽合成酶，即青霉素结合蛋白（ PBPs ），从而阻碍细胞壁黏肽合成，使细菌胞壁缺损，菌体膨胀致使细菌胞质渗透压改变和细胞溶解而杀灭细菌［3］，其对革兰阳性菌、革兰阴性菌和厌氧菌均有较强的抗菌活性［4］。随着该类抗生素的的广泛使用，临床上不断出现碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌，给临床抗感染治疗和医院内感染控制带来了极大困难。

成人免疫 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（ SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15 d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160 d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7， P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。

结核 DNA 疫苗肌肉注射加电转染不同免疫方案免疫效果的研究

目的：研究结核DNA疫苗肌肉注射加电转染不同免疫方案的免疫效果，获得DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的佳方案。方法40只BALB/c小鼠随机分为4组：（1）生理盐水组。（2）50μg Ag85A DNA组。（3）100μg Ag85A DNA组。上述3组分别肌肉注射加电转染免疫3次。（4）混合Ag85A DNA免疫组，第1和3次各肌肉注射加电转染10μg Ag85A DNA，第2次肌肉注射加电转染100μg Ag85A DNA，每2周免疫1次。后1次免疫后2周、6周每组各杀5只小鼠，用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4水平；用流式细胞术检测小鼠全血单个核细胞分泌IFN-γ的Th1细胞和分泌IL-4的Th2细胞比值；用定量RT-PCR检测小鼠肌肉电转染部位Ag85A DNA的含量。用ELISA方法检测小鼠免疫前、第1～3次免疫后10 d小鼠血清特异性抗体水平。结果免疫结束后2周，小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平：混合Ag85 A DNA免疫组[（703．66±394．74） pg/ml]和50μg Ag85A DNA组[（648．60±439．41） pg/ml]明显高于生理盐水组[（70．58±108．76） pg/ml]（t值分别为3．975、3．629，P值分别为0．0004、0．0010）和100μg Ag85A DNA组[（86．08±135．73） pg/ml]（t值分别为3．878、3．532，P值分别为0．0005、0．0013），但混合Ag85A DNA免疫组和50μg Ag85A DNA组之间差异无统计学意义（t＝0．3457，P＝0．7318）；全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值：混合Ag85A DNA免疫组（3．82±1．09）均显著高于生理盐水组（0．37±0．11）、50μg Ag85A DNA组（1．20±0．80）、100μg Ag85A DNA组（1．10±0．60）（t值分别为2．980、2．260、2．352，P值分别为0．0058、0．0315、0．0257）；肌肉注射加电转染部位 Ag85A DNA 含量：100μg Ag85A DNA 组[（963．40±892．79）拷贝]显著高于50μg Ag85 A DNA组[（270．90±398．18）拷贝]和混合Ag85 A DNA免疫组[（205．80±136．95）拷贝]（t值分别为2．639、2．887，P值分别为0．0144、0．0081）。免疫结束后6周，小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ水平：混合Ag85A DNA免疫组[（238．43±258．90）pg/ml）]高于生理盐水组[（0±0） pg/ml]、50μg Ag85A DNA组[（83．14±135．08） pg/ml]和100μg Ag85A DNA组[（163．83±207．13） pg/ml]，但各组之间差异均无统计学意义（t值分别为1．4970、0．9750、0．4684，P值分别为0．1442、0．3369、0．6427）；全血单个核细胞内Th1/Th2细胞比值：混合Ag85A DNA免疫组（4．67±5．05）显著高于生理盐水组（0．77±0．19）、50μg Ag85A DNA组（1．23±0．74）和100μg Ag85A DNA组（0．51±0．49）（t值分别为3．199、2．971、3．610，P值分别为0．0033、0．0059、0．0011）；肌肉电转染部位Ag85A DNA含量各组之间差异均无统计学意义。第2次免疫后，50μg Ag85A DNA组、100μg Ag85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体均比第1次免疫后显著升高（F＝7．17，P＝0．0111），但3组之间差异无统计学意义。第3次免疫后，100μg Ag85A DNA组和混合Ag85A DNA免疫组血清抗Ag85A特异性IgG抗体比第2次免疫后略有升高，而50μg Ag85 A DNA组略有降低，但3组之间差异无统计学意义。结论电转染可以使低剂量的DNA 疫苗产生较好的免疫效果，低、高剂量混合免疫是DNA疫苗肌肉注射加电转染免疫的佳方案。

H5 N1 DNA 疫苗与重组痘苗病毒疫苗在小鼠中不同联合免疫方案对免疫原性的影响

目的：本研究旨在优化人高致病性禽流感病毒H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用的免疫方案。方法我们将前期制备的含H5N1（安徽株）结构基因的两种重组DNA疫苗（分别基于pVRC与pIRES载体骨架）及一种重组痘苗病毒（天坛株）疫苗，采用不同初免方式联合免疫BALB/c小鼠，比较分析抗原特异的体液[血凝素（hemagglutinin， HA）抑制抗体（HAI）、神经氨酸酶（neuraminidase， NA）特异性抗体、中和抗体]与细胞免疫应答（IFN-γELISPOT）特点。结果H5N1重组DNA疫苗初免、H5N1重组痘苗病毒疫苗加强的联合免疫可激发较强的体液与细胞免疫应答；其中H5N1重组DNA疫苗皮内电转初免组比肌肉电转初免组诱导的中和抗体更高。此外，基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗初免诱导的HAI抗体及NA特异的细胞免疫均高于基于pIRES载体的DNA疫苗初免组；基于pVRC载体的H5N1重组DNA疫苗肌肉注射电转初免组诱导的HA特异的细胞免疫亦高于基于pIRES载体的H5N1重组DNA疫苗。结论各组H5N1重组DNA疫苗与重组痘苗病毒疫苗联合应用可诱导多个抗原特异的体液与细胞免疫应答，不同联合免疫方案对免疫原性的影响显著。该研究为新型H5 N1疫苗的研发及免疫方案的优化应用奠定了基础。

人源化抗 VEGF 单克隆抗体制品的大小异质性分析

目的：比较十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ sodium dodecyl sulfatepolyacrylam-ide gel electrophoresis ，CE-SDS）和分子排阻高效液相（ size exclusion high performance liquid chromatogra-phy，SE-HPLC）在单克隆抗体（单抗）大小异质性分析中的区别。方法应用非还原和还原CE-SDS以及常规、变性和变性还原SE-HPLC评价人源化抗血管内皮细胞生长因子（ VEGF）单抗的大小异质性。结果对于多聚体的分析，虽然非还原CE-SDS结果显示其含量为0．82％±0．01％，显著低于常规SE-HPLC的分析结果（5．08％±0．10％），但与变性SE-HPLC的分析结果（1．05％±0．02％）则基本一致；在非还原状态下对单抗的片段分析，非还原CE-SDS结果显示其含量为7．12％±0．04％，显著高于常规SE-HPLC的分析结果（0．02％±0．01％）以及变性SE-HPLC的分析结果（0．62％±0．01％）；而在还原状态下对单抗的片段分析，还原CE-SDS结果显示其含量为（3．19％±0．50％），其含量同样高于变性还原SE-HPLC的分析结果（0．07％±0．01％）。结论在分析多聚体含量时，由于常规SE-HPLC对共价和非共价连接的多聚体形式均可显示，相比CE-SDS相比更加客观；而在分析片段含量时，非还原CE-SDS可显示非共价键连接的片段，还原CE-SDS可显示降解片段，所以CE-SDS相比常规SE-HPLC更具优势。两种不同原理分析方法的组合有效保障了单抗制品大小异质性的质量控制。

TNF-α单抗分子大小变异体与电荷变异体色谱行为的比较研究

目的：分析对比原研TNF-α全人源单克隆抗体（单抗）和4个生物类似药的分子大小和电荷异质性差异。方法采用体积排阻色谱（ SEC-HPLC）分析抗体大小异质性，采用弱阳离子交换色谱（WCX-HPLC）分析单抗电荷异质性。结合羧肽酶B（CpB）处理单抗，分析单抗主要电荷异质性来源。结果经体积排阻色谱检测发现，4个生物类似药与原研单抗在单体比例上基本一致，其中两个生物类似药（ SBP-3， SBP-4）聚合物比例较原研单抗略高。离子交换色谱检测结果显示，4个生物类似药与原研单抗的电荷分布在碱区以及主峰比例上有明显差异。羧肽酶B处理样品后，样品碱区峰比例明显减少，提示4个生物类似药在碱区上的差异主要由C末端赖氨酸引起。结论4个生物类似药虽然在单抗分子大小异质性上与原研单抗无明显差别，然而在电荷变异体组成上却存在较大差异。在对单抗质量控制中应重视电荷异质性检测的重要性。

本刊使用的医学缩略语

为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下（按英文首字母顺序排列），本刊在论文中将不再注释。

本刊“流行病学调查”栏目征稿

疫苗相关的流行病学调查是疫苗研发和质量提升的重要支撑数据，而我国目前还没有这方面的系统性资料。本刊新开辟“流行病学调查”栏目，主要调查和获取新发突发传染病、当前无疫苗可用的传染病、疫苗免疫后相关疾病和院内感染性疾病的流行病学资料。希望通过本栏目的交流为我国在新疫苗研发和疫苗升级换代方面提供支撑性材料。

《中华微生物学和免疫学杂志》书写规范

1．根据GB／T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。

《中华微生物学和免疫学杂志》第七届编辑委员会组成人员名单

关于中华医学会系列杂志投稿网址的声明

为维护广大读者和作者的权益以及中华医学会系列杂志的声誉，防止非法网站假冒我方网站诱导作者投稿、并通过骗取相关费用非法获利，现将中华医学系列杂志稿件管理系统网址公布如下，请广大作者加以甄别。

《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事

《中华微生物学和免疫学杂志》为中华医学会主办。1981年创刊，主要报道医学微生物学和免疫学方面的研究论文、简报、评论、综述、国内外学术动态、书评及消息等。

西安市流行性脑脊髓膜炎流行病学特征及控制效果分析

目的：利用西安市传染病报告系统数据、疫苗接种情况和健康人群病原监测结果，综合分析控制流行性脑脊髓膜炎（流脑）因素。方法用描述流行病学方法分析流脑的历年流行情况、病原携带率和发病控制效果。结果西安市流脑1951-1984年期间发病率为22．51/10万，1984年计划免疫实施后发病率开始呈大幅度下降趋势，20世纪80年代发病率平均为4．87/10万，90年代平均为0．59/10万，2001-2011年期间发病率平均为0．095/10万，2012-2013年无发病，呈明显阶段下降趋势。结论流脑的控制应采取提高常规免疫接种率和加强流脑疾病监测系统的综合性预防措施。