中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人LAK细胞抗菌活性多肽HLP-3P21的分离纯化和鉴定
目的分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽,鉴定其分子特性,检测其抗菌活性. 方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,并用IL-2和PHA刺激培养.5%乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物.应用制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽,Tricine-SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr),运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性,采用Edman降解法测定其氮端序列,并进行肽质谱分析. 结果从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出一多肽,Tricine-SDS-PAGE表观Mr为17×103,命名为HLP-3P21(human lymphocyte peptide),具有抗致病性大肠杆菌ML-35P及铜绿假单胞菌ATCC65922的活性.其氮端序列为PKRKAEGDAK,肽质谱的检索分析未发现匹配度大于50%的蛋白质分子. 结论 HLP-3P21可能为LAK细胞一新的抗菌效应分子.
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CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合供体细胞输注诱导混合嵌合体和大鼠心脏移植耐受
目的在心脏移植手术中实施CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗并联合术后输注供体骨髓细胞,诱导异基因大鼠心脏移植耐受,并对相关机制进行研究. 方法将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注供体DA的脾细胞(SC,3×108)、CTLA-4 Ig腺病毒[(1～5)×109 PFU/ml],第4天由舌静脉输注DA的骨髓细胞(BMC,3×108).观察、记录心脏移植物的存活时间.并对皮肤移植的受体作同样处理,观察皮肤移植存活情况.通过MLR、IL-2逆转实验及嵌合体的测定,探讨耐受机理,并检测了CTLA-4 Ig的体内表达、TH1/TH2型细胞因子的表达. 结果单用CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗,或CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合单独的供体脾细胞或骨髓细胞能不同程度地延长异基因心脏移植物的存活,但不能延长皮肤移植物的存活.脾细胞、CTLA-4 Ig腺病毒和骨髓细胞(SC/Ad/BMC)处理组的心脏移植物存活时间明显超过其它各耐受诱导组,并且能够诱导皮肤耐受.RT-PCR实验证明,在受体内不同的组织CTLA-4 Ig基因的表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.TH1和TH2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性降低,IL-2逆转实验、嵌合体检测表明,该耐受可能与克隆无能、嵌合体的存在有关. 结论在术中注射供体脾细胞和CTLA-4 Ig腺病毒,然后再给予供体骨髓细胞,能够提高嵌合体水平,加深移植耐受,进一步延长异基因大鼠心脏移植物存活,该移植耐受的形成涉及多种机制.
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IL-2调节人外周血T淋巴细胞CTLA-4表达
目的探讨人外周血T淋巴细胞CTLA-4的表达情况及IL-2对其表达的调节作用. 方法采用流式细胞仪定量测定人外周血T淋巴细胞内及细胞膜上CTLA-4的水平,半定量RT-PCR检测T淋巴细胞内CTLA-4 mRNA的水平,并在体外用IL-2刺激T淋巴细胞后观察CTLA-4及CTLA-4 mRNA水平的变化. 结果人外周血T淋巴细胞膜表面几乎不表达CTLA-4,7.6%～18.0%的T淋巴细胞有胞内表达,CD4+T淋巴细胞表达CTLA-4的阳性比例略高于CD8+T淋巴细胞;人T淋巴细胞可溶性形式的CTLA-4 mRNA半衰期短于全长CTLA-4 mRNA;IL-2可以通过诱导人T淋巴细胞CTLA-4 mRNA的转录上调CTLA-4的表达,IL-2诱导的细胞多为CD25+T淋巴细胞. 结论 CTLA-4多存在于人外周血T淋巴细胞内,参与T淋巴细胞活化过程的调节.IL-2的免疫抑制作用可能与其诱导T淋巴细胞内CTLA-4 mRNA转录,从而上调CTLA-4的表达有关.
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雷帕霉素对氧化低密度脂蛋白刺激血管平滑肌细胞信号转导的抑制作用
目的探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及分泌功能改变的细胞内信号转导机制及雷帕霉素(rapamycin)干预作用. 方法培养兔血管平滑肌细胞分为7组处理.以直接细胞计数及噻唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖能力;酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;Western免疫印迹法定量蛋白激酶B(PKB)表达水平;免疫沉淀、特异底物组蛋白H2B γ32P掺入量测定PKB活性. 结果 oxLDL使细胞增殖指标增加1.62～3.2倍,细胞因子分泌增加3～5倍,PKB活性增加11.8倍.而相同浓度的低密度脂蛋白对细胞增殖及细胞因子分泌无明显影响.磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂沃漫青霉素(Wortmannin, WT)及雷帕霉素均可显著抑制VSMC增殖、细胞因子分泌及PKB活性,并完全逆转oxLDL的上述作用. 结论 PI3K/PKB是oxLDL促VSMC增殖及分泌功能的信号通路之一.雷帕霉素可能通过抑制PI3K/PKB对VSMC生物学功能发挥较全面调控效用.
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铜绿假单胞菌感染豚鼠后生物被膜形成的研究
目的建立体内铜绿假单胞菌生物被膜模型,研究体内细菌生物被膜的组织学及细菌学特征. 方法通过吸入法使铜绿假单胞菌以气雾剂的形式吸入豚鼠肺内并生长定植,分别观察不同时期肺组织内细菌生物被膜的特征. 结果定植在肺内的铜绿假单胞菌以肉芽肿结节的形式存在,外周包绕类上皮细胞和成纤维细胞.结节内细菌被被膜基质所包绕并彼此连结,中间镶嵌宿主炎性细胞.接种后3周,肺内仍可见结节并培养出铜绿假单胞菌. 结论用吸入法可建立较稳定的铜绿假单胞菌肺感染生物被膜,其以肉芽肿结节的形式存在,宿主的反应细胞参与了生物被膜的形成.
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肺炎链球菌在体外触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排
目的通过体外实验研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae, S.pn)侵袭A549细胞和微丝肌动蛋白细胞骨架重排之间的关系. 方法采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察S.pn作用于A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况;用F-actin细胞骨架重排抑制剂--细胞松弛素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭率;分别使用PLC、TPK信号转导抑制剂U73122、Genistein处理因素预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排的关系. 结果 S.pn作用A549细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低S.pn 对A549细胞的侵袭率,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;PLC(磷脂酶C)、TPK(酪氨酸蛋白激酶)信号转导途径抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,其相关系数分别为:rPLC=-0.88(P＜0.05);rTPK=-0.91(P＜0.05).S.pn细胞壁作用A549细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集,二者间存在剂量依赖关系. 结论 S.pn可通过PLC、TPK细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞.
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伤寒活疫苗Ty21a免疫相关新基因的克隆及其组织分布
粘膜免疫在机体的免疫防御系统中起着重要的作用.寻找粘膜免疫防御相关的分子,对于揭示粘膜免疫的规律具有重要的意义.在通过抑制消减杂交,建立cDNA消减文库的过程中,发现了几条在Ty21a免疫后基因表达发生改变的新的ESTs.为了揭示这些ESTs对应的基因在粘膜免疫中的作用,我们利用RACE-PCR技术扩增了其中1条EST对应基因的全长.
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幽门螺杆菌细胞微生物学模型的研究
目的建立幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)细胞微生物学研究模型. 方法选择6至8月龄胎儿胃粘膜组织进行原代细胞培养,运用扫描和透射电镜研究了螺杆状和圆球形Hp与人胃粘膜上皮细胞相互作用关系. 结果螺杆状Hp很快与人胃粘膜上皮细胞微绒毛粘附,Hp粘附细胞处形成一个致密纤维样肌动蛋白垫,上皮细胞膜杯状内陷包绕Hp,紧密粘附于宿主细胞,Hp粘附下方细胞内微丝、微管和肌动蛋白呈局灶性聚集.圆球形Hp可出现类似生物学效应,提示两种形态的Hp皆可作用于人胃粘膜上皮细胞.此外,螺杆状Hp还可与宿主细胞膜融合,被细胞内在化,细胞内出现空泡效应.上述病理性改变与Hp感染的胃粘膜活性组织标本的检查结果基本一致. 结论原代胃粘膜上皮细胞与Hp相互作用近似于Hp体内致病的微环境,是Hp细胞微生物学研究的良好模型.
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登革2型病毒广东流行株结构蛋白基因序列测定及分析
目的对广东省90年代以来流行的3株登革2型病毒(DEN2)的结构蛋白基因序列测定及分析,了解流行株之间的相互关系、变异及基因型. 方法应用RT-PCR技术扩增广东省不同年份流行的3株DEN2型病毒的结构蛋白基因(C、PrM、E基因).分别克隆到pMD18 T载体,转化JM109宿主菌,挑取阳性克隆进行鉴定及序列测定. 结果 3株DEN2病毒结构蛋白基因序列长度均为2?325bp,编码775个氨基酸.三者核苷酸(氨基酸)的同源性分别是:GD06/93与GD19/2001为96%(97%)、GD06/93与GD08/98为94%(97%)、GD08/98与GD19/2001为92%(94%).其在相关毒力位点E383～385处均为GLU-PRO-GLY、E126处均为GLU.3株DEN2与国际参考株比较表明:GD06/93与GD19/2001和澳大利亚TSV01株共享序列非常接近,核苷酸(氨基酸)的同源性为98%(98%);GD08/98与泰国株ThNH-P28/93核苷酸(氨基酸)同源性为98%(98%).此3株DEN2二级结构与对乳鼠不致病的04株比较,主要差别位于其393～400氨基酸处,本室分离的3株对乳鼠致病毒株为EEEEHHHH,而04株为EEEE----;337～343处本室分离的3株对乳鼠致病毒株为HH-------HHHHH,而04株为--------HHHHE-,恰好位于Dengue病毒E基因的Ⅲ区. 结论 GD06/93、GD19/2001与TSV01亲缘关系较近,属同一基因型.GD08/98与ThNH-P28/93共享序列非常接近,属同一基因型.3株DEN2病毒在E蛋白Ⅲ区结构有一定变异,可能与毒力有关.
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一种新的TTV基因群全基因序列测定及基因结构分析
目的测定2株TTV高度变异株全基因序列,对其基因结构、基因分型及分子流行病学分析. 方法从2名感染TTV高度变异株的婴儿血清中抽提其DNA,用long inverted PCR扩增出全基因组并测定其序列,同时对测序结果进行分析.根据测定的序列设计引物,对人群中此类变异株的感染情况进行研究. 结果首次报道了TTV一个新基因群--第5基因群;测定了该基因群中2株变异株的全基因序列.该基因群在小于30日龄、1～6月龄、7～12月龄的婴儿中检出率分别为0、27.3%、39.5%,献血员中检出率为45.8%. 结论虽然第5基因群基因组核酸序列呈高度异质性,但其基本结构及功能与已报道的TTV各基因群十分相似;婴儿中该基因群的感染主要与环境因素有关.
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人乳头瘤病毒58型E6蛋白对p53的作用研究
目的研究HPV58 E6蛋白与p53蛋白的作用关系,以初步探讨其致癌机理. 方法先通过GST沉降试验和体外降解试验,体外研究HPV58 E6结合降解p53蛋白的作用,进而将表达质粒导入SAOS-2细胞,在细胞内研究HPV58 E6对p53诱导细胞凋亡活性的影响. 结果 HPV58 E6能够有效结合p53蛋白并进一步诱导其降解,而且在细胞内,HPV58 E6具有抑制p53蛋白的诱导凋亡的功能. 结论 p53蛋白的降解影响其细胞周期调控和诱导凋亡的功能,导致细胞发生恶性转化引发子宫颈癌等肿瘤.
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登革2型病毒海南分离株全长E基因的测定与分析
目的测定我国登革2型病毒海南分离株E基因的全序列,并分析其病毒学特性和分子进化特征. 方法运用RT-PCR法扩增我国登革2型病毒海南分离株(D2V-HN89)E基因,测序并用计算机分析序列,作毒株感染细胞及乳小白鼠试验. 结果 D2V-HN89株E基因核苷酸全长1?464bp,核苷酸和氨基酸序列与D2V-NGC株的同源性分别为95%和98%,系统树分析显示其与登革2型牙买加株及登革2型巴西90株的亲缘关系近.D2V-HN89株的细胞病变效应与D2V-NGC株相同,但对乳小白鼠神经毒力较弱. 结论 D2V-HN89株的E基因区有缺失,该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区.
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重型乙型肝炎患者血清HBV前S2基因变异的观察
重型肝炎的发病机理至今不清,可能与HBV病毒变异有关.在HBV DNA前S2区、前C区及C启动子区,均有报道存在变异,但到目前为止,尚未发现特异位点的变异.本研究通过检测20例重型乙型肝炎和14例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA前S2区变异,观察HBV前S2区变异在重型肝炎中分布的情况.
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TT病毒研究进展
TT病毒(TTV)是新近发现的一种DNA病毒,有关TTV的研究近年取得了很大进展,本文就TTV相关的研究现状并结合所存在的问题进行简要综述.
关键词： 病毒 -
尿路致病性大肠杆菌fimC和fimH基因诱导小鼠免疫应答的初步研究
尿路致病性大肠杆菌(UPEC)是引起尿路感染的主要病原菌.此类大肠杆菌80%携带Ⅰ型菌毛.现已证明UPEC的Ⅰ型菌毛的编码基因位于染色体上,由9个基因组成.其中fimH基因编码的蛋白--FimH粘附素,能与泌尿道上皮细胞表面甘露糖受体结合并可诱导细菌的细胞内在化.FimC蛋白是FimH蛋白的伴侣分子,在保持Ⅰ型菌毛的折叠和长度上起着关键的作用,可增强FimH蛋白的免疫原性[1].Langermann等制备FimH和FimC纯化蛋白混合疫苗,可以诱发动物产生抗Ⅰ型菌毛抗体,使猴对UPEC的感染有保护作用[2,3].
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以Rev依赖性凋亡增强HIV-1gp160的抗原性
目的检测Rev(HIV的调控基因)依赖性肿瘤坏死因子受体(TNFR-1)和gp160双重表达质粒pDM128-TNFR-1(pT128)的凋亡诱导功能. 方法采用基因枪转导及流式细胞仪检测新质粒的表达功能. 结果新结构具有特异的选择性表达作用.当Rev存在时,能间接表达TNFR-1,明显诱导HeLa细胞凋亡,使绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).等质量转染时,TNFR-1表达量少于Hu p60 TNFR-1的pDC302(pT60),故间接表达不及单纯pT60的直接表达,绿荧光细胞百分率显著高于pT60转染组(P＜0.01).培养40?h,才有明显杀伤功能并接近单纯pT60,差异无显著性(P＞0.01).单纯pT128不能直接表达TNFR-1,绿荧光细胞百分率非常显著地高于单纯pT60转染组(P＜0.01),接近阴性对照,培养40?h时差异无显著性(P＞0.01).当AD8或pMD+pRnv存在并表达Rev时,pT128均能表达TNFR-1,杀伤HeLa细胞,绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).pT128与pRev或AD8转染人正常的角质生成细胞时,能表达TNFR-1,诱导细胞凋亡.培养72?h后,阴性对照和单纯pT128组的绿荧光角质生成细胞数皆显著地超过pT128+pRev和pT128+pAD8组(P＜0.01). 结论 pT128可调控的凋亡诱导保证了HIV DNA疫苗足量的抗原表达、凋亡体形成、APC表型激发及特异性抗凋亡体免疫记忆建立.单纯pT128并不对机体产生明显伤害.此结构还适用于不同类型的HIV抗原表达系统并具有HIV感染细胞杀伤功能,能够方便地在人皮肤中表达抗原,诱导凋亡体形成.可作为HIV DNA疫苗的研究策略之一.
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单纯疱疹病毒DNA疫苗的免疫原性和保护效力
单纯疱疹病毒(HSV)感染可分为原发性感染和复发性感染,在临床上表现为多种症候群,如生殖器感染、口面感染、皮肤感染、中枢神经系统感染和新生儿感染等.HSV-1主要引起非生殖器感染,而HSV-2则引起生殖器感染.由HSV-2感染造成的公共卫生问题促使人们对能预防或控制HSV-2感染的疫苗进行研究.
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恙虫病东方体山西株56kD蛋白基因DNA疫苗的初步研究
我们构建了恙虫病东方体山西株(Sxh951)56kD蛋白基因DNA疫苗(pc-DNA3.1-Tsa56),该重组质粒转染的COS7细胞经IFA和WB染色均为阳性,表明该重组质粒能够在哺乳动物细胞中表达.为了探讨该DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果,将6周龄BALB/c鼠随机分成5组,每组10只.
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幽门螺杆菌粘附素基因babA2的克隆及免疫应答的初步研究
目前,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗的研制仍处在抗原的筛选阶段,已经评价的基因重组抗原基本上是着眼于阻断Hp的毒力因素,而与Hp定植密切相关的粘附素评价较少.babA是迄今为止唯一明确受体的Hp粘附素,研究表明babA基因存在两个等位基因:babA1和babA2,其中只有babA2具备与Leb结合的功能[1].本实验对babA2基因进行了克隆和表达并研究了其免疫反应.
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河豚毒素抗毒疫苗载体蛋白的选定
河豚毒素(TTX)是高毒性的小分子神经性毒素,因其分子量小,需与大分子载体蛋白共价偶联成人工抗原,才具有免疫原性.为提高疫苗效价,本文比较了5种载体蛋白对免疫效果的影响.
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恙虫病东方体Karp株47kD蛋白基因的表达及DNA免疫初步研究
目的观察恙虫病东方体Karp株相对分子质量(Mr)为47×103蛋白基因的DNA免疫效果. 方法将恙虫病东方体Karp株Mr为47×103的蛋白基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1/47.在证明该重组质粒可在哺乳动物COS7细胞中表达的基础上,单独和将其与Mr为40×103重组蛋白联合免疫小鼠.在每次加强免疫之后10?d,检测小鼠体液和细胞免疫反应. 结果质粒DNA和蛋白联合免疫组所诱导的抗体水平和脾淋巴细胞增殖反应均高于重组质粒DNA和蛋白单独免疫组,而第二次加强免疫后重组质粒诱导脾淋巴细胞的增殖情况则显著弱于其它免疫组(P＜0.05). 结论重组质粒pcDNA3.1/47和重组Mr为47×103蛋白在刺激小鼠免疫反应上具有相互加强作用.
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肽核酸压电基因传感器阵列检测乙肝病毒的研究
随着声光技术、微电子技术的迅速发展,一种基于石英晶体的压电现象发展而来的石英谐振式基因传感器逐渐发展成熟起来,它是以压电石英晶体为换能器、以特异性短核酸探针为分子识别元件的一种新型基因传感器,在它诞生之初就因为集合了核酸探针杂交的高特异性和石英晶振微天平的高灵敏性可能成为新一代基因诊断技术.但是,目前研究报道的基因传感器表面固定的都是DNA探针,形成一些难以克服的困难.
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应用脉冲凝胶电泳技术分析肺炎克雷伯菌染色体多态性
目的利用脉冲凝胶电泳(PFGE)技术探讨肺炎克雷伯菌3个亚种临床分离株核型特征. 方法用XbaⅠ酶切各试验菌株染色体DNA,经脉冲凝胶电泳分离酶切片段. 结果 PFGE法将28株细菌分为15个型和亚型,较准确地显示各菌株染色体多态性,并筛选出亚种间的差异DNA片段. 结论脉冲凝胶电泳技术分析肺炎克雷伯菌基因型准确、可靠,是用于流行病学监测的有效方法.
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肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱的相关性
目的了解肺炎链球菌对青霉素和其它抗生素的耐药情况;对40株青霉素敏感菌株和30株青霉素不敏感菌株进行pbp2b基因扩增产物RFLP图谱相关性研究. 方法采用肉汤稀释法、E-试验和K-B纸片法进行抗生素药物敏感试验;通过用特异性引物pF和pR对肺炎链球菌进行PCR扩增,并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ消化反应. 结果肺炎链球菌对青霉素的不敏感率为9.9%～14.6%;40株青霉素敏感菌株(MICs≤0.094μg/ml)中的39株(97.5%)为s1、s2和s3三种之一,1株为r1;30株青霉素不敏感菌株(MICs≥0.12μg/ml)中的26株(86.7%)为r1～r6六种之一,其余4株为s1. 结论青霉素和β-内酰胺酶类抗生素对北京地区的肺炎链球菌具有活性;肺炎链球菌的耐药性和pbp2b基因扩增产物图谱之间有相关性.
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微阵列技术诊断神经系统细菌感染
微阵列技术以高通量、大规模、微型化和平行化的显著特点,已越来越多地应用于人类疾病诊断.我们在细菌的16S rRNA基因内设计了一套保守的通用引物,并对脑脊液常见病原菌各设计了2条特异性探针,建立了膜微阵列技术平行检测脑脊液病原菌DNA的方法,在对标准菌株进行检测鉴定的基础上,又对34株脑脊液临床分离株进行了鉴定,其结果可靠,而且仅用5?h即可鉴定出菌种,具有一定的现实意义.
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HLA-B7可诱导启动子调控TNF-α和IFN-β基因协同增强抗肿瘤效应
目的将TNF-α和IFN-β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC-7721,以增强其免疫原性. 方法以腺病毒为载体,以IRES连接TNF和IFN基因,选择HLA-B7可诱导启动子调控其表达.分别用Southern/Northern blot和MTT法检测TNF-α和IFN-β基因的整合、转录与表达.流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达.CTL细胞毒性实验检测T细胞对转染细胞的杀伤作用.细胞增殖实验检测目的基因的表达对肿瘤细胞的抑制作用. 结果 TNF-α和IFN-β基因可整合入转染细胞,并被有效转录.转染细胞MHCⅠ类分子的表达比对照组高3～4倍.TNF活性:Liu6细胞为3.778ng/ml,SMMC-7721为2.017pg/ml;24?h IFN高活性分别为397.8U/106个细胞和345.8U/106个细胞.对照组与实验组在效靶比分别为5∶1,10∶1,15∶1时,CTL细胞毒性实验结果差异均有显著性(P＜0.05),表明T细胞杀伤作用明显增强.细胞增殖实验结果显示实验组与对照组差异有显著性(P＜0.05).目的基因的表达对肿瘤细胞具有一定的抑制作用,抑制率分别为5.5%(Liu6),3.7%(SMMC-7721). 结论人TNF-α和IFN-β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC-7721可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达,增强机体对转染瘤细胞的杀伤作用.
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以核仁形成区银染蛋白等指标评价肿瘤患者免疫状况的研究
目的比较分析各项免疫检测指标在肿瘤患者的变化情况,寻找可以真实反映肿瘤患者机体免疫状况相对理想的指标. 方法运用细胞培养、细胞化学银染技术、酶联免疫吸附测定、单向免疫扩散测定、KL型免疫图象分析系统及流式细胞仪等技术方法,分别检测健康人和恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞核仁形成区银染蛋白(argyrophilic nuclear organizer region associated proteins, Ag-NORs)、T细胞亚群及血浆细胞因子等项目. 结果与健康人比较,各种类型肿瘤患者外周血T细胞Ag-NORs降低.胃肠道恶性肿瘤外周血T淋巴细胞Ag-NORs、CD3、CD4显著减少,血浆TH1型细胞因子IL-2和IFN-γ降低,TH2型细胞因子IL-6升高.外周血T淋巴细胞Ag-NORs变化与患者化疗和术后的全身综合状况的恢复时相大致相符.经过对衡量人罹患恶性肿瘤时免疫状态作用的各项免疫指标进行筛选比较,单项指标中血浆细胞因子佳.外周血T淋巴细胞Ag-NORs优于T细胞亚群及NK细胞.联合应用,以T淋巴细胞Ag-NORs、IFN-γ及IL-2三项指标的检测结果为佳,其判断恶性肿瘤发生可能性的敏感性和特异性分别达93.1%和96.7%. 结论外周血T细胞Ag-NORs可以作为反映患者机体免疫状况的一个具有临床应用前景的指标.外周血T淋巴细胞Ag-NORs、IFN-γ及IL-2的联合检测,可能成为衡量恶性肿瘤患者免疫状况的参考指标.
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preS2反义RNA肝癌特异性表达载体的构建及相关特性研究
目的构建针对preS2基因的肝癌特异性反义RNA表达载体,并对其特异性和有效性进行研究. 方法 PCR扩增preS2(3?203～340)基因,克隆至含甲胎蛋白启动子的EB病毒表达载体pEBAF,构建反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2.脂质体转染肝癌细胞和ECV304细胞,3?d后Northern blot检测preS2 mRNA的表达,ELISA检测HBV抗原,荧光定量PCR检测HBV DNA. 结果序列分析表明,pEBAF-as-preS2构建成功,Northern blot证实反义RNA仅在AFP阳性的肝癌细胞中表达,pEBAF-as-preS2转染3?d后,可显著抑制HepG2.2.15细胞HBV复制和抗原表达,对HBsAg、HBeAg表达的抑制率分别为33.4%和41.5%;对HBV复制抑制率为86%. 结论反义RNA表达载体pEBAF-as-preS2仅在肝癌细胞中特异表达、并可有效抑制HBV,有良好的开发应用前景.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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