中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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全反式视磺酸对树突状细胞分化及抗原提呈的抑制作用与NF-κB信号通路相关
目的 研究全反式视磺酸(atRA)对树突状细胞(DC)抗原提呈作用的影响是作用在骨髓细胞向DC的分化过程还是作用在已分化形成的DC,以及NF-κB信号通路是否参与到此调节过程.方法 以MOG35-55免疫C57BL/6J小鼠,给予或不予atRA干预.分离小鼠脾脏DC及CD4细胞进行交互培养,同时给予IL-12或IL-23干预CD4细胞的分化.测定CD4细胞向Th1及Th17细胞的分化情况及相应细胞因子的产生能力.分离小鼠骨髓细胞(BMC),IL-4及GM-CSF诱导其向DC分化,并在不同时间点给予RA干预.比较DC表面分子CD11c、MHCⅡ的表达情况及其提呈抗原对效应细胞的激活作用;Western blot检测DC中NF-κB p65的磷酸化及p65向胞核转位的情况.终比较RA对DC的影响是否可以被选择性RA受体(RAR)拮抗剂所拮抗.结果 RA体内干预显著降低脾脏DC的抗原提呈作用;在体外RA则可抑制BMC向DC分化过程,降低CD11c及MHCⅡ分子在细胞表面的含量,并抑制DC的抗原提呈功能;但是对已分化形成的DC却没有类似效应.RA可显著抑制DC中NF-κB p65的磷酸化及胞核中NF-κB p65的含量,并伴随着DC抗原提呈功能的减弱;其作用可被RARβγ拮抗剂所拮抗.结论 RA可抑制DC的提呈功能,其作用环节可能在于DC的分化过程并与NF-κB信号通路密切相关.
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κ-卡拉胶对THP-1源性巨噬细胞免疫响应的影响
研究发现κ-卡拉胶(κ-CGN)能够诱导并促进动物肠道出现溃疡甚至癌变[1].但一些官方机构如FDA(Food and Drug Administration)、欧洲食品科学委员会(SCF)等却认为卡拉胶在正常摄入量范围内对人肠道影响很小[2].卡拉胶致炎机制也存在争议,可能作为异质颗粒被细胞吞噬,使溶酶体破裂后引起溃疡;也可能提高肠内硫化氢的含量.Tobacman等[1]针对肠上皮细胞的研究认为,卡拉胶能够通过TLR4通路激活细胞的Bcl-10、NF-κB、IL-8等因子.本文选择经佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞为研究载体,观察κ-CGN对该细胞的免疫响应,从而研究它们调节免疫的能力及响应机制.
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串联siRNA干扰沉默结肠癌SW480细胞APRIL基因表达
目的 检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体(APRIL)基因的影响.方法 设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段(sh644、sh1451、sh1938、sh2231),分别将其连接至pGenesil-1.1质粒表达载体,形成pGsh644、pGsh1451、pGsh1938、pGsh2231单一表达载体,同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体.阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480.实时荧光定量PCR和Western blot技术检测SW480细胞中APRIL mRNA和蛋白表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,构建的串联siRNA质粒载体符合要求.几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达,APRIL mRNA的抑制率分别是pGsh644(56.2%)、pGsh1451(49.5%)、pGsh1938 (50.9%)、pGsh2231 (49.2%)、pG4(79.3%).蛋白质表达抑制率分别为pGsh644(56.9%)、pGsh1451(48.7%)、pGsh1938(50.1%)、pGsh2231 (46.4%)、pG4 (87.5%) (P<0.05).其中以pG4抑制效应强.结论 与传统单一的siRNA表达载体相比,串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达,为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础.
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非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株亚碲酸钾抗性水平及抗性基因簇分析
目的 了解我国部分地区非O157产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)分离株的亚碲酸钾抗性水平、抗性基因簇及其关系.方法 使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平,采用PCR方法检测亚碲酸钾抗性基因簇.结果 在所检测的39株非O157 STEC中,仅有5株菌亚碲酸钾抗性水平介于128~512 μg/ml,同时携带亚碲酸钾抗性基因簇(terABCDE).另有2株菌的亚碲酸钾抗性水平为8 μg/ml,3株菌为2 μg/ml,其余29株菌均<1 μg/ml,且这34株菌terABCDE均阴性.结论 大多数非O157 STEC分离株对亚碲酸钾敏感,在使用含亚碲酸钾的选择性培养基分离非O157 STEC时应慎重.
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耐药鲍曼不动杆菌耐药相关基因检测结果的样本聚类分析
了解一组2010年1月至12月收集于浙江某医院重症监护室(ICU)患者痰液标本中分离到的耐药鲍曼不动杆菌菌株间的亲缘关系.采用PCR方法,分析3种与耐药相关的看家基因(carO、gyrA、parC)和55种水平转移获得与β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关的基因以及12种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记,再对检测结果作样本聚类分析(Neighbour-Joining法).
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口服柔嫩梭菌对小鼠体内Tr细胞诱导作用研究
近年来发现机体缺乏微生物暴露,减少抗原刺激,可导致调节性T细胞(Tr)低表达.由此预测:选择适当的微生物刺激机体,诱导Tr增殖,是增强机体抗炎免疫的有效途径.本研究拟在小鼠模型中,明确口服柔嫩梭菌对成年小鼠体内Tr细胞数量和功能的影响,进而为过敏性疾病和结缔组织病的防治提供新思路.
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结核分枝杆菌甲硫腺苷核苷酶的原核表达及活性分析
目的 克隆、表达、鉴定结核分枝杆菌(MTB) Rv0091基因编码蛋白,分析酶活性,初步鉴定其功能.方法 构建Rv0091基因原核表达质粒,在大肠杆菌BL21trxB进行表达,经IPTG诱导,Ni2+-NTA柱纯化后获得可溶性蛋白,通过SDS-PAGE分析目的蛋白纯度、Western blot进行免疫学活性鉴定、质谱分析重组蛋白相对分子质量、酶耦联法检测酶活性,分析酶学性质.结果 成功构建Rv0091基因原核表达质粒,建立了可溶性蛋白佳表达体系,获得纯度在95%以上的可溶性蛋白,Western blot结果证实重组蛋白为结核分枝杆菌蛋白,质谱鉴定其相对分子质量与理论值基本一致,酶学活性实验证实重组蛋白能够分解底物5′-甲硫腺苷(MTA),酶学性质分析表明适缓冲液为磷酸盐缓冲液和Hepes,酶的热稳定性较差,37℃为适反应温度,适pH为10 ~ 12.结论 初步证明该重组蛋白在体外能够分解MTA,发挥甲硫腺苷核苷酶(MTAN)的作用,可能在MTB的代谢中起关键作用.
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Dectin-1内在化表达介导氧依赖性方式杀伤白色念珠菌
目的 探讨Dectin-1介导人嗜中性粒细胞以氧依赖性方式杀伤调理吞噬后白色念珠菌孢子的机制.方法 在白色念珠菌孢子作用前后,流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测人嗜中性粒细胞中Dectin-1的表达率及表达部位;并通过Dectin-1阻断试验分析嗜中性粒细胞中Dectin-1的表达与胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生及对白色念珠菌孢子杀伤的相关性.结果 在白色念珠菌孢子刺激30或60 min后,细胞内Dectin-1的表达率明显上调(0min,8.32%;30 min,16.82%;60 min,23.88%.与0min相比,P均<0.01),且Dectin-1与ROS在胞内的表达均被募集到吞噬的白色念珠菌孢子表面.Dectin-1的阻断分别与ROS峰值的抑制(R2=0.306,P<0.01)及白色念珠菌杀伤率的降低(R2=0.251,P<0.01)呈剂量依存关系.结论 Dectin-1可通过内在化的表达模式介导人嗜中性粒细胞以ROS依赖性方式杀伤调理吞噬的白色念珠菌孢子.
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引起河南省一起病毒性脑炎暴发的柯萨奇病毒B5的鉴定及其序列分析
目的 鉴定2011年引起河南省漯河地区一起病毒性脑炎(VE)暴发的病原体,并对分离的柯萨奇病毒B5(CVB5)进行基因特征分析.方法 采集漯河地区病毒性脑炎暴发期间29例患者的5份咽拭子、21份粪便和14份脑脊液,采用实时荧光RT-PCR方法分别检测总肠道病毒(PE)、EV71及CA16病毒核酸.所有标本均进行病毒分离培养,对其中5例患者的2份粪便和3份脑脊液的阳性分离产物进行VP1和5′-UTR区核苷酸序列测定及亲缘进化分析.结果 实时荧光RT-PCR结果显示,所有临床标本EV71和CA16病毒核酸检测均为阴性,咽拭子、粪便和脑脊液的PE核酸检测阳性率分别为60.0%(3/5)、61.9%(13/21)和85.7% (12/14).咽拭子、粪便和脑脊液病毒分离率分别为20.0%(1/5)、25.0%(5/21)和29.0% (4/14).VP1和5′-UTR区核苷酸序列BLAST分析及分子分型结果显示为CVB5,对其中5株分离毒株进行VP1全长基因分析显示彼此之间核苷酸同源性为97.9% ~ 99.5%.与其同源性近的毒株是2010年引起长春手足口病暴发的CVB5分离株CC10/10/Changchun,核苷酸同源性为97.1%~98.1%.与2010及2012年河南省平顶山地区的脑炎分离株COXB5/Henan/2010和03001N/HN/CHN/2011/CB5的同源性分别为89.0%~89.6%和91.8%~92.5%.VP1区遗传进化树显示此次分离株为基因型D,且与长春株成一簇.结论 导致此次病毒性脑炎暴发的病原体为肠道病毒CVB5,优势基因型的变迁可能与此次暴发相关.
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贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的初步研究
目的 了解贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的组成及其点突变.方法 监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,随机选取部分GⅡ型诺如病毒阳性标本,采用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,基因序列与国内外流行的GⅡ.4型诺如病毒进行系统进化及氨基酸位点的突变分析.结果 检测标本426份,有267份(62.68%)GⅡ型诺如病毒阳性,测序获得了9份GⅡ.4型诺如病毒VP1基因组序列,贵州省2010年流行的GⅡ.4型诺如病毒包括2个变异株(GⅡ.42008a和GⅡ.4 2008b新型变异株),亚型组闻的VP1基因的同源性为95.90% ~ 96.72%,亚型组内同源性为99.45% ~ 100%,有2个氨基酸位点易发生突变.结论 贵阳地区2010年夏秋季急性胃肠炎以诺如病毒GⅡ型为主,并且变异株具有多样性.
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贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株糖蛋白基因差异研究
目的 分析贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株的糖蛋白基因(G基因)差异,为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据.方法 以RT-PCR扩增贵州省近几年人和犬狂犬病病毒阳性脑组织标本G基因序列,对扩增产物进行序列测定后采用生物信息学软件对序列与疫苗株G基因序列进行比较分析.结果 贵州省狂犬病病毒阳性标本经RT-PCR扩增、测序与拼接后得到8株狂犬病病毒G基因全长序列,与我国常用狂犬病疫苗毒株在核苷酸和推导的氨基酸水平上的同源性分别为82.0% ~94.1%和87.6% ~ 97.5%,与人用疫苗株中的CTN株G基因核苷酸和氨基酸序列同源性高(分别为87.0% ~ 94.1%和93.7.%~97.5%),而在兽用疫苗株中与Flury株的核苷酸和氨基酸同源性高(分别为83.9% ~ 84.6%和91.1% ~ 93.0%).在所测定序列中以来自贵州省2005年的GZ09与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G同源性高,而以2010年的GZ30与人用疫苗毒株CTN和动物用疫苗株Flury株G基因同源性低.系统进化树分析显示,本次所测定的序列和9株疫苗株与狂犬病病毒基因1~7型中的基因1型代表毒株聚类在同一分支,与疫苗毒株中的CTN亲缘进化关系近,而与其他疫苗株相对较远,所测定序列中以2005年的GZ09与CTN疫苗株同源性近,而其他序列与CTN毒株的亲缘进化关系相对较远.结论 本研究从狂犬病病毒G基因水平证明贵州省狂犬病病毒流行毒株与常用的疫苗株同属狂犬病病毒基因1型,与人用疫苗株中的CTN毒株及兽用疫苗株中的Flury株差异小,且随着时间的推移贵州省狂犬病病毒流行毒株与疫苗毒株G基因的差异越来越大,该研究结果将为狂犬病疫苗研制及有效防控措施的制定提供科学依据.
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福建地区水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型分析
水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)属人类疱疹病毒α亚科,称人类疱疹病毒3型(HHV-3),是水痘和带状疱疹的病原体.水痘减毒活疫苗预防接种显著降低了儿童水痘和老年带状疱疹后遗神经痛发生率.但疫苗接种后可发生水痘样皮疹,接种的疫苗也可港伏体内引发带状疱疹.而且,疫苗接种后发生的水痘或带状疱疹可能为野毒株或疫苗株感染所致[1].利用基于ORF62单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术鉴别VZV野毒株和疫苗株[2]对水痘疫苗接种效果评价、安全性监测、质量控制等有重要意义.
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乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达
目的 构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV,旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况,为进一步深入研究提供基础资料.方法 通过RT-PCR扩增目的基因,酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGFP-C1-JEV重组表达载体,利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞,观察绿色荧光标记蛋白表达情况,同时提取细胞RNA,检查目的基因转录表达情况,并利用免疫组化和Western blot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性.结果 重组质粒pEGFP-C1-JEV构建成功,转染至BHK-21细胞中,绿色荧光标记蛋白正常表达,表达率较高,RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达,表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中,且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合.结论 pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达,且对细胞生长和形态不产生影响,真核表达抗原具有良好的抗原性,本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料.
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HBV-ACLF患者外周血和肝脏NK细胞的表达频率及功能与肝损伤的相关性
目的 探讨HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血和肝组织自然杀伤(NK)细胞的表达频率及功能与肝损伤的相关性.方法 利用多色流式技术检测14例HBV-ACLF患者和15例HBV-CHB(慢性乙型肝炎)患者外周血NK细胞(CD3-CD56+)的表达频率和NK细胞表面CD107a的表达,胞内细胞因子染色技术检测NK细胞分泌IFN-γ的水平.收集20例HBV-ACLF患者、10例轻度CHB患者肝组织穿刺标本,利用免疫组织化学双染技术检测肝组织中CD3和CD57抗原的表达.分析轻度CHB和HBV-ACLF患者肝脏NK细胞的表达频率及与肝损伤程度(TBIL水平)的相关性.结果 HBV-ACLF患者与轻度CHB患者外周血NK细胞的表达频率和IFN-γ的表达差异均无统计学意义(12.7% ±5.3% vs 9.6%±3.3%和4.52% ±2.52% vs 9.06%±7.6%,P均>0.05),HBV-ACLF患者外周血CD107a表达(NK细胞的杀伤活性)要显著强于轻度CHB患者(52.1%±18.9% vs 30.9% ±12.4%,P<0.05).HBV-ACLF患者肝组织中CD57+NK细胞的表达频率显著高于轻度CHB患者(95.1±21.3/低倍镜视野 vs 9.5 ±10.6/低倍镜视野,P<0.01).肝脏CD57+NK细胞的表达频率与TBIL水平显著正相关,相关系数为0.936.结论 外周血NK细胞杀伤活性显著增强和肝脏中CD57+NK细胞大量募集可能是导致HBV-ACLF免疫性肝损伤加剧,肝细胞大量凋亡和坏死的重要因素.
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Graves病患者外周血单个核细胞TIM-3、TIM-1及其相关基因mRNA的表达与临床意义
目的 研究TIM-3、TIM-1、T-bet、GATA-3、IFN-γ、IL-4和Galectin-9基因在Graves病(GD)患者外周血的表达及其临床意义.方法 通过实时定量RT-PCR分别检测70例Graves病患者及22例健康正常人外周血单个核细胞(PBMC)中TIM-3、TIM-1及其相关基因mRNA的表达情况,并分析TIM-3、TIM-1与其之间的关系.结果 GD患者PBMC中TIM-3、TIM-1 mRNA的表达异常增高,其突眼GD组TIM-3 mRNA的表达要高于无突眼GD组,而TIM-1 mRNA的表达却无明显差异.GD初诊患者,TIM-3 mRNA的表达要显著高于复发组,但TIM-1 mRNA的表达却恰恰相反.GD缓解患者,TIM-3 mRNA的表达与健康对照组差异无统计意义,TIM-1 mRNA的表达虽显著下降,但仍高于正常对照组.结论 TIM-3、TIM-1可能参与了GD的发生、发展和晚期转归,TIM-3或(和)TIM-1有可能为治疗GD提供一个新的靶点.
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非小细胞肺癌患者外周血Foxp3+调节性T细胞和Th17的检测与临床意义
目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血Foxp3+调节性T细胞(TrFoxp3+)、Th17细胞、TrFoxp3+/Th17及相关细胞因子水平,探讨TrFoxp3+、Th17细胞在肺癌发生发展中的相互作用以及是否存在TrFoxp3+/Th17失衡.方法 采用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测18例健康人、26例NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞占CD4+T细胞的比例,以及转化生长因子-β(TGF-β)、IL-17、IL-23的表达水平.结果 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例、TrFoxp3+/Th17高于健康对照组(P<0.05).NSCLC患者外周血TrFoxp3+与Th17细胞成正向直线相关的关系(r=0.81,P<0.05).不同TNM分期肺癌患者外周血TrFoxp3+/Th17:Ⅳ期肺癌患者高于Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期肺癌患者(P<0.05).NSCLC患者血清中TGF-β、IL-17、IL-23水平高于健康对照组,TGF-β在晚期组/健康对照组的比值高于早中期组/健康对照组的比值(P<0.05).结论 NSCLC患者外周血中TrFoxp3+、Th17细胞比例及TrFoxp3+/Th17较健康人升高,且晚期患者TrFoxp3+/Th17明显升高,提示NSCLC患者可能存在TrFoxp3+/Th17比例失衡,导致肿瘤患者免疫抑制,促进肿瘤发生、发展,可能与二者的细胞因子调节有关.
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不成熟免疫抑制CD14+HLA-DRlow/-单核细胞在原发性肝细胞癌的临床意义
原发性肝细胞癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,发病率日益增高,且预后较差,生存率低.大部分肝癌患者由于转移或者肝功能恶化不适合手术治疗,非手术治疗如化疗、介入治疗等虽然能够减少肿瘤负荷,提高生存率,但肿瘤复发却很常见.近年研究表明,通过抑制免疫效应细胞对肿瘤发生免疫应答,在促进肿瘤的发生、发展中起一定的作用.
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金黄色葡萄球菌酚溶调制肽(PSM)的致病作用
金黄色葡萄球菌是引起人类感染性疾病的主要致病菌之一.随着抗生素的广泛应用,葡萄球菌对抗生素的耐药已成为临床治疗感染性疾病的重大难题.近年来,一种具有强致病力特点的社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)暴发流行,严重威胁着人类的健康,给临床治疗带来巨大挑战[1-3].葡萄球菌可以合成分泌多种毒素,如TSST-1、ETA/ETB、SEA-SEE和SEG-SEQ、α-毒素、β-毒素、δ-毒素γ-毒素、杀白细胞素(Panton-valentine leukocidin,PVL)等.细菌毒素在细菌致病过程中发挥着重要作用,过去认为PVL是导致CA-MRSA具有强致病力的决定因子[4-5].但是当将PVL等位基因从致病菌中敲除后,研究发现细菌的致病力并无明显改变,因此PVL的决定作用受到质疑[5-6].
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自然杀伤细胞与结核感染的研究进展
肺结核(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)引起的威胁人类健康的重大传染疾病,每年大约有140万人死于肺结核[1].近年来,耐药株的出现并在世界范围内传播,导致肺结核的治疗周期延长,风险大且治愈率低,这无疑为肺结核的防治增加了新的威胁.因此,寻找新的肺结核的治疗策略成为了近年来的研究热点,其中以固有免疫为基础的预防和治疗,尤显重要.
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异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌检测方法的临床应用评价
近年来,随着甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)感染率的上升和万古霉素的广泛使用,临床上出现了万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌,包括万古霉素中介金黄色葡萄球菌(vancomycinintermediate Staphylococcus aureus,VISA)和异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,hVISA).2006年,美国临床和实验室标准协会(CLSI,原NCCLS)将万古霉素对金黄色葡萄球菌的折点进行了更新,但并未对hVISA做出明确的定义,也未推荐确认hVISA的标准方法[1].目前,hVISA的准确检测仍存在困难,其分离率和临床意义尚不明确.为此,本研究对国际上常用的3种检测方法进行比较分析,并评价它们的可靠性和临床应用价值,旨在寻找一种适用于临床实验室检测hVISA的简便易行的方法.
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新等位基因HLA-B*54∶26的序列鉴定
目的 鉴定一个中国汉族人群中发现的人类白细胞抗原(human leukocyte antigens,HLA)B位点新等位基因.方法 应用双链直接测序分型技术进行中华骨髓库供者常规HLA分型,发现一例HLA-B位点无全相配结果,采用等位基因分离DNA测序分型方法进行新等位基因序列鉴定.结果 确定一个等位基因为B*15∶05∶01,另一个为HLA-B*54组的一个新基因序列,与同源性高的HLA-B* 54∶01∶01相比,559、560位碱基AC→GA,密码子163 ACG→GAG,编码氨基酸T→E.结论 鉴定为一个HLA-B新等位基因,2012年2月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*54∶26,GenBank注册号为JN209963.
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快速检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因mPCR-SSCP建立及应用
目的 建立快速检测结核分枝杆菌异烟肼(INH)和利福平(RFP)耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变的多重聚合酶链反应-单链构象多态性(multi PCR-single strand conformational polymorphism analysis,mPCR-SSCP)方法.方法 药敏试验检测134株结核分枝杆菌临床菌株对INH和RFP的耐药性.设计结核分枝杆菌INH和RFP耐药相关katG、inhA和rpoB基因PCR引物,建立mPCR-SSCP技术检测上述菌株katG、inhA和rpoB基因的突变,同时采用PCR直接测序技术(PCR-DS)检测上述基因片段突变情况,并对上述3种方法检测结果进行分析和比较.结果 134株临床菌株均含有katG、inhA和rpoB基因,其中42株(31.3%)对INH耐药、45株(33.6%)对RFP耐药.mPCR-SSCP和PCR-DS检测结果显示,92株INH敏感菌株katG和inhA基因均未发生突变,检测特异性均为100%;89株RFP敏感菌株中rpoB基因分别有2株和1株检测出突变,检测特异性分别为97.8%和98.9%;42株INH耐药菌株中分别有33株和36株katG和/或inhA基因突变,检测灵敏度分别为78.6%和85.7%;45株RFP耐药菌株中rpoB基因分别有41株和43株发生突变,检测灵敏度分别为91.1%和95.6%.结论 本研究建立的mPCR-SSCP能快速、简便、特异,并有一定的敏感性检测结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药相关基因katG、inhA和rpoB突变,具有临床应用前景.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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