中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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树突状细胞固有胆碱能系统的研究
近年在淋巴细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞中相继发现非神经元性胆碱能系统活性物质,如:烟碱样乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR), 胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE),从而提出淋巴细胞"固有胆碱能系统"的概念.
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蛋白激酶C和激活蛋白-1信号级联对哮喘大鼠IL-5基因转录的调控作用
目的探讨蛋白激酶C(PKC)和激活蛋白-1(AP-1)信号转导级联在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠外周血T淋巴细胞白细胞介素5(IL-5)基因转录中的作用. 方法建立大鼠哮喘模型.从每只大鼠外周血中分离T淋巴细胞,并随机分为空白对照组、PKC激动剂12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)组、PMA和AP-1顺式诱骗元件(CD ODNs)组及PMA和AP-1突变顺式诱骗元件(突变CD ODNs)组进行培养.两种CD ODNs分别经脂质体转染至后两组细胞.用电泳迁移率改变分析(EMSA)检测AP-1活化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-5 mRNA表达. 结果 (1)PMA组的AP-1活化(86 777.22±2257.79)和IL-5 mRNA表达(0.8100±0.0316)增加,与空白对照组(分别为20 708.54±968.04和0.3050±0.0129)相比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)PMA和AP-1顺式诱骗元件组的AP-1活化(23 475.90±757.99)被抑制,IL-5 mRNA表达(0.3450±0.0129)亦减少,与PMA组相比较,其差异有统计学意义(P<0.01).PMA和AP-1突变顺式诱骗元件组的AP-1活化(86 955.71±1600.38)和IL-5 mRNA表达(0.8175±0.0222)与PMA组相比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)T淋巴细胞AP-1活化和IL-5 mRNA表达呈显著正相关(P<0.01). 结论哮喘T淋巴细胞PKC活化后促进IL-5基因转录的生物信号可能是通过AP-1进行转导,提示T淋巴细胞PKC/AP-1信号转导级联的激活可能是哮喘发病机制之一.
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FasL对CD28基因启动子活性的抑制作用
目的探讨FasL对CD28基因启动子活性的影响,为研究凋亡信号在免疫衰老中的作用提供资料. 方法采用MTT法和annexinⅤ-FITC染色测定细胞凋亡,Northern blot检测CD28 mRNA的表达水平,构建CD28基因上游非编码区序列的报告基因载体,并瞬时转染Jurkat E6-1细胞后,用Luciferase检测报告基因启动子的活性. 结果 FasL在Jurkat E6-1细胞介导的凋亡可使CD28 mRNA水平降低.CD28启动子的有效序列在上游-400 bp的范围内,并且FasL介导的凋亡信号可明显降低CD28启动子活性. 结论 FasL介导的凋亡信号是CD28基因启动子活性降低的重要原因.
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IL-5反义寡核苷酸对哮喘大鼠CD4+ T淋巴细胞IL-5 mRNA和蛋白质表达的影响
IL-5是哮喘中的重要调节因子.因此,阻断IL-5的合成对治疗哮喘有着积极的作用.国外研究表明[1],反义寡核苷酸技术可以较好地在转录水平阻断IL-5的表达.而且,大部分IL-5 mRNA及IL-5由CD4+ T淋巴细胞表达.由于反义寡核苷酸作用mRNA不同部位,其阻断效果可能不同.因此,我们设计了IL-5 mRNA上起始密码处、外显子-2和终止密码处的反义寡核苷酸,利用脂质体导入哮喘大鼠CD4+ T淋巴细胞,观察比较反义寡核苷酸组与空白对照组、反义寡核苷酸各组间对IL-5 mRNA及蛋白质的抑制效率.
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AChRα211的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用
目的在毕赤酵母(P. pastoris)中分泌表达AChRα211,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 方法以质粒pUC-AChRα211为模板,PCR扩增人AChRα211 DNA 片段,插入真核表达载体pPIC9K中.重组质粒转入P. pastoris GS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα211,用Sepharose Q离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化.Western blot 和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr-Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用. 结果双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα211 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中.重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-AChRα211经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα211,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95%纯AChRα211,并制备成免疫吸附剂.Western blot 和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性.免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb. 结论在P. pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα211,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα211-Sepharose,可清除肌无力患者血清中的AChRAb.
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高效液相色谱法分析分枝菌酸鉴定分枝杆菌
分枝杆菌菌种的鉴定不仅在流行病学上十分重要,在临床诊断和治疗上均有重要意义.目前分枝杆菌菌种的传统鉴定方法复杂、费时,需要40~60 d,影响临床诊断和治疗.PCR方法结果假阳性高.近年来,美国的一些临床实验室采用高效液相色谱法分析分枝菌酸(Mycolic acid, MA)鉴定分枝杆菌.
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远源链球菌可能与细胞分裂相关的新基因ftsK的克隆与序列分析
目的克隆并分析远源链球菌(S.sobrinus)可能与细胞分裂相关的新基因ftsK. 方法采用"genome walking system(基因组步移系统)"克隆远源链球菌可能与细胞分裂相关的新基因ftsK,与GenBank进行同源性分析,并用蛋白质分析软件分析ftsK的氨基酸序列. 结果所克隆的新基因由2100个碱基组成,编码699个氨基酸.用GOR4软件对S.sobrinus ftsK的二级结构预测,显示其主要由α螺旋和无规卷曲组成,另有小部分伸展线,但无β折叠,在其N末端有一跨膜区.对氨基酸序列进行保守区分析,氨基酸335~530序列具有ftsK/SpoⅢE保守序列,同源性分析,除N末端226个氨基酸外,其余氨基酸序列与大肠杆菌细胞分裂蛋白FtsK的C末端2/3序列同源,217~635氨基酸与枯草杆菌SpoⅢE的C末端同源. 结论通过"基因组步移系统"克隆出的新基因可能与远源链球菌细胞分裂蛋白FtsK相关.
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问号钩端螺旋体rLTB/rCTB-LipL32/1免疫保护作用及野生株LipL32基因表达和患者抗体检测
目的构建LTB-LipL32/1和CTB-LipL32/1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用,了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率. 方法采用常规分子生物学技术构建LTB-LipL32/1和CTB-LipL32/1融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLTB-LipL32/1及rCTB-LipL32/1表达情况.分别采用Western blot和GM1-ELISA检测rLTB-LipL32/1及rCTB-LipL32/1的免疫反应性和佐剂活性.采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况.采用ELISA检测228例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体.采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用. 结果与报道的相关序列比较,LTB-LipL32/1和CTB-LipL32/1融合基因核苷酸序列相似性分别为99.12%~99.71%和98.54%~99.42%,氨基酸序列相似性分别为97.58%~99.63%和96.77%~99.63%.rLTB-LipL32/1和rCTB-LipL32/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,并主要以包涵体形式存在.rLTB-LipL32/1和rCTB-LipL32/1均分别能与LipL32/1兔抗血清和牛GM1结合.97.9%(95/97)问号钩体野生株含有LipL32基因,95.9%(93/97)问号钩体野生株与rLipL32/1和rLipL32/2兔抗血清的MAT结果阳性.97.4%(222/228)和94.7%(216/228)的病人血清rLipL32/1和rLipL32/2抗体阳性.rLTB-LipL32/1、rCTB-LipL32/1和rLipL32/1豚鼠保护率分别为75.0%、75.0%~87.5%、50.0%~62.5%. 结论成功构建了LTB-LipL32/1和CTB-LipL32/1融合基因及其原核表达系统.rLTB-LipL32/1和rCTB-LipL32/1融合蛋白有良好的抗原性和佐剂活性及一定的免疫保护作用,具有成为问号钩体属特异性疫苗的良好前景.LipL32/1是不同问号钩体血清群中广泛存在、序列保守、高频率表达的基因.
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放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌内高效介导位点特异性重组
目的证明放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌细胞内介导高效的位点特异性重组. 方法在大肠杆菌内构建分子内重组分析系统.质粒pBZP含有方向相同的attB和attP位点,分别位于lacZ基因的两侧.将pBZP电击导入含有sre基因的大肠杆菌细胞. 结果重组的发生导致lacZ基因的切除,使含有X-Gal成分的培养基上细菌菌落从蓝色变成白色.整合后DNA经酶切、PCR和DNA测序证实.发生100%重组率的attB和attP小片段分别是50 bp和47 bp. 结论在大肠杆菌宿主环境中放线菌噬菌体重组酶Sre高效催化位点特异性重组.本分子内重组分析系统是一个简便而有效的方法.
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北京市褐家鼠中汉坦病毒的分离和初步鉴定
肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是由鼠类传播的自然疫源性疾病.现已证实我国主要存在汉滩型(HTN)和汉城型(SEO)汉坦病毒.近年来,北京市HFRS发病出现不断上升趋势,流行形势比较严峻.近年的流行病学研究证实北京地区存在鼠间SEO型汉坦病毒感染[1-3].为了解近期北京地区HFRS流行毒株的型别和特点,从病原学角度阐明疫情原因,我们在对北京地区宿主动物进行汉坦病毒分子流行病学调查研究的基础上,进行了病毒分离和初步鉴定.
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流感病毒非结构蛋白对TBK-1的抑制作用
目的流感病毒非结构蛋白1(nonstructural protein 1, NS1)抑制干扰素调节因子(interferon regulatory factors, IRF) 3的机制未明,TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1, TBK-1)能使IRF-3活化,研究NS1是否对TBK-1有抑制作用. 方法亚克隆IRF-3、NS1和TBK-1至pcDNA3.1-flag构建flag-IRF-3、flag-NS1和flag-TBK-1质粒;用TBK-1对TBK-1+NS1以及IRF-3+TBK-1对IRF-3+TBK-1+NS1两组实验,分别共转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,鉴定IRF-3、NS1和TBK-1的表达,观测NS1对TBK-1活化IRF-3的抑制作用;荧光素酶功能分析方法观测NS1对TBK-1诱导的干扰素β(IFN-β)启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响. 结果 IRF-3、NS1和TBK-1均有高表达.TBK-1能使IRF-3活化,Western blot分析显示:TBK-1转染的细胞出现迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型,NS1共转染可使IRF-3 Ⅲ和Ⅳ型几乎消失;荧光素酶功能分析显示,NS1能抑制TBK-1活化内源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子活性,约为对照组的1/4,TBK-1+IRF-3共转染可使IFN-β启动子活性增高近1000倍,NS1可使TBK-1活化外源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子的活性降至对照组的约1/2至1/3. 结论流感病毒NS1可抑制TBK-1所致的IRF-3活化,功能分析提供了NS1显著抑制TBK-1诱导的IFN-β启动子活性的证据,首次阐明了流感病毒NS1抑制IRF-3因而抑制干扰素β产生的机制之一是通过TBK-1信号通路所取得,为新的抗病毒治疗及新药开发战略提供了基础.
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TRAIL诱导HBV转染肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用及机制研究
目的研究肝癌细胞BEL-7402感染HBV前后,TRAIL诱导其凋亡的敏感度变化及作用机制. 方法构建含1.1倍HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3/1.1HBV,转染人肝癌细胞BEL-7402,G418稳定筛选,建立HBV adr亚型体外转染的细胞模型.原位末端标记(TUNEL)检测 TRAIL诱导的凋亡反应,并通过设立TRAIL联合其可溶性受体sDR5(sDR5与TRAIL结合后,可特异性阻断TRAIL诱导凋亡),以证实该凋亡是由TRAIL特异性诱导的.琼脂糖凝胶电泳(DNA ladder)检测染色体DNA的断裂情况.流式细胞术、半定量逆转录聚合酶链反应检测HBV感染前后细胞表面TRAIL各受体的表达.双荧光素酶报告基因系统检测抑制凋亡的核转录因子NF-κB的活性. 结果成功构建了包含HBV全基因组的真核表达载体pcDNA3/1.1HBV,转染BEL-7402、经G418稳定筛选后得到HBV adr亚型转染的细胞模型BEL-7402/1.1HBV.TRAIL诱导BEL-7402、BEL-7402/pcDNA3及BEL-7402/1.1HBV的凋亡率分别为30.5%、29.8%和76%(P<0.01);经sDR5特异性阻断后,凋亡率分别为0.9%、0.8%和0.9%,证明凋亡是由TRAIL特异性诱导的.TRAIL作用24 h后,琼脂糖凝胶电泳可见BEL-7402/1.1HBV较BEL-7402、BEL-7402/pcDNA3染色体DNA断裂的现象更为明显.无论RNA水平还是蛋白水平,TRAIL受体DR4、DR5、DCR1、DCR2的表达在BEL-7402、BEL-7402/pcDNA3和BEL-7402/1.1HBV差异无统计学意义(P>0.05).BEL-7402/1.1HBV与BEL-7402、BEL-7402/pcDNA3相比,抑制凋亡基因表达的转录因子NF-κB的活性显著下调(P<0.05). 结论 HBV 转染可以促进TRAIL诱导的细胞凋亡,其机制与受体表达水平无关,主要与NF-κB活性降低有关.
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HBV感染对趋化因子CCL20表达的影响及其意义
目的研究HBV不同感染状态对CCL20表达水平的影响,探讨CCL20在乙肝病毒感染中的作用. 方法通过基因体外转染技术,建立HBV不同感染状态的肝细胞模型;以内对照定量RT-PCR检测HBV不同感染状态下CCL20的表达水平. 结果 HBV不同感染状态下CCL20的表达水平不同,HBV未感染肝细胞CCL20表达水平每106细胞为(2.65±0.02) pg/10 μl,HBV短暂感染肝细胞CCL20的表达水平每106细胞为(3.43±0.02) pg/10 μl,而HBV持续感染肝细胞CCL20的表达水平每106细胞为(1.22±0.04) pg/10 μl,上述三种不同感染状态下肝细胞表达CCL20的水平差异有统计学意义,表现为HBV短暂感染肝细胞>未感染肝细胞>HBV持续性感染肝细胞(P<0.05).在HBV同一感染状态下,CCL20的表达水平与HBV感染时间、细胞的培养时间、病毒载量等因素未见显著性相关;上述细胞经乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)活化后,相应细胞CCL20表达均明显增加(P<0.05),但并不改变CCL20在各细胞中的表达格局. 结论 HBV的不同感染状态影响了CCL20的表达.
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乙型肝炎病毒基因组前-前-S和前-X区基因分布的研究
目的研究不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S和前-X区核苷酸和氨基酸序列分布. 方法应用DNAstar软件中的MegAlign程序分析GenBank登记的35株和3株由本室测定的不同基因型HBV全序列中前-前-S和前-X区基因分布情况,并用Blast软件对GenBank中598株HBV全基因组序列进行前-前-S和前-X区的核苷酸和氨基酸相似性分析. 结果除D基因型外,在各型HBV基因组中均存在前-前-S区核苷酸序列,但仅在C、F和H型HBV基因组中存在前-前-S区开放读码框架(ORF).但前-X区核苷酸序列及其ORF仅见于C基因型HBV.在GenBank登记的598株不同基因型HBV中,与推导的前-前-S区相似氨基酸序列有36株,而与推导的前-X区相似的氨基酸序列有47株. 结论前-前-S区序列存在于除D基因型以外的所有HBV基因型,而前-X区基因仅存在于C基因型HBV基因组中.
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FK506和CTLA4Ig转基因腺病毒在耐受诱导中的作用
目的评价Tacrolimus(FK506)和细胞毒性T淋巴相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)转基因腺病毒(AdCTLA4Ig)在耐受诱导中的作用. 方法按照是否接受FK506处理、心脏移植后有无骨髓细胞输注(bone marrow transfusion, BMT)、术后有无AdCTLA4Ig输注及移植心脏来源,将实验动物随机分为8组,观察各组心脏移植物的存活时间,于术后第30天测定其中4组的混合淋巴细胞反应的特异性和非特异性抑制率以及其中4组的异基因嵌合水平. 结果无处理对照组移植心脏存活时间为(6.5±0.55) d;AdCTLA4Ig单一处理组及联合BMT组移植心脏存活时间分别为(37.5±2.88) d和(39.2±3.31) d,与无处理组比较,差异有统计学意义(P<0.05),当把FK506处理加入到上述2组的处理方案中时,移植心脏存活时间缩短(P<0.05).术后30 d混合淋巴细胞反应(MLR)结果显示,AdCTLA4Ig+BMT组和AdCTLA4Ig组的特异性抑制率明显高于FK506+AdCTLA4Ig+BMT组和FK506+AdCTLA4Ig组(P<0.05),而非特异性抑制率并没有差别.术后30 d的异基因嵌合水平检测显示,BMT+AdCTLA4Ig组的胸腺和外周血嵌合水平高于AdlacZ腺病毒组、无处理对照组和AdCTLA4Ig组(P<0.05). 结论在耐受诱导过程中,当FK506和AdCTLA4Ig联合应用时,前者会对后者的作用产生拮抗.AdCTLA4Ig延长移植物存活时间的作用可能与宏嵌合无关.
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磷酸二酯酶抑制剂Rolipram对NOD小鼠免疫应答的影响
目的探讨磷酸二酯酶Ⅳ型抑制剂Rolipram对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠免疫应答的影响机制,为临床通过免疫干预治疗糖尿病提供理论依据. 方法动物模型分为Rolipram干预组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,分别经DNA ladder、免疫组化检测T细胞凋亡;流式细胞、RT-PCR测定T细胞亚群的漂移. 结果与PBS对照组比较,Rolipram干预组外周T淋巴细胞凋亡率增加(Bcl-2表达减少:0.3439±0.0739 vs 0.7361±0.0839,t=2.682,P<0.01;Bax表达增加:0.7380±0.1372 vs 0.3227±0.0428,t=2.679,P<0.01;同时DNA ladder也呈典型的200 bp及其倍数大小的条带);CD4+ TH1型淋巴细胞减少(IL-2 A260/β-actin A260:0.033±0.001 vs 0.287±0.006,t=2.701,P<0.01)而CD4+ TH2型细胞增加(IL-10 A260/β-actin A260:0.323±0.004 vs 0.072±0.003,t=2.135,P<0.05);胰岛炎症积分明显减少(Z=-1.882,P<0.01). 结论磷酸二酯酶Ⅳ型抑制剂Rolipram能引起T细胞功能抑制,减轻NOD小鼠自身免疫反应程度,保护胰岛β细胞功能,其机制可能是通过T细胞亚群由TH1型向TH2型定向漂移实现的.
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BCG-PSN通过抑制哮喘小鼠NF-κB影响BALF中细胞因子的水平
核因子NF-κB (Nuclear factor kappa B)是一个具有广泛生物学活性的核转录因子,可参与许多炎症的表达调控,是与支气管哮喘及气道炎症密切相关的因子之一.将28只6周龄BALB/c小鼠(山东大学医学院实验动物室)随机分为4组,每组7只.对照组:隔日腹腔内注射生理盐水(NS)0.03 ml, 第14天、28天、35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;BCG-PSN (卡介苗多糖核酸注射液,BCG-Polysaccharide nucleic acid)6周龄组:隔日腹部皮下注射BCG-PSN(商品名斯奇康1 ml/安瓿,长沙九芝堂公司产品)0.03 ml,在第14、28和35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;OVA(卵蛋白,aerosolization)组:隔日腹腔内注射NS 0.03 ml,建立哮喘模型;BCG-PSN 6周龄+OVA组:6周龄鼠,隔日腹部皮下注射BCG-PSN 0.03 ml,建立哮喘模型.
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中药牛膝提取物抗肿瘤活性的初步研究
目的探讨中药牛膝提取物的抗肿瘤活性及其作用机制. 方法 MTT法检测细胞抑制率;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况;分别用生物化学法和ELISA法检测巨噬细胞因子TNF-α和IL-6的表达;用RT-PCR法检测巨噬细胞因子IL-6 mRNA表达. 结果牛膝提取物在体外对两种肿瘤细胞株的增殖具有明显抑制作用,量效、时效关系显著(P<0.01),细胞周期停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡可能是其发生作用的机制之一;牛膝提取物虽然在体外不能促进小鼠脾细胞的生长增殖,但对巨噬细胞的吞噬功能却有较强的刺激作用(P<0.01),并可促进细胞因子TNF-α和IL-6的产生以及IL-6 mRNA的表达. 结论该提取物具有抗肿瘤作用,不仅对免疫功能没有抑制作用,而且可以通过延缓肿瘤细胞周期、诱导凋亡、增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及分泌细胞因子如TNF-α、IL-6等参与其抗肿瘤机制.
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80株解脲脲原体的药敏及耐药机制分析
目的分析解脲脲原体(Ureaplasma urealyticm, Uu)的耐药情况,并探讨Uu可能的耐药机制. 方法对80株临床上分离到的Uu进行了药敏分析、PCR生物分群、tetM基因的检测和PCR扩增喹诺酮类药物耐药区(QRDR,gyrA、gyrB、parC及parE)基因并分析其核苷酸序列. 结果 80株临床分离的Uu有66份为生物1群,占82.5%;对所测的9种药物全敏感的Uu比例仅为10%(8/80);7株耐四环素Uu中有3株出现了tetM基因阳性条带;对6株临床分离Uu的QRDR(gyrA、gyrB、parC及parE)进行了突变分析,未发现环丙沙星、氧氟沙星均敏感Uu株有gyrA、gyrB、parC及parE突变,但耐喹诺酮Uu株有gyrA、parC和parE基因的点突变,并导致其编码的氨基酸改变.在这些QRDR的改变中,gyrA 137C→A和parC基因100C→T的误义突变导致其编码的相应氨基酸的改变,但parC基因的225G→A和parE基因40G→A,41T→C的误义突变导致其编码的相应氨基酸的改变.对Uu耐药率及生物群分型结果进行分析发现,虽然两群Uu的耐药率不完全一样,但差异无统计学意义(P均>0.05). 结论 Uu QRDR的改变是导致耐喹诺酮类药物的原因,单独parE基因突变引起其酶蛋白的氨基酸改变也可导致Uu耐喹诺酮类药物.
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铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究
铜绿假单胞菌是引起医院内感染的主要病原菌.亚胺培南(IMP)作为革兰阴性菌的有效的抗生素,随着青霉烯类抗生素的广泛应用,铜绿假单胞菌的耐药菌株逐渐增多,给临床治疗带来困难.这与铜绿假单胞菌的主动外排机制以及特异性膜蛋白OprD2的缺失有关,能够水解碳青霉烯类抗生素的新β-内酰胺酶--金属酶的产生, 对碳青霉烯类抗生素的使用造成了更大威胁.本研究分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌产生金属酶合并外膜蛋白OprD2的缺失.
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北京发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌
目的研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)及质粒型AmpC 酶菌株的比率及其基因型. 方法收集北京两家教学医院2001-2002年产ESBL且对头孢西叮耐药的59株大肠埃希菌和21株肺炎克雷伯菌,采用等电聚焦电泳测定β-内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性,并用碱裂解法提取质粒;采用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型.脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)确定耐药菌株的亲缘关系. 结果北京两家医院ESBL中质粒型AmpC 酶的发生率,大肠埃希菌分别为0和2%,肺炎克雷伯菌则分别为9.7%和17.1%.1株大肠埃希菌及9株肺炎克雷伯菌产生DHA-1型质粒AmpC酶,同时也产CTX-3型(6株)或CTX-M-14(1株)或SHV-12(3株)型ESBL.10株中,3株肺炎克雷伯菌可将头孢西叮耐药性传给受体菌.这10株菌均至少携带1个约33~36 kb的大质粒,未发现质粒的传播.PFGE发现这10株菌来自不同的克隆株. 结论北京地区发现同时产DHA-1质粒AmpC型及CTX-M型ESBL的肺炎克雷伯菌,它们来自不同的克隆.
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20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析
目的明确临床分离的20株阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因存在状况. 方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析氨基糖苷类修饰酶基因型. 结果该20株菌呈现多重耐药,对亚胺培南和美罗培南均敏感,对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药,对头孢吡肟及4种氨基糖苷类抗生素阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为25.0%、60.0%、85.0%、90.0%和90.0%,其余9种的耐药率在80.0%~95.0%之间.19株(95.0%)检出氨基糖苷类修饰酶基因;aac(6′)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ基因的阳性率分别为80.0%、50.0%、40.0%、5.0%和5.0%;而aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ和aac(6′)-Ⅱ基因均阴性. 结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率很高.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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1998 | 01 02 03 04 05 06 |