中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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趋化因子及其受体CXCL12/CXCR4在人前列腺癌转移机制中的作用
目的 探讨趋化因子及其受体CXCL12/CXCR4在人前列腺癌转移机制中的作用.方法 免疫组织化学技术分析CXCL12/CXCR4蛋白在18例前列腺癌组织中的表达;免疫细胞化学技术分析CXCL12/CXCR4蛋白在人前列腺癌细胞株PC3、DU145和LNCap中的表达;迁移、侵袭试验分析外源性CXCL12对PC3、DU145和LNCap体外侵袭能力的调节作用.结果 18例人前列腺癌组织中,17例不同强度表达CXCR4蛋白,1例阴性表达,同时除1例标本弱表达CXCL12蛋白外,其余不表达CXCL12蛋白.3种前列腺癌细胞株均表达CXCR4蛋白,不表达CXCL12蛋白.外源性CXCLl2可明显促进PC3、DU145及LNCap的体外迁移、侵袭,以抗CXCL12或CXCR4抗体预处理PC3、LNCap细胞可以拮抗CXCL12对它们的促迁移、侵袭作用.结论 人前列腺癌组织表达CXCR4蛋白,CXCL12/CXCR4信号通路可能参与前列腺癌的侵袭、转移.
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TH线性肽对人肝素酶B细胞表位多抗原肽的免疫增强作用
目的 探讨提高人肝素酶B细胞表位肽应答效应的免疫策略.方法 预测人肝素酶蛋白B细胞表位,采用8分支多抗原肽(MAP)结构合成多肽,利用ELISA鉴定合成的MAP与肝素酶全蛋白抗体的结合反应.以MAP联合或不联合通用型TH表位线性肽免疫C57BL/6小鼠,动态检测免疫血清效价.结果 软件预测得到3个肝素酶蛋白B细胞表位,即大亚基的第1～15位(MAP1)、第279～293位(MAP2)及175～189位(MAP3)氨基酸序列.ELISA显示,MAP2多肽与全蛋白抗体的结合力明显强于MAP1及MAP3,MAP与TH线性肽联合免疫产生的抗体滴度明显高于单纯MAP免疫组.结论 生物信息学预测得到的3个表位肽均为肝素酶蛋白的B细胞优势表位,T辅助表位线性肽能显著增强MAP的免疫效应.
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B群链球菌42KD蛋白提取及免疫学效果初步探讨
目的 寻求一种以B群链球菌(group B Streptococcus,GBS)菌体免疫原性蛋白为基础的疫苗.方法 以一步层析法从GBSⅢ型菌32325株中获得42KD菌体蛋白,以42KD蛋白不同剂量和针次免疫NIH成年小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体滴度.选择佳免疫条件免疫小鼠,然后腹腔攻击GBSⅢ型32325菌株,观察主动免疫和被动免疫保护效果.结果 目的 蛋白的相对分子质量(Mr)为42.33×103,等电点为6.6,并初步鉴定为糖蛋白且为分泌性蛋白质.不同剂量免疫均能诱导小鼠产生相应IgG抗体,其效价高可达1:24576,说明42KD蛋白具有很好的免疫原性.试验组成年小鼠的免疫保护指数为100,乳鼠的免疫保护指数为40.结论 42KD蛋白对成年小鼠和乳鼠均诱导保护免疫.不同剂量免疫保护试验结果说明:在一定范围内,免疫剂量与血清IgG抗体应答水平呈正相关;小鼠血清IgG抗体滴度与保护力正相关.
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重组结核抗原痘苗病毒免疫次数和免疫途径对免疫原性的影响
卡介苗(BCG)是目前用于预防结核病的惟一疫苗,但其对成年人结核病的预防效果不理想.本研究前期工作已构建了5种不同类型的表达结核杆菌特异抗原的重组痘苗病毒,其免疫小鼠2次后均可激发针对结核杆菌抗原的特异性细胞免疫.然而,重组安卡拉痘苗病毒(MVA)是一活的病毒载体[1],此重组病毒是否能多次免疫动物以及多次免疫动物后能否产生更有效的免疫反应尚不清楚.
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准噶尔盆地鼠疫耶尔森菌的基因组型分析
目的 对我国新发现的准噶尔盆地大沙鼠鼠疫自然疫源地的鼠疫菌株进行基因组差异性区段的比较分析,确定该鼠疫疫源地鼠疫菌株的基因组类型.方法 按常规方法提取鼠疫菌染色体DNA,依据已证实的鼠疫菌22个差异性区段(DFR)设计引物,采用PCR技术检测鼠疫菌基因组差异性基因片段的构成.结果 准噶尔盆地鼠疫菌株的差异性区段结构类型为缺失DFRO1、04、06、07、10、13和DFR15～18,不同于其他鼠疫疫源地鼠疫菌株的结构类型.为我国新的鼠疫菌基因组型.结论 准噶尔盆地大沙鼠鼠疫疫源地鼠疫菌株的基因组结构类型为我国新的基因组类型.
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凝固酶阴性葡萄球菌胞外多糖蛋白复合物的检测
凝固酶阴性葡萄球菌(coagulasenegative Staphylococci,CNS)属人体正常菌群.随介人性治疗和免疫抑制剂的使用,现成为院内感染的条件致病菌.本研究通过刚果红黏附试验和刚果红-阿利新蓝联合染色,对采自临床的CNS标本进行胞外多糖蛋白复合物检测,以胞外多糖毒力指标作为确定CNS致病性的一个可能性依据,可为医院有效控制CNS感染提供实验基础.
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布鲁菌重要毒力调控基因在环境刺激和细胞侵染过程中的转录研究
目的 了解dnaK、htrA、vjbR和gntR等布鲁菌的重要毒力调控基因的功能.方法 本研究利用定量RT-PCR的方法分析了dnaK、htrA、vjbR和gntR在酸等体外刺激条件下和巨噬细胞感染过程中的转录变化.结果 这些毒力调控基因在体外刺激条件下、侵染过程中可特异的诱导表达,但是它们在这些刺激条件和胞内不同时期的转录丰度不同.结论 dnaK、htrA、vjbR和gntR在布鲁菌感染过程的不同环节发挥作用.
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蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用
目的 研究蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)信号途径在结核分枝杆菌抗原(Mycobacterium tuberculosis antigen,Mtb-Ag)激活人γδT细胞增殖和分化中的作用.方法 健康人外周血单个核细胞(PBMC)用Mtb-Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞,或预先用5.0μmol/L Rottlerin(楸毒素)预处理,培养不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达;同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,流式细胞术分析Mtb-Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率.结果 PBMC经Mtb-Ag刺激后3d,γδT细胞CD69和CD25表达分别为46.2%和45.6%,而Rotderin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达(P＜0.01);PBMC经Mtb-Ag激活培养5、10和15d,培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9.6%、54.6%和82.4%,其中第5天已有少部分γδT细胞发生增殖,第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上,用Rottlerin预处理,显著抑制了γδT细胞增殖反应,但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应;同时在培养第7天、14天和21天,用PMA(佛波酯)+Ionomycin(离子霉素)再刺激后,产生IFN-γ的γδT细胞均在80%左右;培养21d时,有2.6%的γδT细胞表达IL-4.在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少(P＜0.05),而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制(P＜0.01).结论 PKCθ信号途径在Mtb-Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用.
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HIV-1 Vpr蛋白对C8166细胞毒性研究
目的 利用腺病毒系统研究HIV-1 Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性.方法 将表达目的 蛋白Vpr的重组腺病毒rAd-vpr和空白载体病毒rAd-vector分别感染对数生长期的C8166细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布、凋亡和坏死.用Hoechst-PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死,JC-1荧光染色测定线粒体膜电势.结果 Annexin V-PI染色及Hoechst-PI染色一致显示HIV-1 Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死;PI细胞周期结果表明HIV-1 Vpr能阻滞C8166细胞于G2期;JC-1荧光染色法测定HIV-1 Vpr致C8166线粒体膜电势下降.结论 细胞内HIV-1 Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡.
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BALB/c鼠和裸鼠呼吸道合胞病毒感染比较研究
目的 比较普通BALB/c鼠和裸鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染免疫及炎症反应特点.方法 BALB/c鼠和裸鼠感染RSV后不同时间空斑形成试验检测肺组织病毒滴度,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞总数和分类,HE染色分析肺组织病理学改变,免疫组化检测肺组织F4/80+细胞和CD49b+细胞.ELISA检测BALF中TNF-α、IFN-r、IL-12和IL-10浓度.结果 BALB/c鼠和裸鼠感染RSV后肺组织病毒滴度在第3天达峰值,感染裸鼠带毒时间更长,在感染后各天病毒滴度明显高于BALB/c鼠(P＜0.05),肺组织病理改变也更重.感染BALB/c鼠和裸鼠BALF白细胞总数明显升高,分类以淋巴细胞为主.感染裸鼠与感染BALB/c鼠比较,肺组织检测到更多的F4/80+巨噬细胞和CD49b+NK细胞(P＜0.05),BALF中TNF-α、IL-12和IL-10水平更高(P＜0.05).结论 RSV感染裸鼠与BALB/c鼠比较,病毒复制水平更高,时间更持久,炎症反应更重.单核巨噬细胞和NK细胞是RSV感染重要的免疫细胞和炎症细胞,炎症反应强度并不一定与T细胞免疫应答平行.
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人巨细胞病毒UL149蛋白结合多肽的氨基酸序列分析
目的 初步确定与UL149蛋白具有较强结合能力的多肽,并对这些多肽氨基酸序列的特点进行分析.方法 应用随机多肽文库分别筛选与UL1493种不同基因型克隆表达的UL149蛋白结合的克隆,并测序,对相应的多肽氨基酸序列进行同源性比较,并与蛋白数据库中已知的蛋白序列进行比较.结果 与3种不同基因型的UL149蛋白结合的多肽序列之间具有较高的同源性,氨基酸序列中存在较为集中的区域,即W/A/F/V-D/E-D/E-G-W/F/I/L.与已知人类蛋白数据库进行比较,发现与人免疫球蛋白重链可变区关系密切,并与SH3、WD结构域、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、补体因子H、锌脂蛋白、MHC Ⅰ类分子、真核细胞转录起始因子、核因子NF等存在结合关系.结论 人巨细胞病毒UL149蛋白可能通过多条途径来干扰机体对人巨细胞病毒的免疫应答反应.
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风疹病毒包膜糖蛋白糖基化作用对细胞融合的影响
目的 探讨JR23株风疹病毒包膜糖蛋白E2和E1的糖基化作用对其引起的特异性细胞融合的影响.方法 采用基因定点突变的方法构建6个突变株,分别改变E2或E1蛋白的糖基化位点结构.采用Giemsa染色法与指示基因法检测各突变株蛋白引起的细胞融合,流式细胞术检测其在细胞表面的表达效率,并用血细胞吸附试验检测其吸附活性.结果 与野毒株蛋白相比较,突变株蛋白E2 N53G、S73I、S131V与E1 T78A、T179A、1211A引起的细胞融合效率分别为62.73%、66.66%、55.12%、66.93%、87.33%、90.18%;除了E2 S131V之外,其他突变株蛋白在细胞表面的表达效率均有不同程度的降低;只有E2 S73I与E1 T78A的血细胞吸附效率略有降低.结论 E2蛋白的3个糖基化位点与E1蛋白的N76位糖基化位点的糖基化对细胞融合有重要作用,E1的N177与N209位点糖基化对细胞融合的影响较小.
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白血病患者及其HLA-A/B/DR全相合同胞中杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型分布
目的 通过研究白血病患者及其HLA-A/B/DR相同的同胞中杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型的分布情况,探讨同胞间KIR基因型与HLA分子之间的关系及KIR在不同种类白血病中的分布.方法 采用序列特异性弓I物聚合酶链反应(PCR-SSP)法进行KIR基因分型,对78例白血病患者及其HLA-A/B/DR相同的83例同胞的KIR基因型进行分析.结果 78例患者中有48.72%与其同胞有相同的KIR基因型,44.87%的患者与其同胞不完全相同.所有KIR基因型频率在患者及同胞之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).除KIR2DS4在慢性粒细胞白血病患者中的频率明显高于急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病外,其余KIR基因型在3组疾病中的频率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 KIR基因和HLA Ⅰ类抗原各自独立遗传,且相对稳定.KIR基因受白血病类型影响较小.
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慢性HBV感染者外周血CD4+CD25high调节性T细胞初步分析
目的 分析不同临床乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)的水平及其与各种临床指标的关系.方法 采集35例不同临床表现成年慢性HBV感染者(HBsAb+组5例、非活动肝炎组8例、活动肝炎组12例、免疫耐受期组10例)及12例健康成人外周血标本,流式细胞仪分析外周血中CD4+CD25high Treg含量,ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,RT-PCR法检测HBV DNA载量,同时进行肝脏生化功能检测,并进行统计学分析.结果 HBV慢性感染者[(12.35±6.48)个/μl;(1.82 4-0.87)%)]及健康成人外周血标本[(8.91±3.11)个/μl,(1.35±0.39)%]中CD4+CD25highTreg绝对计数和其占CD4+T细胞百分含量差异均无统计学意义(P＞0.05);分组分析发现,免疫耐受期组CD4+CD25highTreg占CD4T细胞百分含量高于HBsAb+组、活动肝炎组及健康对照组(P＜0.05);免疫耐受期组CD4+CD25highTreg绝对计数高于健康对照组(P＜0.05);余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).分析CD4+CD25highTreg含量与临床指标间相关性发现,CD4+CD25highTreg占CD4+T细胞百分含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈负相关(r=-0.418,P=0.038),与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.344,P=0.021),与HBV DNA水平无相关性(r=0.118,P＞0.05);CD4+CD25highTreg绝对计数与CD4/CD8比值呈正相关(r=0.360,P=0.015),与ALT水平及HBV DNA水平无相关性(r=-0.211,r=-0.060,P＞0.05).结论 CD4+CD25highTreg在HBV慢性感染的免疫发病机制中可能发挥一定作用.
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阻断4-1BB/4-1BBL通路在系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞活化中的作用
目的 探讨协同刺激分子4-1BB/4-1BBL在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)T淋巴细胞活化中的作用机制.方法 应用RT-PCR和Western blot方法检测体外培养20例SLE患者和20例正常对照者T淋巴细胞活化前后及应用抗4-1BB单抗阻断后p38 MAPK和NF-kB表达的变化.结果 SLE患者T淋巴细胞NF-kB mRNA和p38 MAPK mRNA表达及其蛋白水平明显高于正常对照组(P均＜0.01),活化后的表达进一步升高(P均＜0.01).阻断4-1BB/4-1BBL通路后SLE患者T淋巴细胞p38 MAPK mRNA及蛋白水平的表达均明显下降(P均＜0.01),但是NF-kB mRNA及蛋白水平的表达无明显变化(P＞0.05).结论 协同刺激分子4-1BB可能通过p38MAPK信号转导通路促使SLE患者T淋巴细胞的活化与增殖.
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噬菌体抗体库中筛选血小板膜糖蛋白Ⅱ b/Ⅲa特异的人源性Fab抗体
本研究利用特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者产生抗血小板自身抗体的特点,从ITP患者脾脏细胞中提取RNA,扩增抗体轻链和重链Fd基因,插入噬粒载体pComb3H,构建人源性抗GP Ⅱ b/ⅢaFab噬菌体抗体库.以表达GP Ⅱ b/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,制备人源性GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体.
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致病真菌抵抗宿主氧化杀伤的机制
真菌人侵人体后,首先面临的是机体天然免疫系统的清除,其中很重要的是中性粒细胞、巨噬细胞等吞噬细胞的吞噬作用.通过吞噬小体复杂的生化信号传导系统,激活了和膜相连的NADPH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)依赖的氧化酶复合物,吞噬了真菌的中性粒细胞和巨噬细胞发生呼吸暴发,产生大量毒性的反应活性氧(reactive oxygen species,ROS)杀伤其吞噬的真菌,这是吞噬细胞处理侵入机体真菌的主要方式之一[1].
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实时荧光RT-PCR检测活性单核细胞增生李斯特菌方法的建立
目的 采用逆转录结合实时荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李氏菌)死活状态的定量方法.方法 根据单增李氏菌hlyA基因序列设计引物和探针;对实时荧光PCR反应体系进行优化后,提取菌体mRNA,通过随机引物进行逆转录反应;产生的cDNA通过实时荧光定量PCR进行鉴定.进一步评价逆转录结合实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对20份模拟双盲样本进行检测.结果 本实验所建立的逆转录结合实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测单增李氏菌,其他菌株和失活的单增李氏菌均无阳性结果出现;该方法检测纯菌和模拟样本的灵敏度分别可达到10 CFU/ml和1000CFU/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对20份模拟样本进行检测,其中10份含有活性单增李氏菌样本的检测结果均为阳性,其他含有失活单增李氏菌的5份样本和其他致病菌的5份样本检测结果为阴性.结论 本文建立的检测活性单增李氏菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可进行定量分析,为食品安全监测和现场流行病学调查提供较好的分析手段和完整的数据.
关键词： 实时荧光定量PCR 单核细胞增生李斯特菌 -
单核细胞增生李斯特菌与志贺菌双重实时PCR检测技术的建立
目的 建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生(单增)李斯特菌(Listeriamonocytogenes)与志贺菌(Shigella)同步检测方法.方法 分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针.构建重组质粒pGEM-T-hly与pGEM-T-ipaH,并以EcoR I单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品.优化反应体系,分析特异性.双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测.结果 成功构建了重组质粒标准品,并运用5'、3'端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5'、3'端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法.结论 建立的方法有较强的特异性,线性范围好(105～101copies/μl,R2≥0.998),灵敏度为10 copies/PCR,同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为102CFU/ml.
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变性高效液相色谱技术快速检测下呼吸道致病性细菌的实验研究
目的 运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测5种下呼吸道致病性细菌,建立一种快速检测下呼吸道致病性细菌的分子生物学方法.方法 以下呼吸道致病性细菌16S rRNA基因的保守区设计通用引物,并在引物前加上40-bpGC,特异性扩增该基因的保守区和可变区,运用DH-PLC技术对PCR产物进行分析.选取50株临床分离菌株验证该方法的有效性.结果 通用引物可特异性扩增细菌16S rRNA,PCR产物经DHPLC分析后每种细菌均能得到特征性的洗脱峰.DHPLC检测临床分离菌株结果显示,与常规培养方法的符合率为100%.结论 DHPLC技术具有准确、简便、快捷和高通量等特点,在临床检测下呼吸道致病性细菌中具有潜在的应用价值.
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著名病毒学家黄祯祥教授传略
黄祯祥教授是世界著名的病毒学家,我国医学病毒学奠基人之一.他从事有关传染病学和病毒学方面的研究50余载,为人类的防病治病事业做出了卓越的贡献,于1987年3月24日辞世.
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| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
