IL-2和IL-4联合诱导B细胞死亡受体CCR3的表达及其功能研究

目的研究在IL-2和IL-4作用下,趋化性细胞因子受体CCR3在人生发中心(germinal center,GC)B细胞上的表达及其功能特性.方法采用流式细胞术检测人GC B细胞上CCR3表达和在CCR3配体eotaxin作用下B细胞的凋亡,实时定量RT-PCR和Northern blot法检测GC B细胞内CCR3 mRNA的表达,淋巴细胞趋化和黏附试验检测B细胞的趋化和黏附能力.结果人GC B细胞极低表达趋化性细胞因子受体CCR3,经IL-2和IL-4作用后,GC B细胞高表达CCR3,但此时CCR3不能在其配体作用下诱导GC B细胞的趋化和黏附功能,而是诱导GC B细胞凋亡.结论IL-2和IL-4联合诱导人GC B细胞CCR3表达,CCR3可能具有死亡受体的功能.

抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

目的通过体外实验探讨抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较.方法以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞(PBMC)为靶细胞,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率;在新鲜补体存在下,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC).以EBV转化的B细胞为刺激细胞,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率;以同种异体的PBMC为刺激细胞,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养(MLC)中的增殖抑制率.结果嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应,且二者抑制率差异无显著性(P＞0.05),其抑制作用随抗体浓度增加而增强,PBMC和丝裂原共同孵育12 h后加入抗体的增殖抑制效应明显;在新鲜补体存在下,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用,而鼠源性单抗CDC作用较弱;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组(P＜0.05).结论抗CD71人-鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体.

浙江地区幽门螺杆菌cagA基因3'区多态性研究

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的重要毒力基因cagA具有高度保守的5'区和可变的3'区,3'区中重复序列类型和数量的差异造成了cagA基因产物(CagA蛋白)在分子大小上的不同.cagA基因/CagA蛋白的结构差异可能终影响Hp感染的临床结局.

前脂蛋白乙二酰转移酶基因(lgt)与霍乱弧菌噬菌体VP3的受体相关

目的研究霍乱弧菌噬菌体VP3的受体相关基因,确定前脂蛋白乙二酰转移酶基因在霍乱菌株可被VP3感染中的作用.方法采用转座子(TnphoA)插入,筛选对VP3感染产生抗性的突变株.Southern blot鉴定突变株染色体中TnphoA的拷贝数,利用反向PCR扩增TnphoA插入位点旁侧研究菌株的染色体序列.对扩增产物测序确定插入位点基因.另外,克隆被破坏基因的完整序列,转入该突变株,以反式互补实验确定回补突变株对VP3的敏感性.结果获得1株VP3的抗性转座突变株,Southern blot确定TnphoA在其中为单拷贝插入,反向PCR(IPCR)扩增得到插入位点处的结构基因为霍乱弧菌lgt基因,其表达产物为前脂蛋白乙二酰转移酶(Lgt).反式互补表明突变株恢复了对VP3的敏感性.结论前脂蛋白乙二酰转移酶在赋予霍乱菌株噬菌体VP3的敏感性方面有重要作用,可能为VP3转染的受体合成中的必需酶类.

双歧杆菌脂磷壁酸延缓脾脏衰老的研究

目的研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸(LTA)在D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响.方法在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时,注射双歧杆菌LTA;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指数,并以单细胞凝胶电泳试验检测脾脏淋巴细胞DNA氧化损伤的情况.结果与正常对照组相比,模型对照小鼠的脾脏指数显著升高(P＜0.05),脾淋巴细胞DNA受到了较严重的损伤(P＜0.05);用双歧杆菌LTA处理后,试验小鼠的脾脏指数明显下降(P＜0.05),脾淋巴细胞DNA的损伤程度显著降低(P＜0.05).结论双歧杆菌LTA能显著抑制衰老小鼠脾脏淋巴细胞DNA的氧化损伤,这可能与双歧杆菌抗衰老有关.

钩端螺旋体属特异性外膜蛋白抗原的分析

致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群众多,各群间交叉保护作用较弱或无,目前国内外均采用当地流行的钩体血清群来制备多价钩体疫苗,但对疫苗中未包含钩体血清群感染的保护作用极其有限,易造成钩体病的暴发流行.

铜绿假单胞菌外膜蛋白的免疫原性及免疫保护性

铜绿假单胞菌亦称绿脓杆菌,是一种常见的条件致病菌.铜绿假单胞菌感染占院内感染的15%以上,并还有上升趋势,这与铜绿假单胞菌对抗生素耐药率增高有关[1].在国内外烧伤中心对革兰阴性细菌感染的临床调查表明,铜绿假单胞菌感染占首位(约50%)[2].

SARS冠状病毒N蛋白的克隆与表达

目的克隆和表达SARS冠状病毒N蛋白,并分析其免疫学活性.方法采用RT-PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码N蛋白的基因;经克隆和测序分析后,亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定;阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析;大量诱导表达N蛋白,亲和层析予以纯化;免疫印迹分析纯化蛋白对SARS的诊断效果;用纯化的融合蛋白免疫小鼠观察其诱导的抗体应答.结果RT-PCR扩增出N蛋白基因的特异片段,获得的阳性克隆序列与GenBank中登录的SARS冠状病毒的N蛋白基因序列同源性为99.8%;N蛋白基因被亚克隆到表达载体pGEX-4T-2,在JM109中表达了N蛋白,表达的蛋白经亲和层析获得纯化;纯化蛋白能被SARS病人血清识别;免疫小鼠诱导产生了高滴度的抗体.结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中表达的N蛋白融合蛋白具有良好的免疫学活性.

HCV CE2融合蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

HCV的E2蛋白能刺激机体产生具有中和活性的抗体,其C蛋白序列在不同的型和株间具有高度保守性,是细胞免疫的主要识别位点.本研究利用家蚕杆状病毒为载体,在家蚕培养细胞和幼虫中高效表达了具有生物活性的HCVCE2融合蛋白,为今后该蛋白免疫学特性及疫苗的研究、临床诊断试剂的开发提供了参考资料.

B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白结构对反式激活能力影响

目的研究B、C基因型乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白氨基酸差异对反式激活能力的影响.方法以DNAMAN软件对GenBank中B、C基因型HBV的X蛋白进行氨基酸同源比较,确定B、C基因型HBV X蛋白各自的保守氨基酸序列并分析基因型特异性氨基酸.以相应核苷酸序列为参照,通过基因定点突变的方式获得保守的B、C型HBVX基因(分别为XB及XC)并构建真核表达载体pcDNA3.1-XB及pcDNA3.1-XC.将表达载体与报告质粒pCMVβ(含CMV即刻早期启动子)共同转染HepG2细胞并检测细胞内β-半乳糖苷酶的活性,实验数据以配对t检验进行分析.结果B、C型HBV X蛋白之间共有17个氨基酸差异,主要位于蛋白的反式抑制区及反式激活功能区.β-半乳糖苷酶在各组转染细胞内的活性依次为pcDNA3.1-XB+pCMVβ组＞pcDNA3.1-XC+pCMVβ组＞pcDNA3.1/Hygro(-)+pCMVβ组(对照组).结论B、C基因型HBV X蛋白对CMV即刻早期启动子均有反式激活能力,且B基因型HBV X蛋白要强于C基因型,这种差别与B、C基因型间X蛋白的17个氨基酸差异有关.X蛋白反式激活能力的不同与B、C基因型HBV产生不同的临床及病理表现的关系有待进一步研究.

SARS冠状病毒S蛋白表位合成肽抗原性的研究

目的研究SARS病毒合成肽疫苗.方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列,运用计算机抗原表位预测技术,筛选抗原表位,以合成肽抗原表位.通过对SARS病人血清进行筛选确定与血清高交叉反应的3个短肽,再合成多重抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),与KLH偶联后免疫小鼠.结果筛选的3条与SARS病人血清反应强的肽,免疫小鼠均产生了高效价的抗体.结论以合成肽为免疫原研究SARS病毒肽疫苗有着广阔前景.

地塞米松对SLE患者外周血单核细胞中STAT1调控的研究

目的探讨地塞米松对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1(signal transducer and activator of transcription 1)的DNA结合活性和表达量的调控.方法5例活动期SLE患者进入本研究.采用凝胶滞留法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测地塞米松对SLE患者外周血单核细胞核蛋白中转录因子STAT1的DNA结合活性的调控,并对其进行定量分析.结果地塞米松可显著抑制SLE患者外周血单核细胞中转录因子STAT1的DNA结合活性和表达量.在地塞米松浓度为10-6mol/L时,转录因子STAT1的DNA结合活性和表达量可被抑制60%以上.经统计学方法分析,发现地塞米松处理组和未经地塞米松处理组之间差异有显著性(P＜0.05).动态研究发现,地塞米松对转录因子STAT1的DNA结合活性的抑制早可发生于加入地塞米松8 h后;加入地塞米松12 h后此抑制具有显著性.地塞米松对转录因子STAT1的DNA结合活性和表达量的抑制可持续到48h以后.结论地塞米松对转录因子STAT1的DNA结合活性和表达量的抑制可能是其发挥免疫抑制作用的又一机制.

儿童发作性睡病的免疫遗传特征

目的探讨儿童发作性睡病的免疫遗传特征及其在该病的诊断、治疗和判断预后中的作用.方法对40例临床表现和各项检查、多次小睡潜伏时间试验(MSLT)均符合发作性睡病诊断标准的患者,用序列特异性引物体外基因扩增(PCR/SSP)方法进行HLA-DRB1*15低分辨、DRB1*15及DQB1*6高分辨测定基因型,并和91例正常对照组进行比较.结果患者组中HLA-DRB1*15的阳性率为92.5%(37/40),且大部分为DRB1*1501(RR=23.33,x2=47.12,Pc＜0.01)和DQB1*0602(RR=20.69,x2=43.61,Pc＜0.01),差异均有显著性.有2例患者为DRB1*1502、DQB1*0601.DQB1*0601的基因频率在患者组中有明显下降,但经P值校正后无统计学意义(x2=4.19,Pc＞0.05).结论儿童发作性睡病与HLA-DRB1*1501和DQB1*0602有显著相关,为该病免疫遗传特征的一个主要标志.

激活诱导细胞死亡对尖锐湿疣患者TH1/TH2细胞分化的影响

按1991年国家制订尖锐湿疣(CA)诊断标准确诊的31例患者为观测对象,其中男25例,女6例,年龄为19～48岁,平均年龄35岁,病程1个月以上36个月以下.

IL-13和IL-4在哮喘发病中的作用及相互关系

目的探讨IL-13在哮喘发病中的作用及其与IL-4的相互关系.方法哮喘组24例,男17例,女7例;健康对照组24例,男12例,女12例.用ELISA法检测不同时段PBMC培养上清IL-13和IL-4水平及加IL-13单克隆抗体(McAb)和IL-4 McAb干预后PBMC培养上清IL-4、IL-12、IL-13和IFN-γ水平.结果(1)IL-13动态变化:①对照组PBMC培养3 d、5 d、7 d水平均较培养1 d水平高,差异有显著性,培养3 d的水平较培养5 d、7 d的高,差异有显著性;②哮喘组PBMC培养3 d、5 d、7 d的水平均较培养1 d的水平高,差异有显著性,培养5 d的水平均较培养3 d、7 d的水平高,但之间差异无显著性;③哮喘组PBMC培养3 d、5 d、7 d的IL-13水平均较对照组高,差异有显著性.(2)IL-4动态变化:①对照组和哮喘组PBMC培养1 d后,IL-4水平明显上升,第3天仍保持较高水平,第5、7天明显下降;②哮喘组1 d、3 d、5 d和7 d水平均较对照组高,差异有显著性.(3)IL-4 McAb干预后,哮喘组和正常组IL-13水平与对应小鼠IgG组相比有显著性降低,哮喘组IFN-γ水平与对应小鼠IgG组相比有显著性增高.(4)IL-13 MoAb干预后IL-12水平在哮喘组和正常组均提高,与对应小鼠IgG组相比差异有显著性.(5)IL-13 MoAb和IL-4 McAb联合干预后哮喘组IL-12水平较相应小鼠IgG组提高,差异有显著性.结论IL-4可能在哮喘早期起作用,而IL-13可能在哮喘的维持和发展中起重要作用;IL-13 McAb可在较高水平促进TH1细胞因子产生,抑制TH2细胞因子产生,因此其在治疗哮喘症时较IL-4 McAb可能更有效.

关于SARS患者免疫功能探讨

自2002年11月我国广东省发生首例急性严重呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)患者以来,至2003年7月13日,世界卫生组织报告,全世界共有29个国家和地区发生8098例疑似SARS病例,死亡774例,病死率为9.6%[1].

CpG-ODN气道内应用抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症及GATA-3的表达

目的研究气道内应用CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)对小鼠哮喘模型气道过敏性炎症的治疗作用及对肺内GATA-3表达的影响.方法鸡卵蛋白(OVA)免疫BALB/c小鼠建立哮喘模型,激发后1 h气道内滴入100ug CPG-ODN,处死动物后观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)的变化及IL-4、IL-5、IL-12、IFN-γ的含量变化.取肺组织行病理切片HE染色、AB-PAS染色检查,观察小鼠气道炎症情况,免疫组化染色观察CpG-ODN对小鼠哮喘模型肺部GATA-3表达的影响.结果CpG-ODN治疗组BALF中IL-12和IFN-γ的产生增加,Il-4、IL-5的产生减少,BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例降低,肺部炎症情况明显减轻,肺血管周围及支气管周围表达GATA-3的细胞数较哮喘模型组及对照寡核苷酸治疗组明显减少.结论哮喘小鼠激发阶段气道内滴入CpG可能通过诱导IL-12、IFN-γ产生,抑制GATA-3的表达,导致TH2型细胞因子的产生减少,从而减轻哮喘气道过敏性炎症.

表达HBsAg重组毕赤酵母用于抗乙型肝炎病毒治疗的实验研究

本研究旨在借助毕赤酵母的表达和免疫特点,设计一种新型抗HBV治疗性疫苗,探索一种全新的可有效活化机体抗乙型肝炎病毒细胞免疫应答的方式.

治喘贴对实验豚鼠嗜酸粒细胞凋亡和对白细胞介素-5的影响

目的研究治喘贴对卵清蛋白所致实验豚鼠哮喘体内嗜酸粒细胞(EOS)凋亡及对白细胞介素(IL-5)的调节作用.方法将实验动物随机分为正常对照组、哮喘模型组、代温灸膏治疗组、治喘贴治疗组.经外贴治疗18 d,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并采集心脏血,采用流式细胞仪、免疫组织化学(TUNEL)和酶联免疫吸附(ELISA)法分析血中EOS凋亡和BALF中EOS凋亡数及IL-5含量.结果哮喘豚鼠血和BALF中EOS凋亡数、IL-5含量均高于正常对照组动物(P均＜0.01),治喘贴治疗豚鼠IL-5和EOS均明显低于哮喘模型组(P均＜0.01).结论治喘贴能促进哮喘豚鼠体内EOS凋亡,并降低IL-5的水平,从而改善哮喘模型豚鼠的气道变态性炎症反应.

GAD抗原肽抗体对IDDM糖尿病基因治疗研究

目的探讨GAD抗原肽抗体诱导特异性免疫耐受对IDDM糖尿病的基因治疗.方法构建Ig/MBAE、GAD-Ig/MBAE融合蛋白表达载体,制备产重组病毒的病毒包装细胞,经逆转录病毒载体介导基因转染B细胞,对非胖型糖尿病小鼠(NOD)进行基因治疗,以血糖指标和病理组织学分析评价疗效.结果1.酶切鉴定证实Ig/MBAE、GAD-Ig/MBAE表达载体构建正确.2.RT-PCR可检测到转染48h GAD-Ig/B细胞中的GAD-Ig融合基因表达;Western blot和双夹心ELISA可检测到转染细胞胞浆和细胞上清中的GAD-Ig融合蛋白;3.在治疗第36周,GAD-Ig/B细胞治疗组的糖尿病发病率由B细胞和Ig/B细胞组的100%降低至55.5%,胰腺组织病理分析提示,GAD-Ig/B细胞治疗组的胰岛组织形态接近正常,胰岛组织中淋巴单核细胞的浸润得到有效控制.结论GAD抗原肽抗体通过逆转录病毒介导的基因治疗,可有效地延迟NOD小鼠的糖尿病发病及明显降低发病率.

中国免疫学杂志英文版创刊

中华医学会新增两大医学期刊系列

社区获得性MRSA感染的临床特征和耐药性分析

目的研究社区获得性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的临床特征及分离菌的耐药情况,指导临床合理用药.方法以同期分离的引起医院获得性感染的MRSA菌株作为对照,分析杭州地区两所医院近年来临床各类标本中分离的引起社区获得性感染的MRSA菌株的临床特征和对非β-内酰胺类抗生素耐药状况.结果社区获得性MRSA感染患者的平均年龄为30.89±13.3岁,较院内感染患者的平均年龄(56.0±11.8岁)为轻(P＜0.01),且绝大多数没有基础疾病.体外药敏示:两组细菌对万古霉素的体外敏感率为100%;对利福平、磷霉素和甲氧苄啶-磺胺甲噁唑,社区感染菌株的体外敏感率分别为86.8%、81.6%和52.6%,院内感染菌株的体外敏感率分别为88.1%、82.9%和61.9%,各组间差异均无显著性(P＞0.05);但社区感染菌株对奈替米星、克林霉素、红霉素和四环素的敏感率分别为73.7%、60.5%、28.9%和81.6%,院内感染菌株的体外敏感率分别为50.5%、45.7%、11.4%和58.6%,社区感染菌株敏感率高于院内感染菌株(P＜0.01;P＜0.05;P＜0.01;P＜0.01);社区感染分离株中多重耐药株的发生率较院内感染低(31.6%vs 81.0%,P＜0.01).讨论社区获得性MRSA是一组不同于医院获得性MRSA的细菌,在临床用药时应区别对待.

产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究

目的了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其β-内酰胺酶的基因型特征.方法110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶,美国临床实验室标准委员会(NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的低抑菌浓度(MICs);等电聚焦实验测定β-内酰胺酶等电点(pIs);质粒接合实验定位耐药基因;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型.结果同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为7.7%(5/65)、8.9%(4/45).该类产酶菌株产2～3种pI5.4～9.0 β-内酰胺酶,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低,但对亚胺培南均敏感.9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA-1亚型,其中1株同时检出ACT-1亚型;ESBLs基因亚型分别为CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9,各有4、3、2株;有3株还携带广谱酶TEM-1基因.结论我院存在同时产质粒介导DHA-1、ACT-1型AmpC酶和CTX-M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株,药敏检测结果显示对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感.

异质性万古霉素耐药葡萄球菌分离及生物学特性观察

目的了解本地区临床标本中异质性万古霉素耐药葡萄球菌(h-VRS)分离率,并对其生物学特性进行观察.方法采用琼脂筛选和菌谱分析法对56株甲氧西林耐药的葡萄球菌进行检测,同时对分离细菌的生长特性和超微结构进行观察,并与同源性敏感菌株及金黄色葡萄球菌标准菌株相比较.结果本地区h-VRS检出率为14.3%,其中血浆凝固酶阴性葡萄球菌的分离率(23.1%)明显高于金黄色葡萄球菌(6.7%);耐药亚群与同源性敏感菌株和标准菌株比较,生长速度减慢,在固体培养基上菌落大小不等,在液体培养基中呈沉淀生长,电镜观察可见细胞壁增厚.结论h-VRS在本地区的临床标本中有一定的分离率,应引起重视;该菌的很多生物学特性与同源性敏感菌株有所不同,其中细胞壁增厚是比较明显的改变,并与该菌的耐药性有关.

卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比例增高的可能机制

近期研究发现,人体内有一个具独特免疫调节功能的T细胞亚群--CD4+CD25+调节性T细胞,这群调节性细胞具有免疫无能和免疫抑制两大特性,即对高浓度的IL-2单独刺激或经TCR的刺激无应答,而活化的CD4+CD25+T细胞能抑制CD4+和CD8+T细胞的活化与增殖[1,2].

MUC1/Y基因真核表达载体构建及MUC1、MUC1/Y体外修饰DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答

目的构建MUC1/Y全长cDNA真核表达载体,并以MUC1及MUC1/Y真核表达载体修饰树突状细胞(DC)诱导特异性抗肿瘤免疫.方法构建MUC1/Y DNA真核表达载体,选取10例HLA-A2乳腺癌患者,体外IL-4、GM-CSF联合诱导DC,并以pCDNA3.1-MUC1和pCDNA3.1-MUC1/Y转染DC,同时以空载体为对照,以pIRES2-EGFP-MUC1/Y观察转染效率,转染后DC与自体T细胞混合培养,诱导CTL.以MCF-7为特异性靶细胞,Raji为非特异性靶细胞,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性,以anncxin V-FTTC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况.以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力.结果酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1/Y真核表达载体pIReS2-EGFP-MUC1/Y和pCDNA3.1-MUC1/Y.pIRES2-EGFP-MUC1/Y转染效率基本为10%左右,DC中MUC1表达率为8%.杀伤实验表明T-DC-pCDNA3.1-MUC的杀伤活性为64%,T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y为46%.这两组间差异有显著性,同时与对照组比较差异均有显著性.annexin V-FTTC标记实验显示,T-DC-pCDNA3.1-MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T-DC-pCDNA3.1-MUC1/Y及对照组.基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力显著升高.结论构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-MUC1/Y可用于真核细胞转染并观察转染效率,易于筛选阳性克隆.经pCDNA3.1-MUC1及pCDNA3.1-MUC1/Y修饰的DC可有效诱导特异性免疫应答.

跨膜型肿瘤坏死因子信号肽氨基酸部分缺失对细胞毒作用影响

目的探讨跨膜型肿瘤坏死因子(TM-TNF)信号肽在其杀瘤中的作用.方法用PCR构建突变体及体外转录、翻译蛋白质,分别获得TM-TNF信号肽胞浆段、胞外与分泌型肿瘤坏死因子(S-TNF)连接段以及部分跨膜段缺失即信号肽第-73～-47、-73～-34、-34～-1、-21～-1位氨基酸缺失的TM-TNF体外翻译蛋白.用MTT法检测其对HL-60细胞的杀伤率.结果-34～-1、-21～-1位氨基酸缺失可提高TM-TNF对HL-60细胞的杀伤,-73～-47位氨基酸缺失对其杀瘤力无明显作用,而-73～-34位氨基酸缺失可使其杀瘤率明显下降.结论去除信号肽胞外段可提高TM-TNF-α对HL-60细胞的杀伤率,而TM-TNF-α信号肽-47～-34位氨基酸在其杀瘤过程中有重要作用.