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中华微生物学和免疫学

中华微生物学和免疫学杂志

Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지

统计源期刊
  • 主管单位: 中国科学技术协会
  • 主办单位: 中华医学会
  • 影响因子: 0.59
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 0254-5101
  • 国内刊号: 11-2309/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 北京市经济技术开发区经海二路38号
  • 曾用名:
  • 创刊时间: 1981
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 中华微生物学和免疫学杂志编辑委员会
  • 出版地区: 北京
  • 主编: 沈心亮
  • 类 别: 预防医学与卫生学
期刊荣誉:
  • 外周CD8αα+TCRαβ+调节性T细胞表型与功能初步研究

    作者:孙寒晓;胡志刚;曹雅楠;庄文芳;宣彬彬;Igor Maricic;盛慧明

    目的:研究外周CD8αα+TCRαβ+调节性T细胞的表型和免疫调节功能。方法采用流式细胞术分析CD8αα+TCRαβ+T细胞在 C57BL/6J小鼠体内的分布情况,并对其进行了相关表型分析,随后采用anti-CD3抗体刺激,流式微球分析细胞因子分泌格局;采用流式细胞术分选和CFSE标记方法,在体外研究CD8αα+TCRαβ+T细胞调节抑制功能,并采用细胞过继免疫实验观察CD8αα+TCRαβ+T细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎( EAE)小鼠模型的保护作用。结果在C57BL/6J小鼠肝脏、脾脏和外周血中存在一群 CD8αα+TCRαβ+T 细胞与CD8αβ+TCRαβ+T细胞相比具有CD25+CD122highCD44highCD62LlowCD69highNK1.1+DX5+记忆效应表型,激活后能迅速产生IL-2,随后产生IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-17A以及微量IL-6和IL-10。体外功能实验表明CD8αα+TCRαβ+T细胞专一性抑制活化CD4+T细胞的分化(P<0.01),体内实验证明该群细胞具有抑制自身活化CD4+T细胞介导的EAE,延缓疾病发展和保护的效果( P<0.01)。结论 CD8αα+TCRαβ+T细胞是体内一群固有的具有免疫调节功能的CD8+调节性T细胞,有望成为细胞治疗新靶点用于自身免疫性等各类疾病。

  • 外源性IL-10对变应性鼻炎大鼠Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响

    作者:刘卫卫;王洪琴;李健;代保强;江雪;苏小明;许鹏;金爱燕;左文娜

    目的:探讨外源性白细胞介素-10( IL-10)对变应性鼻炎大鼠( AR) Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响。方法 SD大鼠30只,采用随机数字表法将其分为AR模型组、IL-10组和阴性对照组,每组10只。 AR组和IL-10组采用常规卵白蛋白( OVA)联合氢氧化铝致敏法建立AR大鼠模型,阴性对照组采用生理盐水代替,IL-10组于激发21 d后,给予OVA的同时,腹腔注射40 pg/kg的IL-101 ml,连续7 d;各组于给药后30 min内观察各组大鼠临床表现,记录大鼠的行为学得分,并于后一次激发后48 h,取血清检测IgE和OVA-sIgE含量,同时取大鼠双侧鼻腔呼吸区黏膜,用ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量变化,同时用Western blot法检测各指标的表达水平。结果 AR组大鼠均表现出四处摩擦、涕流满面等重度AR的临床表现,与其相比,IL-10组表现明显减轻(P<0.05);各组血清中IgE和OVA-sIgE含量及鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量均明显升高(P<0.05),经IL-10干预后,其含量明显降低,且与AR组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,AR组和IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平明显升高,IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平低于AR组( P<0.05)。结论用外源性IL-10的方法治疗AR,并降低鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β的表达,可在一定程度上达到治疗AR的目的。

  • 生酮饮食对难治性癫痫患儿滤泡辅助性T细胞及B细胞的影响

    作者:周厚福;李成荣;廖建湘;王国兵;林素芳;陈黎

    目的:探讨生酮饮食( KD )导致低丙种球蛋白血症的可能机制。方法难治性癫痫( IP)患儿36例,正常同龄对照17例,分别于KD治疗前后直接取血备检。流式细胞术检测外周血滤泡辅助性T细胞( Tfh)、各阶段B细胞比例,ELISA检测外周血IL-21浓度,实时荧光定量PCR检测外周血CD4+T细胞雷帕霉素靶蛋白( mTOR )、Blimp-1、Bcl-6和IL-21 mRNA表达及测定CD19细胞mTOR mRNA表达。结果(1)IP患儿Tfh细胞数量在KD治疗后明显下降(P<0.05),IP患儿治疗前Tfh细胞比例与正常对照组无明显差异(P>0.05)。(2)IP患儿KD治疗后Tfh细胞转录因子Bcl-6表达显著下降(P<0.05),抑制因子Blimp-1表达增高(P<0.05)。(3)KD治疗后IP患儿IL-21血浓度呈下降趋势,CD4+T细胞IL-21 mRNA表达显著下降(P<0.05)。(4)KD治疗前后CD27-IgD+B细胞无显著差异(P>0.05),CD27+IgD+B细胞和CD27-IgD-B细胞呈下降趋势,CD27+IgD-B细胞和CD27+IgD-CD38highB细胞治疗后明显下降(P<0.05),Tfh细胞比例与CD27+IgD-转化后记忆B细胞和CD27+IgD-CD38high浆细胞数量呈正相关(r分别为0.644和0.609,P<0.05)。(5)IP患儿KD治疗后CD4+T细胞mTOR mRNA表达显著下降(P<0.05),mTOR表达与Tfh比例呈正相关(r=0.691,P<0.05),mTOR表达与CD27+IgD-转化后记忆B细胞和CD27+IgD-CD38high浆细胞数量呈正相关(r分别为0.715和0.650,P<0.05)。结论 KD可通过抑制CD4+T细胞及B细胞mTOR表达下调Tfh细胞数量及功能,抑制B细胞分化,这可能是少数患儿长期KD治疗导致低丙种球蛋白血症的原因之一。

  • 非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病过程中 B10细胞水平的研究

    作者:蒋瑞妹;秦瑶;许馨予;陈恒;杨涛;张梅

    目的:观察非肥胖性糖尿病( non-obese diabetic, NOD)小鼠自然病程不同阶段CD19+CD5+CD1dhigh B细胞及Th1、Th17细胞数量的变化,探讨B10细胞与NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法采用流式细胞术分别检测4周(A组,n=10)、8周(B组,n=10)及糖尿病(C组,n=10)NOD小鼠及同龄C57BL/6小鼠(对照组,n=20)脾脏、肠系膜淋巴结、外周淋巴结、胰腺淋巴结中CD19+CD5+CD1dhigh B、CD19+IL-10+B、CD4+IFN-γ+Th1、CD4+IL-17+Th17细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞的比例;分离NOD小鼠胰腺组织作病理切片以评估胰岛炎的严重程度。结果(1)胰腺组织HE切片:A组无胰岛炎,4周;B组发生胰岛炎,8周;C组发生明显胰岛炎且无完整胰岛,糖尿病。(2)不同病程阶段NOD小鼠B10细胞比较:B及C组B10细胞较A组增高,而C组B10细胞则较B组显著下降,差异有统计学意义(P<0.01);A组B10细胞各组织间无明显差异(P>0.05),B组B10细胞以胰腺淋巴结高,C组B10细胞以外周淋巴结高且胰腺淋巴结B10细胞较B组显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)不同病程阶段NOD小鼠效应性T细胞比较:C组Th1及Th17细胞较A、B组显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)不同病程阶段CD4+CD25+Foxp3+T细胞比较:C组Treg较A、B组无明显变化,且NOD小鼠Treg较同龄C57BL/6小鼠亦无明显变化( P>0.05)。结论随NOD小鼠年龄增长及胰岛炎进展,B10细胞存在数量变化及组织分布的差异;B10细胞数量减少可能参与NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发生。

  • 肺炎链球菌phpP基因重组表达及其产物PP2C型磷酸酶活性的研究

    作者:孙颜红;张少妮;楼永良;严杰;孙爱华

    目的:构建肺炎链球菌StkP/PhpP信号偶联中磷酸酶编码基因phpP原核表达系统,了解表达产物rPhpP磷酸酶活性及类型。方法采用PCR扩增肺炎链球菌ATCC6306株phpP基因并测序。采用常规基因工程技术构建phpP基因原核表达系统。采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统检查rPhpP表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析法提纯rPhpP。实时荧光定量RT-PCR检测亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP基因转录水平变化。采用专业生物信息学软件分析phpP基因序列中磷酸酶功能结构域及其类型。采用丝/苏氨酸磷酸酶检测试剂盒检测rPhpP水解PP2C型磷酸酶活性并测定其酶动力学参数。结果克隆的phpP基因序列与GenBank报道序列完全相同。所构建的phpP基因原核表达系统表达可溶性rPhpP。亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP-mRNA水平升高。 phpP基因序列中含有PP2Cc磷酸酶结构功能域。提纯的rPhpP能水解PP2C型磷酸酶底物磷酸肽[RRA(pT)VA]且活性随rPhpP浓度增加而升高,其Km 和Kcat值分别为277.35μmol/L和0.71 S-1。结论肺炎链球菌phpP基因表达产物为PP2C型磷酸酶,亚致死量青霉素和头孢噻肟可诱导phpP基因表达上调。

  • 亚胺培南耐药革兰阴性杆菌的耐药性和耐药机制分析

    作者:黄志卓;韦柳华;蒋利君;李梦薇;莫善颖;戴盛明

    亚胺培南是一种临床常用的碳青霉烯类抗生素,对大多数β-内酰胺酶高度稳定,被认为是可有效治疗高产 AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶( ESBLs)多重耐药菌引起的严重感染的药物之一。但近年来耐该药物的细菌在临床上不断被发现,鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌尤为严重。本文对近4年来收集到的耐亚胺培南革兰阴性杆菌进行耐药性和耐药机制分析。

  • 1株分离自骨髓炎患者的泛耐药肺炎克雷伯菌的特性研究

    作者:张亚培;陈栎江;李梅梅;尉骁;孙瑶;周铁丽

    肺炎克雷伯菌( Klebsiella pneumoni-ae, KPn)广泛存在于自然界中,是院内感染的重要病原菌,可引起肺炎、尿路感染、败血症等。骨髓炎是一种复杂的临床感染性疾病,葡萄菌属是其常见的病原菌,肺炎克雷伯菌引起骨髓炎的相关资料较少,仅在免疫力低下、新生儿中有几例报道。本实验室自平素体健成年男性骨髓炎患者的骨髓标本中分离出一株肺炎克雷伯菌FKA78,其表现出泛耐药特性,即除了对替加环素敏感外,对临床各类抗菌药物都表现出高水平耐药,而目前国内外关于肺炎克雷伯耐药菌的研究大多数局限于对氨基糖苷类药物敏感的产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)型菌株。

  • 应用高分辨熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子

    作者:李万翔;魏取好;胡庆丰;陈素峰;林晓伟;吕火烊

    目的:应用高分辨率熔解曲线法快速鉴定功能性第2类整合子。方法收集99株2011年8月—2012年8月非重复分离自临床标本的第2类整合酶阳性变形杆菌,以基因组DNA为模板,PCR扩增包含第2类整合酶基因突变位点一段60 bp的片段,高分辨率熔解曲线分析后测序验证。结果功能性第2类整合子与普通第2类整合子高分辨熔解曲线具有显著差别,测序结果与高分辨率熔解曲线法鉴定结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线法可快速准确进行功能性第2类整合子的筛查鉴定。

  • HBV 感染不同阶段病毒特异性T 细胞反应评估

    作者:覃岭;赵艳;王熠;黄雁翔;刘金花;张永宏

    目的:探讨HBV感染不同阶段病毒特异性T细胞反应特征。方法对北京佑安医院84例HBV感染者进行研究,分为急性乙型肝炎组(8例)、慢性乙型肝炎组(39例)、肝硬化组(17例)和HBV相关肝癌组(20例)。采用ELISPOT方法与磁珠细胞分选方法检测外周血中HBV特异性T细胞。结果(1)急性乙型肝炎组、慢性乙型肝炎组、肝硬化组及肝癌组HBV特异性T 细胞反应强度分别为(2067.00±1029.00) SFU/106 PBMCs、(288.50±57.69) SFU/106 PBMCs、(96.25±31.06) SFU/106 PBMCs、(71.47±14.26) SFU/106 PBMCs,急性乙型肝炎组病毒特异性T细胞反应强,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)急性乙型肝炎组中,HBV Core(C)蛋白诱导的T 细胞释放IFN-γ反应强度为(323.90±130.30) SFU/106 PBMCs,明显高于S蛋白、P蛋白及X蛋白诱导的T细胞反应强度,组间比较差异有统计学意义(P=0.0037);在慢性乙型肝炎组HBV P蛋白诱导的T细胞反应强,为(127.20±54.42) SFU/106 PBMCs,其次为S蛋白、C蛋白、X蛋白,差异有统计学意义(P=0.0159)。(3)在肝硬化组和肝癌组,HBV X蛋白、P蛋白、S蛋白及C蛋白诱导的T细胞释放IFN-γ反应强度无明显差别,并且均低于慢性乙型肝炎患者组。结论 HBV感染者随着病情由急性乙型肝炎向慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌进展,病毒特异性T 细胞反应逐渐减低,不同的感染阶段病毒蛋白诱导的T细胞反应可能发挥不同的作用。

  • P 物质及其受体在乳腺癌中的表达和临床意义

    作者:周云丽;付正;李金萍;臧凤琳;姚智

    目的:研究P物质(SP)和神经激肽受体-1(NK1R)在乳腺癌中的表达,探讨其改变与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。方法采用ELISA法检测乳腺癌及乳腺良性疾病患者血清、乳腺细胞系培养上清中SP水平,用免疫组织化学和免疫印迹技术检测总NK1R、全长型NK1R( NK1R-FL)和截短型NK1R( NK1R-Tr)在82例乳腺癌及其癌旁正常组织、30例乳腺良性病变组织中的表达。结果乳腺癌患者血清SP水平高于乳腺良性疾病患者和正常对照( P<0.05),乳腺癌组织的NK1R-FL表达显著低于、NK1R-Tr的表达显著高于癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织(P<0.01);与导管内癌组织比较,NK1R-FL的表达在浸润性导管癌中下降显著(P<0.05),而NK1R-Tr的表达则明显升高;NK1R-FL表达随TNM分期的升高而降低,而NK1R-Tr和SP的表达则升高(P<0.01);乳腺癌患者组织NK1R-FL的表达降低、NK1R-Tr升高和血清的SP升高还与淋巴结转移、雌激素受体( estro-gen receptor, ER)和孕激素受体( progesterone receptor, PR)阴性、Ki-67阳性、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)阳性、血清癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)和糖类抗原-153(cancer antigen 153,CA-153)水平等显著相关(P<0.05)。乳腺癌组织NK1R-FL和NK1R-Tr的表达与患者的年龄、组织分级和P53表达等临床病理因素均无关(P>0.05)。结论 NK1R-FL的表达与乳腺癌的浸润转移呈负相关,SP、NK1R-Tr的表达上调与乳腺癌的浸润转移成正相关。

  • 糖皮质激素受体亚型在系统性红斑狼疮和类风湿关节炎中表达差异及与疾病活动相关性分析

    作者:关艳春;于丹丹;孙祥囡;马亮亮;方美云

    目的:探讨系统性红斑狼疮( SLE)及类风湿关节炎( RA)外周血单个核细胞( PBMCs)中糖皮质激素受体(GR)4种亚型GRα、GRβ、GRγ、GR-P及血浆中白细胞介素(IL)-6、巨噬细胞游走抑制因子( MIF)、干扰素( IFN)-γ和IL-10表达及差异,同时分析与疾病活动相关性。方法选择初发SLE患者55例、RA患者49例和健康对照38例,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测SLE、RA患者和对照PBMCs中GRα、GRβ、GRγ、GR-P表达,GR总和表达为4种GR亚型表达总和,酶联免疫吸附试验法检测血浆中IL-6、MIF、IFN-γ和IL-10表达。结果 SLE、RA患者及对照4种GR亚型表达占GR总和百分比呈以下趋势:GRα>GR-P>GRγ>GRβ。与对照相比, SLE和RA患者GRα表达所占百分比显著降低(P<0.05),GR-P显著高于对照(P<0.05)。 RA患者GR-P表达显著高于SLE组(P<0.05)。 SLE患者和RA患者GRα表达与SLEDAI评分呈显著负相关(P<0.05),RA患者GRα表达与DAS28评分呈显著负相关(P<0.05);从表达来看,高活动组GRα表达显著低于低活动组(P<0.05)。与对照相比,SLE、RA患者IL-6、IFN-γ和MIF表达均显著增高(P<0.05)。 SLE高活动组IL-6显著高于低活动组(P<0.05)。 RA患者高活动组IFN-γ表达显著高于低活动组(P<0.05)。 SLE组高活动患者IL-6与GRα表达呈显著负相关( P<0.05);RA组高活动组IFN-γ与GRα表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 SLE、RA患者GR亚型表达特点与对照不同,且两种疾病间亦存在差异,提示两种疾病发病时内环境变化可导致GR各亚型比例的变化。 GRα为GR表达主要亚型,与疾病活动呈负相关,炎性细胞因子过量分泌对GRα可能有抑制作用,本研究结果对临床判断疾病活动度、指导临床用药有重要意义。

  • AIRE基因单核苷酸多态性与中国陕西汉族类风湿关节炎关联分析

    作者:李晓波;闫铭锋;李婷

    类风湿关节炎( rheumatoid arthritis, RA)是一种自身免疫性疾病,成年人发病率约为1%。至今RA病因学及发病机制还不清楚。遗传因素和环境因素及二者的交互作用在RA的发病中起到重要作用。 AIRE基因是一种重要的转录调节器,在胸腺髓质细胞中表达,在胸腺细胞发育及控制胸腺中外周抗原表达负向调节中发挥作用。在日本人群和欧洲人群已证明 AIRE 基因相关易感标签SNP 位点( rs2075876、 rs1800520、rs760426、rs878081)与 RA 密切相关。本研究通过病例-对照关联研究,分析AIRE基因4个标签SNP位点是否是中国陕西汉族RA人群易感基因位点。

  • 人类免疫缺陷病毒膜蛋白变异与广谱中和抗体产生关系的研究进展

    作者:赵娟;聂建辉;黄维金;王佑春

    自人类免疫缺陷病毒( HIV)被确定为获得性免疫缺陷综合症( AIDS)的病原体以来,艾滋病疫苗研发已有近30年的历史,先后已对上百种疫苗进行了临床试验。初的疫苗研究以诱导gp120膜蛋白抗体为主,该类疫苗不能有效预防HIV-1感染或延迟疾病进程[1-2]。之后疫苗研究转至以诱导细胞免疫为主,默克公司以5型重组腺病毒( Ad5)为载体的疫苗曾被给予厚望,虽然该疫苗诱导了特异性CD8+T细胞反应,但不能有效预防病毒感染,甚至疫苗免疫组的感染率高于对照组[3]。近,研究人员重新将目光聚焦于大限度地诱导强效、广谱中和抗体的疫苗研究上。2009年,泰国开展的RV144Ⅲ期临床试验,在受试的高危异性恋人群中取得了约31%的保护作用[4],让人们看到了艾滋病疫苗研究的希望。但是,鉴于该疫苗较低的保护效率,是否推广应用还存在较大争议,还需要极大的努力去改进这类疫苗和研发新疫苗。

  • 趋化因子在炎性肾损伤中的作用

    作者:林乐涛;王应

    大多数肾损伤疾病都存在炎症反应,白细胞从外周循环进入肾脏受损区域是炎症反应的必需步骤。趋化因子在这一过程中介导白细胞的游走、浸润和激活,参与调节炎症反应的进程,该过程中肾脏发生的渗出、变质、增生、纤维化病变都与趋化因子有着密切联系,因此趋化因子的表达对炎性肾损伤的发生、发展和预后均起重要作用。本文就目前趋化因子在炎性肾损伤中的作用作一综述。

  • C D4+T 细胞剔除对复制型重组痘苗病毒免疫原性及毒力的影响

    作者:刘颖;王书晖;刘莹;彭虹;刘畅;邵一鸣

    目的:探讨CD4+T细胞剔除对复制型重组痘苗病毒免疫原性及毒力的影响。方法BALB/c小鼠经腹腔注射CD4单克隆抗体剔除CD4+T细胞后,尾部划痕接种重组痘苗病毒rTV或天坛株VTT,同时设正常小鼠对照。免疫后定期观察小鼠体重变化和接种部位痘斑变化,并检测病毒排出量和CD4+T细胞比例。免疫后第28天处死小鼠,检测小鼠体液和细胞免疫,取卵巢组织检测病毒滴度。结果 CD4+T细胞剔除小鼠和正常小鼠在接种rTV或VTT后均出现典型的种痘后局部反应,但均未出现次级或卫星病损。 CD4+T细胞剔除小鼠的痘斑愈合时间、病毒排出时间及体重恢复时间均长于正常小鼠。 CD4+T细胞剔除小鼠和正常小鼠的卵巢中均未检测出痘苗病毒。 CD4+T细胞剔除小鼠的HIV抗体和痘苗病毒抗体平均A值分别为0.119和0.168,显著低于正常小鼠的平均A值(P<0.05,P<0.01)。 McAb/rTV组的痘苗病毒中和抗体滴度几何均值为1∶321,显著低于rTV组1∶1286(P<0.05)。 McAb/rTV组诱导的痘苗病毒特异性IFN-γ+/CD4+T效应细胞百分比均值为0.654%,显著低于rTV组(P=0.0004),但IFN-γ+/CD8+T效应细胞百分比与rTV组的差异无统计学意义。结论剔除CD4+T细胞的小鼠能有效控制重组痘苗病毒的复制和播散。 CD4+T细胞的剔除显著降低了体液免疫应答和CD4+T细胞免疫应答,对CD8+T细胞免疫应答无显著影响。

  • 2株产KPC-2型碳青霉烯酶肠聚集性大肠埃希菌的分离

    作者:顾丹霞;张嵘;余涛;陈功祥

    肠聚集性大肠埃希菌( EAEC)可引起成人和儿童的持续性水样腹泻。多重耐药的EAEC菌株在多个国家和地区均有报道,国内尚未见相关报道。本研究首次报道重症监护病房中分离到2株对碳青霉烯类抗生素耐药的EAEC菌株。

  • Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证

    作者:张雪松;户义;康晓平;张雨;李裕昌;吴晓燕;杨银辉

    目的:构建含Gluc-GFP的双标记系统,为研究病毒的体外标记和活体成像提供技术手段。方法根据文献报道合成split-GFP基因,将GFP拆分为G1-10与G11两部分,分别构建含G1-10与G11的pcDNA3.1表达质粒并通过荧光观察验证其相互作用。然后通过融合PCR技术将Gluc基因与G11基因通过Linker连接并插入到pcDNA3.1上,与G1-10表达质粒共转染293T细胞,测定细胞上清中Gluc荧光素酶的活性,并进行GFP荧光观察。为了更方便对病毒进行细胞水平的观测和筛选,利用慢病毒表达系统构建能稳定表达G1-10的MDCK细胞系,再向细胞系中转染G11质粒,通过红色荧光蛋白( RFP)标记和嘌呤霉素的抗性对细胞系以及GFP活性进行筛选与验证。结果split-GFP基因共转染细胞后的荧光观察结果证实了split-GFP拆分策略的可行性。 Gluc-G11与G1-10质粒共转染后,细胞能够发出明亮的绿色荧光,上清中荧光素的活性也较高。在此基础上,建立的G1-10 MDCK细胞系能够稳定表达出G1-10,用G11质粒转染该细胞系后,可检测到GFP荧光。结论成功构建了含Gluc-GFP的双标记系统,split-GFP拆分策略可行,Gluc-G11不会影响荧光素酶Gluc的生理活性;G1-10细胞系的稳定表达可简化双标记系统的制备,为在细胞和活体水平研究病毒致病机制提供技术手段。

  • 4种方法检测替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌体外药敏结果分析

    作者:闫少珍;宋玥;陈中举;田磊;朱旭慧;高随;李丽;张蓓;孙自镛

    目的:比较四种不同药敏方法检测替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌药敏结果的不同。方法将临床分离的鲍曼不动杆菌(158株)和肠杆菌科细菌(339株)用纸片扩散法检测替加环素敏感性,对非敏感的124株细菌再分别采用微量肉汤稀释法、MTS法、琼脂稀释法检测替加环素小抑菌浓度( MIC),分析四种不同药敏检测方法间的差异性。结果替加环素对纸片扩散法非敏感的两种细菌均有较好的抗菌活性,MIC50大部分在敏感范围内(0.5~2 mg/L),MIC90均为4 mg/L。微量肉汤稀释法表明,替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌均有较好的抗菌活性,MIC50为1 mg/L, MIC90为4 mg/L。参照美国食品药品监督局( FDA)和欧洲药敏试验委员会( EUCAST)判读标准,敏感率分别为87.1%和70.2%。琼脂稀释法显示多数鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌测得的替加环素MIC结果比微量肉汤稀释法高2个稀释度[基本一致性( EA)为56.5%],按照FDA判读标准,非常重大误差( VME)和重大误差(ME)均为0,分类一致性(CA)为46.8%;按照EUCAST判读标准,VME为0.8%,CA为24.2%。MTS法相比于琼脂稀释法,测定替加环素对鲍曼不动杆菌和肠杆菌科细菌的药敏结果更好,MIC50为1.5 mg/L,MIC90为4 mg/L,与微量肉汤稀释法较接近,按照FDA/EUCAST判读标准,敏感率分别为83.1%/21.0%,CA分别为81.5%/29.8%,EA为71.8%,但多数细菌结果比微量肉汤稀释法高1个稀释度。FDA判读标准的相关性比EUCAST判读标准好。纸片扩散法结果表明,按照FDA判断标准, ME 为19.4%,小误差(mE)为71.8%。本研究未出现VME菌株,但CA仅为8.9%。结论纸片法、MTS法、琼脂稀释法与微量肉汤稀释法均存在差异,其中以MTS法与微量肉汤稀释法相关性好,且FDA判读标准相比于EUCAST判读标准相关性更好。建议临床检测替加环素体外药敏试验,可参照美国FDA判读标准,通过纸片法常规检查,对于纸片法中介或耐药的菌株再进行MTS法进行确认,必要时可进行微量肉汤稀释法做进一步确证试验。

  • 本刊使用的医学缩略语

    作者:

    为了精简文字,使文章读起来更简练易懂,现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下(按英文首字母顺序排列),本刊在论文中将不再注释。

  • 远程投稿系统作者常见问题

    作者:

    问题1:作者如何投稿?(1)注册网站会员,邮箱获得登录名和密码;(2)申请成为杂志作者,需要给哪个杂志投稿,就申请成为哪个杂志的作者,一个作者可以同时申请成为多个杂志的投稿作者;(3)进入系统,点击左侧菜单栏【期刊管理系统】,点击之后系统会列出期刊系统作者的所有功能,点击【作者投稿】,按步骤一步步往下操作,后点击【投稿】,完成投稿操作。

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