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中华微生物学和免疫学

中华微生物学和免疫学杂志

Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지

统计源期刊
  • 主管单位: 中国科学技术协会
  • 主办单位: 中华医学会
  • 影响因子: 0.59
  • 审稿时间: 1-3个月
  • 国际刊号: 0254-5101
  • 国内刊号: 11-2309/R
  • 发行周期: 月刊
  • 邮发: 北京市经济技术开发区经海二路38号
  • 曾用名:
  • 创刊时间: 1981
  • 语言: 英文
  • 编辑单位: 中华微生物学和免疫学杂志编辑委员会
  • 出版地区: 北京
  • 主编: 沈心亮
  • 类 别: 预防医学与卫生学
期刊荣誉:
  • 集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

    作者:张进平;苏丽萍;乔宾;徐焕宾;张瑞华;储以微;王缨;熊思东

    目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成. 方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系;用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响;应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成. 结果 RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达,且经过实时定量PCR分析发现,集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关;当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制;经共聚焦显微镜观察发现,集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在,且和CD3分子共定位,抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成. 结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞,可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化.

  • 脐血HLA-A位点PCR-SBT分型的研究

    作者:吴洁莹;廖灿;汤雪薇;李焱;杨昕;黄以宁

    目的建立HLA-A位点等位基因的PCR-SBT高分辨分型方法,探讨DNA测序技术在脐血库样本HLA分型中的应用价值. 方法利用PCR产物直接测序,对广州脐血库保存的547份脐血样本进行HLA-A位点2、3、4外显子的序列分析,由分型结果得出基因频率,与中华(上海)骨髓库北方人群、上海地区人群及德国白种人进行比较. 结果采用PCR-SBT分型方法并结合分析软件确定了全部样本的HLA-A基因型,广州地区人群HLA-A等位基因以A*110101(30.8%)为常见,其后依次是 A*24020101/02L(16.18%)、A*0207(11.88%)、A*3303(9.42%).A*110101在广州汉族人群中出现的频率明显高于中华(上海)骨髓库北方人群,而A*010101、A*3001明显低于后者;在HLA-A2亚型人群中,A*020101在广州、上海两地汉族人群中的频率明显低于德国白种人,而广州汉族人群中A*020101与A*0206均明显低于上海汉族人,但A*0203明显高于后者. 结论基于核酸序列测定的HLA分型技术能够直接、准确、快速地进行高分辨分型,将有助提高无亲缘关系供者脐血移植的临床效果.改进实验条件、升级分型软件,可以降低试剂成本和节约时间.

  • 重组Derp2变应原诱导小鼠变态反应气道炎症动物模型的建立

    作者:李国平;刘志刚;钟南山

    目的建立重组屋尘螨Derp2变应原(rDerp2)诱导的小鼠变态反应气道炎症动物模型. 方法在大肠杆菌中诱导表达Derp2重组蛋白,用镍亲和柱层析法提纯重组蛋白;32只BALB/c小鼠随机分为屋尘螨粗浸液组(A组)、屋尘螨粗浸液+rDerp2组(B组)、rDerp2组(C组)、对照组(D组).分别观察肺组织病理变化与支气管肺泡灌洗液(BLAF)中细胞学变化,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BLAF中和脾细胞培养上清IL-4与INF-γ变化,ELISA测定血清中IgE、IgG1与IgG2a 抗体变化. 结果成功表达、纯化Derp2重组蛋白;A、B、C组肺部病理改变呈现明显的变态反应性炎症;A、B、C组小鼠BALF中的细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞数和EOS计数显著高于D组(P<0.01);A、B、C组BALF中IL-4含量分别为(109.35±16.46) pg/ml、(88.87±5.66) pg/ml、(85.59±6.05) pg/ml,与D组(23.17±2.67) pg/ml相比差异有统计学意义(P均<0.01).A、B、C组抗原特异性IgE抗体分别为0.49±0.04、0.41±0.02、0.37±0.04,与D组(0.03±0.01)相比差异有统计学意义(P均<0.01);A、B、C组小鼠脾细胞分泌IL-4分别为(266.20±19.18) pg/ml、(252.72±15.81) pg/ml、(243.62±19.07) pg/ml,与D组(15.99±1.56) pg/ml相比差异有统计学意义(P均<0.01). 结论用rDerp2能成功建立小鼠变态反应气道炎症动物模型.

  • 儿童幽门螺杆菌感染根除前后IL-18、IFN-γ水平变化

    作者:高玮;黄仕和;余跃;陈新霞

    儿童幽门螺杆菌(Helicobactor pylori, Hp)感染已经日益引起了人们的重视.Hp是儿童慢性活动性胃炎的致病菌,与儿童十二指肠炎、消化性溃疡密切相关.IFN-γ是T、NK细胞分泌的细胞因子,其主要功能是免疫调节作用.Rieder等发现Hp感染后,IFN-γ mRNA水平增高,且mRNA表达水平与黏膜炎症程度呈正相关.IL-18是一种具有强烈IFN-γ诱导活性的促炎细胞因子,动物研究表明过量的IL-18产生可加剧肠道黏膜的炎症损伤.用特异的抗体中和IL-18能够减轻实验性结肠炎的严重程度.本研究对66例4~14岁儿童患者采用快速尿素酶试验和胃黏膜涂片用Giemsa染色镜检Hp联合检测判定Hp感染状态,并采用双抗体夹心ELISA法测定了儿童Hp感染根除治疗前后胃窦黏膜IL-18、IFN-γ水平,旨在探讨两者在Hp致病机制中的作用.

  • 钩端螺旋体抗原表位预测、重组、表达及免疫原性分析

    作者:杨榆玲;黄小琴;史荔;褚嘉祐;郭晓奎;石铁流

    目的应用生物信息学方法预测两种钩端螺旋体外膜蛋白的表位,结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析. 方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测LipL32和OmpL1的表位,应用PCR技术合成重组表位基因片段,克隆PCR产物构建重组质粒,测序验证.在BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白.纯化该融合蛋白,免疫BALB/c小鼠,显微镜凝集试验(MAT法)测定抗体效价. 结果在LipL32和OmpL1中各预测到2个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段.PCR合成的重组表位基因序列中没有出现移码和碱基置换.纯化后融合蛋白纯度>90%.融合蛋白产生的抗体效价为75.79,融合头(运载蛋白)抗体效价为10.62. 结论重组表位具有一定免疫原性.为相关蛋白的表位重组和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础.

  • 赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白新基因ompL17基因靶向敲除及其突变株的构建

    作者:张会东;鲍朗;赵计林;朱庆平;李娅莎

    目的将外膜蛋白新基因ompL17靶向敲除并构建该基因的突变株. 方法提取钩端螺旋体017株基因组DNA,扩增出外膜蛋白新基因ompL17,与打靶载体p2NIL重组,并插入氨苄抗生素抗性基因Ampr+使外膜蛋白新基因ompL17失活,构建重组的基因打靶质粒p2NIL17A.电穿孔转化入钩体017株中构建突变株,通过豚鼠模型观察该突变株的毒力变化. 结果 PCR、Dot blot和酶切分析,证实构建了以氨苄青霉素抗性基因DNA为标记探针的基因打靶载体,并构建外膜蛋白新基因ompL17敲除的钩体017株突变株. 结论成功将钩体外膜蛋白的新基因ompL17进行靶向敲除,并构建钩体017株突变株,为进一步进行该基因的功能研究和阐明赖型钩体致病的分子机制奠定了基础.

  • neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义

    作者:向淑利;蔡方成;邓兵;张晓萍

    目的构建唾液酸合成酶基因1(neuB1)失活、脂多糖(LPS)中唾液酸(SA)缺失的空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni, Cj)O∶19突变株,以确认Cj LPS中,含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林-巴利综合征(GBS)发病机理中的关键作用. 方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O∶2 DNA中,将含卡那霉素抗性基因(KmR cassette)的neuB1突变片段--neuB1::KmR克隆到pGEM-T载体,形成突变载体pGEM-neuB1::KmR,进一步转化到与GBS相关的Cj O∶19野生株,获得Cj O∶19突变株,行PCR和RT-PCR鉴定.SDS-PAGE分析Cj LPS,过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测Cj LPS中SA.霍乱毒素B亚单位(CTB)结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构.后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠,第5周取坐骨神经原纤维分离. 结果 neuB1基因突变片段--neuB1::KmR成功克隆到pGEM-T载体中,进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株.后者LPS已丧失SA基团且不能与CTB结合,表明其菌体裂解物和LPS中已不存在GM1模拟结构.野生株LPS免疫组中,17.3%的坐骨神经原纤维发生免疫性损伤,明显高于PBS对照组(1.6%)和突变株LPS免疫组(2.4%);而突变株LPS免疫组与PBS对照组间差异无统计学意义. 结论成功构建neuB1基因失活的Cj O∶19突变株,其LPS已缺失野生株所具有的SA基团及与GM1的分子模拟特性,且不能再诱导活体动物的周围神经免疫性损伤,有力证实了关于Cj LPS诱发GBS的分子模拟推论,SA是该交叉免疫反应中抗原的重要成分.

  • 登革2型病毒调控血管内皮细胞纤溶系统相关蛋白的表达

    作者:江振友;肖瑞;唐小龙;江丽芳

    目的观察登革2型病毒(DV2)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达组织纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影响. 方法应用胰酶消化分离HUVEC并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.用cell counting kit-8(CCK-8)测定DV2感染后细胞活性变化;发色底物法测定感染DV2组和对照组培养液中tPA、PAI-1活性;RT-PCR检测细胞内tPA和PAI-1 mRNA水平. 结果 DV2感染对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.感染DV2组培养液中tPA活性在12~72 h显著升高(P<0.05);DV2诱导HUVEC表达tPA mRNA的水平显著上调,12 h达到峰值,以后渐降,72 h mRNA表达水平仍高于对照组(P<0.01).而DV2感染组培养液中PAI-1活性和PAI-1 mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05). 结论 DV2感染可显著上调HUVEC的tPA mRNA转录,增强内皮细胞tPA蛋白的分泌,而不影响PAI-1 mRNA的转录或改变内皮细胞PAI-1的分泌.结果提示DV2可活化但并不损伤内皮细胞,诱发内皮细胞增强表达纤溶酶原激活物而致使纤溶系统失衡,引起纤溶亢进,这可能是诱发DHF/DSS患者急性期出血、低血容量性休克等体征的主要因素之一.

  • 人巨细胞病毒感染对体外培养肺成纤维细胞中明胶酶的影响

    作者:刘志峰;郝理华;张理菁

    目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对体外培养肺成纤维细胞(HEL)中明胶酶活性的影响. 方法体外培养HEL细胞感染HCMV,分为低感染复数(MOI)组及高MOI组,每组重复6例.明胶酶谱法检测HEL细胞中MMP-2及MMP-9的明胶酶活性,用半定量RT-PCR检测各组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的转录水平.结果在低MOI组及高MOI组HEL细胞中MMP-9及MMP-2活性均增强(P<0.05),高MOI组MMP-9及MMP-2活性较低MOI组显著增加(P<0.05).进一步检查MMP-9及TIMP-1的mRNA水平发现,正常对照组HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA处于一个较低的水平,HCMV感染使HEL细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA水平均明显升高(P<0.05),低MOI组和高MOI组差异无统计学意义(P>0.05).在低MOI组及高MOI组,HEL细胞MMP-9/TIMP-1的比值和正常对照组相比明显升高(P<0.05),表明MMP-9升高更为显著.高MOI组和低MOI组中MMP-9/TIMP-1的比值差异无统计学意义(P>0.05). 结论 HCMV感染可以造成MMP-9和TIMP-1转录和MMP-9/TIMP-1的失衡,同时造成MMP-9及MMP-2明胶酶活性增强,导致肺泡结构的破坏和肺纤维化的发生,这在CMV肺炎的发病机制中起着重要的作用.

  • 乙型肝炎病毒免疫吸附柱构建的实验研究

    作者:高庆伟;李永新;孔亮;刘莎;王波;邹汉法;孙万里;刘沛;王英兰

    根据免疫学原理,结合血液净化学理论,将人抗-HBs-IgG结合于活化琼脂糖凝胶上,构建了抗-HBs-IgG免疫吸附柱, 并在体外观察了其对含HBV和HBsAg 血浆的吸附作用.该项技术已申报了国家发明专利(申请号: 03110948.9).

  • 河北省HIV-1流行株的env基因序列测定和亚型分析

    作者:赵翠英;邢辉;赵宏儒;黄海龙;刘艳芳;马鹏飞;李保军;张玉琪;王玉;邵一鸣

    目的了解河北省HIV-1亚型的分布特点和传播方式,推测流行时间,预测流行趋势. 方法采集HIV感染者的全血样品,分离外周血单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应(nested-PCR),扩增HIV-1的env基因的C2-V3区并进行序列测定和亚型分析. 结果对22份HIV-1感染者的样品,扩增得到了18份HIV-1 env C2-V3基因片段,经序列测定和基因分析鉴定出3种HIV-1 M亚群基因亚型,即:B′、CRF-BC和C亚型.B′亚型的组内基因离散率为7.84%±3.14%(n=14),基因序列与云南瑞丽株rl42(泰国B亚型)相近;2株CRF-BC亚型与广西毒株的基因离散率为4.60%.与血液途径感染有关的人员均为B′(泰国B)亚型. 结论目前,在河北省发现了3种HIV-1亚型.输供血途径中B′亚型仍是主要的流行亚型,可能来源于云南吸毒人群.HIV-1 B′亚型在河北省的流行时间大约为7~9年.

  • IL-18在抗流感病毒感染早期免疫应答中的作用

    作者:刘北星;吕昌龙;木村吉延

    IL-18是活化巨噬细胞产生的IFN-γ诱导因子.IL-18可增加脑实质中IFN-γ产生细胞数,增强活化小神经胶质细胞的功能[1].体外实验证明肺巨噬细胞能选择性识别和杀伤被流感病毒感染的组织细胞,抑制流感病毒的增殖[2].本研究利用IL-18基因缺陷鼠流感病毒感染模型,探讨IL-18在调节肺巨噬细胞抗流感病毒感染早期免疫应答中的作用.

  • 中国莱姆病伽氏疏螺旋体蛋白免疫印迹法诊断标准的研究

    作者:蒋毅;万康林;耿震;侯学霞

    目的研究中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型蛋白免疫印迹法(WB)的阳性诊断标准. 方法采用中国莱姆病螺旋体伽氏疏螺旋体基因型参照菌株PD91作抗原,建立WB检测方法.采用Gel-Pro凝胶分析软件进行结果分析.病例组和对照组各组蛋白条带的频数分布比较采用χ2检验或Fisher′s精确检验,WB检测莱姆病阳性诊断标准确定采用ROC曲线. 结果共检测127例莱姆病病例和504例对照的血清标本,经统计学分析得出我国莱姆病伽氏疏螺旋体检测中WB阳性诊断标准为:对于IgG P83/100、P58、P39、P30、OspC、P17、P66、OspA中至少有一条蛋白条带显色即可诊断为阳性,此标准敏感度为73.2%,特异度为99.4%;对于IgM P83/100、P58、OspA、P30、OspC、P17、P41中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性,此标准敏感度为50.4%,特异度为93.1%. 结论建立了中国莱姆病伽氏疏螺旋体基因型WB阳性诊断标准,用于莱姆病的WB诊断具有较好的特异性.

  • 甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白的分离、纯化和鉴定

    作者:胡明冬;徐剑铖;周长喜;冯英凯;龚传明;毛宝龄

    目的提纯甲型副伤寒沙门菌鞭毛蛋白并鉴定. 方法选用甲型副伤寒沙门菌,经自制的液体培养基扩大培养后,酸裂解法初步分离出鞭毛蛋白,用AKTA Explorer蛋白纯化系统除盐,弱阴离子交换层析纯化.纯化的蛋白用SDS-PAGE、Western blot和磷钨酸负染扫描电子显微镜(scanning electron microcopy, SEM)观察并摄片鉴定.考马斯亮蓝法测定所获得鞭毛蛋白的产量. 结果 SDS-PAGE提示纯化的鞭毛蛋白为一条相对分子质量(Mr)为52×103蛋白带;免疫印迹试验亦提示条带在Mr 52×103处; SEM观察发现该鞭毛蛋白呈丝状;三者均证实该蛋白为同一均质蛋白.蛋白定量测得每克湿重的细菌可提取(4.8±0.5)mg鞭毛蛋白. 结论经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,且易于纯化和鉴定.

  • 应用AFLP方法对我国土拉弗菌基因分型的研究

    作者:张芳;刘玮;何君;端青;张泮河;杨红;曹务春

    土拉菌病又称"野兔热",是由土拉弗菌经患病野生动物、吸血昆虫或遭受污染的水或食物传播的一种自然疫源性疾病,呈世界性分布.其致病菌是革兰阴性胞内寄生菌,包括4种基因型.由于不同基因型在地理分布、毒性等方面存在较大差异,基因分型研究一直是该领域的研究热点,而近年来随着16S rRNA的序列分析、随机引物扩增多态性(RAPD)、限制性片段长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)等分子生物学方法在细菌分型中的应用,世界范围内许多地区的土拉弗菌株得到了很好的基因型鉴别,也对一些传统认识提出了新的质疑,如欧亚地区是否也存在致病性较强的A型菌株?事实上在1998年科学家们证实了这一疑问[1].

  • HBV基因型芯片检测方法的研究

    作者:杨夏;张跃新;朱滨;孙悦;阿曼·古丽;张明智

    HBV属于嗜肝DNA病毒科,基因组经反转录过程进行复制.由于反转录酶缺乏自我校读功能,且感染过程中,在宿主免疫反应的抗病毒压力或特异性治疗的作用下,病毒基因组发生变化,造成HBV核苷酸序列的显著差别.HBV基因分为A~H 8个基因型,能更好的刻画病毒致病性的不同.基因芯片技术的出现,对于像HBV这样高变异性病原体的基因分型检测无疑是一大改进.

  • 基因多态性分析在凝固酶阴性葡萄球菌菌种鉴定中的应用

    作者:王亚娟;沈叙庄;高薇;胡翼云;俞桑洁;林影;王慧欣;何建平;杨永弘

    凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylococcus, CNS)是定居在人体皮肤和黏膜表面的正常菌群.随着大量介入性医疗技术的发展和广谱抗生素的应用,CNS已成为儿科医院感染性疾病常见的致病原,尤其是抵抗力低下的新生儿败血症的常见病原.因此,建立快速及可靠的菌种鉴定方法,对于早期预测每一种临床细菌菌株的潜在致病性或抗生素的敏感性是非常必要的.

  • 第二次全国现代免疫诊断技术学术研讨会补充征文通知

    作者:

  • 布地奈德对哮喘大鼠信号转导子和转录激活子6的表达

    作者:叶乐平;谢丽微;李昌崇;吴淑珍;李孟荣

    目的研究布地奈德(BUD)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)基因和蛋白表达的调控作用. 方法 30只清洁级幼年雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、哮喘组(B组)和BUD组.对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4、IL-12浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达的变化. 结果 (1)B组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均显著高于A组(P<0.01),BUD组BALF中上述各项指标较B组均显著降低(P<0.01);(2) BALF中IL-4的浓度B组显著高于A组(P<0.01),BUD组较B组显著降低(P<0.01),而IL-12的浓度B组显著低于A组(P<0.01),BUD组较B组显著升高(P<0.01);(3)B组支气管上皮细胞STAT6蛋白和STAT6 mRNA阳性表达较A组明显增强(均为P<0.01),BUD组较B组明显减弱(均为P<0.01);(4)支气管上皮细胞STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的IL-4浓度呈显著正相关,与BALF中EOS绝对值呈显著正相关;而与IL-12浓度呈显著负相关.结论哮喘大鼠支气管STAT6及其mRNA较强表达,上皮细胞是其主要表达细胞;BUD有抑制气道炎症的作用,下调STAT6及其基因表达,使IL-4合成减少可能为其重要作用机制.

  • 细胞因子在登革病毒感染人皮肤成纤维细胞中的作用

    作者:江振友;温筱芸

    目的探讨登革病毒(dengue virus, DV)对人皮肤成纤维细胞(HSF)的感染性和细胞因子在DV感染HSF中的作用. 方法采用微量病毒空斑法检测登革Ⅱ型病毒(dengue type-2 virus, DV2)感染HSF后病毒繁殖动态变化,间接免疫荧光法检测HSF内DV抗原.透射电镜观察病毒感染细胞的超微结构改变.用不同浓度的IL-6、TNF-α、GM-CSF分别作用于DV2感染HSF的不同环节(病毒吸附时和病毒吸附后),于感染后48*!h收集感染上清,测病毒滴度;用DV2感染HSF后,于不同时间收集感染上清,用ELISA法定量测定IL-6、TNF-α的含量. 结果病毒感染后24*!h即可在培养上清中测出病毒,病毒滴度在48*!h达到高峰,以后逐渐下降.用间接免疫荧光法证明感染的HSF胞浆及胞膜上携带DV抗原.在光镜和电镜下,感染细胞均未见明显的形态和结构改变.在病毒吸附时10*!ng/ml浓度的IL-6能显著提高病毒产量;在病毒吸附时和吸附后100*!ng/ml浓度的TNF-α能抑制病毒的产量.GM-CSF对DV感染HSF无明显影响.DV感染能促进HSF分泌IL-6;对TNF-α的分泌无明显影响. 结论 HSF是DV的允许性细胞.HSF可能是蚊叮咬后在原位组织中首先支持DV感染的细胞之一;细胞因子在DV感染HSF的致病和免疫过程中起重要作用.

  • 应用噬菌体随机肽库技术研究干扰素-α2b抗原表位

    作者:田旺;李正赫;曹学琳;杨文博;白钢

    目的应用噬菌体随机肽库技术,研究干扰素-α2b高抗原性表位. 方法利用结合有干扰素-α2b多克隆抗体的免疫磁性微球,对噬菌体随机肽库进行生物淘筛,以ELISA方法鉴定阳性克隆.阳性克隆测序后与干扰素氨基酸序列进行了同源性分析,研究干扰素-α2b分子中高抗原性表位. 结果经4轮淘筛后噬菌体克隆的阳性率为57.6%,据随机挑选的12个阳性克隆的同源性分析结果将其分为3组,分别对应干扰素-α2b 3个高抗原性表位与预测的结果吻合,其中第2组与干扰素受体结合区AB环接近. 结论利用噬菌体随机肽库技术,成功筛选出3个与抗原性预测相符合的干扰素-α2b抗原表位,为研究干扰素分子的作用机理、制备抗特定表位的单克隆抗体以及设计和开发干扰素的小分子模拟肽奠定了基础.

  • 绿色荧光蛋白干扰素-α2b融合基因的构建与表达

    作者:李正赫;田旺;杨文博;白钢

    干扰素-α2b(IFN-α2b)作为治疗慢性乙肝、丙肝的首选药物,已成为医药生物技术产业的重要产品.目前研究IFN与其受体的作用关系多采用酶联免疫吸附法,间接的分析IFN或测定其受体被封闭的情况,但在细胞水平直观实时的检测IFN与其受体相互作用关系的研究报道甚少.本研究利用来源于维多利亚水母的绿色荧光蛋白(GFP)作为分子标签,构建含有GFP与IFN-α2b融合基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.

  • BA46基因转染树突状细胞治疗乳腺癌的研究

    作者:尤长宣;罗荣城;苏瑾;张军一;廖旺军;郑航;Yong Liu;Paul L Hermonat

    目的探讨以乳腺癌特异抗原BA46基因转导树突状细胞(DC)治疗乳腺癌的可行性. 方法取健康人外周血,采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),以AIM-V培养基于6孔板培养,贴壁5 h,轻轻洗去悬浮细胞(T细胞,冻存备用),取贴壁细胞,将细胞分为基因转染组及对照组,基因转染组感染携带BA46基因的重组腺相关病毒rAAV/BA46/Neo,对照组以293细胞冻融液刺激,两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC前体细胞成熟.第7天,收集悬浮细胞(DC),显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析DC的表面标志CD80、CD86、CD40的表达情况;另取该DC与T细胞按1∶20比例混合,含5%人血清蛋白的AIM-V为培养基,同时加入IL-2与GM-CSF,共育7 d,诱导获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),取BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T为靶细胞,采用51Cr释放法测量杀伤效率,同时以流式细胞仪检测CTL群体中CD8/CD4和CD8/CD56的比值. 结果 BA46基因转导的DC表面标志CD80、CD86、CD40的表达均明显高于对照组DC,所激活的T细胞对BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T有很好的杀伤效果,此杀伤具有抗原特异性和MHC限制性,且该T细胞中CD8/CD4和CD8/CD56的比值均明显高于对照组(细胞裂解物冲击DC所激活的T细胞). 结论 BA46基因转染成功制备DC,并诱导特异的CTL,为乳腺癌的DC基因转染疗法打下基础.

  • 表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

    作者:任加强;郑莉;陈琦;李华;张琳;朱虹光

    目的构建表达前列腺特异性膜抗原(PSMA)的DNA疫苗,观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用. 方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA,将DNA疫苗pCDNA3.1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL/6小鼠体内,分离小鼠脾细胞, 检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应.以B16-PSMA细胞攻击免疫后小鼠,观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用. 结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性,经过免疫后的小鼠成瘤率降低,无瘤生存期延长,肿瘤生长缓慢,肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润,表明产生较强的抗肿瘤反应. 结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用,为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路.

  • 非法医学期刊曝光台

    作者:

    2005年4月29日出版的<中国新闻出版报>又一次公布了新闻出版总署、全国"扫黄""打非"工作小组办公室宣布取缔的非法期刊名单,在被取缔的60种期刊中有医学期刊16种,加上2004年7月13日和11月19日公布的非法报刊名单中的11种医学期刊,非法医学期刊达27种.

中华微生物学和免疫学分期目录
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