中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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莫西沙星对脂磷壁酸诱导的人肺泡巨噬细胞凋亡及炎症因子释放的影响
目的 探讨脂磷壁酸(LTA)对人肺泡巨噬细胞(AM)凋亡及炎症因子释放的影响和莫西沙星(MXF)对其反应的抑制作用.方法 收集、提纯及体外培养人AM,LTA刺激4h后,加或不加MXF与其共孵育,于各实验终点用MTT法计算细胞相对活力,光学显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA水平,ELISA检测IL-8蛋白水平,验证RT-PCR.结果 LTA对AM有细胞毒性,并呈浓度递增关系(P＜0.05),MXF对AM活力无影响(P＞0.05),且可抑制LTA的毒性作用(P＜0.05).LTA促进AM凋亡(P＜0.05),此作用可被MXF抑制(P＜0.05).LTA上调AM中TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA表达(P＜0.05),各峰值时间及峰值分别为:12 h(3.56±0.03)、6 h(46.63±7.06)、12 h(28.07±1.24)、3 h(2.34±0.50),上调24 h IL-8蛋白水平,上述效应可被MXF抑制.结论 LTA对人AM有细胞毒性,促进AM凋亡,上调AM中TLR2及炎症因子IL-1β、IL-8及TNF-α的表达,MXF抑制LTA诱导的AM炎症及凋亡,可能在革兰氏阳性菌肺炎中发挥杀菌、抗炎、保护宿主AM免疫活性的作用.
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HLA配型和DSA对移植肾功能的影响研究
器官移植中良好的供受者间HLA配型对预防移植肾早期排斥和移植肾的长期存活具有重要意义.肾移植术后发生排斥的重要因素之一是群体反应性抗体(PRA)的参与,特别是肾移植术后产生抗供者特异性抗体(DSA).因此本文对肾移植供受者HLA分型和DSA对移植肾急性排斥反应和近期肾功能进行研究.现报道如下.材料和方法一般资料:选择了2007年10月至2009年12月间在我院接受肾移植的128例患者,男性88例,女性40例;大年龄63岁,小年龄20岁.
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尾静脉高压注射CⅡTA siRNA对小鼠胶原诱导性关节炎的治疗作用
目的 将MHCⅡ类反式作用因子(CⅡTA) siRNA用于胶原诱导的小鼠关节炎模型中,观察是否具有治疗效果.方法 将雄性DBA/1小鼠随机分为胶原诱导性关节炎(CIA)模型组、CⅡTA siRNA组(siCⅡTA组)、control siRNA组(siCT组)、正常组.再次免疫后4周观察小鼠发病情况,检测小鼠足爪的肿胀度,病理切片观察炎症变化,MTT检测脾淋巴细胞对CⅡ胶原的增殖反应,实时荧光定量PCR检测小鼠脾细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达水平,ELISA检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-17的含量.结果 siCⅡTA组关节炎评分、脾淋巴细胞对Ⅱ型胶原的增殖反应低于模型组和siCT组；siCⅡTA组IFN-γ、IL-17水平低于模型组和siCT组,但IL-4水平高于模型组和siCT组.结论 尾静脉高压注射CⅡTAsiRNA对CIA具有治疗作用.
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系列截短和缺失的hTERT启动子报告载体的构建及活性验证
目的 构建系列截短及缺失的hTERT启动子荧光素酶报告载体并验证其活性.方法 PCR扩增系列截短及缺失的hTERT启动子基因,克隆人pGL3-Basic质粒,构建荧光素酶报告载体.分别与pRL-TK内参照质粒共转染HepG2和COS-7细胞,48h后裂解细胞,双荧光素酶分析法检测启动子的活性.结果 成功构建系列截短及缺失的hTERT启动子报告载体,分别命名为pGL3B-895、pGL3B-371、pGL3B-DELS2、pGL3B-349、pGL3B-329、pGL3B-318、pGL3B-306.双荧光素酶报告基因检测结果显示在肝癌细胞和工程细胞中上述报告载体均具有启动子活性.结论 成功构建具有启动子活性的系列截短及缺失的hTERT启动子荧光素酶报告载体,为进一步探讨肝癌发生中人端粒酶逆转录酶表达调控机制提供必要的实验材料.
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幽门螺杆菌GroEL蛋白重组表达及表达产物小鼠免疫保护作用
目的 检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异,确定重组表达的GroEL蛋白(r-GroEL)抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性.方法 采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列.构建幽门螺杆菌groEL基因pET42a-E.coli BL21DE3原核表达系统,采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性,采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GroEL膜定位.采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用.结果 35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99.4％～ 100％.rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56％,SDS-PAGE后提纯的rGroEL在凝胶中显示为单一的条带.rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体,同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体(Hp-IgG)或rGroEL-IgG识别并与之结合.GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原.50、100或200 μg rGroEL免疫可分别使50.0％ (6/12)、75.0％ (9/12)和91.7％ (11/12)小鼠免于幽门 螺杆菌SS1株的感染,200 μg rGroEL免疫保护率(91.7％)显著高于50μg rGroEL(50.0％)( P＜0.05).结论 幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原,可作为基因工程疫苗候选抗原.
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一株产碳青霉烯酶IMP-26阴沟肠杆菌的分离鉴定
在过去的几年中,产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌不断被发现,这引起了临床工作者的强烈担忧.我院发现一株碳青霉烯类抗菌药物耐药的阴沟肠杆菌,此临床菌株分离自一位9个月的哮喘患儿,对亚胺培南和厄他培南表现为耐药,其低抑菌浓度分别为4 μg/ml和16μg／ml.对青霉素类,头孢类及头孢与酶的复合制剂都表现为耐药.进一步的实验显示此菌株的Hodge试验阳性,确定该菌株产碳青霉烯酶.通过对亚胺培南与亚胺培南+EDTA的纸片的抑菌圈直径的比较,发现此种碳青霉烯酶能被EDTA抑制.通过PCR扩增,发现此阴沟肠杆菌含有blaInt11、blaIMP和blaTEM基因,通过测序和比对确定blaIMr的基因型为blaIMP-26,balTEM基因的基因型为blaTEM-104.通过等电聚焦电泳,也证实此阴沟肠杆菌产IMP和TEM酶.
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解脲脲原体生物膜胞外多糖的检测
目的 研究解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)4个型别标准株在体外形成的生物膜之胞外多糖的分布及结构成分.方法 将Uu标准株Parvo群中4、8血清型和T960群中3、14血清型进行体外生物膜培养后,扫描电镜下观察生物膜组成及结构,并在FITC-ConA/PI及ECA/PI双荧光染色后进行激光共聚焦显微镜观察及测定平均荧光强度.秩和检验及t检验分别比较两种荧光标记物、两生物群的总体平均荧光强度的差异.结果 4个型别Uu标准株均可在体外形成生物膜,生物膜结构主要呈网格状,胞外物质占大部分比例.在激光共聚焦显微镜下,Uu生物膜胞外多糖均可被FITC-ConA和ECA染色,FTTC-ConA呈网格状分布,ECA小片状聚集分布.FITC-ConA的总体平均荧光强度较ECA高,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 Uu体外培养生物膜主要呈网格状结构,胞外多糖中含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡聚糖残基,并以葡萄糖、甘露糖残基为主.
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几株b型流感嗜血杆菌多糖结合物的免疫原性检定
目的 从分子水平检定b型流感嗜血杆菌,研究不同菌株荚膜多糖结合物的免疫原性.方法 提取基因组,通过型特异和荚膜型基因特异引物,利用PCR检定b型流感嗜血杆菌；不同纯化多糖分别与破伤风类毒素(TT)进行耦联结合,结合物原液经稀释免疫小鼠,通过两针免疫,采血进行免疫效力测定.结果 5株b型流感嗜血杆菌通过PCR法均能获得预期大小的型特异(482 bp)和荚膜型(343 bp)基因片段,BLAST分析显示,各菌之间型特异和荚膜型序列比对,其同源性均为100％,各菌型特异和荚膜型序列分别与GenBank X78559.1和M19995.1序列比对,同源性分别为99％和100％；ELISA检测显示,4株不同菌株来源的荚膜多糖结合物(PRP-TT)的小鼠免疫效力差异无统计学意义.结论 通过PCR法从分子水平检定b型流感嗜血杆菌,纯化的不同荚膜多糖结合物小鼠免疫原性基本一致.可供不同Hib多糖结合物免疫原性的研究参考数据.
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慢性HIV感染者抗逆转录病毒治疗过程中树突状细胞亚群的变化特点
目的 了解慢性人免疫缺陷病毒(HIV)感染者抗逆转录病毒治疗(ART)过程中树突状细胞(DC)亚群的变化特点.方法 选取ART治疗的慢性HIV感染者17例,分别于治疗0,4,8,12,24,48,60周采集静脉血,同时选取健康者、长期不进展者(LTNPs)各15例为对照.常规进行CD4+/CD8+T细胞计数和病毒载量测定；用流式细胞术测定DC亚群,ELISA测定血浆IFN-α水平；采用SPSS16.0软件分析数据特点.结果 (1) ART治疗前HIV感染者髓样树突状细胞(mDC)百分比及绝对计数明显低于健康组和LTNP组(P＜0.001).ART治疗60周后,HIV感染者mDC明显增加,与健康组、LTNP组之间差异无统计学意义.(2) ART治疗过程中浆细胞样树突状细胞(pDC)数量和血浆IFN-α水平保持相对稳定,且接近健康组、LTNP组水平.(3) ART治疗前DC亚群细胞计数与CD4+T细胞计数正相关.ART治疗12、24、60周,mDC细胞计数与CD4+T细胞计数正相关,与病毒载量负相关.ART治疗8周mDC细胞计数增加值与治疗60周CD4+T细胞计数增加值正相关,与病毒载量下降值负相关.结论 HIV感染者mDC细胞数量明显减少,ART治疗后明显上升,与CD4+T细胞计数正相关,提示mDC在控制HIV感染方面可能具有重要作用.治疗早期mDC细胞数量可能是ART治疗后免疫重建的早期预测指标.
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新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内保守氨基酸基因突变分析
目的 确定新城疫病毒(NDV)血凝素神经氨酸酶(HN)糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸功能,探讨HN糖蛋白的促细胞融合机制.方法 采用PCR定点突变与体内同源重组相结合的方法将HN糖蛋白促细胞融合区域内6个保守氨基酸突变为丙氨酸(A),在BHK21细胞内表达后,流式细胞仪定量分析蛋白的表达效率,并分别检测其促细胞融合活性、血细胞吸附能力(也称为受体识别活性)和神经氨酸酶活性.结果 L74A蛋白表达效率降低为72.7％,各突变株蛋白表达效率与野毒株相比差别无统计学意义(P＜0.05).各突变株蛋白促细胞融合活性都有不同程度的下降,其中I103A下降幅度大,为野毒株的9.1％,各突变株蛋白血细胞吸附能力也都出现不同程度的降低,其中I1iA的下降明显,为28.2％,各突变株蛋白的神经氨酸酶活性变化程度不同,其中174A略有升高,为118.6％,L110A下降幅度大,为5.2％,I103A仅次于L1 10A,为5.7％.结论 新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用,第103位异亮氨酸(Ⅰ)是此区域内的关键氨基酸.
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HLA-G14bp基因多态性与儿童Epstein-Barr病毒感染的相关性分析
目的 通过检测Epstein-Barr病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿人类白细胞抗原G(HLA-G) 14 bp插入/缺失多态性及血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,探讨其与儿童EBV感染IM的相关性.方法 采用PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)技术,对102例EBV感染IM患儿及165例正常对照儿童进行了HLA-G 14 bp插入/缺失多态性检测；采用ELISA检测了51例EBV感染IM患儿及146例正常对照儿童血浆sHLA-G水平.结果 EBV感染IM组与正常对照组HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性分布频率差异有统计学意义(X2=6.742,P=0.034),两组等位基因分布频率差异亦有统计学意义(x2=6.672,P=0.01)；EBV感染IM组血浆sHLA-G水平明显高于正常对照组,经检验差异有统计学意义(Z=-9.472,P＜0.01),EBV感染IM组不同基因型间血浆sHLA-G水平差异有统计学意义(H=6.09,P=0.048),14 bp+/+基因型组血浆sHLA-G水平明显低于另两组基因型(Z=-2.376,P=0.018).结论 HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性与儿童EBV感染IM的发生有关,携带14 bp-/-基因型或缺失14 bp等位基因的儿童可能更易发生EBV感染.血浆sHLA-G水平可作为EBV感染IM的辅助诊断指标之一.
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强直性脊柱炎患者Th17细胞与CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的变化及意义
目的 探讨强直性脊柱炎( ankylosing spondylitis,AS)患者Th17和CD4+ CD25+ FoxP3+调节性T细胞比例及相关细胞因子水平的变化及意义.方法 强直性脊柱炎患者40例,正常同年龄对照37例.采用流式细胞术检测外周血Th17与调节性T细胞的比例,双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平.结果 AS组患者外周血Th17细胞比例明显高于对照组[(1.02±0.34)％vs(0.68:±0.29)％,P＜0.05],CD+ CD25+ FoxP3+细胞比例明显低于对照组[(3.77±0.81)％ vs (4.69±1.23)％,P＜0.05].AS患者血清中IL-6、IL-23、IL-17水平明显高于对照组[ (6.15±2.71) ng/L vs(3.31±1.65) ng/L; (9.44±3.12) ng/ml vs (5.82±2.61) ng/ml;( 10.53±4.97) ng/L vs (6.78±3、26) ng/L,P均＜0.01]；差异有统计学意义.与对照组相比,AS组TGF-β水平有下降的趋势[(4,76±2.15) ng/ml vs(5.16±2.02) ng/ml,P＞0.05],但差异无统计学意义.AS患者血清各细胞因子含量与临床及实验室指标无相关性.结论 强直性脊柱炎患者Th17与CD4+CD35+FoxP3+调节性T细胞比例失衡,血清IL-6、IL-23、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与强直性脊柱炎免疫发病过程.
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活动性肺结核患者痰液中miR-29a的表达
miRNA是一类长度为18 ～25个核苷酸的单链非编码RNA分子,参与到调控细胞生长、发育、分化等各个环节,与疾病的发生、发展相关.近的研究结果表明,miRNA分子也在微生物引起的感染和免疫应答中起重要调控作用;肺部疾病患者痰液中miRNA的表达可发生变化[1].我国是结核病高发国,其中,以肺结核为常见.痰是肺泡、气管和支气管的分泌物,含有机体肺组织诸多生物过程的重要产物.本研究的目的是探讨miR-29a分子在活动性肺结核患者痰液中的表达情况.
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溃疡性结肠炎患者外周血IL-22及相关CD4+ T细胞亚群的表达
目的 通过检测溃疡性结肠炎(UC)患者外周血中IL-22及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在UC发病机制中的可能作用.方法 以我院住院治疗的35例UC患者及35例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其与疾病活动度的关系.结果 UC组患者血浆中IL-22的含量为(354.12±104.22) pg/ml,显著高于对照组(P＜0.05),其中重度患者增高明显；UC组患者外周血Th17细胞比例[(2.36±0.94)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,中、重度患者增高明显；UC组患者外周血Th22细胞比例[(2.27±0.87)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,重度患者增高明显；而UC组患者Th1细胞比例与对照组比较尤明显差异.结论 UC患者外周血中IL-22水平、Th17、Th22细胞比例明显升高,且与疾病活动度密切相关.
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特应性皮炎患者外周血CD4+T细胞亚群比例变化的研究
特应性皮炎(或异位性皮炎,atopic dermatitis,AD)是一种与遗传过敏素质有关的反复发作性、炎症性、瘙痒性皮肤病.AD病因尚未明确,患者体内存在明显的免疫功能异常以及CD4+T细胞介导的异常免疫应答在AD发生、发展中可能起主要的作用.本研究通过检测AD患者外周血CD4+T细胞亚群Th1、Th2、调节性T细胞(Tr)与Th17细胞比例,各自特异性转录因子及血清中相应细胞因子的表达水平,探讨CD4+T细胞亚群比例变化在AD发病中的意义.
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HLA-DRB1基因多态性与急性髓性白血病的相关性研究
急性髓性白血病( acute myelogenous leukemia,AML)是临床常见的一种造血系统恶性肿瘤.关于HLA与AML的相关性研究,由于环境不同、人种不同,各地的报道结果存在一定差异.本文对732例AML患者及2264例正常对照进行了Ⅱ类基因HLA-DRB1的PCR-SSP基因分型研究,探寻与AML相关的HLA基因.病例组为经临床及实验检查确认的732例急性髓性白血病患者(男性460例,女性272例);对照组来自脐血库的2264份无血液病及遗传病家族史的正常新生儿脐血.采用离心柱法提取DNA,按照说明书进行操作.用核酸蛋白测定仪测定DNA浓度和纯度,保证A260/280值在1.6～1.8,调整浓度至80～100 ng/μl.
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湖南地区强直性脊柱炎患者TNFRⅡ基因多态性研究
目的 通过对湖南地区强直性脊柱炎(AS)汉族患者及健康人群DNA中肿瘤坏死因子受体(TNFR)Ⅱnt587位点的多态性分析,研究TNFRⅡnt587位点基因多态性与强直性脊柱炎发病的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)对100例AS患者和100名健康对照TNFRⅡnt587位点进行基因分型检测.数据经SPSS处理,分析两组中基因型、等位基因频率差异.结果 100例患者中TNFRⅡn687位点T/T型43例(43.0％),T/G型32例(32.0％),G/G型25例(25.0％)；100例健康对照中TNFRⅡnt587位点T/T型56例(56.0％),T/G型34例(34.0％),G/G型10例(10.0％),AS患者中TNFRⅡnt587 G频率(41.0％)较正常对照(27.0％)明显增高(x2=8.734,P=0.003).与对照组相比,AS患者TNFRⅡnt587位点基因型为G/G时比数比(OR=3.256)明显高于T/G型(OR=1.226)和T/T型(OR=1).结论 湖南地区汉族人群中TNFRⅡnt587位点多态性与AS发病具有相关性,且G/G基因型在AS发病中具有高风险性.
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结核杆菌毒力的研究进展
据世界卫生组织(WHO)统计,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)近年来每年引起全球约300万人死亡.我国在全球22个结核病(TB)高负担国家中居第2位[1],且具有患病率高、分布广、病死率高等特点.结核菌侵入人体后,有些感染者发展为重症结核,有些成为潜伏感染[2-3],未出现活动性结核病的症状和表现[4].研究表明,不同毒力的MTB感染巨噬细胞后可诱导宿主细胞产生不同的转归:高毒力结核菌株H37Rv能够抑制细胞凋亡,在胞内存活、繁殖、扩散,导致细胞坏死,进而引发炎症反应、细菌扩散;而H37Ra、卡介苗(BCG)等减毒株则能诱导宿主细胞产生大量凋亡,研究提出该凋亡途径与TNF-α无关[5].毒力具体机制仍不清楚,现在就结核杆菌毒力的部分问题作一综述.
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内毒素诱导中枢神经系统交叉耐受机制的研究进展
内毒素( endotoxin,ET)又名脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),是革兰氏阴性细菌(G-negative)细胞壁上的主要成分,通过激活相关受体介导的信号通路调控炎症及免疫系统.高剂量LPS诱导强烈的炎症反应,导致致死性的脓毒血症或感染性休克.相反,低剂量LPS可诱导一种保护性的耐受状态,对LPS再次刺激时损伤明显减轻[1].耐受现象是生物在长期进化中形成的一种保护性调节机制,以避免机体对内毒素刺激过度反应而造成损伤,是机体防御机制的重要组成部分.同时,低剂量的LPS还诱导交叉耐受现象(cross-tolerance)[2],即一种刺激物诱导的耐受对随后不同类型的损伤例如缺血再灌注、创伤及自身免疫性损伤等都可产生保护效应.近年来,LPS交叉耐受对中枢神经系统损伤的保护作用及其机制的研究成为一个热点.
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多重实时荧光PCR法快速检测水体中致病性弧菌的研究
致病性弧菌检测方法主要是生化鉴定法,费时费力,而且对于生化反应不典型或生化反应极为相似的弧菌属无法准确鉴别,传统的生化鉴定法在大规模的病害调查过程和生产实践中无法做到快速准确方便.多重荧光PCR方法是在DNA分子水平进行微生物检测的一种新方法,根据样本中各种微生物的特异性基因对目标菌进行鉴定,可以稳定准确地在种属和菌株水平上鉴别微生物,弥补传统生化鉴定方法的缺陷[1-3].本研究通过优化多重荧光PCR方法体系,建立了水体中致病性弧菌的两个多重荧光PCR检测方法,该方法通过富集水体细菌,无需前增菌步骤,大大减少检测时间.实际工作中推广应用结果表明,多重荧光PCR方法检测7种弧菌,具有快速、准确度高、重复性好及敏感性高等特点.
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检测肺炎衣原体血清IgM抗体ELISA的建立和应用
特异性抗体测定是目前诊断肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,C.pn)感染较敏感的方法.主要外膜蛋白(MOMP)是C.pn重要的抗原成分,具有良好的免疫原性,与C.pn的感染密切相关,其特异性抗体具有免疫保护作用[1].机体感染C.pn后体内可出现特异性的IgM抗体,检测该IgM抗体可作为判断C.pn感染的标志.本研究利用特异性的MOMP抗原,建立检测血清中C.pn特异性IgM抗体的ELISA[2],以351例病原学确诊的临床血清标本和11例其他病原体感染的肺炎患者血清标本为对照,对其灵敏度和特异性进行了评价,现报告如下.
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登革病毒特异性抗原片段的筛选鉴定及其ELISA方法的建立
目的 筛选、鉴定登革病毒共同及型特异性抗原,用纯化抗原建立检测登革病毒抗体的ELISA方法.方法 分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E、NS1蛋白进行分析,预测可能的抗原表位.并根据表位位置和氨基酸序列的相似性,分析登革病毒的共有及型特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息进行比对,分析其在不同登革病毒株中的保守性.然后选择预测得分值较高的表位,利用pET32a、pMAl-c2x原核表达系统进行原核表达,Western blot验证其免疫学反应特异性.Western blot检测阳性抗原片段经亲和纯化后,包被ELISA微孔板,并对ELISA反应条件进行系统优化.结果经系统的生物信息学分析,共预测获得登革病毒抗原表位18个,登革病毒型特异性抗原表位25个,并对其中得分值较高的5段进行了高效表达,经Western blot分析,获得登革1～4型(Den-Ag5),登革2、4型(Den-Ag3),登革1～3型(Den-Ag2)病毒共同抗原片段各一段,登革1、2、4型( Den-Ag1、Den-Ag4)共同抗原片段两段,与流行性乙型脑炎病毒、黄热病毒及所用甲病毒多克隆抗体均无交叉反应.选择Den-Ag5、Den-Ag1和Den-Ag2作为检测用抗原,建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法,初步应用表明,所建立方法具备良好特异性,可检测50～200倍稀释的患者血清,S/N比值均在15以上.结论 经系统筛选,获登革病毒特异性抗原片段5段,并建立了检测登革病毒抗体的ELISA方法.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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