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血流感染高致病性肺炎克雷伯菌毒力因子及分子分型特点分析
目的 研究血流感染高致病性肺炎克雷伯菌的毒力基因和基因分型特点. 方法 采用PCR方法检测临床分离株血流感染高致病性肺炎克雷伯菌的高毒力基因,并进行荚膜血清型和ST分型;采用微量肉汤稀释法通过BDPhoenix全自动细菌鉴定/药敏系统对分离菌株进行药敏试验;应用加克拉维酸复合药(头孢他啶/克拉维酸或头孢噻肟/克拉维酸)与单药(头孢噻肟或头孢他啶)的药敏纸片组合进行肺炎克雷伯菌产ESBLs的表型确证试验. 结果 115株血流感染肺炎克雷伯菌临床分离株分为高毒力肺炎克雷伯菌(Hvkp,占43.48％,50/115)和非Hvkp(non-HvKP,占56.52％,65/115).与non-HvKP相比,HvKP更容易表现为高黏液性表型(44.00％ VS 6.15％,P＜0.01),且普遍携带rmpA(98.00％ VS 4.61％,P＜0.01)、rmpA2(50.00％ VS 3.08％,P＜0.01)、wcag(24.00％ VS 2.15％,P＜0.05)毒力基因.HvKP常为K1、K2荚膜血清型,non-HvKP常为K-nontypable血清型.本组血流感染肺炎克雷伯菌主要流行ST型别为ST23、ST65、ST37,其中Hvkp流行型为ST23、ST65和ST86.Hvkp对常用抗生素的敏感性好于non-HvKP,其中发现产ESBLs耐药hvKP菌株4株. 结论 血液感染高毒力肺炎克雷伯菌易表现为高黏液性表型且普遍携带rmpA毒力基因,因此应注意检测肺炎克雷伯菌黏液性状、荚膜血清型、毒力基因以及ST分型,以利于hvkp感染的识别.
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幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A的分离纯化
在对Hp毒力因子进行的研究中，发现CagA基因是Hp高毒力株的标志基因。其编码产物-细胞毒素相关蛋白A(CagA)是引起人类严重胃部疾患的主要因素之一，CagA基因并不存在于所有的Hp菌株中，在中国人中约有90%感染者含有此基因。该基因已被克隆和测序，含有CagA基因与不含CagA基因的菌株在致病能力上存在显著的差异。目前一致认为含CagA基因的Hp菌株为高毒株，与消化性溃疡，萎缩性胃炎及胃癌的发生密切相关。CagA蛋白位于细胞表面，是一种亲水性免疫显性蛋白，可刺激患者机体产生相应的IgG和IgA抗体，从而可以通过免疫学的方法达到检测高毒力Hp菌株的目的。
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结核杆菌毒力的研究进展
据世界卫生组织(WHO)统计,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)近年来每年引起全球约300万人死亡.我国在全球22个结核病(TB)高负担国家中居第2位[1],且具有患病率高、分布广、病死率高等特点.结核菌侵入人体后,有些感染者发展为重症结核,有些成为潜伏感染[2-3],未出现活动性结核病的症状和表现[4].研究表明,不同毒力的MTB感染巨噬细胞后可诱导宿主细胞产生不同的转归:高毒力结核菌株H37Rv能够抑制细胞凋亡,在胞内存活、繁殖、扩散,导致细胞坏死,进而引发炎症反应、细菌扩散;而H37Ra、卡介苗(BCG)等减毒株则能诱导宿主细胞产生大量凋亡,研究提出该凋亡途径与TNF-α无关[5].毒力具体机制仍不清楚,现在就结核杆菌毒力的部分问题作一综述.
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产碳青霉烯酶K20型肺炎克雷伯菌的分离及分子背景研究
根据荚膜血清学分型，可以将肺炎克雷伯菌分为78个血清型。近年来研究非常关注的荚膜血清型K1、K2、K20、K54、K57型肺炎克雷伯菌在动物实验中表现出较强的毒力特征，并发现与人类肝脓肿、眼内炎、腹膜炎等多种侵袭性疾病密切相关［1－3］。这些高毒力肺炎克雷伯菌多携带rmpA、magA、wcaG、Arobactin等毒力基因，在毒性、侵袭性、血清抵抗性等方面都显著高于其他荚膜血清型肺炎克雷伯菌［4］。
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K1血清型肺炎克雷伯菌临床感染分子流行病学研究
目的 了解K1血清型肺炎克雷伯菌(K1-Kpn)的临床特点和分子流行病学特征.方法 收集医院2015年1-12月各类标本中分离的所有非重复肺炎克雷伯菌331株,使用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性分析;"拉丝"试验检测菌株的高黏液表型;PCR方法检测6种高毒力荚膜血清型、7种常见毒力基因和17种常见耐药基因;多位点序列分型(MLST)分析K1-Kpn的分子流行病学特征.分析感染K1-Kpn患者的平均年龄、平均急性生理与慢性健康(APACHE)Ⅱ评分、平均住院时间及ICU入住率等临床特征,并与40例同期感染非K1-Kpn的患者进行比较.结果 检出37株K1-Kpn,HM试验阳性率为72.97％,7种常见毒力基因的携带率在91.89％～100.00％;感染K1-Kpn和非K1-Kpn患者的平均年龄为(55.43±16.1)和(43.43±14.2)岁,差异有统计学意义(Z=-5.412,P=0), APACHE Ⅱ评分为(27.72±8.53)和(18.63±7.29)分,差异有统计学意义(Z=-14.388,P=0),平均住院时间为(53.7±27.4)和(10.2±8.4)d,差异有统计学意义(Z=-4.311,P=0)及ICU分离率为45.95％(17/37)和20.00％(8/40),差异有统计学意义(χ2=5.9,P<0.05);对常用抗菌药物仍保持较高的敏感性,PCR结果显示产SHV型β-内酰胺酶4株(占10.81％)、TEM型4株(占10.81％)和CTX-M型14株(占37.84％),另有13株(占35.14％)携带PMQR基因,仅1株携带16 SrRNA甲基化酶基因,未检出碳青霉烯酶基因,MLST分型显示:ST23为主要序列型.结论 K1-Kpn携带多种毒力基因,耐药机制与β-内酰胺基因密切相关,ST23为其主要的临床流行株;对中老年、心脑血管疾病合并肺部感染患者,应积极地预防控制K1型菌株感染,控制其传播.
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肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床及微生物特征分析
目的 对肺炎克雷伯菌肝脓肿的临床特征和致病菌的微生物特性进行总结,为临床的诊治提供依据.方法 采用回顾性分析方法,收集2010年1月至2014年12月就诊于北京3家教学医院,经B超或CT诊断为肝脓肿、脓肿穿刺物培养为肺炎克雷伯菌的152例患者病历,对其中137份完整的病历进行分析;对来自肝脓肿的非重复患者的152株肺炎克雷伯菌进行黏丝试验确定高黏液性状,使用PCR方法进行荚膜血清分型和毒力基因检测,K-B法进行药敏试验,采用χ2 检验对结果进行统计分析.结果 肺炎克雷伯菌肝脓肿多发生于中老年男性及糖尿病患者,92.7%(127/137)有发热,80.3%(110/137)的脓肿为单发,单发脓肿中80.9%(89/110)发生于右叶,33.6%(46/137)的脓肿内可见气体;74.5%(102/137)的白细胞计数、83.2%(114/137)的中性粒细胞百分比、78.1%(107/137)的谷丙氨酸转氨酶和51.8%(71/137)的胆红素升高.87.5%(133/152)菌株属于高黏液型;K1型是常见的血清型,其次为K2 型;毒力基因 rmpA 和气杆菌素的检出率分别为82.9%(126/152)和88.2%(134/152);不伴其他肝胆疾病的肝脓肿的K1型比例、rmpA和气杆菌素检出率分别为65.7%、94.9%和96.0%,高于伴有其他肝胆疾病肝脓肿的28.9%、50.0%和68.4%,差异有统计学意义(x2 =14.98、38.40、17.61,均P<0.01),未分型比例为5.1%,低于伴有其他肝胆疾病脓肿的26.3%,差异有统计学意义(x2 =10.65,P<0.01).肺炎克雷伯菌对常见抗生素的耐药率较低.结论 肺炎克雷伯菌肝脓肿多由高黏液、携带毒力基因rmpA和气杆菌素的高毒力肺炎克雷伯菌引起,大多数菌株对抗生素尚敏感.
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幽门螺杆菌感染与胃外疾病相关性研究
幽门螺杆菌(HP)是慢性胃炎的重要病原菌,与消化性溃疡、胃癌关系密切.临床上将HP菌株大体分两类:Ⅰ类:高毒力株,含有细胞毒素相关基因A(Cag A),表达Cag A蛋白和空泡毒素(Vac A)蛋白;Ⅱ类:低毒力株,含Vac A基因,但不表达Cag A蛋白和Vac A蛋白.
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多重耐药HvKP菌株临床感染分布及耐药机制
目的 探讨高毒力肺炎克雷伯菌新型变种(HvKP)临床感染分布和耐药机制.方法 肺炎克雷伯菌180株为实验菌株并筛选HvKP菌株;多位点序列分析和ERIC-PCR检测HvKP菌株的分子流行病学特征;检测实验菌株对常用抗菌药物的敏感性,梅里埃ETEST药敏纸条检测美罗培南和厄他培南的MIC值;PCR和基因测序检测耐药基因型、血清荚膜分型、毒力基因;黏液丝试验检测菌株高黏液型表型.结果 共分离出11株HvKP菌株,其中医院获得性HvKP菌株感染率明显高于社区获得性感染率(P<0.05);明确HvKP菌株感染前碳青霉烯类使用率明显高于其他类抗生素(P<0.05).11株HvKP中检出5种ERIC-MLST克隆分型,主要为A/ST23、 B/ST263分型.PCR和测序显示,广谱β-内酰胺酶基因中,9株携带blaTEM-1、5株携带blaCTX-M-3、5株携带blaCTX-M-14、3株携带blaSHV-12;质粒介导喹诺酮类耐药基因中,8株携带qnrA1、6株携带qnrB4、6株携带qnrS4、2株携带acc-Ib-cr.荚膜血清型为K1的10株、K2的1株.毒力基因中magA、rmpA、产气菌素的检出率明显高于其他毒力基因(P<0.05).结论 A/ST23、 B/ST263型分子克隆是引发多重耐药HvKP菌株的机制之一且存在强毒性血清型和多种毒力基因.
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疫苗类型与病原体毒力演变的关系
Gandon通过建立病原体毒力演变数学模型，研究有缺陷疫苗对病原体毒力演变的影响。发现4种类型疫苗中抗生长疫苗、抗毒疫苗使用后会导致病原体演变为高毒力株，抗感染疫苗使用后可使病原体演变为低毒力株，抗传播疫苗对病原体毒力影响较小。这一发现有助于疫苗的研究和应用。
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高毒力肺炎克雷伯菌的分子致病机制
肺炎克雷伯菌是一种常见致病菌,根据毒力和致病特点不同,可分为毒力相对较弱的经典肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌.目前,关于肺炎克雷伯菌分子致病机制研究较多且较清楚的主要有荚膜、脂多糖、黏附素和铁载体.这四大类毒力因子在经典肺炎克雷伯菌中也存在,但在高毒力肺炎克雷伯菌中存在的频率更高,并引发不同的免疫应答,从而使高毒力肺炎克雷伯菌具有特征性表型.本文就此进行详细介绍和讨论.
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高毒力肺炎克雷伯菌诱导人外周血中性粒细胞凋亡延迟及其影响核因子-κB的潜在机制
目的 了解高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)和普通肺炎克雷伯菌(non-hvKP)对人外周血中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响与差异,探讨hvKP影响核因子-κB(NF-κB)诱导中性粒细胞凋亡的潜在作用机制.方法 离体检测hvKP和non-hvKP感染患者外周血中性粒细胞的凋亡情况.取健康成人外周血分离中性粒细胞,设0.9％NaCI溶液对照组、hvKP组和non-hvKP组,各组分别刺激中性粒细胞0、3、6、9 h后,采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞的呼吸爆发功能,采用Western blot检测感染后中性粒细胞NF-κB的表达水平.结果 hvKP组各个时间点的中性粒细胞凋亡率显著低于non-hvKP组(P＜0.01).体外研究显示,non-hvKP组各个时间点的中性粒细胞凋亡率显著高于hvKP组和对照组(P＜0.01);hvKP组中性粒细胞的呼吸爆发率显著低于non-hvKP组(P＜0.01).Western blot检测发现随着感染时间的增加,hvKP感染人中性粒细胞的p65蛋白表达量显著高于non-hvKP (P＜0.01).结论 hvKP可通过上调p65蛋白表达从而抑制NF-κB信号途径,导致中性粒细胞凋亡延迟,但却可降低中性粒细胞的呼吸爆发能力,其或可在hvKP感染致病中发挥重要作用.
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高毒力肺炎克雷伯菌的实验室检测标志
高毒力肺炎克雷伯菌可引起严重的社区获得性感染,易转移形成新的并发灶,可导致肝脓肿、肺炎、脑炎和眼内炎等,致死率较高.目前尚缺乏该类菌鉴定金标准.该文从高黏液性与耐药性表型、荚膜基因与毒力基因、多位点序列分型等方面对高毒力肺炎克雷伯菌的检测标志进行综述,以期为实验室对该类菌鉴定有所裨益.
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产ESBLs高毒力肺炎克雷伯菌研究进展
肺炎克雷伯菌根据毒力及致病特点分为经典肺炎克雷伯菌 (cKP) 和高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP). 1986年在中国台湾地区首次报道高毒力肺炎克雷伯菌,后越来越多在东南亚地区报道,南非、澳大利亚、欧洲和美国等也有报道[1]. 研究[2,3]发现,hvKP携带黏液表型调节基因和气杆菌素,因此表现为高毒力. 该菌常侵袭年轻健康的宿主且易并发脓毒血症,严重的侵袭性疾病,如化脓性肝脓肿,脑膜炎,重症肺炎、眼内炎,坏死性筋膜炎等[4].相对于易引起医院感染的"普通"肺炎克雷伯菌, HVKP感染严重且易继发性迁移,可导致多器官感染[5]临床死亡率高.感染hvKP有幸救活者,难免患有严重的并发症, 比如较常见的是失明和神经系统后遗症等[6]. 虽然大多数高致病性肺炎克雷伯菌株对抗生素敏感, 但有些菌株同时具有高毒性和抗药性, 越来越多研究报道碳青霉烯抗性和高毒力的肺炎克雷伯菌菌株出现. 多药耐药和高毒力在同一种菌株的结合有可能导致下一次临床危机.
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临沂地区高毒力肺炎克雷伯菌的分子特征
目的：从分子生物学特征方面对高毒力肺炎克雷伯菌进行分析，为实验室诊断提供参考。方法：采用回顾性分析，收集69位肺炎克雷伯菌阳性的患者标本，进行黏液丝试验，使用PCR方法进行荚膜血清分型和毒力基因检测。结果：37株高黏液型高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因rmpA和aerobactin的携带率分别为72.9%和100%；常见的血清型是K1型，其次为K2型。结论：高毒力肺炎克雷伯菌具有一定的分子生物学特征，除了高粘液表型和荚膜血清型集中在K1或K2型之外，毒力基因rmpA或aerobactin也高表达。这些分子特征对实验室诊断高毒力肺炎克雷伯菌的参考价值有待进一步明确。
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临沂地区高毒力肺炎克雷伯菌的分子特征分析
目的 从分子生物学特征方面对高毒力肺炎克雷伯菌进行分析,为实验室诊断提供参考.方法 收集69位肺炎克雷伯菌阳性患者的标本,进行黏丝试验,使用PCR方法进行荚膜血清分型和毒力基因检测.结果 69例标本中,37株为高黏液型高毒力肺炎克雷伯菌,其毒力基因r m-pA和aerobactin的携带率分别为72.9％ 和100％;常见的血清型是K1型,其次为K2型.结论荚膜血清型K1或K2型、毒力基因rmpA或aerobactin可以辅助高黏液表型对hvKP做出实验室诊断.
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肺炎克雷伯菌的毒力特性及其对视网膜色素上皮细胞炎症相关因子表达的影响
目的 比较高毒力肺炎克雷伯菌与经典肺炎克雷伯茵的毒力特性,探讨不同毒力的肺炎克雷伯茵对视网膜色素上皮细胞炎症相关因子表达的影响.方法 收集8株高毒力肺炎克雷伯菌及8株经典肺炎克雷伯菌,分为高毒力肺炎克雷伯菌组和经典肺炎克雷伯茵组,通过黏液丝实验、PCR扩增rmpA基因检测、细菌抗血清杀伤实验及细菌抗吞噬实验比较两组肺炎克雷伯菌的毒力特性;两组细菌分别感染视网膜色素上皮细胞,通过ELISA检测视网膜色素上皮细胞内单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平.结果 高毒力肺炎克雷伯菌组细菌的高黏液表型、rmpA基因表达水平、抗血清杀伤能力及抗巨噬细胞吞噬能力均显著高于经典肺炎克雷伯菌组;两组细菌分别感染视网膜色素上皮细胞后,高毒力肺炎克雷伯菌组MCP-1和IL-6含量分别为(1177.38±227.17)ng·L-1、(118.63±40.39)ng·L-1,经典肺炎克雷伯菌组分别为(669.50±62.01)ng· L-1、(53.75±14.04) ng·L-1;视网膜色素上皮细胞MCP-1和IL-6表达水平高毒力肺炎克雷伯菌组分别是经典肺炎克雷伯菌组的1.76倍和2.20倍,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 相对于经典肺炎克雷伯菌,高毒力肺炎克雷伯菌具有高黏液表型、抗血清杀伤能力及抗巨噬细胞吞噬能力强的特性,且感染视网膜色素上皮细胞后,可引起更严重的炎症反应.
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呼吸系统感染高毒力肺炎克雷伯杆菌的临床和分子特征
目的 了解呼吸系统感染高毒力肺炎克雷伯杆菌(hvKP)的临床特征、常用抗生素的耐药性和分子特征.方法 收集中山大学附属第三医院2016年8月至2017年8月呼吸系统感染患者分离的62株肺炎克雷伯杆菌作为实验菌株,分析病例的临床特征,采用药敏实验检测菌株耐药性,利用PCR检测菌株的毒力质粒和耐药质粒的分布.结果 62株呼吸系统感染肺炎克雷伯杆菌中11株是hvKP,检出率为17.7%,其中1株hvKP发生迁徙感染,hvKP感染成人患者的高体温为(38.6±0.9)℃,其中63.6%(7/11)的患者表现为中高热,而普通肺炎克雷伯杆菌(cKP)感染成人患者的高体温为(37.8±0.9)℃,其中60.9%(28/46)的患者表现为低热或无发热.hvKP感染成人病例平均年龄(53.3±13.1)岁,低于cKP感染成人病例平均年龄(65.6±18.6)岁,66.7%(6/9)hvKP感染病例胸部CT表现为结节渗出阴影或脓肿,cKP感染病例中25.6%(11/43)胸部CT表现结节渗出阴影或脓肿.所有(11/11)hvKP菌株都含有毒力质粒pLVPK的部分基因rep、rmpA或iuc,其中毒力质粒pLVPK特有序列rep只存在于hvKP菌株.hvKP菌株对大部分抗生素敏感,目前未发现含有耐碳青霉烯质粒KPC-2基因的hvKP菌株,hvKP菌株均对碳青霉烯类抗生素敏感.结论 呼吸系统感染的hvKP病例临床特征有别于cKP病例,hvKP菌株对大部分抗生素敏感性高并含有毒力质粒pLVPK基因,但未发现含有耐药质粒KPC-2的hvKP菌株,指导临床可使用碳青霉烯类抗生素治疗hvKP感染.
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幽门螺杆菌研究的主要进展和趋势
1 H.pylori的微生物学和流行病学1.1 H.pylori的基因型 目前发现H.pylori是基因型易变的细菌。目前研究的重点主要是H.pylori的cag致病岛、vacA基因、尿素酶A基因、鞭毛素A基因、粘附素基因及耐药基因，以期明确H.pylori的致病性，进而达到免疫防治或减少H.pylori的耐药性产生，提高H.pylori根除疗效的目的。但尚未能根据H.pylori的基因型对临床H.pylori菌株进行系统分类，仅能根据H.pylori的cag致病岛和vacA基因型将H.pylori分为高毒力株和低毒力株。cag致病岛中存在的功能性序列，使之能产生CagA蛋白者一般毒力较强。vacA基因三个不同信号(Sla，Slb，S2)和两个不同的中区(m1，m2)抽构成的不同基因亚型中，S1/m1型毒素活性强，S1/m2型活性低或测不到活性，S2/m2型无毒素活性。
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高毒力肺炎克雷伯菌的研究进展
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)作为主要的医院感染病原菌已被大家所熟知,同时它也是目前革兰阴性菌血流感染第二大菌.近二三十年间KP表现出两大趋势:其一是越来越多KP发展为多重耐药菌株甚至出现泛耐药菌株;其二是部分KP表现为高毒力且常侵袭健康的宿主并造成严重的侵袭性疾病,出现了高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent Klebsiell pneumoniae,HVKP).现普遍认为造成HVKP高毒力的主要原因是其自身厚重的荚膜抗吞噬作用及其强大的摄铁系统.目前鉴定高毒力肺炎克雷伯菌尚无金标准,这对临床的早期诊断和治疗造成了较大的困难.HVKP除对氨苄西林天然耐药外,对其他大多数抗菌药敏感,但这几年产β-内酰胺酶的HVKP和产碳青霉烯酶的HVKP也陆续报道.本文对HVKP的研究进展做一综合阐述.
