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戊型肝炎疫苗的研究进展
自1991年戊型肝炎病毒(HEV)基因组全序列被克隆和测序后,对HEV的致病性、分子生物学及疫苗进行了深入研究.但近年来发现,HEV的流行范围远较初预料的要广泛,从而给HEV疫苗研究提出了新问题.
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幽门螺杆菌lpp20基因的克隆及序列分析
幽门螺杆菌(Hp) lpp20基因编码Hp外膜上的一种相对分子质量约为18×103的脂蛋白(Lpp20).有研究表明,Lpp20具有良好的免疫原性和免疫保护性,是一种理想的疫苗候选抗原.本研究对Hp郑州分离株MEL-HP27 lpp20基因进行克隆和测序;通过对7株Hp lpp20基因的核苷酸序列及相应的氨基酸序列进行同源性分析,确定Hp lpp20基因的变异性.
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幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A的分离纯化
在对Hp毒力因子进行的研究中,发现CagA基因是Hp高毒力株的标志基因。其编码产物-细胞毒素相关蛋白A(CagA)是引起人类严重胃部疾患的主要因素之一,CagA基因并不存在于所有的Hp菌株中,在中国人中约有90%感染者含有此基因。该基因已被克隆和测序,含有CagA基因与不含CagA基因的菌株在致病能力上存在显著的差异。目前一致认为含CagA基因的Hp菌株为高毒株,与消化性溃疡,萎缩性胃炎及胃癌的发生密切相关。CagA蛋白位于细胞表面,是一种亲水性免疫显性蛋白,可刺激患者机体产生相应的IgG和IgA抗体,从而可以通过免疫学的方法达到检测高毒力Hp菌株的目的。
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心律失常的研究现状
心律失常是近年来心血管病领域非常活跃的一门学科,从基础到临床都作了大量研究,本期有7篇论文涉及心律失常的药物和非药物治疗.关于基础研究方面,缝隙连接(gap junction)与传导异常型心律失常的关系受到重视,缝隙连接广泛存在于各种生物体的多个组织器官中,通过蛋白来表达,目前已经克隆和测序的哺乳动物连接蛋白约15种,在人类心肌细胞中主要有CX40,CX43,CX45.在慢性、缺血性心肌病、瓣膜病等心脏病中,出现缝隙连接蛋白表达量和种类的变化,可能参与了心房颤动(AF)的维持.缝隙连接与折返性心律失常也有关系,缝隙连接是某些传导障碍型心律失常的结构基础.对缝隙连接的深入研究将为心律失常发病机制和抗心律失常药物治疗的筛选开辟了新的途径.
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瘦素与妊娠的关系
1994年,Zhang等[1]成功克隆和测序了小鼠和人类的肥胖基因(obese gene,Ob),确定了其编码蛋白产物为瘦素(lep-tin).瘦素主要由脂肪细胞产生、分泌,进入血液,传递体内脂肪含量的信号给中枢神经系统,从而抑制摄食、增加能量消耗、减轻体重、控制能量平衡.随着研究的深入,发现瘦素与妊娠关系密切,现就瘦素与妊娠的研究进展综述如下.
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角质细胞生长因子及其辐射防护作用
成纤维细胞生长因子(Fibrobast Groth Factor,FGF)家族由一组在结构上相关的16种蛋白质组成,其中包括初发现的酸性FGF(aFGF,FGF-1),碱性FGF(bFGF,FGF-2),还包括一些原癌基因的产物,如int-2(FGF-3)、hst(FGF-4)、FGF-5和FGF-6,以及角质细胞生长因子(Keratinocyte Growth Factor,KGF,FGF-7)[1]、雄激素激活因子(AIGF,FGF-8)、神经角质激活因子(GAF,FGF-9)、成纤维细胞生长因子-10(FGF-10)和4种成纤维细胞生长因子类似因子(FHFs)(FDF-11~14)及近发现的FGF-15和FGF-16。 与其他大多数FGF具有很强的广谱促细胞分裂作用相比,KGF是一种对包括胃肠道在内的各种类型的上皮细胞具高度特异的强促分裂作用的细胞因子。KGF在0.1~1.0 nmol/L的浓度范围内其浓度与细胞DNA合成呈线性关系,小浓度时可使细胞DNA合成增加600倍[1]。 一、角质细胞生长因子及其分子结构 KGF是由Rubin等人在M426肺成纤维细胞中首先发现的,具有有丝分裂原的性质[1]。纯化的KGF蛋白是分子量为26~28 kD怕热怕酸的单体。此后相应的cDNA的克隆和测序表明,KGF属于FGF家族[2]。
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幽门螺杆菌在胆囊结石形成中作用机制的研究
胆囊结石是一常见疾病,随着人口的老龄化和生活条件的改善,胆囊结石的发病率无论在全世界还是在我国范围内均有明显上升趋势.据报道,西方国家成年人胆囊结石的发病率达15%~20%,我国的发病率为7%~10%,因此,探讨胆囊结石的成因,以便从根本上预防其发生,就成了近年来医学工作者的重要研究课题之一.1995年以前,大多数研究者都认为胆汁是无菌的,胆囊结石的形成与细菌无关,直到1995年,Swidsinski等采用分子生物学方法分离到人胆囊结石中细菌DNA,并扩增、克隆和测序,才使人们重新考虑细菌在胆囊结石发病机制中的作用.幽门螺杆菌只能在酸性胃液中生存,是否参与胆囊结石的形成,有待研究.幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃癌的发生密切相关.
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充血性心衰低钠血症治疗新药--V2血管加压素受体拮抗剂
随着近年来对血管加压素(AVP)结合受体的克隆和测序,许多具有直接拮抗AVP对受体作用的药物已经问世.这些制剂能够阻滞AVP对肾集合管V2受体的作用,增强游离水排泄,而没有明显的钠钾丢失,从而使血钠浓度升高,为充血性心力衰竭(CCF)水肿和低钠血症的治疗提供了一种新方法.
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第二讲受体的克隆
本文较详细地描述了如何从传统的蛋白质化学出发,结合操作核酸的分子生物学技术,来对烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的亚基进行克隆和测序.这是第一次利用这种技术来克隆神经递质受体,在这经典克隆策略后,又发展了同源克隆策略和表达克隆策略.为了解这项工作是怎样完成的,先介绍一下分子生物学家所用的有关基本技术.
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胆汁酸代谢替代途径关键酶的调节
在哺乳动物体内,肝脏的胆汁酸代谢在维持机体的胆固醇稳态中起了重要作用。胆汁酸的代谢有经典(中性)和替代(酸性)两条途径,至少有15种酶和4个不同的细胞器参与了这两条代谢途径[1]。替代途径在整个胆汁酸代谢中的作用已经越来越受到人们的重视[2],同时也有越来越多的研究者把胆汁酸研究的重点放在替代途径关键酶--甾醇27-羟化酶(CYP27)和氧化甾醇7α-羟化酶(CYP7B)的调节上。本文将对CYP27和CYP7B活性的调节及其可能的机理进行探讨。 甾醇27-羟化酶调节 甾醇27-羟化酶(CYP27)是细胞色素P450酶系中的一员,以前曾被命名为甾醇26羟化酶,催化经典途径中侧链氧化剪切的起始反应和替代途径起始步骤。与肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A)不同的是,它为线粒体内酶,存在于除肝脏以外的多种组织和细胞,有着广泛的底物活性[3],除了催化胆固醇和胆汁酸中间产物外,它还具有对维生素D3和25-羟化维生素D3羟化的活性。编码CYP27的基因已在大鼠、兔和人体身上被克隆和测序,人类CYP27基因位于染色体2q33-q10。CYP27基因含9个外显子和8个内含子,长约18.9kb。该酶发挥活性需要铁氧化还原蛋白和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)的参与。 CYP27曾被认为是一个稳定而不容易受调节的酶,然而随着对替代途径和CYP27研究的深入,越来越多的研究者已改变了这种观点,认为替代途径中任何代谢中间物都有可能调节CYP27的活性[4]。另一些研究表明,CYP27的调节和CYP7A的调节有相似性,只是同一种调节因子对CYP27的作用要小于对CYP7A的作用[5,6]。
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刚地弓形虫表面抗原研究进展
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种细胞内寄生原虫,可感染任何有核细胞,无论人或动物,感染率都很高。和其它细胞一样,弓形虫的表膜具有重要的作用,既是虫体与外界环境进行物质交换的界面,也是宿主免疫系统识别并杀伤虫体的主要部位。Handman,Goding和Remington(1980)首先对弓形虫表面抗原进行了分析,其后Johnson(1983)、Dubremetz(1985)、Rodriguez(1985)、Kasper(1982,1984,1987)亦对一些表面抗原进行了研究,虽然已发现的抗原种类很多,但由于技术方法差异,命名很混乱。G.Couver(1980)利用单克隆抗体技术对表面抗原进行了确认。随着分子生物学技术的发展,目前对表面抗原的研究已深入到基因水平,已能对编码P30、P22和P43的基因进行克隆和测序。本文将对近年来弓形虫表面抗原的研究进展作如下综述。1 速殖子的表面抗原1.1 蛋白抗原目前已知的速殖子表面蛋白抗原有五种,根据SDS-PAGE中显示的分子量大小,分别命名为P43、P35、P30、P23和P22[1-4]。编码P30抗原的基因首先被克隆、测序,根据分子遗传学的传统命名方法,编码P30的基因被称为SAG〔s〕。随后,编码P22和P43的基因相继被克隆和测序,依次命名为SAG2和SAG3。至今编码P23和P35的基因仍无法克隆、测序。SAG1、SAG2和SAG3的克隆均采用特异抗体和相关抗原对表达文库进行筛查的传统方法所得,三者具有一些明显特点:
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抑癌基因PTEN在胃癌中的研究进展
1986年第一个抑癌基因Rb经成功克隆和测序后,迄今已有越来越多的抑癌基因被陆续发现,研究热潮正方兴未艾.PTEN的发现被认为是既p53之后,抑癌基因研究领域的又一重要里程碑[1].PTEN基因具有独特的双重特异性磷酸酶活性,与多种肿瘤的发生和发展密切相关.本文就PTEN基因的结构、功能及与胃癌的关系作一概述.
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糖皮质激素抗炎机制研究进展
糖皮质激素(glucocorticoid,GC)是临床广泛使用的抗炎药物,其机理一直是研究的热点,近年来,随着分子生物学的发展和新技术的应用,特别是糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)分子克隆和测序成功后,这方面的研究取得了重大进展,本文就GC抗炎机理综述如下:
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基质金属蛋白酶在肺癌中的表达及调控
近年来,随着基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)家族成员及其组织抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)不断地被发现、克隆和测序,它们在肿瘤研究中的应用价值引起了国内外学者的密切关注,成为肿瘤研究领域中的热点之一。MMPs是一组结构相近、功能复杂的锌离子依赖性蛋白溶解酶,目前已有至少18个家族成员被鉴定出来,依次命名为MMP-1……MMP-18。研究证明,MMPs的表达与肿瘤的组织来源密切相关。本文就MMPs/TIMPs在肺癌中的表达规律及调控作一简要综述。
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反义方法及其在疼痛研究中的应用
分子生物学领域的新进展极大地促进了基因克隆和测序的发展.有人预测到2005年人类基因组计划将提供3,000~10,000种新的基因用于药物研究[1],其中约1/3的基因将用于研究疼痛.因此,对这些新基因的功能研究提出了更高的要求.目前研究基因功能的方法很多,包括增强基因表达和减弱或阻断基因表达等.减弱或阻断基因表达主要有基因敲除(knock-out)和基因下调(knock-down)两种方法.
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猴真菌监测分析
目的:了解猴真菌携带情况,为猴致病性真菌感染防控提供科学依据.方法:用真菌培养、TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术,进行猴的真菌监测分析.对所有真菌分离株进行抗真菌药敏试验.结果:从全国几个不同厂家122只猴中分离获得71株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为阿萨希毛孢子菌、圆形毛孢子菌、白色念珠菌、黄曲霉、烟曲霉、黑曲霉、焦曲霉、杂色曲霉、聚多曲霉、匿名曲霉、产黄青霉、草酸青霉、变幻青霉、宛氏拟青霉、小刺青霉、绳状青霉、卷枝毛霉、多变根毛霉、伞枝犁头霉、球毛壳霉、热带头梗霉、节菱孢霉菌、暗孢节菱孢菌、链格孢、松色二孢菌.结果表明,猴真菌种类比较丰富,获得真菌11属25种,毛孢子菌属、曲霉属、青霉属、毛霉属、念珠菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位.抗真菌药敏试验分析结果显示:这些真菌分离株对制霉菌素、两性霉素B、氟康唑、咪康唑、酮康唑、氟胞嘧啶、特比萘芬已产生了耐药性.结论:联合使用真菌培养、TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR、普通PCR、基因克隆和测序技术能有效分析猴真菌.猴的真菌大多为人兽共患病病原体.研究结果为我国猴真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防治提供科学依据.