支原体巨噬细胞活化脂肽2经MAPKs和Nrf2途径诱导人单核细胞血红素氧合酶-1产生

目的：探讨支原体巨噬细胞活化脂肽2（ MALP-2）能否诱导人单核细胞系THP-1产生血红素氧合酶-1（HO-1），并探讨其可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的，用不同浓度的MALP-2作用12 h，或一定浓度的MALP-2作用不同时间后，real-time PCR和Western blot分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达；比色法分析 HO-1酶活性情况；采用丝裂原活化蛋白激酶（ MAPKs）特异性抑制剂（30μmol/L SB203580、PD98059和SP600125）预处理THP-1细胞30 min后加入5．0 ng/ml MALP-2共孵育细胞，Western blot检测HO-1的蛋白表达。提取MALP-2处理后的核蛋白及胞质蛋白，Western blot检测转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）在细胞核及胞质中的表达情况，并采用Nrf2 siRNA干扰Nrf2表达后，检测Nrf2和HO-1表达情况。结果 MALP-2能以浓度依赖性方式诱导人单核细胞系THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白质，同时，HO-1的酶活性也随着MALP-2浓度的递增而增强；30μmol/L MAPK特异性抑制剂SB203580、PD98059和SP600125处理THP-1细胞后，MALP-2诱导HO-1的表达量随之降低；5．0 ng/ml MALP-2能降低细胞质内Nrf2的表达水平，同时增加其细胞核内含量；且转染Nrf2 siRNA 后，HO-1的表达显著降低。结论 MALP-2诱导的HO-1表达受MAPK和Nrf2的调控。

多位点串联重复序列分析和脉冲场凝胶电泳对伤寒沙门菌基因分型

目的：比较多位点串联重复序列分析（ MLVA）和脉冲场凝胶电泳（ PFGE）对伤寒沙门菌基因分型的能力，构建适合伤寒沙门菌的MLVA分型方法。方法根据国外文献报道选出5个多变的伤寒沙门菌串联重复序列（ VNTR）位点（ SAL02、SAL11、SAL16、SAL20、TR4699）设计MLVA分型方案，运用MLVA分型方案和国际PulseNet公布的沙门菌PFGE分型方案对2002至2007年21株流行病学不相关的深圳社区感染伤寒沙门菌基因分型，比较这两种分型方法对伤寒沙门菌基因分型的能力。结果5个单一VNTR位点对深圳地区伤寒沙门菌的分型能力（ D值）为0.838～0.943；使用MLVA分型方法，获得19种MLVA型别；使用PFGE分型方法，获得19种PFGE型别；两种分型方法的D值均为0.99，且结果完全一致。结论5个VNTR位点的MLVA分型方法可作为一种简单快速准确的基因分型方法用于伤寒沙门菌感染流行的分析。

《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事

同时产 ESBLs 和 AmpC 酶志贺菌临床菌株的分离及鉴定

目的：确定头孢西丁耐药志贺菌临床菌株超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs ）和头孢菌素酶（ AmpC）表型、基因型及毒力特征。方法 K-B扩散法筛选头孢西丁耐药志贺菌临床菌株并进行血清学分型。采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型， PCR及序列分析确定其ESBLs 和AmpC基因型。采用PCR检测上述志贺菌株毒力基因virA、ial、ipaH、set1A、set1B和sen，以确定其毒力基因型。结果从356株志贺菌临床菌株中检出8株头孢西丁耐药菌株，其中6株为福氏志贺菌（4株F2a、1株F2b、1株F2c）、2株为宋内志贺菌。8株头孢西丁耐药志贺菌中，5株ESBLs确证试验阳性，另2株AmpC酶三维试验阳性；7株携带ESBLs基因（ CTX-M-14、15、57和/或OXA-30），其中2株检出AmpC基因（ DHA-1和CMY-2）。8株头孢西丁耐药志贺菌中，5株携带所有6种受检的毒力基因，3株携带除set1A和set1B以外的4种毒力基因。两株同时产ESBLs和AmpC酶志贺菌仅对亚胺培南敏感。结论头孢西丁耐药志贺菌临床菌株产ESBLs为主且有较强毒力，但部分菌株同时产AmpC酶，其中DHA-1型AmpC酶为国内首次发现。

大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及分子分型

目的：研究大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制及分子分型。方法2007-2011年从杭州市3家医院分离到22株对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌。琼脂稀释法测定抗生素低抑菌浓度（ MIC）；接合试验、PCR扩增和序列分析等研究细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制。脉冲场凝胶电泳（PFGE）、多位点序列分型（MLST）和系统发育分型（phylogenetic typing）等对菌株进行分子分型。结果22株大肠埃希菌亚胺培南和美罗培南的MIC范围为1～16μg/ml，厄他培南为2～64μg/ml。所有菌株产KPC-2型碳青霉烯酶及各种β-内酰胺酶，部分菌株同时产质粒介导的AmpC酶。22株大肠埃希菌均可通过接合试验或转化试验将碳青霉烯耐药性传递给大肠埃希菌EC600，使后者获得blaKPC-2基因及与供体菌相似的耐药性。 PFGE显示仅少数菌株为相同克隆或密切相关；MLST显示常见的序列类型为ST131（9株）和ST648（5株）， ST38和ST405各2株；系统发育分析显示9株ST131菌株均为B2群，另有11株属于D群，B1群和A群各1株。结论杭州地区产KPC-2大肠埃希菌主要为世界范围流行的多重耐药菌株ST131，其次为ST648。

转录因子 p53通过激活Ⅰ型干扰素通路抑制登革病毒感染

目的：探讨转录因子p53在登革病毒感染中的作用。方法用逆转录病毒载体介导的RNA干扰技术构建p53低表达的人肝癌细胞株HepG2，并采用Western blot 进行鉴定。设定野生组和干扰组，分别用2型登革病毒感染。采用Vero细胞噬斑法检测病毒滴度；间接免疫荧光检测病毒增殖；流式细胞术检测病毒感染后细胞凋亡；酶联免疫吸附试验检测IFN-β分泌。结果与野生组比较，干扰组p53表达明显下调，表明构建p53低表达的HepG2细胞株成功。登革病毒感染24 h后，干扰组病毒滴度比野生组高100倍；免疫荧光显示干扰组发绿色荧光的细胞数明显多于野生组，说明p53抑制了登革病毒的感染。但是，登革病毒感染24 h后两组凋亡细胞的数目并没有明显差异，而野生组IFN-β分泌量增加6倍。结论转录因子p53抑制登革病毒感染可能不是通过促进细胞凋亡，而是通过激活Ⅰ型干扰素通路来发挥作用。

柯萨奇病毒 B3 KM06／2009株全基因组测序及其序列分析

目的：分析柯萨奇病毒B3（ CVB3） KM06/2009全基因序列，并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega 4.1、RDP3和SimPlot3.5.1等软件分析全基因序列。结果 CVB3 KM06/2009病毒株全基因组全长7401 bp个核苷酸（nt），5′端和3′端分别为743 nt和100 nt的非编码区，5′和3′非编码区间为一个6558 nt长的开放读码框，编码一个含2185个氨基酸的多聚蛋白，编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank 库中CVB3 Nancy 原型株比较，其全基因组序列核苷酸同源性为81.4％，氨基酸同源性为95.7％；与无心肌毒力的临床分离株CVB3 GA比较，其全基因组序列核苷酸同源性为80.7％，氨基酸同源性为96.4％；与历史同期国内临床分离株Beijing0811、SSM、GZ0803株比较，整个基因组的核苷酸同源性分别为98.1％、89.7％和88.4％，氨基酸同源性分别为99.4％、98.1％和98.1％。基于全基因组和全长VP1核酸序列的进化树图均显示，CVB3病毒株具有明显的时空聚簇分布特征。 CVB3心肌毒力相关区域5′非编码区颈环结构Ⅱ RNA二级折叠结构分析结果表明，CVB3 KM06/2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。结论基于基因分子生物信息学分析，与CVB3临床分离株比较，KM06/2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。

2006-2011年青岛地区B型流感病毒全基因组进化特征分析

目的：了解2006-2011年间青岛地区流行的B型流感病毒的全基因组进化特征。方法选取2006-2011年间青岛地区分离的B型流感病毒，提取病毒RNA，应用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）扩增各基因片段，并进行序列测定；Sequencher 软件完成序列拼接。 MEGA5.0软件对各基因片段进行系统发育分析及分子特征分析。结果在血凝素（ HA）基因进化树上，Victoria系V1分支为B/Malaysia/2506/2004样毒株，包含2006-2009年13个毒株，V2分支为B/Brisbane/60/2008样毒株，包含2009-2011年12个毒株；Yamagata 系全部为 B/Florida/4/2006样毒株， Y1分支包含2006-2008年5个毒株，Y2分支包含2010-2011年7个毒株。全基因组分析表明V2分支3个毒株发生了5＋3重配，1个毒株发生了1＋7重配，重配株均与前一季及当季疫苗株同亚型；HA进化树上处于Yamagata系的毒株全部属于基因型2，处于Victoria系的毒株全部属于基因型15；HA1蛋白与疫苗株进行比较：Victoria系分离株主要变异位点包括H14Q、L58P、N129S、I146V、N171D、R279K；Yamaga-ta系分离株主要变异位点包括R48K、K88R、P108A、N116K、S150I、N165Y、D196N、N202S、S229G；位点116和129、位点150、位点165、位点196和202分处以往证实经历阳性选择的抗原表位120环、150环、160环和190环。结论2006-2011年青岛地区B型流感病毒两系共流行，并且持续进化；疫苗的使用可为同系病毒造成选择压力，而双组分的B型流感疫苗可能更为有效。

钙离子通道调节细胞在抗结核作用方面的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌（ MTB ）感染引起的慢性传染病。 MTB可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。目前，全球已有20亿人感染MTB，仅在2012年，新发结核患者达860万，有130万人因结核病死亡［1］。2012年我国结核病新发患者人数约为90万，占全球的10．5％，位居全球第二位［1］。目前结核病的预防和治疗遇到的主要挑战在于：（1）流动人口感染及隐性感染患者数量庞大；（2）在应对耐多药结核病（ MDR-TB）方面取得的进展仍然十分缓慢；（3）免疫低下人群合并感染［2］。单凭目前已有的化疗方案很难应对上述挑战，因此应当致力于开发新的治疗方法，这包括新药的研发、免疫治疗以及基因治疗等综合方法的运用。

疱疹病毒感染与不良妊娠结局相关性的研究进展

不良妊娠结局包括自然流产、死胎、早产、胎儿宫内发育迟缓、畸形等。病原微生物感染是导致不良妊娠的重要原因，其中病毒感染不可小视。研究发现，在自然流产的胚胎或死胎组织中，人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、EB病毒等病毒核酸检出率高达34％［1-2］。妊娠早期，病原体引起子宫内膜、胎盘炎症可导致胎儿染色体异常；胎儿发育过程中，病原体还可通过活化母体巨噬细胞和 T 淋巴细胞，释放TNF-α、IL-1、IL-6等细胞因子，促进子宫收缩而诱发流产；病原体（尤其病毒）还可破坏胎盘屏障或直接透过胎盘屏障，引起胎儿感染，导致流产、死胎或畸胎等［3］。因此，当前各级妇幼保健机构均开展了宫内感染和围生期感染的病原体“TORCH”筛查工作［4］，其中C（cytomegalovirus，CMV）是人巨细胞病毒，H（herpes simplex virus，HSV-1／2）是单纯疱疹病毒1／2型，均为疱疹病毒家族。

白念珠菌唑类药物作用靶酶在菌株唑类耐药机制中的作用

近年来，随着获得性免疫缺陷综合征（ AIDS，艾滋病）患者的不断增多，高效广谱抗生素、糖皮质激素的广泛应用，抗肿瘤治疗的深入开展，以及器官移植、介入治疗的不断实施，白念珠菌感染的发生率呈上升趋势［1-2］。更重要的是，该菌为导致黏膜和血源播散性感染的重要条件致病菌，感染率远高于其他念珠菌［3-4］。治疗白念珠菌引起的感染常用三唑类抗真菌药物，包括氟康唑（ Fluconazole ）、伊曲康唑（Itraconazole）和伏立康唑（ Voriconazole）等［5］。然而长期和重复用药往往导致耐药菌株的出现，特别是对于艾滋病患者口腔黏膜念珠菌病的治疗，唑类耐药现象已经成为严重的问题［3，6］。其中唑类抗真菌药物的靶酶编码基因ERG11的突变和过度表达是白念珠菌产生耐药性的重要原因，且已成为近年来国内外学者研究的热点。现就此项研究进展进行综述。

人A组轮状病毒结构蛋白VP8的卵黄抗体制备与活性检测

目的：制备人A组轮状病毒VP4结构蛋白N端的刺突蛋白VP8卵黄抗体IgY，并检测其生物学特征。方法以轮状病毒VP4基因的DNA为模板，采用PCR方法扩增VP8 DNA序列。将VP8片段克隆到原核表达载体 pET28a 上，形成重组质粒pET28a-VP8，转化基因工程菌E．coli BL21，完成VP8重组蛋白的诱导表达。 VP8包涵体蛋白经纯化和蛋白复性后，与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用水稀释-超滤法纯化卵黄抗体IgY。通过SDS-PAGE、Western blot、ELISA和点杂交等技术方法，分析该抗体的生物学特性，包括抗体的纯度、滴度、特异性和稳定性。结果 VP8在基因工程菌E．coli BL21中主要以包涵体蛋白形式表达，相对分子质量约为35×103，在pH8．0的Tris-HCl缓冲体系其复性效率可达90％。将重组抗原VP8免疫产蛋鸡，获得VP8抗原特异性的卵黄抗体IgY，抗体滴度达到1∶100000，且特异性地识别野生型A组轮状病毒。结论本研究采用基因工程和免疫技术制备的VP8卵黄抗体IgY，具有较高的抗体滴度和特异性，为婴幼儿轮状病毒感染性腹泻的诊断和防治提供了新的思路。

应用 PCR 技术和 wciP 基因测序方法鉴定6群肺炎链球菌血清型

目的：利用分子生物学方法，包括PCR技术和wciP基因测序鉴别6群肺炎链球菌血清型。方法根据GenBank上发表的wchA基因和wciO基因设计合成6群特异性引物，wciNα基因设计合成6A/B型特异性引物，wciNβ基因设计合成6C/D型特异性引物，做PCR扩增，凝胶电泳确认PCR产物；根据wciP基因设计6群特异性引物，PCR扩增后产物测序确定第584位核苷酸。结果原6A型9株菌株（编号为6A-1至6A-9）和原6B型7株菌株（编号为6B-1至6B-7）用6群特异性引物进行的扩增均有分子量在2.0 kb左右的PCR产物，而1型没有PCR产物；除6A-2、6A-3、6B-3和6B-7外，其余菌株用6A/B型特异性引物进行的扩增有600 bp左右的PCR产物；6A-2、6A-3、6B-3和6B-7用6C/D型特异性引物进行的扩增有750 bp左右的PCR产物；测序结果确认原6A型9株菌株wciP基因第584位为G，原6B型7株菌株wciP基因第584位为A。结论6A-1、6A-4、6A-5、6A-6、6A-7、6A-8、6A-9属于6A型，6A-2、6A-3属于6C型，6B-1、6B-2、6B-4、6B-5、6B-6属于6B型，6B-3和6B-7属于6D型。

肺炎链球菌荚膜多糖抗原活性的评价方法

目的：比较免疫双扩散法和速率散射比浊分析法在肺炎链球菌荚膜多糖抗原性评价方面的优劣。方法分别采用免疫双扩散法和速率散射比浊分析法检定来源于4个公司和美国ATCC的1型、6B型、9V型、10A型、14型和19A型肺炎链球菌荚膜多糖样品的抗原活性，同时比较肺炎链球菌免疫血清和仪器增益值对实验结果的影响。结果两种抗原活性检定方法都显示9V型4号样品的抗原活性缺失，其速率散射浊度信号值接近阴性对照；其余多糖样品均有沉淀线，速率散射浊度信号值高低不等；不同来源的肺炎链球菌抗血清和仪器增益值对速率散射比浊分析法的实验结果无明显干扰。结论速率散射比浊分析法能够定量分析各型肺炎链球菌荚膜多糖的抗原活性。

本刊使用的医学缩略语

中华医学会2014年全国微生物学与免疫学学术年会征文通知

第七次全国暨第六届亚洲支原体学术会议征文通知