华支睾吸虫1 5/1 6 ku蛋白的纯化与部分氨基酸顺序测定

目的进一步证明华支睾吸虫成虫15/16 ku蛋白(Cs15/16)用于诊断的免疫活性,同时测定其部分氨基酸顺序,便于今后对此蛋白的人工合成等分子生物学研究及其相关免疫学研究.方法用高效液相色谱技术(HPLC)自华支睾吸虫粗抗原(Clonorchis sinensis adultworm antigens,CAA)中提纯15/16 ku蛋白,用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其抗原活性,并使用蛋白质自动测序仪测定其N端部分氨基酸顺序.结果3个具有抗原活性的纯化样品(H3、H11及H13)中,H13的诊断效果接近CAA,敏感性达90%,特异性95%.分别测获3个纯样的N端15、14和20个氨基酸残基(aa),其中H11的N端14个aa与H13的前14个完全相同.结论进一步证明了Cs15/16为有效的诊断抗原,测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考.

HLA-B*2705重链的原核表达和活性鉴定

本研究探讨HLA-B*2705重链的原核表达及活性鉴定.从HLA-B*2705全长cDNA中PCR扩增出膜外区片段并克隆进入pGEM-T载体,序列测定后构建原核融合表达载体pET32a(+)-B*2705,并转化大肠杆菌.Western Blot和阻断抗体反应鉴定它们在体外是否具有HLA-B27抗原活性.结果表明:HLA-B*2705重链融合蛋白在大肠杆菌中获得高效融合表达,表达产量占细菌总蛋白的50%以上;通过Western Blot和阻断抗体反应鉴定它们在体外具有HLA-B27抗原活性.结论:本研究获得了}玎LA-B*2705重链融合蛋白,为今后的相关研究打下了基础.

SARS冠状病毒膜蛋白膜内区的表达、纯化及抗原性初步研究

目的 对SARS冠状病毒膜蛋白膜内区基因片段进行克隆表达和表达产物的纯化复性,探讨该表达蛋白的抗原特性.方法 克隆SARS冠状病毒GD322株膜蛋白膜内区,在原核表达系统中表达His-融合蛋白,采用Western blot和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析His-融合蛋白抗原特性.结果 7份SARS临床诊断患者血清中5份血清能与His-融合蛋白反应,2份不与之反应.兔抗OC43、229E血清及20份健康人血清皆不与His-融合蛋白反应.His-融合蛋白免疫动物可产生多克隆抗体.结论 本研究获得的His-融合蛋白可与SARS临床诊断患者血清特异性结合,可免疫动物获得特异性多抗;但不与健康人血清及兔抗OC43、229E血清发生特异性结合.

肺炎链球菌荚膜多糖抗原活性的评价方法

目的：比较免疫双扩散法和速率散射比浊分析法在肺炎链球菌荚膜多糖抗原性评价方面的优劣。方法分别采用免疫双扩散法和速率散射比浊分析法检定来源于4个公司和美国ATCC的1型、6B型、9V型、10A型、14型和19A型肺炎链球菌荚膜多糖样品的抗原活性，同时比较肺炎链球菌免疫血清和仪器增益值对实验结果的影响。结果两种抗原活性检定方法都显示9V型4号样品的抗原活性缺失，其速率散射浊度信号值接近阴性对照；其余多糖样品均有沉淀线，速率散射浊度信号值高低不等；不同来源的肺炎链球菌抗血清和仪器增益值对速率散射比浊分析法的实验结果无明显干扰。结论速率散射比浊分析法能够定量分析各型肺炎链球菌荚膜多糖的抗原活性。

干扰素在血液系统疾病中的应用

干扰素是细胞受病毒感染后(或其他物质刺激后)释放出来的一种糖蛋白,其分子量为20000～30000,也可高至90000.具有抗病毒和激活机体免疫系统的作用.干扰素分为Ⅰ型和Ⅱ型.它是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白,其活性的发挥又受细胞基因组的调节和控制,涉及到RNA和蛋白质的合成.目前已用于临床的干扰素按生物学活性和抗原活性分为三类:干扰素α是由病毒诱导白细胞而产生,干扰素β是由病毒诱导纤维母细胞而产生,干扰素γ是由病毒诱导淋巴样细胞而产生.干扰素α和干扰素β具有共同的表面受体,作用基本一致,属于Ⅰ型;干扰素γ和干扰素α有不同的受体表面,属Ⅱ型,其在实验中抑制肿瘤的作用比Ⅰ型强.

幽门螺杆菌Omp11重组蛋白的制备和应用

幽门螺杆菌(Hp)感染与人体胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病的发生密切相关[1,2],免疫接种是控制Hp感染流行有效的措施[3],但由于Hp感染的免疫机制比较复杂,尚未发现一种效果理想的疫苗抗原[4].Hp外膜作为免疫攻击的重要靶标在人体保护性免疫反应中具有重要的作用[4,5].Omp11是Hp的一种外膜蛋白,其编码基因具有高度的保守性,有望成为疫苗抗原[6],但目前国内外均未检索到关于Omp11抗原活性和免疫效果的报道.因此,拟应用基因克隆方法研究Omp11重组蛋白(rOmp11)的制备、抗原活性和应用价值.

199缨瓣属植物Crossopetalum tonduzii中倍半萜的绝对构型及其对Raji细胞中EB病毒早期抗原活性的抑制作用

Ca2+离子对榛子过敏原Cor h1二级结构和抗原活性影响研究

目的:研究Ca2+离子对非CaBPs 蛋白类过敏原二级结构和抗原活性的影响.方法:以重组榛子主要过敏原Cor h 1为研究对象,用圆二色谱(CD)研究了系列浓度的Ca2+和EDTA各自存在情况下,不同蛋白浓度溶液中rCor h 1二级结构的变化及规律,并以榛子过敏患者血清为一抗,用ELISA实验分析了Ca2+和EDTA对rCor h 1抗原活性的影响.结果:在高浓度rCor h 1溶液中Ca2+的加入可以引起椭圆率的增加,而在低浓度的rCor h 1溶液中则引起椭圆率的降低;EDTA在高浓度和低浓度的rCor h 1溶液中均能引起rCor h 1二级结构相对含量的降低;椭圆率增加(或降低)的幅度与Ca2+、EDTA终浓度成正比.ELISA实验表明Ca2+和EDTA都能显著降低rCor h 1的抗原活性.结论:Ca2+离子可以显著影响rCor h 1的二级结构,降低其抗原活性,为非CaBPs蛋白类低致敏原的研究奠定了较好的前期研究基础.

温度对鼠疫菌FraⅠ抗原血清学反应性及免疫原性的影响

检测鼠疫菌FraⅠ抗原及其抗体是鼠疫诊断的重要依据.目前用于鼠疫血清学诊断方法大都基于检查这两种指标.通常高温处理(＞56℃)后的抗原和抗体,其抗原活性及免疫原性会受到很大影响,本文通过间接血凝技术了解不同温度、不同时间作用后鼠疫菌特异性FraⅠ抗原的血清学反应性及免疫原性,以指导实验室质控及现场材料处理.

HCV核心区全基因片段的表达及产物抗原活性分析

目的表达并纯化核心基因全片段,以得到良好特异性的核心蛋白.方法自克隆载体pUC19/HCV-C中切下核心基因全片段,将其插入带有His 6纯化标签的融合表达质粒pTrcHisA中,转化人大肠杆菌,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE、中和抑制ELISA和Western blot对占菌体总蛋白15%以上的表达产物进行鉴定,用IMAC一步法纯化,纯化产物检测HCV阴阳性血清标本,并与日本东燃公司核心抗原C11检测结果进行比较.结果核心基因全片段插入pTrcHisA载体,转化入大肠杆菌TOP10后构建成功稳定的表达株PTrcHisA/HCV-C/TOP10,用纯化产物检测血清标本,与日本东燃公司核心抗原C11检测结果的阳性均值与阴性均值之比及A值分布基本相同.结论表达抗原具有良好的免疫反应性和特异性.

两种不同配方含前S表位乙型肝炎疫苗的免疫原性及抗原活性比较

目的 对共表达的含前S1(PreS1)和前S2(PreS2)表位的乙肝表面抗原(SS1S2)及分别表达的含PreS1表位乙肝表面抗原(SS1)和含PreS2表位乙肝表面抗原(SS2)混合物的免疫原性及抗原活性进行比较,为疫苗配方的选择提供依据.方法 将SS1S2抗原、SS1抗原与SS2抗原的混合物(1∶1混合,以下简称SS1+SS2)分别用氢氧化铝佐剂吸附,制成SS1S2疫苗和SS1+ SS2疫苗,总抗原含量均为20 μg/ml,分别经BALB/c小鼠腹腔单次注射两种疫苗1.0、0.25和0.06μg,免疫后1、2、4周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中HBV S、PreS1和PreS2抗体水平.分别以纯化的SS1抗原或SS2抗原为参考品,采用ELISA法检测6批SS1S2抗原所对应的SS1或SS2抗原含量.结果 免后1、2、4周,3个剂量的SS1S2疫苗S抗体阳转率均高于同剂量的SS1+SS2疫苗,0.25 μg剂量的SS1S2疫苗PreS1抗体阳转率高于同剂量的SS1+SS2疫苗;免后1、2周,3个剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率与SS1+SS2疫苗相近;免后4周,1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗PreS2抗体阳转率高于SS1+SS2疫苗.免后4周,3个剂量的SS1S2疫苗的S和PreS1几何抗体平均滴度(GMT)均高于同剂量的SS1+SS2疫苗;1.0和0.25μg剂量的SS1S2疫苗的PreS2抗体GMT高于同剂量的SS1+ SS2疫苗.6批SS1S2抗原中,每10 μg SS1S2抗原所包含的PreS1抗原活性相当于(12.1±0.84) μg的SS1,每10 μg SS1S2抗原所包含的PreS2抗原活性相当于(7.0±0.52) μg的SS2;SS1S2抗原中SS1和SS2抗原活性之和远超过100％.结论 共表达的SS1S2抗原比单独表达的SS1抗原、SS2抗原具有更强的免疫原性;共表达的SS1S2抗原中PreS1和PreS2抗原活性也得到增强.

固定对IgG抗原活性的影响

免疫组织化学染色(ICS)以其突出的优点,已广泛用于病理学诊断、鉴别诊断及相关学科的研究之中[1,2],其染色成功与否和抗原性的妥善保存极为重要.影响石蜡切片中抗原性的主要因素有固定、制片、ICS中的封闭内源酶、抗原修复或暴露、组织存档时间等[3～5],但排除其它各种因素,单从固定这一环节看来,其对抗原性的影响如何,尚不十分清楚.我们应用蛋白质的Western blot技术、并与图像分析相结合,观察了不同的固定液和时间对小鼠IgG抗原活性的影响,现报道如下.

弓形虫多表位基因的构建及其在大肠杆菌系统中的表达鉴定

目的构建弓形虫和破伤风毒素多个表位的编码基因,将其在大肠杆菌系统进行表达,评价重组抗原的特异反应性.方法从弓形虫保护性抗原及通用免疫增强佐剂破伤风毒素中选取含有T和(或)B细胞表位的抗原片段,通过软件分析在各片段之间插入适当数目、起间隔作用的氨基酸,以保持个片段的空间构象独立性,从而确定氨基酸顺序.根据氨基酸序列选取适当的密码子构成弓形虫多表位基因.将该基因合成并鉴定后,亚克隆入原核表达载体,在大肠杆菌中表达并分析表达产物的表达形式和抗原活性.结果成功构建了长度为360bp的弓形虫多表位基因.该基因在原核表达系统中经诱导,得到了14.4kDa的包涵体形式的表达产物.免疫印迹实验表明该产物具有强特异性抗原活性.结论弓形虫多表位基因在原核中的表达产物在弓形虫病疫苗及诊断中有潜在的应用价值.

外用免疫调节剂在皮肤科的临床应用

人体的免疫系统可以通过以下的四种方式进行调节:①使用免疫抑制或抗炎药物;②使用微生物抗原(如接种疫苗、源自微生物的化学物质或佐剂等);③增加或去除具有独立抗微生物抗原活性的免疫组分(如静注免疫球蛋白、水痘-带状疱疹免疫球蛋白、粒细胞输注或单采浆术);④增加或抑制对抗原没有独立活性的免疫组分,在细胞因子和趋化性细胞因子家族中能够找到这些组分.

利用生物信息技术预测RhD蛋白质抗原活性表位

目的 预测人RhD蛋白刺激B淋巴细胞产生相应抗体的抗原活性表位.方法 利用生物信息技术及互联网平台,以TMHMM和TMpred预测蛋白跨膜区结构为基础,通过ABCpred和BepiPred方案初步筛选RhD蛋白抗原活性表位,并以Swiss-Model Workspace同源模建的RhD蛋白三级结构作抗原表位定位.结果 预测人RhD蛋白的N端36～41、100～104、353～356区段为RhD抗原活性表位区域.结论 上述结果可作为确定结果RhD蛋白潜在优势表位的参考.

SARS冠状病毒M蛋白B细胞抗原表位的原核表达与抗原活性检测

目的 从SARS冠状病毒M蛋白的线性重叠肽链文库中筛选出5个B细胞抗原表位,通过构建原核表达载体,表达抗原表位融合蛋白,并检测其抗原活性.方法 应用大肠杆菌高频密码子设计引物,通过PCR方法合成编码SARS冠状病毒M蛋白5个抗原表位(MKY1、MKY2、MKY3、MKY4和MKY5)的DNA片段,经克隆和测序分析,亚克隆至表达载体pET-CKS,转化大肠杆菌BL21;阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析;大量诱导表达抗原表位融合蛋白,亲和层析予以纯化;Western检测SARS病人阳性血清对融合蛋白的识别.结果 成功构建SARS冠状病毒M蛋白抗原表位的表达载体,在大肠杆菌BL21中表达,融合蛋白表达量达到细菌总蛋白30%,经亲和层析纯化,融合蛋白可被SARS病人抗血清识别.结论 原核表达的抗原表位融合蛋白具有良好的抗原活性,为下一步进行SARS冠状病毒诊断试剂盒的开发研究奠定基础.

食管癌组织中HPV16型L2线性抗原基因的克隆及原核表达

[张菊,阎小君,严泉剑,段杰,侯瑜,苏成芝.世界华人消化杂志,2001;9(3):273-278]目的通过聚合酶链方法,以特异引物,从感染人乳头瘤病毒的新鲜食管癌组织获得人乳头瘤病毒1 6型晚期表达基因I2保守区线性抗原片段的基因,并体外表达,获得具有抗原活性的原核表达蛋白,以探索研制低廉,方便及准确的人乳头瘤病毒感染的新型诊断试剂.方法在前人研究的基础上,经计算机检索,选定与食管癌高度相关的人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L2N端的一段基因,采用特异引物及聚合酶链方法从多例人乳头瘤病毒感染的食管癌组织DNA模板中,获得人乳头瘤病毒16型晚期表达基因L2保守区线性抗原片段的基因,经克隆入测序载体验证DNA大小及序列后,将HPV16 L2 DNA保守区线性抗原基因片段克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性:与乳头瘤病毒抗体及感染者血清的反应活性.结果以我们设计的特异引物,从两例人乳头瘤病毒感染阳性的食管癌组织DNA模板中以得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,且两例组织所得的目的DNA序列完全一致,其插入大肠杆菌表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与商品化的乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论从食管癌组织中能检出人乳头瘤病毒HPV16型晚期表达基因区L2特定片段的基因,该片段确具高度保守性.在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于流行病学检查,预警人乳头瘤病毒感染相关的癌症发生. (潘伯荣)