中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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B7-H3在人肝癌细胞株HepG2对外周血CD8+T细胞活化、周期及分泌IL-17调节中的作用
目的 研究B7-H3在人肝癌细胞株HepG2对人外周血CD8+T细胞活化、周期及IL-17分泌等调节中的作用.方法 RT-PCR及FCM检测B7-H3在HepG2细胞上的表达；应用脂质体法将PGPU6/GFP/neo-B7-H3shRNA质粒转入肝癌细胞株HepG2,阻断B7-H3的表达；免疫磁珠分选健康人外周血CD8+T细胞；FCM分析B7-H3分子在HepG2细胞对PHA刺激下CD8+T细胞活化、周期及PMA刺激下CD8+T细胞分泌IL-17调节中的作用.结果 肝癌细胞株HepG2高表达B7-H3分子,PGPU6/GFP/neo-B7-H3 shRNA质粒能有效阻断B7-H3在HepG2细胞上的表达；FCM分析结果显示,肝癌细胞株HepG2对CD8+T细胞活化及周期均有抑制作用；阻断B7-H3的表达后,明显减弱HepG2细胞对CD8+T细胞早期活化表型CD69表达的抑制作用,且能够通过下调CD8+T细胞Go/G1期细胞数量,上调S期细胞数量逆转HepG2细胞对CD8+T细胞周期的阻滞作用；在HepG2存在条件下,CD8+T细胞对IL-17的分泌明显增加,阻断B7-H3的表达后,IL-17的分泌被进一步上调.结论 HepG2细胞高表达B7-H3分子；B7-H3能够协同HepG2细胞对CD8+T细胞活化表型CD69的表达及细胞周期的抑制作用；HepG2细胞上调CD8+T细胞对IL-17的分泌作用,但B7-H3可抑制该上调作用.
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甘露聚糖结合凝集素抑制肽聚糖刺激THP-1/CD14细胞产生的炎性反应及机制
目的 探讨甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对肽聚糖(peptidoglycan,PGN)刺激佛波酯(PMA)活化的THP-1/CD14细胞产生TNF-α和IL-6影响.方法 用PMA活化THP-1/CD14细胞,以不同浓度人MBL预处理2h后再用PGN刺激24 h.收集培养上清,以ELISA从蛋白水平分析TNF-α和IL-6的产生.收集细胞提取总RNA,以RT-PCR从转录水平评估TNF-α和IL-6的表达.FACS分析MBL与THP-1/CD14细胞的结合,并进一步分析MBL对PGN结合THP-1/CD14细胞的影响,Western blot分析NF-κB的细胞核移位.结果 ELISA检测发现,PGN可刺激PMA活化的各THP-1/CD14细胞分泌TNF-α和IL-6,高浓度MBL(10 ～ 20 mg/L)可抑制PGN诱导细胞分泌TNF-α和IL-6; RT-PCR分析亦显示,MBL(20 mg/L)对PGN诱导的TNF-α和IL-6的mRNA表达有不同程度的抑制作用；流式细胞术检测显示MBL能够与THP-1/CD14细胞以Ca2+依赖形式结合,PGN可竞争性抑制MBL结合THP-1/CD14细胞.MBL还可通过结合THP-1/CD14竞争性抑制PGN与THP-1/CD14的结合.Western blot分析显示,MBL对PGN诱导的NF-κB细胞核移位有显著的抑制作用.结论 MBL通过配体结合抑制PGN诱导的THP-1/CD14细胞产生的细胞反应,提示MBL能够在PGN诱导的炎性反应中起免疫调控作用.
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肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经TLR2及TLR4调控THP-1分泌TNF-α
目的 探讨肺炎嗜衣原体(Cpn)热休克蛋白10(HSP10)诱导人单核细胞分泌炎症因子的作用及Toll样受体(TLR)2、TLR4与此作用的相关性.方法 制备Cpn HSP10(CHSP10)纯化蛋白,去内毒素活性后用不同浓度(0.5、1、5、10、20、30μ/ml)刺激THP-1细胞0、6、12、24、36、48、60 h,并比较蛋白不同处理组别中TNF-α的水平差异；以间接免疫荧光及RT-PCR鉴定THP-1细胞上的TLR4及TLR2；分离C3H系野生型和TLR4缺陷型小鼠巨噬细胞,以CHSP10刺激后检测TNF-α水平；用抗TLR2/TLR4单克隆抗体预孵育细胞,ELISA检测CHSP10刺激细胞前后TNF-α的变化.结果 CHSP10刺激THP-1细胞引起上清液炎症因子TNF-α水平显著增加,经加热等处理后蛋白诱生TNF-α的作用明显降低.THP-1细胞可检测到TLR2及TLR4的mRNA及蛋白表达,CHSP10诱生C3H系野生型小鼠细胞分泌的TNF-α明显高于TLR4缺陷型小鼠细胞,TLR2/4经单克隆抗体作用后均可显著降低CHSP10诱导THP-1分泌TNF-α的水平.结论 CHSP10可能作为炎症相关蛋白参与了Cpn对宿主细胞的致炎作用；并且TLR2及TLR4在该炎症刺激信号的传递过程中发挥一定的作用.
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艾滋病胃病患者胃黏膜幽门螺杆菌感染与其组织CD4和CD8细胞表达的关系研究
目的 回顾分析艾滋病胃病患者胃黏膜幽门螺杆菌(H.pylori)感染与患者胃黏膜CD4、CD8阳性细胞的关系.方法 58例为2004-2011年在上海市公共卫生临床中心消化内科接受胃镜检查的艾滋病上腹疼痛患者,胃窦黏膜活检组织分别进行快速尿素酶和姬氏染色检测H.pylori感染,HE染色病理学检查、免疫组织化学方法分析胃黏膜组织中CD4和CD8阳性细胞的表达,并应用流式细胞仪检测其外周血CD4和CD8淋巴细胞.结果 研究对象H.pylori阳性26例,阴性32例；H.pylori阳性和H.pylori阴性患者胃黏膜组织CD4阳性标志细胞的表达差异没有统计学意义；然而,H.pylori阳性患者胃黏膜组织中CD8阳性标志细胞率显著高于H.pylori阴性患者(P＜0.05)；H.pylori阳性患者胃黏膜组织中CD8阳性标志细胞率又显著高于CD4阳性标志细胞；H.pylori阳性和H.pylori阴性患者外周血CD8淋巴细胞没有显著性差异,而外周血CD4淋巴细胞绝对计数存在差别,前者高于后者(P＜0.05).结论 艾滋病患者感染H.pylori者其胃黏膜组织中CD8细胞表达水平高于H.pylori未感染者,但外周血CD4细胞数高于未感染者,其意义有待进一步探索.
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耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白编码基因以及KPC-ISKpn6连锁检测
目的 探讨耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌的耐药机制.方法 对南京地区两家三甲综合性医院的耐碳青霉烯抗菌药物肺炎克雷伯菌临床分离株,采用PCR方法对其40种β-内酰胺酶基因、膜孔蛋白编码基因及KPC-ISKpn6连锁进行检测,PCR阳性产物进行测序,测序结果BLAST对比分析.结果 24株耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌的A类β-内酰胺酶编码基因TEM-1及SHV的阳性检出率为100％ (24/24)、KPC-2的阳性检出率为95.8％ (23/24)、LAP-2的阳性检出率为45.8％ (11/24),C类β-内酰胺酶编码基因DHA的阳性检出率为4.2％ (1/24),KPC-ISKpn6连锁检测阳性率为95.8％ (23/24),膜孔蛋白编码基因ompK35与ompK36的突变率分别为95.8％ (23/24)及100％(24/24).结论 本组肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶TEM-1、SHV、KPC-2、LAP-2的携带率较高,其中KPC-2的高携带率及膜孔蛋白编码基因ompK35、ompK36的高突变率是本组肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制；插入序列ISKpn6可能参与了KPC-2基因的介导.
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2010-2012年北京地区儿童肺炎支原体流行基因型监测
目的 对肺炎支原体(Mp)的暴发流行进行监测.方法 采用real-time PCR法对北京地区呼吸道感染患儿进行检测；阳性标本进行M-P基因分型[M:多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)；P:P1-限制性片段长度多态性(P1-RFLP)]分析.结果 2010年1月-2012年5月446例呼吸道感染患儿中,69例经real-time PCR检测为阳性,2010、2011及2012年上半年的感染率分别为:11.69％、15.56％及20.00％；采用我们提出的新的M-P基因分型系统,69例标本可分为11个基因型,其中M43562P1和M53562P1为2010至2011年两个主要基因型；M33562P1和M63562P1在2012年有感染上升趋势.结论 在本次国际Mp流行中,北京地区2011年肺炎支原体感染率也有所增加,主要基因型为M43562P1和M53562P1；其中M43562与欧洲流行基因型相同,M53562与以色列流行基因型相同.M-P基因分型系统,可以很好地监测世界不同地区肺炎支原体流行情况.
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新生隐球菌格鲁比变种表型变异菌株的基因及毒力对比研究
新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)属于真菌界担子菌门隐球菌属,是临床上的致病真菌,可致器官移植等免疫抑制患者发生新生隐球菌病,与艾滋病有一定相关.宽大的荚膜是其典型形态学特征及临床分离鉴定的重要依据,我们在实验中对获赠自日本千叶大学医学部真菌研究所的新生隐球菌进行传代培养时发现有2株菌(IFM56803和IFM56743)发生了显著的表型变异,出现光滑型(SM)及黏液型(MC)两种不同的菌落,荚膜形态也出现明显差异,墨汁染色发现MC株的隐球菌荚膜较SM株的厚4～5倍.
关键词： -
siRNA干扰铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵MexB基因表达的体内效应研究
目的 探讨RNA分子干扰铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵MexB基因的体内效应.方法 针对MexAB-OprM外排泵MexB基因设计siRNA小分子,构建干扰RNA(shRNA)表达载体,将带有小分子干扰RNA (siRNA)质粒电转入铜绿假单胞菌,从小鼠支气管内直接予以siRNA质粒干扰PAO琼脂菌体悬液(1×107 CFU/ml)攻击,建立PAO1野生型及siRNA2干扰型和siRNA阴性对照分子干扰型菌株的肺部感染动物模型.于感染后第1、2、3天腹腔注射美罗培南(100 mg/kg,2次/d).感染后第3、5、7天评估各组小鼠肺部细菌学、肺部病理学、细胞因子水平及肺组织中性粒细胞募集(MPO)水平变化.结果 siRNA2干扰组小鼠,感染后3、5、7d的肺部细菌负荷明显下降.且与siRNAnon组和Scrambled siRNA组比较,siRNA2干扰组小鼠感染早期(3 d)病理学改变明显减轻；MPO及炎性细胞因子(IL-1β和IL-12)表达水平升高.而在感染后期(7 d)siRNA2干扰组小鼠炎性细胞因子表达水平则下降.结论 siRNA分子干扰明显增加小鼠对铜绿假单胞菌感染的抵抗力,降低肺部细菌的载量,增加早期中性粒细胞募集到感染部位并诱导铜绿假单胞菌的早期免疫应答.siRNA分子联合抗生素的治疗,为慢性铜绿假单胞菌肺部感染的治疗提供了有意义的资料.
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白念珠菌不同菌态成分诱导小鼠DCs分化成熟的差异性比较
白念珠菌是人类常见的条件致病菌之一,可引起从皮肤黏膜到内脏的广泛感染.白念珠菌从形态观察为双相真菌,有酵母相和菌丝相,其中菌丝相更易黏附入侵宿主组织,是该菌在体内的主要致病形式.DCs是体内重要的抗原提呈细胞,正常情况下绝大多数处于非成熟状态,一旦摄取抗原或接受某些因素刺激,DCs就会发育成熟,通过多种因素可诱导T细胞向不同类型Th细胞分化,形成抗感染免疫的起点和调节点.本研究通过将粉碎后白念珠菌酵母相、菌丝相成分分别刺激小鼠骨髓源DCs,观察DCs形态、表达表面分子CD80、CD86及分泌IL-12情况,比较两者间的差异.
关键词： -
利用活体成像技术对5型腺病毒在小鼠体内生物分布和表达的研究
目的 研究5型腺病毒(Ad5)不同途径感染小鼠后体内代谢和组织分布特点,为Ad5载体疫苗的应用和改造提供参考.方法 构建携带萤火虫荧光素酶基因的Ad5-Fluc病毒并利用活体成像技术分析其感染BALB/c小鼠后的蛋白表达和组织分布特点,以及与裸鼠的感染特点进行比较.结果 Ad5-Fluc肌肉途径感染BALB/c小鼠后出现肝脾转移表达的特点,且肌肉途径表达周期长(＞60d),表达水平高(P＜0.01).病毒感染裸鼠后分布特点与BALB/c小鼠一致但表达周期明显延长.另外,用Ad35的纤突蛋白替代Ad5的纤突蛋白后的5型腺病毒载体(Ad5F35)在保持相似表达效率的同时消除了肝嗜性的特点.结论 肌肉途径可能为5型腺病毒载体疫苗理想的免疫方式,同时Ad5F35病毒是一种理想的替代性腺病毒疫苗载体.
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西藏地区水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型研究
目的 研究西藏地区水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型.方法 将临床采集的水痘或带状疱疹患者皮肤水疱液接种至人胚胎成纤维细胞进行病毒分离；对分离得到的病毒运用间接免疫荧光法鉴定,鉴定结果为阳性的病毒继续体外培养以提取其基因组DNA.PCR法扩增并测序水痘-带状疱疹病毒基因组中开放读码框1、21、50、54的部分片段.测序结果与GenBank中水痘-带状疱疹病毒参考株Dumas进行序列比对分析其中单核苷酸多态性,并利用Primer 5.0软件进行酶切位点分析,从而确定基因型.结果 从临床采集的16份标本中经分离鉴定后得到10株水痘-带状疱疹病毒临床分离株,病毒分离阳性率为62.5％.基因分析结果显示西藏地区10株水痘-带状疱疹病毒临床分离株中基因型A1有3株,基因型A2有4株,基因型J1有3株.结论 西藏地区水痘-带状疱疹病毒基因型分布与西藏地区地理位置密切相关.
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BALB/c和SCID小鼠人偏肺病毒感染特点的比较研究
目的 比较研究人偏肺病毒(hMPV)在BALB/c小鼠和SCID小鼠肺内复制动力学和肺病理特点.方法 GFP-rhMPV滴鼻感染BALB/c小鼠和SCID小鼠,于感染后3、5、7、9、14d处死小鼠并无菌获取心、肝、脾、肺、肾和脑用于病毒分离和病理检查,空斑形成法检测病毒滴度,RT-PCR和real-time PCR法检测hMPV mRNA表达.结果 GFP-rhMPV滴鼻感染BALB/c小鼠和SCID小鼠后第5天肺组织均分离到病毒.感染GFP-rhMPV的BALB/c和SCID小鼠在感染后第5天肺组织病毒滴度均达峰值,分别为(5.25±1.69)×104 PFU/g和(5.83±1.21)×105 PFU/g.SCID小鼠在感染后第14天肺组织内病毒滴度仍可达(4.25±1.04) ×101 PFU/g,此时BALB/c鼠肺内已不能分离到病毒,但可检测到GFP-rhMPV F蛋白mRNA表达.感染后第5天所有小鼠的心、肝、脾、肾和脑组织内均不能分离到病毒,也无法检测到hMPV F蛋白mRNA表达.肺组织病理改变在感染后第5天明显,为典型的间质性肺炎改变,BALB/c小鼠组肺组织病理评分略低于SCID小鼠组,差异无统计学意义.结论 GFP-rhMPV滴鼻感染后只能在小鼠肺内复制.同BAL B/c小鼠相比,SCID小鼠感染GFP-rhMPV后肺内病毒滴度高,复制时间久,但病理损伤无明显差异.
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IL-22在氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞中的调节作用
目的 研究氧化型低密度脂蛋白通过IL-22对人脐静脉内皮细胞(CRL-1730)增殖的影响及机制,初步探讨IL-22与冠状动脉粥样硬化(AS)发病机制的关系.方法 采用RT-PCR检测8例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和30例AS患者外周血单个核细胞(PBMC) IL-22 mRNA的表达,ELISA法检测22例无明显冠状动脉狭窄的健康个体和79例AS患者血浆IL-22的浓度,分析IL-22的表达与AS患者冠状动脉大狭窄程度及受累支数的关系.使用不同浓度氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激CRL-1730细胞,24 h后流式细胞术检测IL-22R1阳性细胞百分比.100 μg/ml ox-LDL和20 ng/ml IL-22共刺激CRL-1730细胞后,MTS法检测细胞的增殖能力,RT-PCR和ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达.结果 随着患者冠状动脉狭窄程度和受累支数的增加,AS患者外周血PBMC中IL-22 mRNA和血浆中IL-22水平逐渐降低.ox-LDL呈剂量依赖性地上调CRL-1730细胞中IL-22R1的表达.ox-LDL刺激可以引起CRL-1730细胞增殖能力受损、表达bFGF的能力降低,IL42可以部分逆转ox-LDL的此种效应.结论 IL-22可能具有抗AS的生物学效应,这种生物学效应可能与其拮抗ox-LDL对CRL-1730细胞增殖能力和表达bFGF的抑制作用有关.
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Th1/Th2细胞相关因子对肝癌家族聚集性的影响研究
目的 探讨机体Th1/Th2细胞相关因子及免疫状态在肝癌发生及家族聚集性中的作用.方法 以IFN-γ和IL-2代表Th1类细胞因子,IL-4和IL-10代表Th2类细胞因子,利用酶联免疫吸附试验检测95对经配对设计的肝癌高发家族成员和无癌家族成员外周血IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的水平.结果 肝癌高发家族成员中肝癌患者的Th1细胞因子水平显著高于无癌家族成员,Th2细胞因子水平显著低于无癌家族成员(P＜0.05)；肝癌高发家族中未患肝癌的家族成员,Th1/Th2细胞相关因子与无癌家族成员相比无明显差异(P＞0.05).结论 肝癌高发家族中的肝癌患者存在Th1/Th2平衡失调,向Th2方向漂移,抗乙型肝炎病毒(HBV)感染及抗肿瘤免疫功能低下导致HBV长期慢性感染,进而引起肝癌,在HBV感染家族聚集的基础上发生肝癌的家族聚集.肝癌高发家族中未患肝癌的成员Th1/Th2细胞因子水平无明显变化.推测肝癌的免疫功能异常是肝细胞癌变后逐渐形成的,而不是癌变前存在的免疫异常导致了癌变.
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肝细胞生长因子的表达、纯化和基本活性研究
目的 通过构建肝细胞生长因子(HGF)基因的重组原核表达载体,转化大肠杆菌,制备HGF重组蛋白并初步证实其活性.方法 克隆HGF基因插入载体pET-26b(+),构建重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF,转化E.coli Rosseta(DE3).IPTG诱导转化菌表达重组蛋白,采用Ni-NTA树脂亲和层析法进行纯化,复性后冷冻干燥.结果 HGF基因重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF构建成功.转化pET-26b(+)-HGF的E.coli Rosseta(DE3)以包涵体形式大量表达目的蛋白,占菌体总蛋白的38％,并经Western blot证实.经Ni-NTA树脂亲和层析法纯化后HGF蛋白纯度约为95％,作用于人非小细胞肺癌细胞系A549细胞发现可促进其增殖、迁徙并抑制凋亡.结论 成功构建了HGF基因重组原核表达载体pET-26b(+)-HGF,转化E.coli Rosseta(DE3)后成功表达,纯化复性回复重组HGF蛋白结构,经体外实验证实具有生物学活性.
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肠道病毒71型VP1的原核表达及生物活性初步研究
目的 原核表达系统表达肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71) VP1蛋白,并探讨该基因工程蛋白阻断病毒感染及其制备抗体的中和活性.方法 构建pET30a(+)-VP1表达载体、IPTG诱导表达,Western blot鉴定.His亲和纯化后,阻断试验分析该重组蛋白阻断病毒感染活性,免疫小鼠制备多抗分析多抗中和活性.结果 构建的重组菌可有效表达VP1,用其免疫小鼠制备多抗ELISA效价达到1:3200,而中和活性只有1:16,并且该工程蛋白没有表现出阻断活性.结论 本研究原核表达的VP1蛋白能刺激小鼠产生抗体,且抗体具有一定的中和活性,但是该蛋白没有阻断活性,表明该蛋白在原核表达系统中未能形成天然构象从而导致与受体结合的能力较差.
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拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造及鉴定
目的 以拟多形假丝酵母菌(ATCC26012)为材料,构建遗传稳定性良好的尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型工程化菌株.方法 利用物化及基因工程等方法对拟多形假丝酵母菌株的染色体进行改造,将ura3基因和leu2基因进行定向诱变,以获得尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株,并对其进行生物学鉴定,包括菌株的遗传稳定性、基因序列及生理生化特征分析等.结果 筛选得到尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株,鉴定结果显示该菌株遗传稳定性良好,标志基因均发生定向改变,生理生化结果显示该菌株能利用多种碳源和氮源,且生长状况良好.结论 拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造为进一步研究该菌株的遗传学奠定了基础,为多价蛋白组成类病毒颗粒的外源表达提供了工程化宿主.进而,为复杂疫苗抗原的重组表达和功能研究提供了技术手段.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
