中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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Hyper-IL-6基因转染的肝癌细胞株的建立及生物学特性的观察
IL-6是一种具有广泛生物学活性的细胞因子,近年曾有学者应用基因瘤苗的方法治疗肿瘤并取得一定的效果.Hyper-IL-6是Fischer等依据已知的关于IL-6受体的结构信息设计的一种“设计细胞因子”,即将人类IL-6基因与截短形式的可溶性IL-6受体基因通过基因操作共价连接,并在真核细胞进行表达得到的一种具有超高效IL-6活性的融合蛋白.本研究我们建立了稳定表达Hyper-IL-6的小鼠肝癌细胞克隆株,同时观察其生物学特性的改变.
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核因子-κB诱骗剂处理的DC对胶原诱导性关节炎大鼠外周血IFN-γ、IL-1O、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响
目的 探讨核因子-κB诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)处理的DC对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清IFN-γ、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响及作用机制.方法 建立Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎模型,NF-κB诱骗剂处理并负载牛Ⅱ型胶原(BⅡC)的大鼠脾脏来源的DC,在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内,并设空白对照组、CIA模型组和BⅡC-decoy-DC实验组.42 d后观察各组关节炎指数和病理变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中IFN-γ、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体的含量.结果 与空白对照组相比,CIA模型组大鼠血清中IFN-γ、抗Ⅱ型胶原抗体含量升高,而IL-10含量降低(P<0.05),而BⅡC-decoy-DC实验组经NF-κB诱骗剂处理并负载BⅡC获得的DC注射后,与CIA模型组相比,血清中IFN-γ、抗Ⅱ型胶原抗体含量降低,而IL-10含量升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NF-κB诱骗剂处理并负载BⅡC的DC具有明显抑制CIA大鼠外周血IFN-γ和抗BⅡC抗体产生,促进IL-10水平的增加,对类风湿关节炎有较好的治疗作用.
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Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响
目的 构建表达人白血病抑制因子(LIF)和抑瘤素M(OSM)双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞,并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34+.造血干/祖细胞体外增殖和分化的影响.方法 以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ为基础,将OSM基因片段酶切后插入,构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ -OSM.将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoter△-OSM,通过包装,收获重组腺病毒(AdLIF-OSM).将重组腺病毒感染饲养层细胞,经RT-PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达;体外与CD34+造血干/祖细胞共培养后,通过Transwell法和细胞计数检测,比较各实验组干/祖细胞体外扩增与分化情况.结果 测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确;转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达;外源LIF和OSM基因在造血干/祖细胞体外培养中能够发挥作用.结论 成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体(Ad-LIF-OSM),Ad-LIF-OSM在造血干/祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,并延缓其分化.
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4种中药提取物对尘肺结核患者感染的耐多药结核分枝杆菌感染小鼠细胞免疫的影响
目的 探讨猫爪草、苦参、夏枯草及狼毒4种中药提取物对尘肺结核患者感染的耐多药结核分枝杆菌(multiple drugs resistant bacillus tuberculosis,MDR-TB)感染小鼠免疫功能的调节作用.方法 采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染模型,将60只健康雄性小鼠随机分为6组,每组10只.正常组标准饲料喂养,模型组灌服生理盐水,其他4组分别灌服4种中药提取物,采用ELISA法检测小鼠血清中与结核免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12含量的变化,同时分离出外周血单个核细胞( PBMC),抽提全部RNA,采用RT-PCR法检测PBMC中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12及颗粒裂解肽(GLS)的mRNA变化.结果 猫爪草、苦参、夏枯草及狼毒4组小鼠血清中的IFN-γ含量依次为(2.01 ±0.73) pg/ml、(1.92±0.56) pg/ml、(1.98±0.67) pg/ml和(1.94±0.59) pg/ml,IL-4为(6.01±1.46) pg/ml、(6.12±1.35) pg/ml、( 6.47± 1.46) pg/ml和(6.15±1.44)pg/ml,IL-10为(12.09±3.07) pg/ml、( 12.45±4.01) pg/ml、(12.13±3.43) pg/ml和(12.54±3.78)pg/ml,IL-12为(2.99±0.89) pg/ml、(2.75±0.84) pg/ml、(3.02±0.86) pg/ml和(2.89±0.75) pg/ml.与模型组比较,IFN-γ、IL-12含量明显升高,IL-4、IL-10含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),尤其以猫爪草提取物的调节作用为显著;在mRNA表达水平上,4种中药提取物组小鼠PBMC中IFN-γ、IL-12、GLS表达明显升高,IL-4、IL-10 mRNA表达明显下降,差异有统计学意义(P<O.05或P<0.01).结论 4种中药提取物均可明显增强小鼠的细胞免疫功能,其对免疫的调节作用是在基因转录水平上发挥作用的,从而为临床应用治疗尘肺结核提供了理论依据.
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单增李斯特菌检测基因芯片的研制与评价
目的 研制快速、特异、灵敏的检测单增李斯特菌的基因芯片.方法 选择gyrB、ISR、16S rRNA、23S rRNA、hlyA、iap和prfA作为单增李斯特菌的检测靶基因,研制一种Oligo探针基因芯片,对18个不同种属来源的已知参考生物样品进行检测和鉴定,并且采用对比试验、重复性试验、灵敏度试验和特异性试验对该芯片进行验证评估.结果 通过对比发现IDT合成的70 mer Oligo芯片探针在芯片打印与芯片检测两个方面较优.比较10、40和80 μmol/L 3个Oligo探针点样浓度,结果 显示10 μmol/L的探针点样浓度已能获得很好的芯片检测结果.单增李斯特菌检测芯片具有较好的重复性;样品检测绝对量下限为0.9 ng DNA左右.结论 Oligo基因芯片可以快速准确地检测单增李斯特菌.
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人癌胚抗原相关细胞黏附分子1介导的小鼠淋病奈瑟菌易感性
目的 研究制备淋病奈瑟菌感染人癌胚抗原相关细胞黏附分子1(hCEACAM1)转基因小鼠模型的可行性.方法 用hCEACAM1真核表达载体pCDPGICEA1,通过显微注射法制备转基因小鼠,PCR及序列分析法检测目的基因在小鼠基因组中的整合,Western blot及FACS技术检测目的基因的表达,镜检及培养法检查淋病奈瑟菌对转基因小鼠的感染.结果 产生的22只F0代小鼠中4只为转基因整合阳性,其中1只可表达hCEACAM1蛋白,且目的蛋白表达在细胞膜上.淋病奈瑟菌可在转基因小鼠中形成感染.结论 hCEACAM1转基因小鼠可作为淋病奈瑟菌感染研究的转基因动物模型.
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同时失活HtrA和ClpP对变异链球菌适应性耐酸能力的影响
变异链球菌的适应耐酸能力是它适应牙菌斑中动态变化酸性环境的关键致龋机制.本实验前期构建变异链球菌htrA-clpP双基因缺陷株(简称htrA-clpP 缺陷株),来探究HtrA和ClpP两种蛋白在变异链球菌耐酸性过程中相互作用机制.将标准株和htrA -clpP缺陷株常规复苏,收集细菌沉淀物用生理盐水适当稀释成菌液备用,用TPY液体培养液分别对两种菌液进行稀释,培养至对数中期后得到细菌沉淀物分成两份,分别加入与上清液等体积的pH5.5(预酸化处理)或7.0 TPY液体培养基中培养5h后收集4种细菌沉淀物,将其加入等体积pH3.0 TPY液体培养液中,在0、1.0、2.0、3.0h取菌液进行逐步稀释,在TPY固体培养基计数,计算生存率,实验步骤重复3次.
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依地酸与环丙沙星联合应用对豚鼠铜绿假单胞菌生物被膜感染模型的作用
目的 探讨依地酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)与环丙沙星联用对豚鼠体内铜绿假单胞菌生物被膜感染的清除作用.方法 吸入法建立豚鼠肺部铜绿假单胞菌生物被膜感染模型;EDTA腹腔注射、环丙沙星雾化吸入,单独及联合作用于感染后豚鼠;平板计数法对比药物作用前后生物被膜菌落数变化,HE染色及电镜观察肺部病理变化.结果 EDTA、环丙沙星单独及联合均对生物被膜有杀菌作用(P<0.05),联合应用的效果好,使菌落数由105 CFU/g降至10 CFU/g(t=24.67,P<0.05)且肺部组织病理改变明显减轻,生物被膜结构也被破坏.结论 EDTA与环丙沙星联合应用对体内肺部铜绿假单胞菌生物被膜感染有显著清除作用.
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不同抗菌药物组合对多重耐药鲍曼不动杆菌的作用研究
目的 评价18组抗菌药物组合对临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌( MDRAB)的体外抗菌效应.方法 收集2009年10月-2010年5月首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的非重复鲍曼不动杆菌,肉汤微量稀释法测定抗菌药物单药MIC,棋盘肉汤微量稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度( FIC)值.根据FIC值判别药物组合的作用类型.对实验菌株,同一药物组合表现矛盾作用的,用PCR扩增其外排泵基因.结果 体外联合作用中利福平+多黏菌素B、亚胺培南+庆大霉素、头孢吡肟+左氧氟沙星协同作用比例大,分别达到68.1%、45.5%、40.9%,米诺环素+利福平、氨苄西林/舒巴坦+妥布霉素、头孢他啶+环丙沙星具有较高的相加作用,分别为81.8%、68.2%、68.2%.有些组合对实验菌株出现协同和拮抗的矛盾作用.选择协同作用的No.19和拮抗作用的No.21、No.26进行耐药基因扩增,基因型表现不同,其中No.19扩增adeS( -),No.21和No.26扩增adeS(+).结论 18种药物组合里利福平+多黏菌素B存在较高的协同作用,在严重MDRAB感染情况下可以考虑应用该组合.亚胺培南+庆大霉素、头孢吡肟+左氧氟沙星也具有较高的体外协同作用,但是在部分菌株的试验中存在拮抗作用,可能是由于菌株存在adeS基因,某些抗菌药物的应用会激活adeS,使外排泵表达或者过量表达,反而使进入细菌细胞内的药物被泵出,表现为拮抗作用.
关键词: 多重耐药鲍曼不动杆菌 联合用药 -
重症监护病房环境与临床分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的REP-PCR分型研究
目的 调查上海市重症监护病房(ICU)环境中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)的流行型别,并分析ICU的环境分离株与临床分离株的同源性.方法 对上海市21所医院ICU环境分离到的61株CRAB及其中一所医院(S医院)ICU临床分离到的14株CRAB,采用DiversiLab自动化重复序列(REP) -PCR分型系统,进行基因分型.结果 61株ICU环境分离的CRAB共分7型,其中G1型又分3个亚型,共46株细菌,占全部细菌的75.4%,分布于上海市的13所医院;G2、G3、G4、G5、G6和G7型分别为8株(13.1%)、2株(3.3%)、1株(1.6%)、1株(1.6%)、2株(3.3%)和1株(1.6%).在检出CRAB的13所医院中,除了D医院外,其他医院均分离到G1型CRAB.上海市S医院ICU共检出25株CRAB(14株临床株和11株环境株),分4型:其中G1型17株,为主要流行型别.由临床株和环境株的分布示意图显示:在外科ICU(SICU)中,环境株和临床株均以G1型为主,多个邻近床位病人检出G1型CRAB;心外科ICU(CICU)环境株以G1型为主,临床株以G2型为多,其中19床的病人及周围环境均检出G1型CRAB.结论 上海市ICU环境中普遍存在G1型CRAB流行株,各医院ICU环境中存在流行株交叉污染的现象,ICU临床分离的CRAB与环境分离株有较高的相关性.应加强ICU环境消毒和手卫生,防止医院感染的暴发和流行.
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盐酸小檗碱对表皮葡萄球菌生物被膜形成的影响
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)是人体皮肤和黏膜的主要共生菌之一,属于凝固酶阴性葡萄球菌,是一种常见的条件致病菌.近年来随着临床上插管、人工瓣膜、透析等医疗技术和一次性材料的使用增多,表皮葡萄球菌现已是医院感染的重要致病菌,而表皮葡萄球菌对常见抗菌药物耐药率已成为医院感染和临床治疗的棘手问题.生物被膜(biofilm,BF)可以保护细菌抵抗宿主免疫力和抗生素杀灭作用,造成感染难以治愈和反复发作.
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同时产ArmA型16S rRNA甲基化酶及KPC-2型β-内酰胺酶泛耐药阴沟肠杆菌的研究
目的 探讨上海交通大学医学院附属瑞金医院分离的5株泛耐药阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶及16S rRNA甲基化酶的情况及两者之间的相关性.方法 用E test法检测5株泛耐药阴沟肠杆菌对10种抗菌药物的MIC值.PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因armA、mtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA,β-内酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、CTX-M-25、PER-1、VEB-1.鸟枪克隆法克隆碳青霉烯酶基因,并对克隆片段进行测序.质粒接合试验验证碳青霉烯酶基因及16S rRNA甲基化酶基因是否具有转移性.脉冲场凝胶电泳(PFGE)法对5株菌进行分子分型.等电聚焦电泳法检测β-内酰胺酶等电点.Southern杂交法对耐药决定因子进行定位.结果 5株阴沟肠杆菌对10种抗菌药物的MIC值均>32 mg/L.克隆的碳青霉稀酶基因为blaKPC-2,酶编码基因上游为一转座酶基因,两侧为复制靶位,下游为ISKpn6的插入序列,该序列包括一个重复序列和tnpA转座子,酶编码基因位于54.2 kb的一个非接合性大质粒上.等电聚焦电泳显示5株菌均产4种β-内酰胺酶(TEM-1,pI5.4;KPC-2,pI6.7;SHV-12,pI8.2;CTX-M-14,pI8.4).16S rRNA甲基化酶基因位于接合性质粒上,而blaKPC-2基因则位于非接合性质粒上,5株菌PFGE型别一致.结论 5株泛耐药阴沟肠杆菌对碳青霉烯类耐药由产碳青霉烯酶KPC-2所介导.blaKPC-2与armA型16S rRNA甲基化酶基因由两条不同的质粒编码,不存在相关性.临床医院应加强监控,以防止交叉感染.
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乙型肝炎病毒在体内外抑制补体C3和C4表达的研究
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)对补体C3和C4表达的影响,并探讨其调节机制.方法 采用基因芯片筛选HepG2和HepG2.2.15细胞的差异表达基因,免疫比浊法检测HBV患者和健康对照者补体C3和C4血清学水平,将HBV感染性克隆pHBV1.3转染HepG2细胞,RT-PCR和Western blot法检测C3和C4表达水平的变化.结果 补体C3和C4 mRNA在HepG2.2.15细胞中水平降低;C3和C4在慢性乙型肝炎患者和肝癌患者的血清学水平明显低于健康对照者(P<0.05);HBV能够在mRNA和蛋白水平下调C3和C4的表达.结论 HBV能够在体内外抑制补体C3和C4的表达.
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甲型H1N1流感病毒HA63-286蛋白的原核表达及免疫原性初步研究
近年来,随着甲型H1N1流感的不断暴发,对新型流感疫苗的开发和安全应用越来越得到重视.对甲型H1N1的血凝素(HA)第63~ 286氨基酸区进行基因克隆,并将其插入到大肠杆菌表达载体pTXB1中进行表达,对其免疫原性进行了初步的研究,为开展基因工程疫苗和核酸疫苗研究提供了资料.
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贵州省一例犬伤致人患狂犬病的病原学及病毒基因分析
目的 从病原学角度证实贵州省凯里市一起犬伤人致儿童死亡病例为狂犬病所致,了解狂犬病病毒的基因特征.方法 采用dFA实验初步检测犬和患儿脑组织狂犬病病毒抗原,以RT-nested PCR检测狂犬病病毒核酸,测定狂犬病病毒N基因全长序列,根据同源性比较及系统进化树进行分子流行病学分析.结果 dFA与RT-nested PCR检测显示犬脑和人脑组织标本均为狂犬病病毒抗原和核酸阳性.经测序拼接均得到长度为1353 bp的核苷酸序列,同源性分析显示犬脑组织(GZD)和人脑组织(GZH)检出的狂犬病病毒N基因核苷酸与推导的氨基酸同源性均为100%,与我国各省已报道的狂犬病病毒基因1型流行毒株及疫苗株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%~99.6%和98.2%~100%,与我省往年报道的毒株N基因核苷酸和推到的氨基酸同源性高.此外,在与疫苗株的比较中,与CNT株的核苷酸和氨基酸同源性高.进化树分析显示犬脑和人脑组织标本狂犬病病毒N基因亲缘进化关很近,同属于基因1型狂犬病病毒.结论 从病原学和病毒分子生物学证实了贵州省一起犬伤人致儿童死亡病例为狂犬病所致,其病原为狂犬病病毒基因1型,与疫苗毒株中的CNT毒株的亲缘进化关系近,该起病例可能为我省境内传播,因此,应加强我省狂犬病疫区的防制工作.
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IgM抗体检测对肠道病毒71型感染者诊断价值的探讨
目的 探讨IgM抗体检测对肠道病毒71型(EV71)感染者的诊断价值,并与核酸检测和中和试验方法进行比较分析.方法采用EV71 IgM抗体酶免检测试剂盒(EV71 -IgM试剂)、EV71核酸检测试剂盒(EV71-PCR试剂)和中和试验方法,检测115例EV71感染者的EV71 RNA、中和抗体和IgM抗体的水平,并进行比较性研究分析.结果 对115例EV71感染者,EV71 -IgM试剂对患者首份血清的检出率为80.9% (93/115,95% CI:72.5~87.6),对228份健康儿童血清,EV71 -IgM试剂的检出率为2.6%.同时,对病发1~2d采集的54份血清检出率为70.4%(38/54),显示了较好的早期诊断价值.EV71-PCR试剂对患者咽拭子标本的检出率为82.6%(95/115,95% CI:74.4-89.0),与EV71-IgM试剂相比,差异无统计学意义.此外,EV71-IgM试剂与EV71-PCR试剂具有很好的互补性,两种方法联合使用可提高检测灵敏度约10个百分点达到92.2%.结论 EV71 -IgM试剂具有良好的早期诊断价值,与EV71-PCR试剂联用可提高诊断率.
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乙型肝炎病毒对超敏C反应蛋白表达的影响及其临床意义
目的 探讨乙型肝炎病毒( HBV)对超敏C反应蛋白(hs-CRP)表达的影响及其临床意义.方法 采用RT-PCR检测人肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15中hs-CRP mRNA的表达,通过Olympus5400全自动生化分析仪检测HBV患者和健康对照者hs-CRP血清学水平,分析hs-CRP在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中hs-CRP表达水平的差异.结果 HepG2.2.15细胞中hs-CRPmRNA的表达水平较HepG2高;hs-CRP在乙肝感染者血清学水平显著升高(P<0.05);hs-CRP在肝硬化患者和肝癌患者明显高于慢性肝炎患者.结论 HBV能够上调hs-CRP的表达,其血清学水平与疾病进程相关.
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色氨酰tRNA合成酶(TTS)的免疫调节作用
近年来,在自身免疫性疾病、移植排斥和抗肿瘤免疫中,免疫系统的过度激活和免疫耐受逐渐成为研究关注的热点.大量研究证实,吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径分解代谢的限速酶,其高表达在抑制T细胞免疫、诱导肿瘤免疫耐受中发挥重要的调节作用[1-2].研究显示,另一种色氨酸代谢酶——色氨酰tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,TTS,TrpRS)能够催化色氨酸与其对应的tRNA结合,增加细胞内色氨酰tRNA储备,对抗IDO介导的色氨酸消耗,参与机体的免疫调节过程,与多种自身免疫性疾病及恶性肿瘤的发生、发展和预后密切相关,但其具体的调控机制尚未完全阐明.现就TTS参与的色氨酸代谢过程及其免疫调节作用作一综述.
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HIV感染者B淋巴细胞功能损伤机制的研究进展
1983年的一项研究首次揭示了AIDS病人的B细胞出现高活化和功能损伤等异常现象[1],提示HIV感染不仅导致细胞免疫的功能缺陷,而且也能引起体液免疫的功能损伤.HIV感染诱导的B细胞变化主要表现在两方面:一方面是亚群上的变化,体现在未成熟/过渡型B细胞亚群、活化B细胞和浆细胞亚群、以及组织样记忆B细胞亚群增加,而初始和CD27+记忆B细胞亚群减少[2-4];另一方面是功能上的变化,包括高度异常活化、易于凋亡、HIV特异性或非特异性抗体反应性低[5-7]等.B细胞功能损伤使得体液免疫应答缺陷,HIV病毒不能得到有效控制,同时,还会增加机会感染和二次感染的易感性.因此,深入理解HIV感染过程中B细胞功能损伤的机制,不仅能通过改善体液免疫来减少机会感染和二次感染的发生,也为基于抗体的疫苗研究提供了依据.
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问号钩端螺旋体T和B细胞表位联合基因的原核表达及其产物免疫性分析
目的 构建问号钩端螺旋体(简称钩体)LipL32、OmpL1和LipL21蛋白的优势T-和B-细胞联合表位融合基因及其原核表达系统,并对表达产物的免疫原性进行鉴定.方法 人工合成多表位联合基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测重组蛋白;采用MAT检测重组蛋白兔抗血清与我国钩体标准参考株的凝集效价;Western blot和ELISA检测重组蛋白的免疫原性.结果 获得了多表位融合基因并构建了原核表达系统.表达产物的相对分子质量约为23×103,且主要以可溶性形式存在;重组蛋白兔抗血清免疫双扩散效价为1∶8,该抗血清能与我国15群的钩体标准参考株发生凝集反应,ELISA证明该重组蛋白能检测不同群型钩体感染患者血清中的抗钩体抗体.结论 成功构建了包含钩体LipL32、OmpL1和LipL21蛋白的优势T和B细胞联合表位基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及血清学检测的抗原.
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结晶紫蚀斑法检测重组痘苗病毒艾滋病疫苗病毒滴度方法的建立
目的 建立重组天坛株痘苗病毒(rTV)艾滋病疫苗的结晶紫蚀斑病毒滴度检测方法,为rTV艾滋病疫苗病毒滴度测定提供更稳定的方法.方法 通过对Vero细胞浓度、病毒吸附时间及温度、病变判定时间等方面进行优化,建立rTV艾滋病疫苗病毒滴度的结晶紫蚀斑检测方法,并应用BioSpot Reader进行蚀斑计数及分析,比对仪器蚀斑计数和人工蚀斑计数的相关性;应用血球吸附法、中性红蚀斑、结晶紫蚀斑3种方法,对多批rTV艾滋病疫苗及天坛株痘病毒滴度进行检定,进行3种方法的相关性分析;采用结晶紫蚀斑法重复测定样品,计算变异系数(CV),对方法的精密性进行验证;采用SPSS17.0软件对实验数据进行统计分析.结果 确定Vero细胞浓度为5.0×105 ~9.0×105个/ml时,病毒37℃吸附2h后加入含甲基纤维素的维持液,培养72 h,应用BioSpot Reader进行蚀斑计数,与人工计数的相关系数r=0.985,能客观反映不同大小的病毒蚀斑,降低了人工计数引起的非客观因素误差;经过3种方法对不同批次的rTV艾滋病疫苗及天坛株痘病毒进行病毒滴度检定,结晶紫蚀斑与血吸附法的相关系数r=0.997,结晶紫蚀斑法与中性红蚀斑法相关系数r=0.980 (P<0.01),具有高度相关性.结论 建立了可用于rTV艾滋病疫苗病毒滴度检测的结晶紫蚀斑方法.
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CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响
目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3~6倍、2~4倍和4~8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23~ 57倍、9~20倍和16~64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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