原发性干燥综合征患者外周血浆细胞样树突状细胞变化

目的：探讨原发性干燥综合征（ primary Sj?gren′s syndrome，pSS）患者外周血浆细胞样树突状细胞pDC（ Lin－CD123＋HLA-DR＋）的变化及意义。方法收集疾病组原发性干燥综合征患者39例，正常对照组15例，采用流式细胞术检测pDC占外周血淋巴细胞的比例，ELISA检测15例原发性干燥综合征患者血浆IFN-α、IL-6和TNF-α水平。结果 pSS疾病组外周血pDC占淋巴细胞百分比低于正常对照组（P＜0．05）；抗干燥综合征抗原A（SSA）抗体阳性pSS患者pDC水平显著高于抗SSA抗体阴性pSS患者（P＜0．05）；pSS疾病组血浆TNF-α（P＜0．05）和IL-6（P＜0．05）水平高于正常对照组，pSS疾病组血浆IFN-α水平与正常对照组相比差异无统计学意义（ P＞0．05）；pSS疾病组外周血pDC占淋巴细胞百分比与血浆TNF-α、IL-6和IFN-α水平之间无相关性。结论 pSS患者外周血pDC占淋巴细胞百分比降低，外周血TNF-α、IL-6水平增高，可能参与原发性干燥综合征的发病机制。

肺炎支原体脂质相关膜蛋白刺激 THP-1细胞表达血红素氧合酶-1

目的：研究肺炎支原体（ Mycoplasma pneumonia， Mp）脂质相关膜蛋白（ lipid-associated membrane proteins ， LAMPs）对人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）的影响。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的加入不同浓度LAMPs作用不同时间，并设阳性和阴性对照。收集各处理组细胞，LDH漏出实验检测LAMPs对THP-1细胞的毒性，实时荧光反转录PCR检测 HO-1 mRNA 表达， Western blot 检测 HO-1蛋白表达，比色法检测 HO-1酶活性。结果LAMPs浓度为10μg／ml时，LDH漏出率明显增高。 LAMPs刺激THP-1细胞9 h后HO-1 mRNA表达水平高；HO-1蛋白表达水平与LAMPs刺激呈剂量依赖性和时间依赖性，其中5．0μg／ml LAMPs刺激表达的HO-1蛋白水平高；LAMPs刺激12 h 后的HO-1蛋白浓度高。 LAMPs刺激THP-1细胞后，随着HO-1表达水平的增高，其酶活性亦显著增强。结论 Mp LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1，并可上调其酶活性。

益肝清毒颗粒联合阿德福韦酯抑制鸭乙肝病毒反弹

目的：研究益肝清毒颗粒联合阿德福韦酯（ ADV）对ADV停药后鸭乙肝病毒（ DHBV）感染模型体内乙肝病毒反弹的抑制作用。方法用鸭乙肝病毒阳性血清感染雏鸭7d后，实时荧光定量PCR筛选出DHBV阳性鸭，并随机分成5组，分别设为模型对照组、ADV组、中药替换组、联合给药高剂量组以及联合给药低剂量组。 ADV组持续给予ADV（0．25 mg／ml）21 d，然后停药继续饲养14 d；中药替换组持续给予ADV（0．25 mg／ml）21 d后换用益肝清毒颗粒（1．2 g／ml）再持续给药14 d；联合给药高剂量组同时给予益肝清毒颗粒（1．2 g／ml）和ADV（0．25 mg／ml）21 d后再单独使用益肝清毒颗粒（1．2 g／ml）持续治疗14 d；联合给药低剂量组同时给予益肝清毒颗粒（0．6 g／ml）和ADV （0．125 mg／ml）持续治疗21 d后单独使用益肝清毒颗粒（0．6 g／ml）持续治疗14 d。各组分别于给药后0 d、7 d、14 d、21 d及停用ADV后7 d、14 d，自腿静脉取血，检测血清中DHBV-DNA滴度以及谷丙转氨酶（ ALT）和谷草转氨酶（ AST）含量。结果停用ADV前，中药替换组、联合给药高剂量组和联合给药低剂量组与模型组比较，血清中DHBV-DNA、ALT和AST均显著降低（P＜0．01或P＜0．05），而且联合给药高剂量组较ADV组血清中DHBV-DNA含量更低。 ADV停药后， ADV组血清中DHBV-DNA、ALT和AST均出现严重反弹。与ADV组比较，中药替换组和联合给药高剂量组仍能维持在较低水平（P＜0．01或P＜0．05），而联合给药低剂量组虽然DHBV-DNA和ALT出现一定反弹，但仍处于较低水平（P＜0．01或P＜0．05）。结论益肝清毒颗粒联合ADV能有效抑制体内乙肝病毒，同时能显著抑制ADV停药后病毒的反弹。

IL-12 p35和 IL-12 p40缺失可引起衣原体生殖道感染后肾脏病变

目的：探讨IL-12和IL-23在抗衣原体泌尿生殖道感染免疫及病理损伤中的作用。方法用1×104 IFU的鼠肺炎型沙眼衣原体（ MoPn）经生殖道感染野生型（ wt）、IL-12p35 KO和IL-12p40 KO小鼠，每组一半小鼠于感染后114 d，再次感染相同剂量的MoPn。每隔3～4 d取生殖道分泌物，测定其中衣原体包涵体的数量。原发感染后114 d或143 d，处死小鼠，分离泌尿生殖道，肉眼观察其肾脏、输卵管、子宫角水肿程度，并切片， HE染色后，显微镜下观察各组织炎性浸润程度和管腔水肿程度，并计数肾组织中衣原体和细菌数量。结果在MoPn原发感染后，IL-12p35 KO和IL-12p40 KO小鼠清除衣原体的速度相当，带菌时间均较wt小鼠明显延长。所有小鼠均出现严重的上生殖道组织病变，但KO小鼠和wt小鼠病变程度没有明显差异。几乎所有IL-12p40 KO和部分IL-12p35 KO小鼠均发生严重的肾脏病变，而wt小鼠肾脏未见明显异常。在KO小鼠病变的肾组织匀浆及切片中均能检测到衣原体抗原，且包涵体数量均显著高于wt小鼠。结论 IL-12和IL-23可限制经生殖道感染的MoPn扩散到肾脏，IL-12或IL-23基因缺失后生殖道衣原体感染易并发肾脏病变。

我国新出现的基因V型乙脑病毒全基因组分子特征

目的了解我国新分离基因Ⅴ型乙脑病毒（XZ0934）与60年前马来亚（马来西亚）分离株（Muar）全基因组分子特征。方法使用ClustalX 2．0．9、DNAStar 7．1、Bioedit 7．2．5、MEGA 6．06等生物学软件系统分析两株乙脑病毒全基因组核苷酸、氨基酸序列同源性并进行系统进化分析。结果我国2009年西藏蚊虫标本中新分离基因Ⅴ型乙脑病毒（ XZ0934）与1952年马来亚（马来西亚）脑炎病例脑组织分离的基因Ⅴ型乙脑病毒（ Muar ）全基因组分别为10983和10988核苷酸，两株病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为90．6％和98．3％。两株基因Ⅴ型乙脑病毒开放读码框（ ORF）均编码3433氨基酸，而其他4个基因型（1～4型）乙脑病毒ORF编码3432氨基酸。与其他基因型乙脑病毒相比，基因Ⅴ型乙脑病毒较其他基因型乙脑病毒在非结构基因NS4a区段插入一个丝氨酸（Ser），在3′非编码区（3′UTR）插入10～14核苷酸。 E基因分子遗传进化分析显示，XZ0934病毒株与2010年韩国蚊虫标本中检测到的基因V型病毒10-1827处于相邻进化分支，而与Muar株距离较远，提示基因Ⅴ型乙脑病毒在近60年间存在分子遗传进化差异。结论两株分离年代相距约60年的基因Ⅴ型乙脑病毒核苷酸与氨基酸之间均维持较高同源性，均保留了基因Ⅴ型乙脑病毒在非结构基因NS4a的氨基酸插入，但是新分离病毒与60年前分离病毒在分子遗传进化中存在差异。

抗禽流感抗体在广东省人群中的分布研究

目的：检测广东省禽接触职业人群携带抗H5、H6、H7和H9禽流感病毒（ avian influ-enza virus， AIV）抗体阳性率，评估AIV的隐性感染率及传播活性的变化。方法以广东省10个地市的1066名禽接触职业人员血清和205名非禽接触职业人群血清为研究对象，以从广东省外环境或者禽中分离的灭活病毒为检测抗原，用血凝抑制法检测广东省人群携带抗H5、H6、H7和H9抗体滴度。结果2013年广东省禽接触职业人群携带抗H5、H6、H7和H9的抗体阳性率分别是0．44％、0％、0．30％和0．30％；2014年广东省禽接触职业人群携带抗 H5、H6、H7和H9的抗体阳性率分别是1．08％、0．0％、0．0％和0．27％；而对照组只有2013年非禽接触职业人群的抗H9抗体阳性率是0．95％，其余3种AIV的抗体都没有阳性人群。禽接触职业人群和非禽接触职业人群携带AIV抗体阳性率差异没有统计学意义，但是职业人群的抗体几何平均滴度高于非职业人群。结论广东省人群普遍不携带抗AIV抗体，AIV隐性感染率低，尚不具备大规模向人间传播的能力，但是与禽接触仍是人群感染AIV的主要风险因子，应长期开展对禽接触职业人群的AIV抗体监测，及时预防和预警新型AIV由禽向人的传播。

肠道病毒71型嵌合体病毒感染性克隆的构建与鉴定

目的：构建含有弱毒株（SDLY 1株）2A、3B基因片段的强毒株（SDLY 107株）的嵌合体病毒，为进一步研究EV71的毒力建立初步的反向遗传操作平台。方法利用重叠PCR的方法，获得2A、3B基因片段，双酶切后置换到含有SDLY 107株全长的质粒pMD19-T中，利用体外转录获得感染性RNA，转染Vero细胞，成功拯救病毒后经PCR、免疫荧光和免疫印迹对其进行鉴定，测序验证， CCID50和空斑试验测定病毒的滴度。结果成功构建了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1感染性克隆，其转染Vero细胞后可观察到典型的细胞病变，PCR试验、间接免疫荧光和免疫印迹试验均证明EV71感染性克隆构建成功，CCID50和空斑试验测得嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1的滴度分别为1．25×105 PFU／ml和0．7×105 PFU／ml。结论成功拯救了嵌合体病毒SDLY 107-2A-1和SDLY 107-3B-1，其对细胞病变效应与亲本病毒SDLY 107株相似，为进一步在细胞和体内试验中测定病毒的毒力提供基础研究。

乙型肝炎DNA疫苗的动物试验与临床试验研究进展

乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus， HBV）感染是世界范围内的公共卫生难题。目前，治疗乙肝的常用药物是干扰素和核苷类似物。干扰素作为广谱抗病毒抑制剂，可以选择性杀灭被病毒感染的细胞，但会产生一些副作用且实际疗效不够理想，许多患者不得不放弃治疗。而核苷类似物主要有拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦和替诺福韦等，可以抑制DNA多聚酶和逆转录酶的活性，发挥抗病毒作用，但是疗程不稳定，病毒耐药性变异的出现还会使原来的治疗方案失效［1］。因此，许多科研人员致力于探索辅助治疗HBV感染的新方式， DNA疫苗就是其中的一种。

RNA干扰抗HIV-1的研究进展

艾滋病即获得性免疫缺陷综合征（ acquired immunodefi-ciency syndrome，AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（ human im-munodeficiency virus，HIV）感染导致CD4＋T淋巴细胞计数减少、机体免疫功能受损直至衰竭的慢性传染病。据联合国艾滋病规划署统计，2012年HIV感染及AIDS患者总人数已达3530万，对全人类的健康造成了极大的威胁。目前对于HIV／AIDS的治疗手段主要是高效抗逆转录病毒疗法（ HAART），该法可以有效降低HIV病毒载量，提高CD4＋T细胞，达到一定程度的免疫重建而减少机会性感染的发生，控制HIV进展并延长生存率，但HAART不能完全清除病毒，且存在依从性差、毒副作用大及耐药突变等缺点［1-2］。所以人们在寻找开发新的疗法， RNA干扰在基因研究、临床治疗中具备高效、稳定、简单、特异等优势和潜力，有许多研究者在AIDS的治疗和预防中尝试应用该技术，且已获得阶段性的进展，使其有望成为一种具有良好抗 HIV-1疗效的新方法。

异基因造血干细胞移植后艰难梭菌感染研究新进展

异基因造血干细胞移植（ allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，ALLO-HSCT）技术可治愈多种恶性及非恶性血液病。随着造血干细胞移植技术的不断发展和骨髓库的扩大，移植患者长期生存率不断提高。由于ALLO-HSCT术后患者机体免疫功能尚未完全重建及免疫抑制剂的长期使用，患者易发生细菌、病毒和真菌等的感染。细菌感染中以艰难梭菌的感染（ Clostridium difficile infection，CDI）较为多见。目前，对移植后患者发生艰难梭菌感染的研究和认识并不全面。本文回顾近几年的研究，并主要对CDI的临床症状、诊断方法、危险因素及治疗方案进行分析探讨，以加深人们对艰难梭菌感染的认识，利于及早识别和确诊，以免病情加重和延误。

43株副溶血性弧菌菌体脂肪酸的成分分析

脂肪酸是细菌细胞膜的主要组成成分，其含量和结构具有种属特征，组成相对稳定，不受生化反应变异及质粒丢失等因素的影响。因此，可将灵敏的气相色谱技术应用于微生物细胞膜上的磷脂脂肪酸组分的分析中，以实现微生物种属的快速鉴定。自Able等［1］首次将气相色谱技术应用于肠杆菌的菌体脂肪酸成分分析，该技术已被应用于多种细菌，特别是厌氧菌等生长缓慢细菌的鉴定及分型。但有报道称目前商品化的细菌脂肪酸分析系统Sherlock MIS存在脂肪酸数据库不完善，无法涵盖国内菌株等问题［2-3］。因此，本研究拟通过气相色谱-质谱法（ gas chromatograph-mass spectrometer， GC-MS）对副溶血性弧菌的菌体脂肪酸组成进行分析，积累有关数据，总结出菌体脂肪酸组成的共同点，为该菌的脂肪酸鉴定工作提供有效的基础数据补充。

弹回引物鉴定军团菌属与嗜肺军团菌

目的：设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列，采用生物信息学方法设计引物，优化实验条件，对方法的特异性、灵敏度进行评估，并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测，军团菌属菌株在85℃～86℃处有扩增子熔解峰，嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰，非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng／μl与（1×103～1×104）／ml。弹回引物对环境分离株验证实验中，成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌；对15份环境水样直接检测，检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定，具有较高的特异性与灵敏度。

评估纸片扩散法与 Vitek2-compact GN13测定肠杆菌科细菌体外药敏及 ESBLs 可靠性的研究

目的：评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13测定肠杆菌科细菌体外药敏及ESBLs的可靠性。方法本研究选取了2011—2012年从21家医院腹腔感染患者中分离的93株肠杆菌科细菌。分别采用纸片扩散法、Vitek2-compact GN13、微量肉汤稀释法测定其对氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、厄他培南、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、亚胺培南、阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星的体外敏感性。以微量肉汤稀释法作为参考方法，分别评估纸片扩散法、Vitek2-compact GN13与参考方法的分类一致率（ CA％）。利用PCR及测序法，在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌中筛选超广谱β-内酰胺酶（ ESBLs）耐药基因，评估纸片扩散法与Vitek2-compact GN13表型确证试验筛选ESBLs的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果纸片扩散法和Vitek2-compact GN13与参考方法的一致率均＞90％；但在使用Vitek2-compact GN13测定厄他培南、氨苄西林-舒巴坦、头孢他啶和头孢吡肟时，会出现一定比例的大错误（ ME，3．2％）和极大错误（ VME，2．2％）。此外，纸片扩散法和Vitek2-compact GN13对产ESBLs菌株测定的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为96．7％（29／30）、100％（20／20）、100％（30／30）和95％（19／20）。结论无论是纸片扩散法还是Vitek2-compact GN13，对肠杆菌科细菌体外药敏及ESBLs的测定均比较可靠。但在采用Vitek2-compact GN13测定厄他培南、氨苄西林-舒巴坦、头孢他啶和头孢吡肟时，应注意可能出现ME及VME。

细胞培养基底刚度对人原代脐静脉内皮细胞增殖率及经登革病毒感染后释放 NO、ET-1的影响

目的：探讨细胞培养基底刚度在登革病毒（ Dengue virus，DENV）感染人原代脐静脉内皮细胞（ HUVEC）中的影响。方法利用丙烯酰胺和双丙烯酰胺制备模拟正常人血管内皮细胞基底刚度的水凝胶[（0±4）kPa]，MTS法检测细胞的增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，常规方法鉴定增殖登革病毒2型（DENV-2），DENV-2（MOI＝10）感染人原代脐静脉内皮细胞，MTS法比较种植在传统塑料基底与水凝胶上的HUVEC被DENV-2感染后对细胞增殖率的影响，并通过硝酸还原酶法检测两组细胞释放一氧化氮（NO）的水平以及双抗体夹心ELISA法检测内皮素-1（ET-1）的表达。结果自重弯曲法测得2％双丙烯酰胺和40％丙烯酰胺配比水凝胶的弹性模量为（3030±0．44） Pa；血管内皮细胞经登革病毒感染后其细胞增殖率与培养基底刚度呈正相关；两组不同刚度基底培养的细胞生长周期和细胞凋亡率无明显差异，但可引起NO和ET-1水平的变化。结论实验结果证实基底刚度可影响人原代HUVEC的增殖效率及释放的NO与ET-1浓度的变化，血管内皮受损后，其分泌合成的血管活性物质减少，参与了登革热的致病发生。同时水凝胶模型的建立为研究DENV感染的体外模型提供一定的新思路。

生产用细胞基质中猪细小病毒污染检测方法的建立及应用

目的：建立生产用细胞基质中猪细小病毒（ porcine parvovirus，PPV）污染的检测方法，并进行方法学性能验证分析及初步应用。方法针对编码非结构蛋白NS1保守序列设计引物和探针，建立荧光定量PCR方法，对方法的线性、精密度、低检出限等参数进行验证，并分析待测样品对试验的干扰。将PPV毒种感染ST细胞，制备病毒。以ST细胞为敏感细胞，建立PPV ST细胞感染性试验，并将ST细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合，建立ST细胞感染-PCR法，分析感染-PCR方法的灵敏度。利用所建立的方法进行生产用细胞样本的初步应用研究。结果 PPV荧光定量PCR法的特异性较好，与其他种属的细小病毒、猴SV40病毒及其他猪源病毒无明显的交叉反应，在109～104拷贝／μl范围内线性较好，R2达到0．98以上，灵敏度为1×104拷贝／μl，试验内和试验间的Ct的精密度均＜5％，试验内病毒定量拷贝数的精密度为5％～15％，试验间为30％～40％，低感染性病毒滴度检测限为1CCID50／ml。待测细胞样品成分对病毒检测无明显的干扰性。 ST细胞感染-PCR法的灵敏度为0．01CCID50／ml。利用荧光定量PCR法对22份细胞样品进行检测，结果均为阴性。结论成功建立了PPV荧光定量PCR检测法及ST细胞感染-PCR法，能够用于细胞中PPV的检测，有助于进一步提高生产用或治疗用细胞的安全性。

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《中华微生物学和免疫学杂志》为中华医学会主办。1981年创刊，主要报道医学微生物学和免疫学方面的研究论文、简报、评论、综述、国内外学术动态、书评及消息等。

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