中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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TLR4介导氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化作用的研究
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,OX-LDL)的致动脉粥样硬化作用与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的相关性.方法 构建针对TLR4的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,转染人单核细胞株U937,于转染前后用不同浓度的ox-LDL刺激,用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化,同时用ELISA测定NF-κB活性改变以及细胞上清液中动脉粥样硬化相关细胞因子MCP-1和IL-8的浓度变化.结果 ox-LDL刺激可导致单核细胞TLR4表达上调,同时NF-κB p65活性增强,MCP-1和IL-8在细胞上清液中的浓度显著高于对照组(P＜0.05),并且呈剂量依赖性;利用siRNA表达载体使TLR4表达抑制后,相同剂量的ox-LDL刺激,NF-κB p65相对活性以及MCP-1和IL-8的分泌显著低于TLR4未抑制组(P＜0.05).结论 ox-LDL的致动脉粥样硬化作用至少部分是由TLR4介导的;调节TLR4的表达,可以减弱ox-LDL刺激引起的包括NF-kB活化以及MCP-1和IL-8分泌等致动脉粥样硬化效应.
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CⅡTA M1-RNA对MHCⅡ类分子表达的抑制作用
目的 探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制.方法 M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选.将细胞外切割作用明显的M1-629-GS亚克隆入psNAV载体(psNAV-M1-629-GS,pA629)并稳定转染ECV304细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA的mRNA水平.结果 pA629阳性ECV304细胞株与对照组比较,HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了89.21%及92.31%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P＜0.05).结论 CⅡTA的M1-RNA(M1-629-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达.
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人外周血CD123+髓系树突状细胞的体外诱导及生物学特性研究
树突状细胞(DC)是功能强大的专职抗原提呈细胞,根据其表面标记,DC分为髓系DC(myeloid-DC,mDC)和浆细胞样DC(plasmacytoid-DC,pDC)两个大的亚群,前者主要用于抗肿瘤免疫治疗,后者主要参与免疫耐受.
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应用刚果红负染检测口腔念珠菌感染的方法
念珠菌病(candidiasis)是由念珠菌属引起的皮肤、黏膜及内脏器官的急性或慢性感染,是机会性真菌感染之一.念珠菌是口腔正常菌群,单纯培养并不能确诊感染.
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脂多糖诱导小鼠肺损伤模型巨噬细胞活化及共刺激分子CD40上调研究
目的 观察肺泡巨噬细胞(AM)活化过程和共刺激分子CD40表达变化,探讨其在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型中所发挥的作用.方法 BALB/c小鼠分为正常对照组和LPS处理组.光镜观察24、48 h肺组织病理变化;RT-PCR测定活化巨噬细胞(activated macrophage,AMψ)中TLR4表达;电泳迁移率变动分析(EMSA)检测AMψ核提取物中NF-kB的活性;Northern blot检测CD4O mRNA表达,流式细胞术检测CD40蛋白表达;ELISA测定肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、MIP-2及IL-1β的含量.结果 小鼠吸入LPS后,肺泡隔断裂、肺间质充血及肺泡腔中性粒细胞浸润,并检测到AMψ表面TLR4的表达、核转录因子NF-kb活性增强、共刺激分子CD40 mRNA和蛋白显著表达,并随着时间延长出现增加趋势,BALF中炎症因子释放增加,正常对照组无明显变化(P＜0.05).结论 LPS诱导的ALI中,AM活化和共刺激分子CD40上调,导致瀑链式炎症反应,造成肺急性炎症损伤.
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脂氧素A4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖
目的 通过研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化、钙池操纵的钙通道电流(Isoc)及细胞激活和增殖的影响,初步探讨其对T细胞的调节作用及机制.方法 钙离子荧光探针 Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜技术动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;全细胞膜片钳技术记录Isoc;ELISA测IL-2水平;3H-TdR掺入法测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 (1)用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时则无显著差异;(2)IXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵的钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起Jurkat T细胞内游离钙浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制anti-CD3或植物血凝素(PHA)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;(3)膜片钳结果显示,LXA,抑制正常Jurkat T细胞Isoc,TG能显著增大Isoc,而LXA,呈剂量依赖性抑制,TG引起的Isoc的升高;(4)LXA4剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28诱导的Jurkat T细胞IL-2表达及细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止Jurkat T细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞Isoc引起的胞质内游离钙离子浓度的升高而抑制其激活和增殖.
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Neuropilin-1在CD4+ CD25+ T细胞上的表达
目的 探讨neuropilin-1(NRPl)在外周血中CIM+ CD25+ T细胞上的表达以及意义.方法 收集肾移植术后长期存活、慢性移植物肾病和急性排斥患者以及健康成年人的外周血,分离外周血淋巴细胞,用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞上NRPl和Foxp3的阳性细胞的百分比.结果 各组CD4+ CD25+ T细胞NRPl的表达率差异有统计学意义(P＜0.05);各组CD4+ CD25+ T细胞Foxp3的表达率差异亦有统计学意义(P＜0.05).长期存活组CD4+ CD25+ T细胞上NRP1和Foxp3表达率分别为19.6%±3.84%、50.19 ±3.90%,显著高于对照及慢性移植物肾病和急性排斥组(P＜0.05);急性排斥组的CD4+ CD25+ T细胞NRP1和Foxp3表达率低4.64%±1.26%、17.24%±5.29%.各组CD4+ CD25+ T细胞NRP1表达变化趋势与Foxp3变化趋势相同.结论 NRP1在长期存活组的外周血淋巴细胞中CD4+ CD25+ T细胞的表达上调,在急性排斥组时表达下调,且其在各组的表达变化趋势与Foxp3的表达变化趋势是一致的,这就提示CD4+ CD25+ NRP1+ 细胞是一群调节性T细胞,即NRP1是CD4+ CD25+ Treg的一个重要的表面标志.
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CTL定向释放的RANTES在肿瘤靶细胞的重新分布
目的 研究受肿瘤靶细胞激活的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)释放趋化因子RANTES(reduced upon activation,normal T cell expressed and secreted)的特征.方法 以酪氨酸酶特异性CTL为效应细胞,以特异性表达HLA-A2-酪氨酸酶的黑色素瘤细胞为靶细胞,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪技术,分析RANTES在效、靶细胞之间的动态分布;利用三重免疫荧光染色,观察受靶细胞激活的CTL定向释放的RANTES与穿孔素的共定位.结果 CTL识别肿瘤靶细胞时,RANTES从活化的CTL内释放,且重新分布于和CTL接触的靶细胞表面,而非靶细胞表面没有RANTES的分布.RANTES和穿孔素共同参与形成免疫突触(immune synapse).结论 CTL受肿瘤靶细胞激活时,定向释放的RANTES重新分布于肿瘤靶细胞表面.
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细菌内毒素对粉尘螨诱导的哮喘小鼠肺部炎症的免疫调节
目的 了解不同时间给予细菌内毒素对过敏性哮喘小鼠炎症反应的免疫调节作用.方法 将60只小鼠随机分成4组,分别为模型组(Der f)、对照组(生理盐水)、实验A组(致敏前LPS+Der f)、实验B组(致敏后LPS+Der f),观察肺组织病理学变化并进行支气管肺泡灌洗液(BALE)细胞计数与分类,ELISA法检测小鼠BALF与脾细胞培养液中IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-12及血清中特异性IgE、IgG2a水平.结果 与模型组比较,实验A组的BALF中炎细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)、IL-4、IL-5显著降低,而IL-12显著升高(P均＜0.05),血清中特异性IgE(sIgE)显著降低,而特异性IgG2a(sIgG2a)显著升高(P均＜0.05);与哮喘组比较,实验B组仅BALF中IL-4水平显著升高(P＜0.05).结论 致敏前LPS能显著抑制过敏性哮喘的炎细胞浸润并下调TH2型免疫反应,而致敏后LPS未显示此功能,提示LPS致敏前给予对过敏性哮喘的发生有保护作用.
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铜绿假单胞菌lasR rhlR基因缺陷对大鼠慢性肺部感染的影响
目的 观察铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)PA01野生型及群体感应(quo rum sensing,QS)系统的lasR rhlR基因缺陷型Pa菌株人工生物被膜致病性的差异,及Qs系统的lasR rhlR基因在Pa生物被膜感染致病过程中的地位.方法 从大鼠支气管内直接予以Pa(菌种为PAO1野生型和PAO1 lasR rhlR基因缺陷型)海藻酸盐微菌粒悬液(109 CFU/ml)攻击,建立PAO1野生型及Qs系统的lasR rhlR基因缺陷型菌株人工生物被膜肺部感染动物模型.分别于感染1周和2周后评估各组大鼠的肺部病理学、细菌学及细胞因子(IL-4、IL-10)反应的变化.结果 感染1周和2周后,PA01野生型组的肺部病理学改变和细菌学改变均明显重于PAO1 lasR rhlR基因缺陷组(P＜0.001);感染1周后PAO1野生型组肺部的IL-4、IL-10水平都高于PAO1 lasR rhlR基因缺陷组(P＜0.01,P＜0.05);2周后PAO1野生型组肺部IL-10水平进一步升高(P＜0.01),明显高于PAO1 lasR rhlR基因缺陷组(P＜0.001).结论 PAO1野生型组在病程中引起持久和严重的肺部感染,激发了TH2样免疫反应,而PAO1 lasR rhlR基因缺陷组的肺部病变明显轻于PAO1组,说明Qs系统的lasR rhlR基因在Pa肺部感染的建立及慢性化发展过程中发挥着重要作用.
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镇江地区幽门螺杆菌cagA、vacA基因及亚型与胃肠病患者的相关性
我们利用分子生物学技术,研究镇江胃肠疾病患者感染幽门螺杆菌(Hp)菌株的cagA基因型、vacA基因型,探讨基因型与胃肠疾病的关系.
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催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导的人外周血T细胞凋亡的影响
目的 探讨催乳素(PRL)在T细胞的活化诱导凋亡(activation induced cell death,AICD)中的作用.方法 用葡萄球菌肠毒素(sEA)体外刺激人外周血T细胞作为T细胞AICD的模型,在第2次向模型中加入SEA诱导T细胞凋亡的同时,分别加入3种不同浓度的hPRL(20、300和1000 ng/ml)进行干预,同时设不含hPRL的对照组.0～24 h内,以MTT法检测T细胞的增殖情况.PI染色后用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA.流式检测T细胞的Fas和FasL的表达水平变化.Western blot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax.结果 在T细胞的AICD模型中高浓度PRL组(300、1000 ng/ml)其T细胞增殖得到显著维持(P＜0.05),各PRL处理组T细胞凋亡率比对照组降低了32.9%～78.2%(P＜0.05).PRL组(300、1000 ng/ml)Bax/Bcl-2比值比对照组下降了44.4%～46.0%(P＜0.05).PRL可明显抑制细胞表面Fas和FasL的表达,其中各PRL处理组Fas的细胞阳性率比对照组下降了51.1%～75.0%(P＜0.01),FasL的细胞阳性率比对照组下降了28.2%～39.1%(P＜0.01).结论 在SEA诱导T细胞的AICD过程中,PRL可通过抑制Fas、FasL和Bax的表达,并提高Bcl-2的表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞的增殖.
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铜绿假单胞菌活菌诱导不同分化状态的U937细胞表达IL-8的研究
目的 探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa ,Pa)活菌对不同分化状态的U937细胞表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶c(PKC)和核因子JcB(NF-kB)的调控机理.方法 采用ELISA和RT-PCR法,分别对Pa诱导不同分化状态的人单核白血病细胞系U937细胞分泌IL-8及U937细胞IL-8 mRNA表达进行研究,应用Western blot检验IkB及NF-kB的蛋白表达,观察PKC和NF-kB活化抑制剂对IL-8表达的影响.结果 Pa可促进U937细胞及佛波酯(PMA)分化的U937细胞IL-8 mRNA的表达及IL-8的分泌,而且具有明显的量效和时效关系.Pa能直接诱导并迅速活化NF-kB,1 h达到高峰,以后逐渐下降.PKC阻断剂calphostin C及NF-kB阻断剂PDTC均能显著抑制NF-kB的活化及IL-8的表达(P＜0.01).结论 IL-8的产生可能与U937细胞的分化状态有关;Pa可能通过PKC信号通路促进NF-kB的活化,从而启动IL-8的高效表达和分泌.
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人巨细胞病毒UL148A、UL148B、UL148C、UL148D基因在临床株中的多态性研究
目的 研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因序列在临床低传代分离株中的多态性.方法 对22株经荧光定量PCR方法(Q-PCR)检测HCMV-DNA为阳性的临床株进行HCMV UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因全序列PCR扩增,并对PCR扩增产物进行序列测定及分析.结果 22株临床株序列与Merlin株相比,临床分离株UL148A基因的核苷酸变异率为0.5%～8.3%,氨基酸变异率为1.3%～6.3%;UL148B基因核苷酸变异率为0.5%～4.6%,氨基酸变异率为1.3%～5.0%;UL148C基因核苷酸变异率为0.5%～3.0%,氨基酸变异率为1.3%～3.9%;UL148D基因核苷酸变异率为0.6%～8.5%,氨基酸变异率为1.7%～8.1%.22株HCMV UL148A和UL148D序列均分为3个型.与Merlin株比较,除U96株外,来自未经传代的尿标本中的UL148A、UL148B、UL148C和UL148D基因编码产物含有的翻译后修饰位点均保守.结论 UL148C基因无论在核苷酸序列还是在蛋白的氨基酸结构上均较为保守.统计学分析显示HCMV UL148A和UL148D基因呈现一定的相关性.
关键词： 巨细胞病毒 UL148A～D基因 -
HIV-1 B'亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性分析
目的 分析我国HIV-1B'亚型R5或R5/X4嗜性毒株在GHOST细胞的感染性.方法 采用传统的共培养方法从HIV-1感染者PBMC中分离并培养病毒,用表达CD4和趋化因子受体CCR5或CXCR4的GHOST细胞系,测定毒株的辅助受体利用情况,使用相同病毒量即2 ng的HIV-1 p24分别感染表达不同受体的GHOST细胞系,通过流式细胞仪检测分析绿色荧光蛋白(GFP)的表达反映病毒感染细胞的能力.结果 35例B'亚型毒株利用CCR5受体,占22例(62.85%),双嗜性即CCRS/CX-CR4均阳性占13例(37.15%).GHOST-R5/X4细胞的感染性分析结果显示,R5/X4双嗜性毒株的感染性明显高于CD4＞200/ta的R5毒株的感染性(P＜0.05);R5/X4毒株与CD≤200/μl的R5毒株感染性比较差异无统计学意义(P＞0.05);CIM＞200/μl的R5毒株与CD4≤200/μl的R5毒株感染性比较差异有统计学意义(P＜0.05);GHOST-CCR5细胞感染性分析结果显示:R5/x4双嗜性毒株的感染性明显下降,与CD4＞200/μl的R5毒株的感染性比较差异无统计学意义(P＞0.05).利用相同剂量的双嗜性毒株分别感染R5、X4或R5/X4的GHOST细胞系,显示双嗜性毒株可同时利用CCR5和CXCR4辅助受体,但69.23%的R5/X4毒株以CCR5受体为主,30.77%的R5/X4毒株CXCR4受体为主.结论 HIV-1 B'亚型R5/X4病毒不仅有更广泛的宿主细胞嗜性,而且在GHOST-R5/X4细胞中感染性明显提高.持续使用CCR5受体的毒株在疾病进展的过程中虽然辅助受体的利用是一样的,但病毒感染细胞的能力增加.
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登革病毒感染对血管内皮细胞ICAM-1表达的影响
目的 探讨登革病毒2型(DV2)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM-1)的影响.方法 原代分离培养HUVEC,用生长良好的2、3代细胞进行实验.用CCK-8法测定DV2感染前后的细胞活性.流式细胞仪测定DV2感染组和对照组细胞在不同实验时间点细胞表面ICAM-1蛋白表达的情况.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和图像定量分析技术分析DV2感染组和对照组在不同实验时间点HUVEC内ICAM-1 mRNA水平.结果 病毒感染HUVEC对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义.DV2感染HUVEC促进ICAM-1 mRNA转录,DV2组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).其中,正常状态下HUVEC有一定水平ICAM-1 mRNA转录,但感染后显著增加(P＜0.05),24～72 h维持于高水平,与其他时间表达差异有统计学意义(P＜0.05).DV2感染HUVEC,细胞表达ICAM-1蛋白在12～72 h显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DV2感染上调HUVEC的ICAM-1 mRNA水平和蛋白表达,从而诱发并加重血管内皮局部的损伤,破坏血管的屏障功能,促进血管渗漏的形成与发展.这可能是DV2感染诱发患者血管通透性升高和血浆渗漏的重要分子机制之一.
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HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质的探讨
目的 探讨HPV L1 C-末端保守氨基酸序列的免疫生物学性质.方法 以合成HPVL1保守序列短肽、点突变该序列中酰胺化酶作用位点后的短肽以及15个氨基酸残基长的该序列交错合成的4个小肽免疫动物.采用T细胞增殖实验确定各肽是否含有T细胞表位;以ELISA方法确定各肽有无B细胞表位及有效免疫位点.结果 不同肽免疫鼠T细胞增殖实验差异无统计学意义(P＞0.05),两短肽免疫兔血清中IgG抗体滴度显著强于4个小肽,但兔和鼠分泌物中均未测出抗体IgG.两短肽的免疫血清对相应短肽的反应明显强于交叉反应的强度.原序列短肽的免疫血清对来自于该短肽的N-末端序列短肽的反应略强,而点突变酰胺化酶作用位点后短肽的免疫血清对C-末端序列的短肽反应略强.结论 HPV L1保守序列短肽和点突变酰胺化酶作用位点后短肽在诱导体液免疫的能力方面相似,但在交叉免疫反应性及有效免疫位点方面存在差异;两短肽的免疫原性显著强于4个小肽.
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血吸虫感染对超敏性疾病与自身免疫性疾病的调控作用
近年来,与发展中国家相比,超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高,并有上升趋势[1].随着卫生假说(hygiene hypothesis)的提出[2],许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说.
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缅怀吴安然教授
吴安然教授,1922年4月出生于江苏常州,汉族.1948年1月毕业于南京金陵大学生物系.在谢少文教授指导下于北京协和医学院进修3年,后留在北京协和医学院及中国医学科学院基础医学研究所免疫研究室,从事病毒学和免疫学的科研、教学工作.
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接头长度对MDC与CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的影响
目的 构建表达不同接头(linker)长度的巨噬细胞源趋化因子(MDC)与CVB3VP1融合基因疫苗,观察接头长度对融合基因疫苗免疫效果的影响.方法 构建表达接头长度分别为10、15和19个氨基酸的重组质粒pcDNA3/MDC-L-VP1;将6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为A～E5组,分别肌肉注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-L10-VPl、peDNA3/MDC-L15-VP1和peDNA3/MDC-L19VP1,每次接种100μg/只,4周注射1次,共3次,每次免疫后第14天眼眶静脉采血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价.第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血中病毒滴度.结果 成功构建了3种不同接头长度的质粒;第3次免疫后,E组中和抗体滴度和小鼠脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他各组,血中病毒滴度显著低于其他各组(P＜0.01).结论 融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1能诱导小鼠对CVB3VP1产生较强的体液和细胞免疫,有效地抑制了病毒的增殖.
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H5亚型禽流感灭活疫苗病毒基因的定量检测及其与HI抗体效价之间关系的分析
目的 建立H5亚型禽流感病毒灭活疫苗中病毒核酸的特异、敏感、快速的定量检测方法,分析其与HI抗体效价之间的相关性.探索禽流感灭活疫苗效力体外检验的方法.方法 选取H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计了特异性引物和TaqMan MGB(minor groove binder)探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感灭活疫苗,通过体外转录,制备含有选定检测序列的RNA标准品,绘制标准曲线.对50批H5亚型禽流感灭活疫苗进行了荧光定量PCR检测,测定了疫苗的HA基因拷贝数,同时测定了50批疫苗相应的HI抗体效价.进行了疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价之间相关性的分析.结果 该方法的灵敏度为10拷贝/反应,标准曲线的相关系数为0.998 003,对H9亚型禽流感灭活疫苗和其他禽病疫苗无交叉反应,特异性好、重复性佳.疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价不相关.结论 荧光定量PCR方法为H5亚型禽流感病毒灭活疫苗检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法.
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HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定
目的 研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗.方法 根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV ADl69株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段.将Kozak序列插入PP150基因的起始密码子的上游,3'端引入了内质网滞留信号KDEL序列,将修饰后的基因片段克隆进载体pB1121,构建了带潮霉素(Hyg)选择抗性基因的植物表达载体pCAM BIA1300/pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105;采用叶盘法转化蚕豆,获得了5株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定,确认了3株为转基因植株.通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析,以鉴定其免疫学活性.结果 这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性.结论 这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件.
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H3、H5、H7、H9亚型流感病毒通用多表位核酸疫苗构建及表达研究
目的 构建表达A型流感病毒多种表位的核酸疫苗,并研究其在幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)内表达产物的生物学活性.方法 筛选流感病毒主要抗原(HA、NA、NP、M)表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构,合成流感通用的复合多表位基因(Epi),以H5、H7亚型流感病毒HA融合表达基因为骨架,将多表位基因Epi插入构建H7HA-Epi-H5HA阅读盒,定向克隆至pVAX1,构建抗A型流感H3579亚型的pVAX1-H7HA-Epi-H5HA.后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞总RNA,以RT-PCR方法检测目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)初步测其表达产物抗原性.结果 RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在.结论 本试验所构建的重组质粒pVAX1-H7HA-EpiH5HA,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗多种A型流感病毒的通用核酸疫苗.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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