中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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问号钩端螺旋体对J774A.1和THP-1细胞NADPH氧化酶活性及ROS产生的影响
目的：探索问号钩端螺旋体(简称钩体)对小鼠和人单核-巨噬细胞株NADPH氧化酶活性及活性氧簇( ROS)产生的影响,了解不同宿主巨噬细胞对问号钩体的杀菌机制。方法采用问号钩体56601株感染J774A.1和THP-1细胞建立钩体细胞感染模型,光度法测定细胞NADPH氧化酶活性和超氧离子O-2水平,免疫荧光法检测细胞ROS水平变化。结果光度法检测结果显示,问号钩体赖株感染2 h、4 h、12 h和24 h后,J774A.1细胞NADPH氧化酶活性分别从感染前的0.6190μmol·min-1· mg-1上升至0.3055μmol · min-1· mg-1、6.1415μmol · min-1· mg-1、1.4871μmol·min-1·mg-1和0.9646μmol · min-1· mg-1；THP-1细胞 NADPH 氧化酶活性分别从感染前0.7235μmol·min-1·mg-1上升至0.8842μmol·min-1·mg-1、1.8971 μmol·min-1·mg-1、1.1254μmol·min-1·mg-1和0.5627μmol·min-1·mg-1；超氧离子结果显示,J774A.1细胞超氧离子水平由正常细胞的0.1890 μmol/L 分别上调至0.2363μmol/L、0.2977μmol/L、0.3240μmol/L 和0.3057μmol/L；THP-1细胞由正常细胞的0.1237μmol/L 分别上调至0.1493μmol/L、0.2490μmol/L、0.2700μmol/L和0.2727μmol/L；免疫荧光检测结果表示,钩体感染J774A.1和THP-1细胞2 h、4 h、12 h和24 h后,细胞ROS水平较正常细胞逐渐变强,24 h出现降低。结论问号钩体感染J774A.1和THP-1细胞NADPH氧化酶活性和超氧离子O-2均显著上调,且J774A.1细胞上调更明显,结果有助于揭示巨噬细胞杀灭问号钩体的分子机制。
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新疆栽培一枝蒿粗多糖对OVA蛋白的免疫增强作用
目的：探讨新疆栽培一枝蒿粗多糖( cultivated Artemisia rupestris L. crude polysaccha-rides,CARCP)作为模式抗原卵清白蛋白( ovalbumin,OVA)佐剂的免疫增强作用。方法将CARCP配伍OVA,皮下免疫小鼠两次,铝佐剂作为阳性对照,ELISA检测IgG及分型IgG1、IgG2a抗体水平；流式细胞术检测脾细胞中T淋巴细胞亚群CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞,CD4+CD44+和CD8+CD44+T细胞,以及细胞因子CD4+IFN-γ, CD8+IFN-γ和CD4+CD25+Foxp3+Treg的表达情况。结果 CARCP能提高小鼠IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平(P<0.05)；增强CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞含量以及CD4+/CD8+的比值(P<0.05)；提高CD4+CD44+和CD8+CD44+T细胞的含量(P<0.05)；促进 CD4+IFN-γ、CD8+IFN-γ的表达(P<0.05),下调 CD4+CD25+Treg 中 Foxp3的表达(P<0.05)。结论CARCP作为OVA蛋白的佐剂能够增强体液和细胞免疫应答,尤其可以增强T细胞免疫应答。
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黄芩苷对BCG感染后巨噬细胞表达NKG2 D配体及NK细胞杀伤活性的影响
目的：探讨卡介苗(BCG)感染对巨噬细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1和ULBP2)表达的影响，以及黄芩苷对配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法佛波醇酯( PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，建立BCG感染巨噬细胞模型，进一步用黄芩苷干预感染模型，分别采用real-time PCR和Western blot检测MICA、MICB、ULBP1和ULBP2 mRNA水平和蛋白表达水平。人外周血单个核细胞( PBMC)诱导分化扩增的NK细胞与感染后巨噬细胞共孵育4 h后，采用RTCA DP实时无标记细胞分析仪检测NK细胞的杀伤活性。结果 BCG感染可上调MICA、MICB、ULBP1和ULBP2 mRNA水平和MICA、ULBP1蛋白表达水平。1 mg/L黄芩苷处理72 h后可显著促进MICA和ULBP1 mRNA和蛋白表达，并增加NK细胞对BCG感染后巨噬细胞的杀伤率。结论 BCG感染可诱导人巨噬细胞NKG2D配体表达增加，但不能有效活化NK细胞；黄芩苷可进一步上调感染后巨噬细胞表达NKG2D配体，进而促进NK细胞杀伤活性。
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小鼠Flt3配体的原核表达及其在不同亚型树突状细胞制备中的应用
目的原核表达小鼠Flt3配体,分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能,为不同亚型DCs的深入研究提供实验资料。方法 PCR扩增flt3l基因,构建pCold-flt3l质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备,流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,同时ELISA测定IL-12和IFN-α的表达。结果 SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达,纯化后纯度达93.3%,Western blot结果表明其具备良好的免疫反应性。同时,该蛋白能诱导小鼠骨髓细胞分化为较高比例(约60%)的DCs,且包含cDCs( CD11c+CD45RA-)和pDCs( CD11c+CD45RA+)亚型；LPS刺激后2种DC亚型均上调CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,且分泌较高水平的 IL-12和IFN-α。结论本研究成功获得重组小鼠Flt3配体蛋白,可用于制备具有良好生物学功能的cDCs和pDCs亚型,为下一步研究提供基础材料。
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结核分枝杆菌Rv1273 c-Rv1272 c转运功能的初步研究
目的：研究结核分枝杆菌ATP结合盒( ATPbinding cassette,ABC)转运蛋白Rv1273c-Rv1272c的转运功能。方法以本实验室前期构建的 BL21/pET-28a-rv1273c 和 BL21/pET-28a-rv1272c重组大肠埃希菌为研究对象,采用溴化乙锭( EB)琼脂试验及EB吸收试验研究Rv1273c和Rv1272c的物质转运方向；通过逆转录PCR的方法确认rv1273c和rv1272c是否位于同一个转录单位,并且通过real-time PCR的方法比较结核分枝杆菌标准株H37Rv和H37Ra中rv1272c和rv1273c的表达差异,验证其与结核分枝杆菌毒力的相关性。结果 EB琼脂试验及EB吸收试验均表明Rv1273c和Rv1272c能够向胞内转运EB；rv1273c与rv1272c位于同一个转录单位,且其在H37Ra中的表达均约是H37Rv的6倍。结论 Rv1273c和Rv1272c为内向转运蛋白,组成一个多顺反子,可能与结核分枝杆菌的毒力相关。
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志贺菌临床株膜孔蛋白OmpF及调控基因micF介导耐药机制的研究
目的：研究志贺菌micF基因和膜孔蛋白ompF基因介导的细胞膜耐药机制。方法选取近年分离保存的志贺菌临床株,抗生素药敏试验筛选出多重耐药菌株和非多重耐药菌株, PCR扩增外膜孔蛋白ompF基因,实时荧光定量RT-PCR技术检测两组菌株micF和ompF基因的mRNA转录情况,并测定两组菌株胞内环丙沙星的浓度。结果多重耐药组13株对3类或3类以上抗生素耐药,非多重耐药组8株全敏感或仅对1类、2类抗生素耐药；21株志贺菌ompF检测均为阳性；多重耐药组micF基因相对表达量明显高于非多重耐药组,而ompF基因相对表达量明显低于非多重耐药组,差异有统计学意义；对两者进行相关性分析,r=-0.244,提示micF和ompF之间呈负相关；多重耐药组胞内环丙沙星浓度低于非多重耐药组,且差异有统计学意义。结论膜孔蛋白OmpF减少是志贺菌引起多重耐药的机制之一,micF基因对膜孔蛋白OmpF的表达起负调控作用,多重耐药菌胞内抗生素浓度的降低可能与膜孔蛋白的表达减少有一定关系。
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HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响
目的：构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1×1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。
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2015年云南省急性弛缓性麻痹病例中非脊髓灰质炎肠道病毒的鉴定分析
目的：了解2015年云南省急性弛缓性麻痹( acute flaccid paralysis, AFP)病例中非脊髓灰质炎肠道病毒( non-polio enterovirus, NPEV)的携带情况,并对分离的肠道病毒71型( enterovirus 71, EV71)作基因特征分析。方法2015年云南省疾病预防控制中心共报告213例15岁以下AFP病例,对213例AFP标本进行病毒分离,分离到的NPEV进行VP1区基因分型。用SPSS22.0软件对云南省近5年AFP病例的NPEV分离率进行比较,并应用MEGA6.06软件对分离到的EV71与其基因库代表株进行进化树分析和作图。进化树用临位相接法( neighbor joining method)做成,所用模式为Kimura二参数置换法( Kimura 2-parameter substitution model)。用1000个pseudo replicate datasets进行进化树bootstrap统计学分析。结果213例AFP病例中共检测到23株NPEV,其中7株为人肠道病毒A组(2个血清型,其中6株为EV71,均属于C4亚型),14株为人肠道病毒B组(8个血清型),2株为人肠道病毒C组,未分离到人肠道病毒D组病毒。云南省近5年AFP病例中NPEV分离率比较的统计检验结果为P=0.101,差异无统计学意义。结论2015年云南省AFP病例中NPEV携带率与往年持平,EV71基因特征分析表明云南省流行的EV71仍然是C4亚型。
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60例e抗原阳性慢性乙肝患者恩替卡韦抗HBV治疗后KIR基因多态性分析
杀伤细胞免疫球蛋白样受体( KIR)属于免疫球蛋白样受体超家族的成员。恩替卡韦( entecavir, ETV)是临床上应用广泛的抗乙型肝炎病毒( HBV)药物。为探讨KIR基因多态性与HBV感染慢性化及慢性乙肝患者对ETV抗HBV治疗应答差异相关性,我们对60例实验组及60例健康志愿者进行KIR基因分型检测。
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急性期川崎病IL-17基因组蛋白甲基化修饰改变及意义
目的：探讨急性期川崎病( KD) IL-17基因组蛋白甲基化水平及其在KD免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿42例,正常同年龄对照组28例,KD患儿分别于静脉用丙种球蛋白( IVIG)治疗前、后直接取血备检。采用免疫共沉淀-荧光定量PCR检测外周血CD4细胞IL-17基因H3K4me3、H3K27me3修饰水平；流式细胞术检测外周血CD4+IL-17+细胞(Th17)比例及IL-17、pSTAT3蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测CD4+ T细胞IL-17、IL-6Rα、gp130、IL-23R、IL-23Rβ1、ETV5、SOCS1、SOCS3、TLR4、MyD88/TRIF、TNFR1、RIP1 mRNA 及 miR155表达；ELISA 检测血浆中IL-6、IL-23、TNF-α浓度。结果(1)急性期KD患儿Th17细胞比例、IL-17蛋白表达及H3K4me3水平显著增高,H3K27me3水平明显降低[H3K4me3：(3.79±1.45)% vs (1.93±0.31)%； H3K27me3：(54.51±13.60)% vs (73.96±22.32)%； P<0.05],且H3K4me3/H3K27me3比值与IL-17 mRNA水平呈正相关关系(r=0.69, P<0.05),其中KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL+)Th17细胞比例、IL-17表达及H3K4me3水平均高于无冠状动脉损伤组(KD-CAL-),H3K27me3水平则低于后者[H3K4me3：(5.11±1.68)% vs (2.98±0.99)%；H3K27me3：(45.02±14.83)% vs (60.35±12.51)%；P<0.05],经IVIG治疗后均明显恢复[H3K4me3：(2.44±0.77)% vs (3.79±1.45)%； H3K27me3：(66.52±15.73)% vs (54.51±13.60)%；P<0.05]。(2)急性期KD患儿CD4+ T细胞pSTAT3、ETV5、miR155表达均显著上调(P<0.05),pSTAT3负性调节因子SOCS1、SOCS3表达明显降低(P<0.05),其中KD-CAL+组前三项表达均高于KD-CAL-组(P<0.05),而后两项表达则明显低于后者(P<0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P<0.05)。(3)急性期KD患儿血浆IL-6、IL-23、TNF-α浓度及CD4+ T细胞TLR4/MyD88/TRIF、IL-6Rα/gp130、IL-23R/IL-23Rβ1、TNFR1/RIP1表达均显著上调(P<0.05),其中KD-CAL+组前述多项均高于KD-CAL-组(P<0.05),经IVIG治疗后均明显降低(P<0.05)。结论IL-17基因组蛋白甲基化修饰异常改变可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关。
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早期HIV-1感染者KIR3 DL1阳性CD8细胞表型和功能的探索研究
目的：探讨 KIR3DL1受体在早期 HIV-1感染者 CD8细胞亚群的表达特点和KIR3DL1+CD8+细胞HIV-1特异性应答能力。方法用流式细胞术检测56例HIV-1阴性对照者和32例早期HIV-1感染者的CD8细胞亚群；同时用HIV-1 Gag多肽库刺激HIV-1感染者的外周血单个核细胞( PBMCs),用胞内细胞因子染色技术检测CD8细胞分泌IFN-γ水平。结果 HIV-1阴性对照者和HIV-1感染者CD8细胞中KIR3DL1+CD8+细胞比例的中位数分别为1.45%(0.12%~8.4%)和0.82%(0.14%~6.14%),差异无统计学意义。 KIR3DL1受体在HIV-1阴性者和HIV-1感染者CD8终端效应细胞的表达比例平均值分别是(4.55±3.84)%和(6.71±8.50)%,显著高于在CD8效应记忆细胞的表达比例,其平均值分别是(0.50±0.59)%和(1.18±1.39)%(P<0.001)。而且,早期HIV-1感染者CD8效应记忆细胞中KIR3DL1阳性细胞比例显著高于HIV-1阴性者(P=0.0012)。早期HIV-1感染者的KIR3DL1+CD8+终端效应细胞比例与HIV-1载量呈正比(rs=0.576,P=0.0009)；而且,HIV-1载量≤4.0log 的 HIV-1感染者 KIR3DL1+CD8+终端效应细胞的比例显著小于病毒载量>4.0log的感染者(P=0.002)。 HIV-1感染者KIR3DL1+CD8+细胞诱导产生HIV-1-特异性IFN-γ的水平远低于KIR3DL1-CD8+细胞。结论 KIR3DL1受体主要表达在CD8终端效应细胞,HIV-1病毒血症高时KIR3DL1受体在终端效应细胞的表达比例高；表达 KIR3DL1受体的 CD8细胞诱导产生的HIV-1特异性T细胞的应答能力低。
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EB病毒在原发性干燥综合征发病机制中的研究进展
原发性干燥综合征( primary Sj?gren′s syndrome, pSS)是一种慢性自身免疫性疾病,可累及全身多个系统,迄今pSS的具体发病机制仍未阐明。 EB病毒( Epstein-Barr virus,EBV)也称人类Ⅳ型疱疹病毒,属于疱疹病毒属,研究发现EBV和pSS的发病有关。随着研究的不断深入,关于EBV致pSS发病的新证据和新观点越来越多,其可能通过多种途径参与pSS发病。本文对pSS发病机制中EBV致病作用的相关研究进行综述。
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更正
发表于本刊2012年11月第32卷第11期的《2010—2012年北京地区儿童肺炎支原体流行基因型监测》,为根据2009年Dégrange等[1]新建立的多位点可变数目串联重复序列分析,即MLVA分型方法,对北京地区2010—2012年儿童肺炎支原体流行基因型监测的研究数据报道。2015年本文作者与英国科学家V. J. Chalker等6个国家的专家共同对肺炎支原体的MLVA分型方法进行了国际标准研究,提出了统一的MLVA分型[2]数据处理标准,即将部分实验室“四舍五入”的重复序列处理方法统一为“逢小数进一”的重复序列处理方法。例如,数据分析中Mpn13位点的重复序列数目为3.19,则重复序列数目记为4。
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诺如病毒P粒子及其应用研究进展
诺如病毒( Norovirus)目前没有疫苗面世，已成为全球健康的威胁之一。由于缺乏体外培养和小动物模型，且基因和抗原不断进化，以致传统方法无法制备诺如病毒疫苗。随着人们对诺如病毒认识和研究的不断深入，基于P粒子的亚单位疫苗表现出许多优势，如易于表达、成本低、免疫原性高、结构稳定等。此外，由于P粒子的另一特性，可携带外源抗原而不影响自身结构，使其成为提呈外源抗原的一个平台。在此基础上，基于P粒子的病毒性疫苗(如流感病毒、轮状病毒、人类免疫缺陷病毒-1、肠道病毒71型等疫苗)以及慢性病(阿尔茨海默症)治疗性疫苗已经成为近年来研究的热点之一。本文对诺如病毒P粒子作为外源抗原提呈的应用载体在相关疫苗研发中的研究进展作一综述，并提出研发新型多价疫苗的必要性。
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福建省HIV抗体不确定人群流行病学调查及随访研究
目的：了解福建省HIV抗体不确定结果的检出率以及在不同人群中的分布情况,分析HIV抗体不确定结果的Western blot带型特征,探讨Western blot带型与HIV感染的关系。方法HIV抗体不确定人群在首次检测判断为HIV抗体不确定后每隔1个月进行随访复检,直到Western blot确认试验检测判断为阳性或阴性为止。结果福建省2015年HIV抗体不确定结果的检出率为3.69%；无偿献血人员、孕产期检查和其他就诊者检测的检出率高于其他人群； p24、gp160+p24和gp160是HIV抗体不确定样本中常见的3种带型；其中p24带型的样本随访结果为HIV抗体确认阴性的比例高,达76%,gp160+p24随访结果为HIV抗体确认阳性的比例高,达76.47%；29例带型为3条条带的样本核酸检测均为阳性。结论不同人群的HIV抗体不确定检出率存在差异,p24、gp160+p24以及gp160是HIV抗体不确定样本中常见的不确定带型,随着Western blot条带数量的增加随访结果为HIV抗体阳性的可能性越大,应加强随访以防止疫情扩散,带型为gp160+gp120+p24的样本出现假阳性的可能很小,更有可能是处于免疫受到抑制的艾滋病终末期。
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上海市长宁区儿童轮状病毒疫苗接种状况分析
腹泻是当今全球性的重要公共卫生问题之一,是5岁以下儿童死亡的第二位死因,仅次于肺炎[1]。好发于秋冬季的轮状病毒( rotavirus,RV)腹泻是引起全球婴幼儿腹泻的主要病因。在我国,兰州生物制品研究所生产的羊轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus, LLR)疫苗是目前唯一获批准可使用的RV疫苗,该疫苗于2001年上市,其接种程序为推荐2月龄~3岁儿童,每年接种1剂,每次口服3 ml。 LLR属于第二类疫苗,家长可自愿、自费为儿童选择接种。本文通过分析上海市长宁区<6岁儿童的LLR接种情况,了解LLR的接种特征,为改进LLR的接种策略提供建议。
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本刊使用的医学缩略语
为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下(按英文首字母顺序排列)，本刊在论文中将不再注释。
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
