中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注诱导小鼠皮肤移植耐受的研究
目的探讨抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用. 方法第0天,C57BL/6(H-2b,B6)小鼠尾静脉注入2×108 BALB/c(H-2d,B/c)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单克隆抗体500μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对B6小鼠进行迟发型超敏反应测定,混合淋巴细胞反应分析,并进行MLR的IL-2逆转实验和过继转移实验,初步探讨耐受形成机制. 结果抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注处理的B6小鼠中供体皮肤移植物平均存活为50.4d,显著长于其它各组(P<0.001).相对于正常对照组小鼠,耐受B6小鼠在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性(P<0.001).IL-2逆转实验结果表明,克隆不应答(anergy)可能参与了移植耐受的形成.体内、外过继转移实验均显示耐受B6小鼠脾细胞中存在抑制细胞活性. 结论抗TCRαβ单克隆抗体联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功地诱导出皮肤移植物的长期耐受.多种耐受机制,包括克隆不应答、抑制细胞,都参与了耐受的形成.
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卵巢癌细胞培养上清抑制CD8+ T细胞增殖及IL-2R表达的研究
目的研究不同卵巢癌细胞株培养上清液对CD8+ T细胞增殖功能和表面IL-2Rα、β、γc链表达的影响,探讨卵巢癌腹腔局部免疫抑制的形成机制. 方法将3种卵巢癌细胞株(OVCAR3,CAOV3,SKOV3)培养上清液和普通培养液混合培养CD8+ T细胞,MTT法测定CD8+ T细胞的增殖反应,流式细胞仪检测细胞表面IL-2Rα、β、γc链的表达,ELISA法测定培养上清液中sIL-2R的浓度. 结果(1) 3种不同浓度卵巢癌细胞株培养上清液显著抑制CD8+ T细胞的增殖,并随浓度增加而增加,和对照组比较,25%浓度时P值依次为0.004、0.006、0.013;50%浓度时P值依次为0.002、0.003、0.005;75%浓度时P值均为0.001.(2) 3种卵巢癌细胞上清均抑制CD8+ T细胞表面IL-2R表达,其中IL-2Rβ和γc链表达被显著抑制,P值依次为0.002、0.013、0.011和0.015、0.039、0.040,对IL-2Rα链表达有抑制趋势,但差异无显著性,P值分别为0.235、0.224、0.498.(3) 3种卵巢癌细胞株培养上清液均使CD8+ T细胞培养上清中sIL-2R浓度显著上升,P值分别为0.008、0.010、0.005. 结论卵巢癌细胞株培养上清液对CD8+ T细胞的增殖和IL-2R表达有抑制作用,可能是卵巢癌腹腔局部免疫缺陷的机制之一.
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人HMGB1基因的原核表达、产物纯化及活性鉴定
目的构建人高迁移率族蛋白1(HMGB1)编码基因的表达载体,获得纯化的重组蛋白,研究其生物学功能. 方法通过RT-PCR方法扩增出人HMGB1的编码基因,克隆于载体pGEM-T easy,再亚克隆于表达载体pGEX4T-2,经IPTG诱导可表达相对分子质量(Mr)约56×103的融合蛋白GST-HMGB1.经用GSTrap FF蛋白纯化柱和凝血酶行柱上酶切,得到纯化的重组蛋白HMGB1,用培养的人单核细胞系THP1检测蛋白活性. 结果构建了融合蛋白GST-HMGB1的重组表达质粒,获得了Mr约为30×103的纯化蛋白产物.该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α,并能明显诱导THP1细胞的凋亡. 结论获得了纯化的人HMGB1原核表达产物,对研究其在脓毒症中的生物学功能具有重要的意义.
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变形链球菌耐酸性缺陷株的构建
变形链球菌(简称变链菌)是主要的致龋菌,耐酸性是其关键的毒力因子,但对其基因调控机制并未明了.本实验欲用转座子Tn917随机诱变变链菌野生株UA159,筛选耐酸性变异的突变株,以便于找到一个与耐酸性相关的调控基因.
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产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的亚碲酸钾抗性基因簇分布和抗性水平
目的了解产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的亚碲酸盐抗性基因簇的分布和抗性水平的关系. 方法运用PCR和核酸杂交方法进行基因检测,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平. 结果在所检测的志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、耶尔森菌、泌尿道致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌中,只有大肠杆菌O157∶H7具有 ter(tellurite resistance, ter)基因簇.所检测的34株产志贺毒素的大肠杆菌O157∶H7有33株具有ter基因簇,所检测的18株不产生志贺毒素的大肠杆菌O157,4株具有ter基因簇,但是没有该毒力岛的其它基因.ter基因阳性的33株菌中,亚碲酸钾的抗性水平一般较高,4株在750μg/ml以上,19株为500～750μg/ml,10株为250～500μg/ml;而4株ter基因簇阴性的菌株,也表现了高水平的耐药性,其抗性水平均为500～750μg/ml.其它ter基因簇阴性的菌株,20株耐药性为5～10μg/ml,1株10～20μg/ml,6株20～50μg/ml,2株50～100μg/ml,1株100～250μg/ml. 结论 ter基因簇在产志贺毒素的大肠杆菌O157∶H7中高频率存在,而在其它病原菌中没有检测到.高水平的亚碲酸钾抗性可以作为选择性分离产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的指标之一.
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蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究
目的建立蜡样芽胞杆菌分子分型方法,用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速溯源. 方法 15株蜡样芽胞杆菌进行生化分型,同时进行vrrA基因PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染检测PCR扩增产物,所有PCR扩增产物进行序列分析,并用ClustalW(ebi.ac.uk)分析软件对DNA序列进行同源性比较. 结果传统生化分型:15株蜡样芽胞杆菌中12株可分为3个型,3株不能分型;主要生化型为1型、2型和4型.分子分型:15株蜡样芽胞杆菌都可分为7个型. 结论 vrrA基因可作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记.蜡样芽胞杆菌分子分型方法与传统生化分型方法相比,将传统生化分型所需的48h甚至更长时间缩短到5h,具有简便快速准确的优点,可做到快速溯源.
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志贺菌属编码赖氨酸的基因簇缺失情况分析
目的探讨编码赖氨酸利用的cadABC基因簇的缺失在志贺菌中的普遍性. 方法根据大肠杆菌K-12 MG1655菌株的cadABC基因簇序列设计引物,使用PCR和核酸杂交试验检测. 结果在志贺菌的4个群42个血清型43株菌中,均发生了cadABC基因簇的缺失.其中29(67.4%)株菌发生了cadABC基因簇的全部缺失,主要表现在A群和C群.A群的12个血清型中有10个发生了完全缺失,C群的18个血清型中有16个发生了完全缺失.其余13个血清型中的14株菌发生了部分缺失或重组.不完全缺失主要发生在B群, B群的11个血清型中的8个表现为部分缺失.D群的2个菌株和肠侵袭性大肠杆菌的2个菌株全部表现出部分缺失,但缺失的程度不同. 结论在志贺菌属的4个群42个血清型中,全部发生了cadABC基因簇的缺失,表现为完全缺失和部分缺失.结果提示,志贺菌的进化可能和cadABC基因簇的缺失有关.
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无细胞短棒状杆菌纳米级制剂对小鼠PMΦ和NK细胞的激活作用
短棒状杆菌制剂(Corynebacterium parvum,CPP)是一种非特异性免疫增强剂,许多动物实验和临床研究证实具有抗肿瘤作用,但副作用较大限制了其临床应用.为了减少副作用,我们采用纳米技术,制备出了无细胞短棒状杆菌纳米制剂(NCPP).并对比研究了NCPP与CPP的毒副作用、对小鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)的激活作用以及NK细胞的杀伤作用,为NCPP的临床应用奠定基础.
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一种新型的乙型肝炎病毒剪接变异体
目的证实乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)前基因组RNA在458nt～1308nt(nt,核苷酸)之间可发生剪接并产生相应的基因组剪接变异体. 方法对1株分离自慢性乙型肝炎患者血清的亚基因组HBV DNA(2366bp)进行测序并以Vector NTI6.0软件进行分析.将全基因组HBV DNA(3215bp)理论上可能的剪接供体及受体内的核苷酸进行定点突变并将突变株转染HepG2细胞,以位于HBV DNA 458nt及1308nt两侧的特异引物检测转染后的细胞内HBV核心颗粒DNA,并以相同引物检测458nt～1308nt发生缺失的HBV DNA在不同病程的乙型肝炎患者血清中的存在情况. 结果2366bp HBV DNA在458nt～1308nt之间发生缺失并符合GT-AG剪接模式.3215bp全基因组HBV DNA在459nt及1306nt分别发生G→A及A→C突变后均不能产生458nt～1308nt缺失.458nt～1308nt发生缺失的HBV DNA在慢性乙型肝炎、肝硬化及原发性肝细胞癌患者血清的检出率分别为80%、75%及70%,显著高于HBV无症状携带者10%的检出率. 结论 HBV前基因组RNA在458nt～1308nt之间可发生剪接并产生长度为2366bp的基因组剪接变异体.该类型基因组剪接变异体基因结构特点及在HBV相关性肝病中广泛存在提示它与HBV致病性密切相关.
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乙型肝炎病毒C基因截短对S基因转录与表达的影响
目的研究HBV C基因截短对S基因转录与表达的影响. 方法采用分子克隆、定点突变技术构建C基因截短型HBV载体,瞬时转染HepG2细胞.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测S基因的转录;应用Western blot、ELISA检测S蛋白的表达. 结果经酶切鉴定,C基因截短型HBV载体构建成功;C基因截短对HBV S基因转录没有影响,但C基因截短141nt后可显著提高HBV S蛋白表达. 结论 HBV C基因截短可影响HBV S基因的生物学功能,机制发生在转录后或翻译水平.
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SARS-CoV E蛋白基因的扩增及原核表达载体的构建
加拿大英属哥伦比亚癌症研究所基因组科学中心已完成了SARS冠状病毒的全基因组测序(基因库登录号:AY274119).SARS-CoV基因组编码包括S蛋白、M蛋白、N蛋白和E蛋白等结构蛋白质.E蛋白是小的结构蛋白(为糖蛋白),散布于SARS病毒的包膜,疏水性强,其核苷酸序列为231bp,编码76个氨基酸,其等电点为6.01,相对分子质量为8.361×103.推测E蛋白的作用有利于病毒形状的形成,在病毒颗粒形成过程中起主要作用.本文利用已公布的SARS-CoV基因组序列,克隆了E蛋白基因,以期为深入研究E蛋白的生物学功能和药物或疫苗开发提供研究基础.
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B组轮状病毒WH-1株 NSP2基因序列和蛋白质结构分析
目的克隆成人腹泻标本WH-1中B组轮状病毒组(group B rotavirus, GBRV)非结构蛋白NSP2基因,分析其核苷酸序列,比较与其它GBRV基因同源性,预测其mRNA二级结构、蛋白质二级结构. 方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从成人腹泻标本WH-1中扩增GBRV NSP2基因,克隆载体pUCmT,对NSP2基因进行核苷酸序列分析.利用GeneBee软件比较与其它GBRV毒株NSP2基因同源性,Rnaviz2.0软件绘制NSP2基因的二级结构,PredictProtein软件分析NSP2蛋白结构. 结果成人腹泻标本WH-1中GBRV非结构蛋白NSP2基因全长1007bp,与ADRV核苷酸序列的同源性达98%,与印度加尔各达分离株CAL-1达82%,与IDIR(鼠)同源性仅为79%.氨基酸序列与ADRV的同源性达98.4%,与CAL-1达97.7%,而与IDIR仅为89.0%.其mRNA折叠形成多达26个发卡环状结构.NSP2蛋白是由301个氨基酸残基组成的多肽,含有2个潜在的N-糖基化位点和多个磷酰化位点. 结论成人腹泻标本WH-1中GBRV非结构蛋白NSP2基因和氨基酸序列与人GBRV有较高的同源性,而与动物中GBRV同源性相对较低,其中与ADRV的同源性高,推测GBRV WH-1株与ADRV具有相同起源.
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慢性乙肝患者趋化因子IP-10及其受体CXCR3的检测
在慢性乙肝病毒感染过程中,淋巴细胞向受病毒感染肝组织的迁移、浸润,对于抗病毒免疫应答及炎症反应的发生起着决定性作用.而对其机理的研究尚未取得令人满意的答案.近年来,对趋化因子与其受体的相互作用的研究表明,激活的淋巴细胞可表达特定的受体分子,并受相应趋化因子吸引、招募后,定向迁移至局部组织,产生免疫应答或炎症反应[1].其中趋化因子受体CXCR3与其配体干扰素诱导蛋白10(IFN-inducible Mr 10×103 protein,IP-10)的相互作用已成为研究某些炎症发生机制的突破点[2,3].本实验旨在研究慢性乙肝患者中IP-10及其受体CXCR3的表达,并探讨两者与炎症发生及肝细胞损伤之间的关系.
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HIV/AIDS患者CCR5、CXCR4的表达与疾病进展的关系
目的了解HIV/AIDS患者淋巴细胞表面第二受体CCR5、CXCR4的表达,分析其与疾病进展的关系,探讨HIV感染的免疫基础. 方法收集33例HIV/AIDS患者及13例健康对照的抗凝全血,用流式细胞仪检测第二受体CCR5、CXCR4的表达,并分析第二受体表达与病毒载量、CD4+ T淋巴细胞绝对值及T淋巴细胞活化(HLA-DR+CD38+)的相关性. 结果艾滋病组CD4+、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5表达高于无症状HIV-1感染组及健康对照(P＜0.001);艾滋病组CD8+ T淋巴细胞表面CXCR4表达低于健康对照(P＜0.01).HIV/AIDS患者CD4+、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5的表达与病毒载量明显正相关(P＜0.01);与CD4+ T淋巴细胞绝对值明显负相关(P＜0.01),与T淋巴细胞活化(HLA-DR+CD38+)水平明显正相关(P＜0.001). 结论 HIV-1感染者第二受体CCR5的表达与机体对HIV的免疫反应及疾病进展密切相关.
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对恩氟烷吸入麻醉胃肠道肿瘤手术病人免疫细胞的检测
吸入麻醉药恩氟烷对肿瘤病人围手术期细胞免疫功能的影响报道结果不一,本文检测了恩氟烷吸入麻醉对胃肠道肿瘤手术病人T细胞亚群和天然杀伤细胞(NK细胞)数的影响.
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CD40L单克隆抗体对HSP患儿PBMC及单核细胞株THP-1产生炎症因子的影响
目的观察CD40配体单克隆抗体(CD40L McAb)对HSP(亨诺-许兰紫癜)患儿PBMC及单核细胞株THP-1产生炎症因子的影响. 方法采用细胞培养、流式细胞技术及ELISA法分别检测正常对照、过敏性紫癜患儿的PBMC及单核细胞株THP-1表达膜蛋白分子CD40L、CD40的阳性率、产生炎症因子IL-1、TNF-α、IL-6水平以及CD40L McAb加入细胞培养体系后上述指标的变化. 结果与正常比较,HSP患儿的PBMC表达CD40L[(8.26±4.15)%,对照(0.54±0.58)%]显著增高、CD40表达无差异;PBMC培养上清中炎症因子IL-1[(1000.4±574.5)pg/ml,对照(246.8±207.1)pg/ml]、TNF-α[(978.7±205.8)pg/ml,对照(452.4±248.5)pg/ml]的水平也显著高于对照,CD40L McAb可使增高的IL-1[(164.7±127.9)pg/ml]、TNF-α[(674.7±269.2)pg/ml]降至正常水平.THP-1自发表达CD40,低浓度产生IL-1、TNF-α.与正常比较,HSP患儿的PBMC培养上清诱导其表达CD40,产生IL-1,TNF-α增高,CD40L McAb同样具有抑制THP-1表达CD40、分泌IL-1、TNF-α的作用. 结论 CD40L McAb能抑制炎症因子的产生.
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急性心肌梗死患者IL-1Ra第2号外显子+8006位点多态性分析
目的对急性心肌梗死(AMI)患者白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)进行基因多态性分析,判断基因型与患AMI风险的相关性,以及对血清IL-1β、IL-1Ra和C反应蛋白(CRP)水平的免疫调节. 方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法,检测了178 例AMI患者和190例健康对照者IL-1Ra基因(IL-1RN)多态性,同时利用酶联免疫吸附试验检测32例AMI患者[携带等位基因C(IL-1RN*C)者12例,不携带者20例]的血清IL-1β、IL-1Ra和CRP水平. 结果IL-1RN多态性在AMI组和健康对照组间的分布差异有显著性(P＜0.01),与健康对照组相比,不携带IL-1RN*C的基因型患AMI的相对风险度增加3.01倍(OR＝3.01, 95%CI＝1.51～6.03).携带IL-1RN*C基因型的AMI患者血清IL-1Ra水平显著高于不携带者(P＜0.01). 结论 IL-1RN基因多态性与AMI之间存在相关关系,并可影响血清IL-1Ra水平的调节,但对血清IL-1β和CRP水平并无影响.
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肠杆菌科细菌多药外排系统AcrAB的研究进展
细菌耐药性的产生及扩散使新型抗生素从一问世就面临耐药的威胁,尤为突出的是,当细菌接触某种抗生素时,其可产生对多种结构不相关抗生素的多重耐药,这种表型通常是多药外排系统超表达的结果.现已认识到,在决定细菌对各种抗微生物制剂固有及获得性耐药的因素中,主动外排机制居主要地位[1].其中AcrAB-TolC是大肠埃希菌主要的、占绝对优势的多药外排系统,并存在于其它肠杆菌科细菌中,其与细菌对氟喹诺酮耐药及多重耐药密切相关[2-4].本文就AcrAB多药外排系统的结构、调控等研究进展作一综述.
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幽门螺杆菌黏附素HpaA的克隆、表达及生物学活性研究
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种慢性、感染率高的细菌,是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡的重要致病因子,并与胃癌、胃相关淋巴组织瘤密切相关.Hp感染基本的条件之一是黏附定居,N-乙酰神经氨酰乳糖结合血凝素(NLBH,HpaA)是Hp众多黏附素中的一种,可激发宿主产生相应抗体,引起黏膜和全身性免疫应答,针对它所产生的抗体不与非Hp细菌和人胃黏膜组织发生交叉反应,是Hp的保护性抗原之一.
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钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB在豚鼠体内的免疫保护性研究
目的观察钩端螺旋体DNA疫苗pcD-flaB是否具有抗钩体交叉感染的保护作用. 方法将纯化后的钩体DNA疫苗pcD-flaB 100μg/200μl肌肉注射豚鼠,共免疫2次,间隔7d,初次免疫后的第21天分别攻击感染赖型、临海型和波摩那型钩体,观察保护作用. 结果该疫苗对3型钩体的保护率分别是88.89%、100%和100%,总保护率为96.3%,与对照组差异具有显著性. 结论 DNA疫苗pcD-flaB在豚鼠体内不但具有抗同型钩体(临海型)感染的作用,也具有较好的交叉保护作用.
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HCMV pp65核酸疫苗表达载体的构建及其体内免疫效果评价
目的构建人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因表达载体并初步评价其作为核酸疫苗的体内免疫效果. 方法利用分子克隆方法构建HCMV pp65表达载体pcDNA3.pp65;对其活性进行体外鉴定后,以肌肉和皮下2种途径、3种剂量组免疫小鼠;测量免疫小鼠的体重、体温等一般状况,利用MTT方法测定免疫小鼠的T细胞增殖活性、NK活性,利用ELISA方法测定小鼠的抗HCMV IgM、IgG抗体,免疫小鼠血清的病毒中和实验. 结果成功构建HCMV pp65表达载体pcDNA3.pp65并免疫小鼠后,小鼠体重、体温等一般状况未见明显变化,T细胞增殖活性增强,NK细胞活性增强,HCMV IgM、IgG抗体增高,且有时间、剂量依赖性,免疫小鼠血清对HCMV有部分中和作用. 结论 pcDNA3.pp65表达载体可引起机体特异性细胞免疫和体液免疫,可作为一种有一定应用前景的核酸疫苗进一步深入研究.
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噬菌体表达短肽模拟日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原表位的研究
目的从噬菌体随机12肽库免疫筛选日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)的模拟短肽分子,探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果. 方法以纯化的SjHmAg 免疫血清IgG为配基免疫筛选噬菌体12肽库,按吸附-洗脱-扩增的淘洗过程进行3轮筛选;随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性,并测序;用混和噬菌体克隆皮下免疫小鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条日本血吸虫尾蚴,42d后剖杀冲虫,观察减虫及减卵效果. 结果经3轮筛选,特异性噬菌体得到有效的富集,产出率为第一轮的210倍;随机挑取24个噬菌体克隆经ELISA鉴定,有21个克隆能与SjHmAg免疫血清特异性反应;自动测序仪测序,结果发现它们的外源肽具核心序列(STRKD);与对照组相比,混和噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为16.2%,减卵率为59.0%. 结论利用噬菌体展示技术可获得模拟SjHmAg短肽,这些短肽分子能诱导部分抗日本血吸虫保护力.
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流行性乙型脑炎病毒活疫苗株SA14-14-2基因稳定性研究
目的通过研究流行性乙型脑炎活疫苗减毒株基因稳定性,从分子水平证实流行性乙型脑炎活疫苗的遗传稳定性. 方法分析流行性乙型脑炎活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒E蛋白基因核苷酸和氨基酸序列,并与其强毒株和基因库中乙脑病毒减毒株(AF315119)比较. 结果乙脑活疫苗主种子、工作种子及其相应的疫苗病毒的E蛋白基因核苷酸序列完全相同.这些病毒E蛋白的氨基酸序列与基因库中乙脑病毒弱毒株(AF315119)比较显示第E447位点氨基酸有差异. 结论乙脑病毒活疫苗减毒株遗传学特性稳定.
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抗HBsAg/RBC双特异噬菌体抗体的构建
目的通过不同外壳蛋白的展示,构建抗HBsAg/RBC双特异噬菌体抗体. 方法通过DNA重组技术,将抗HBsAg Fab与噬菌体基因8融合,抗RBC ScFv与噬菌体基因3融合,这2种融合基因以不同的启动子驱动,并克隆于同一噬菌体表达载体上,得到双特异噬菌体抗体表达载体,转化大肠杆菌后获取噬菌体抗体上清,用ELISA和红细胞凝集试验检测其双特异活性. 结果 ELISA和RBC凝集实验证明,本方法可形成双特异噬菌体抗体,可使含有HBsAg的RBC悬液产生凝集.用展示性能得到提高的蛋白8变种取代野生型蛋白8可提高双特异噬菌体抗体的活性. 结论 HBsAb和RBC两种抗体分子能够通过不同噬菌体外壳蛋白同时展示于同一噬菌体表面,形成双特异噬菌体抗体.可用于人外周血HBsAg的快速血凝法检测.
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抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体的表达及体外对癌细胞浸润的抑制效应
目的制备抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体. 方法从分泌抗人组织蛋白酶B单克隆抗体的杂交瘤细胞株提取总RNA,通过RT-PCR扩增单克隆抗体VH和VL的DNA片段,对其进行序列分析,证实具有小鼠可变区完整的结构,利用基因工程技术将它们分别和人Ig的Cγ1和Cκ恒定区基因连接组建人鼠嵌合轻链和重链Fab抗体,并克隆到pcDNA3真核细胞表达载体.将重组体转染到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO),通过G418筛选、ELISA检测和Western blot鉴定,分离纯化抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体,用于体外抑制癌细胞浸润的试验. 结果得到分泌抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体的中国仓鼠卵巢细胞克隆(C62A2),分泌的抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体在体外能抑制癌细胞浸润. 结论人-鼠嵌合抗体的成功表达,将有可能用于组织蛋白酶B过度表达的有关疾病的治疗.
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交叉保护性抗LPS多克隆抗体的制备与LPS多表位模拟肽的筛选
目的获得具交叉保护性的抗细菌脂多糖(LPS)多克隆抗体与模拟LPS多表位的噬菌体展示环肽克隆. 方法制备具交叉反应性的兔抗鼠伤寒沙门菌抗血清,鉴定抗血清对大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击小鼠的交叉保护性.以亲和纯化的多克隆抗体为靶,亲和筛选噬菌体随机环七肽库.双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆. 结果兔抗血清能与多种来源的LPS反应,对用大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击的小鼠有显著的保护性.用亲和层析纯化的多克隆抗体为靶分子进行3轮筛选,随机挑选46个克隆,其中20个克隆显示与多抗结合.鼠伤寒沙门菌LPS可抑制阳性噬菌体克隆与多抗结合,所有克隆的IC50(达到50%抑制率的LPS浓度)为125ng/ml.挑选其中10个克隆测序并推导氨基酸序列,其中5个克隆具X-QFYP-X-A保守序列;3个克隆具LFTFAHY序列;2个克隆具YQYYPAA序列,所有序列非极性氨基酸含量平均值为80.0%. 结论获得能与多种LPS反应且具交叉保护作用的兔多克隆抗体,筛选得到可模拟鼠伤寒沙门菌LPS多表位噬菌体展示环七肽.
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纳米细菌研究进展
1988年芬兰科学家Kajander等进行哺乳动物细胞培养时发现细胞内存在一种原核微生物,能通过100nm的滤菌器,1990年Kajander等将此种微生物命名为纳米细菌(nanobacteria).纳米细菌广泛存在于自然界的矿物质中和生物体内,能感染人类、牛、鹿和其它哺乳动物,是一种人畜共患的致病原[1].纳米细菌能感染人体任何组织和细胞,分泌钙化的脂多糖生物膜,具有较大的毒性,能引起受感染细胞空泡形成、组织的炎症和肿胀,并出现相关炎症因子的反应,与人类感染和病理性钙化类疾病密切相关[2].纳米细菌的发现及其生物学特性的揭示,为人类多种疾病的发生机制研究提供了新的切入点,越来越引起国内外学者的关注.
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| 2019 | 01 02 |
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