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包涵体变复性技术研究进展
现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实,这极大地促进了蛋白类产品的开发,尤其是重组蛋白药物的研发.目前非糖基化的重组蛋白表达多采用大肠杆菌的原核表达系统,该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在.与蛋白可溶性表达相比,包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点,对毒性蛋白制备尤其适宜.因此,采用包涵体形式已成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一.
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钩端螺旋体毒性蛋白VapC核酸酶活性及其对宿主细胞毒性作用的研究
目的 了解钩端螺旋体毒素-抗毒素系统中毒性蛋白VapC的功能及其对宿主细胞的毒性作用.方法 以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株基因组DNA为模板,采用PCR扩增全长vapB、vapC、vapBC基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rVapB和rVapC 表达情况,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVapB和rVapC.检测rVapB和rVapC有无水解问号钩体赖株及THP-1细胞DNA或RNA活性.分别采用实时荧光定量PCR和Western blot试验,检测问号钩体赖株感染THP-1细胞前后vapB和vapC基因转录及表达水平的变化.构建vapB和vapC基因真核表达载体并转染细胞,采用CCK-8试剂检测VapB和VapC蛋白对细胞活性的影响.结果 所克隆的vapB和vapC基因核苷酸及氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能分别表达rVapB 和rVapC.rVapC可水解RNA,但不水解DNA.问号钩体赖株感染THP-1细胞后,vapB和vapC基因 转录及表达水平均显著上调,部分毒性蛋白VapC外分泌.转染vapC基因的人肾小管上皮细胞HEK293大量死亡.结论 问号钩体赖株VapC蛋白为RNA酶,可在感染宿主细胞过程中外分泌并对细胞有明显毒性.
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帕金森病与泛素蛋白酶体系统
帕金森病(Parkinson's disease,PD)是以中脑多巴胺(Dopamine,DA)能神经元发生退变伴细胞内包含体(LB)形成为主要特征的中枢神经系统变性疾病.LB中聚集了许多蛋白质包括脂质,神经丝和相关蛋白质α-synuclein、泛素和泛素途径相关酶.现在普遍认为神经细胞的死亡是α-synuclein等蛋白构象改变,形成淀粉样丝状物,异常聚集所致[1].而目前许多研究着重于毒性蛋白质的生物合成途径,却很少有研究其降解和代谢途径.泛素蛋白酶体系统(UPS)是细胞内重要的溶酶体外降解系统,是真核生物细胞内主要的降解系统.蛋白质通常在细胞内能正确装配和折叠,但也不可避免地会出错.泛素-蛋白酶体就可以发现和破坏这些错误蛋白,使它们及时降解.在散发性PD病人尸检脑部黑质中发现有蛋白酶体的功能及结构缺陷[2],而与家族性PD有关的三个突变基因α-共核蛋白(α-synuclein)、Parkin(E3连接酶)和UCH-L1(去泛素化酶)也与UPS的功能有关[3].因此越来越多的证据显示,泛素-蛋白酶体系统(UPS)的异常引起细胞毒性蛋白的聚集可能在家族和散发性PD的发病机制中起主要作用.本文就PD与UPS功能障碍之间关系的研究进展做一文献综述.
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蓖麻子中毒3例治疗体会
蓖麻在我国大部分地区有种植,蓖麻子是蓖麻的种子,含有蓖麻毒性蛋白、凝集素及蓖麻碱。蓖麻子可入药,具有泻下作用,也可作为皮肤润滑剂用于皮炎及其他皮肤病的治疗。但生食蓖麻子可致中毒,蓖麻子中毒事件在农村地区时有发生,了解蓖麻子的毒性,做好相关宣传可更好地预防此类事件的发生及正确处理好中毒事件。
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动态监测诱导痰嗜酸性粒细胞对评价哮喘气道炎症的临床意义
支气管哮喘的基本病理特征是气道炎症反应,它与病情恶化、气道结构重建密切相关[1].有研究表明, EOS在哮喘气道炎症反应中起重要作用.EOS炎症程度可作为一个独立的指标来诊断哮喘和衡量哮喘病情[2];ECP是EOS激活后释放的一种毒性蛋白,是EOS活化的标志,也是造成哮喘气道炎症的重要介质,可直接反映气道炎症状态[3].为提高临床对哮喘的诊断及预后分析,我们于2004 年12月至2008 年12 月对98例住院患者(哮喘急性发作组36例;哮喘治疗缓解组32例;健康对照组30例)采用诱导痰的方法,并进行动态监测诱导痰细胞学分类及ECP测定,旨在探讨其与气道炎症反应状态的关联,并评价其在哮喘诊断和预后分析的价值.
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颗粒溶素对NK细胞和树突状细胞具有化学趋化作用研究
颗粒溶素(granulysin,GNLY)是存在于人类细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lympoeytes,CTLs)和自然杀伤细胞(NK Cells)胞浆颗粒中的细胞毒性蛋白[1].
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068重组葡萄球菌株诱生白喉抗毒素
以非致病性菌株表达目的抗原,可望诱导有效的免疫应答,其中以革兰阳性的木糖葡萄球菌、肉质葡萄球菌尤为安全、高效.它们与金黄色葡萄球菌有低水平的DNA同源性,但却不产生有致病力的毒素、溶血素、凝集素、蛋白A等,可作为抗原的活载体,有效表达全部或部分抗原成分,诱导持久的体液免疫反应.本实验旨在研究毒性蛋白上某一定义完整的结构域能否被表达在这两种菌株表面,它们能否在小鼠体内诱生中和抗体.已知,白喉毒素(DT)的382~535氨基酸片段是结构完整的区域,为受体结合域DTR.
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蚯蚓毒素及其去除方法的初步研究
目的研究蚯蚓毒素的来源及其成分,探索其去除方法。方法对蚯蚓应激分泌液进行透析、可见及紫外分光光度法检测透析袋内外液组分、电泳分析蛋白组分、动物体内试验检测毒性。结果蚯蚓应激分泌液的蛋白组分显示剧毒性(小致死量为0.242 mg/kg)。PAGE分离主要有两条带;蚯蚓对不同刺激产生的应激分泌液成分相同。结论蚯蚓应激分泌液的蛋白组分有毒,用加盐或微电流刺激方法可去除毒素。
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嗜酸粒细胞离子通道与其功能的关系
支气管哮喘(简称哮喘)是一种涉及多种炎性细胞参与的气道慢性炎症疾病,嗜酸粒细胞(EOS)是哮喘发病机制中重要的炎症效应细胞及免疫调控细胞[1].EOS性炎症已被广泛认为是哮喘的基本特征.目前对EOS在肺部的聚集与黏附、各种炎症介质的诱导作用、毒性蛋白的释放及其作用、细胞内调节机制都有比较深入的研究[2].
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蛇毒对神经疾病的治疗作用
蛇毒中90%~95%是蛋白质,包括毒素,非毒性蛋白,酶及活性多肽.蛇毒的非蛋白成份包括金属离子,无机阴离子和有机小分子化合物.生物活性物质大部分是蛋白质[1],在蛇毒含有的酶中,应用较广泛的是类凝血酶,目前我国研制的清栓酶,蕲蛇酶等蛇毒酶制剂,分别取自于白眉蝮蛇、尖吻蝮蛇等.国外则多从马来西亚红口蝮蛇及南美洲矛头蝮蛇中提取.这些酶制剂可引起血浆纤维蛋白原浓度降低,表现为抗凝效应,抑制血栓形成过程,降低血液粘度,从而改善血液循环.
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一起食用四季豆引起食物中毒的调查报告
2000年2月22日,洛阳地区一单位因食用市售的四季豆,造成87人食物中毒,经实验证明系四季豆所含的毒性蛋白、皂素以及亚硝酸盐中毒所致.现报道如下.
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贵州省16种植物的可溶性成份对东乡伊蚊幼虫的杀灭作用
蚊虫是重要的疾病传播媒介,化学合成杀虫剂是目前控制和杀灭蚊虫的主要方法.然而,化学合成杀虫剂长期使用带来诸如抗药性、环境污染、生态破坏及对哺乳动物的毒性等问题,因此,迫切需要开发新型高效低毒的杀虫剂.由于植物中所含的一些活性物质具备人们所希望的低毒、不易产生抗性及不污染环境等特点,因此,近年来植源性杀虫剂的研究成为热点.到目前为止已证实可以用于防制害虫的植物源活性物质包括生物碱、甙类、单宁、萜烯类、精油、树脂、毒性蛋白、酯类及酮类等[1].