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短波紫外线与交联淀粉碘联用对血浆中鸭乙型肝炎病毒灭活的研究
采用3H渗入检测法、免疫电镜、ELISA法、雏鸭感染试验等技术,观察短波紫外线(UVC)与交联淀粉碘(CSI)联用对血浆中鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的灭活效果.结果,在7 170 J/m2UVC照射后,再经CSI100 mg/ml作用90 min,血浆中DHBVDNA-P活性下降99.76%,DHBV颗粒破坏,而DHBsAg为阳性,雏鸭感染比率为2/13.若CSI作用时间延长至120 min,血浆中DHBsAg滴度进一步下降但仍呈阳性,雏鸭感染比率却为0/10.
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乙肝扶正胶囊的主要药效学研究
目的:研究乙肝扶正胶囊的主要药效学作用.方法:选用D-半乳糖胺致小鼠急性肝损伤模型、卡介苗+脂多糖(BCG+LPS)造成小鼠免疫性肝损伤模型、四氯化碳(CCl4)致大鼠慢性肝损伤模型,研究乙肝扶正胶囊的保肝作用.选用鸭乙型肝炎病毒感染雏鸭,以分子斑点杂交法观察其对鸭血清乙型肝炎病毒DNA水平的影响.观察对环磷酰胺抑制免疫功能小鼠血清溶血素含量的影响.结果:乙肝扶正胶囊能明显降低D-半乳糖胺致急性肝损伤和BCG+LPS致免疫性肝损伤模型小鼠血清中ALT、AST的含量;对CCl4慢性肝损伤大鼠模型可降低血清中ALT、AST及肝羟脯氨酸含量,提高TP、ALB含量.对肝损伤均有明显的修复作用.对乙型肝炎病毒感染鸭血清DHBV-DNA水平抑制效果显著,拮抗环磷酰胺所致的体液免疫抑制,增加小鼠血清溶血素含量.结论:乙肝扶正胶囊有一定的保肝降酶、抑制鸭乙型肝炎病毒复制、提高机体免疫力的作用.
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玉郎伞多糖抗鸭乙型肝炎病毒作用
目的:研究玉郎伞多糖(YLSP)抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)的作用.方法:取1日龄广西麻鸭60只,在麻鸭颈静脉注射0.2 mL强阳性DHBV DNA鸭血清,13d后分别从其颈静脉采血0.5 mL,分离血清,用普通PCR法筛选出DHBV感染强阳性鸭.然后,将50只DHBV DNA阳性麻鸭随机分为5组:YLSP高、中、低剂量组(5,2.5,1.25 g·kg-1);阿昔洛韦阳性对照组(0.1 mg·kg-1)和模型组.所有给药组均与模型组比较,以明确玉郎伞多糖对DHBV DNA的作用,所以未设置正常组.于给药前(T0),给药7 d(T7),14 d(T14)及停药后3 d(P3)采血,用实时荧光定量PCR法检测鸭血清中DHBVDNA的含量.HE染色观察肝损伤程度.结果:与模型组相比,YLSP各剂量组及阳性对照组在用药后血清中DHBV DNA的含量显著降低,停药后,阳性对照组及YLSP中、低剂量组DHBV DNA含量均有反跳现象.HE染色结果显示YLSP能减轻鸭肝组织的病理损伤程度.结论:YLSP对DHBV具有抑制作用同时对肝损伤具有保护作用.
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玉郎伞多糖抗鸭乙型肝炎病毒及保护肝细胞作用
目的:观察玉郎伞多糖(YLSP)在鸭乙型肝炎病毒(DHBV)持续性感染模型中对鸭血清乙型肝炎病毒DNA的抑制作用及保护肝细胞的作用.方法:将DHBV-DNA强阳性麻鸭随机分为YLSP高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1)、拉米夫定(3TC,0.05 g·kg-1)组和模型组,以上各组每日上午灌胃给药1次,连续14 d.于用药前(T0)、用药7d(T7)和14d(T14)及停药后3d(P3)取静脉血用实时荧光定量PCR检测DHBV-DNA含量,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定上清液鸭乙型肝炎病毒表面抗原(DHBsAg)和e抗原(DHBeAg)的滴度;在停药3d后,取肝脏匀浆,检测肝匀浆液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量.结果:与模型组相比,YLSP高、中剂量治疗组给药7d(T7)和14d(T14)即能明显抑制DHBV-DNA复制及血清DHBsAg,DHBeAg的滴度显著降低(P＜0.05或P＜=.01),停药后3d(P3),YLSP高剂量组仍能显示出持续有效,血清DHBV-DNA水平及血清DHBsAg,DHBeAg的滴度均无反跳现象(P ＜0.05或P＜0.01);在停药3d后,肝匀浆液中SOD,GSH-Px活性以及MDA,GSH的含量,YLSP高、中剂量组仍能显示出持续有效,没有出现反跳现象(P ＜0.05或P＜0.01).结论:YLSP具有有效抑制DHBV-DNA和保护肝细胞的作用.
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复方玉郎伞多糖对鸭乙型肝炎病毒诱导的肝损伤的影响
目的:研究复方玉郎伞多糖(CYLSP)在鸭乙型肝炎病毒(DHBV)持续性感染模型中对DHBV所致的肝损伤的保护作用.方法:采用1d龄雏鸭接种广西麻鸭乙型肝炎病毒(DHBV)强阳性血清,接种1周后用聚合酶链式反应(PCR)法筛选出DHBV强阳性鸭50只,随机分为5组,每组10只,CYLSP高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1)、拉米夫定(0.05 g·kg-1)组和模型组,每日上午ig给药1次,连续14 d.于用药前(T0)、用药7 d(T7)和14 d(T14)及停药后3 d(P3)分别采血,同时检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;在停药3d后,取肝脏匀浆并除蛋白,检测肝匀浆液中总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量;HE染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变.结果:与同组T0及模型组比较,各给药组鸭血清高、中剂量治疗组给药7d(T7)和14d(T14)即能明显降低血清ALT,AST的活性,停药3(P3)天后,CYLSP高剂量组仍能显示出持续有效,没有出现反跳现象(P＜0.05或P＜0.01);检测肝匀浆液中SOD,GSH-Px活性以及GSH,MDA的含量,CYLSP高、中剂量组和拉米夫定组仍能显示出持续有效,没有出现反跳现象(P ＜0.05或P＜0.01);HE染色显示CYLSP可显著减轻鸭肝组织病理损伤程度.结论:CYLSP对DHBV所致的肝损伤具有保护作用.
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原卟啉二钠的抗鸭乙型肝炎病毒作用
目的:研究原卟啉二钠(PPN)抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用.方法:采用先天感染DHBV的龙岩麻鸭为动物模型,分设模型对照组、拉米呋啶组和PPN组,各组按20 mg·kg-1·d-1灌胃给药10 d,斑点杂交法观察用药前、用药5 d、10 d及停药后3 d血清中DHBV DNA表达,HE染色观察肝脏组织病理学变化.结果:PPN组于用药后5 d、10 d,血清DHBV DNA 水平分别为1.36 ±0.26、1.05±0.28,与模型对照组2.04±0.05、1.90±0.31 比较明显降低(T5 P<0.05、T210 P<0.01),病理检查发现PPN组肝细胞点状坏死明显减轻,与模型对照组比较,差异有显著性(P<0.05).结论:PPN有抑制DHBV DNA的作用,并具有明显的抗炎、保肝作用.
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山芝麻抗鸭乙型肝炎病毒作用
目的:研究山芝麻水提物( helicteres angustifolia)体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)的作用.方法:将DHBV-DNA阳性麻鸭随机分为山芝麻高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg-1)、拉米夫定50 mg· kg -组和模型组,分别给予相应药物进行干预.用药前、用药第7,14天及停药第7天,取静脉血用实时荧光定量PCR法检测血清DHBV-DNA含量.治疗后取肝脏组织作病理学检查.结果:拉米夫定组用药后血清DHBV-DNA水平迅速降低,停药后立即反跳；山芝麻高、中剂量组用药7,14 d血清中的DHBV-DNA显著降低(P＜0.05或P＜0.01),停药后仍表现有持续的抑制作用；在给药及停药过程中山芝麻低剂量组血清DHBV-DNA变化不明显.镜下观察显示山芝麻高剂量组与阳性药组鸭肝脏的病理改变有一定的改善.结论:山芝麻在鸭体内有一定的抑制鸭乙型肝炎病毒DNA的作用,其作用有明显的量效和时效反应关系.
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拉米夫定与原儿茶酸药物组合体内抗鸭乙肝病毒
目的:研究拉米夫定( 3TC)联合原儿茶酸(PA)对鸭体内鸭乙肝病毒(DHBV)的抑制作用.方法:感染DHBV的北京雏鸭模型随机分为3TC组,PA组,3TC/PA合用组及模型对照组,每天灌胃给药1次,连续给药10天.分别于给药前、给药第5天、给药第10天及停药后第3天取血,检测血清中DHBV DNA、白蛋白(ALB)和总胆红素( TBil)含量,以及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性,并对各时间点肝组织进行病理形态学分析.结果:PA、3TC单用及合用对雏鸭血清DHBV DNA有抑制作用,且合用时的抑制作用为显著,停药3天后仍与给药前有显著性差异.同时,3TC与PA合用组血清中ALT、AST和ALP活性,以及ALB和TBil含量均较模型对照组有一定程度的降低.另外,3TC组肝脏病理形态与模型对照组相比无明显改善,但PA及其与3TC合用组肝组织病理形态均有一定程度改善.结论:3TC与PA合用可有效抑制雏鸭的DHBV感染,且对DHBV所致雏鸭肝损伤有一定保护作用.
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参灵益肝颗粒抗乙型肝炎病毒作用的实验研究
目的 研究参灵益肝颗粒体内抗乙型肝炎病毒的作用.方法 采用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,随机分为参灵益肝颗粒(简称参灵益肝)1.6 g/kg、3.2 g/kg、6.4 g/kg 3个剂量组,拉米夫定(阳性药)组及病毒对照组.检测血清中的DHBv-DNA、DHBsAg的变化情况及观察肝脏病理改变情况.结果 参灵益肝3个剂量组及阳性药组用药21天后血清中的DHBV-DNA显著降低(P＜0.05或P＜0.01),停药7天后阳性药组及参灵益肝小、大剂组出现反跳.参灵益肝3个剂量组血清中DHBsAg均无明显降低.镜下观察各组鸭肝脏的病理改变较轻,参灵益肝3个剂量组与阳性药组差异无显著性(P＞0.05).结论 参灵益肝颗粒在鸭体内有一定的抑制鸭乙型肝炎病毒DNA的作用.
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桂林地区麻鸭DHBV基因全长克隆和序列分析以及DHBV定量检测方法的建立
携带鸭乙肝病毒(DHBV)麻鸭作为乙肝动物模型被广泛应用于抗HBV药物活性和毒性研究,广西桂林地区麻鸭具有较高的DHBV携带率,但其DHBV基因组结构特点尚未见报道.本研究克隆了桂林麻鸭DHBV基因组,其序列全长3 027bp,ORF finder分析发现桂林麻鸭DHBV除具有S、P、C开放阅读框架外,还有一编码未知多肽的开放阅读框架,Vector NTI 8.0分析显示该多肽具有与HLA* 0201结合的模体结构.比对不同国家及地区DHBV序列,并以Mega5.0生成进化树提示DHBV序列差异无明显的地域分布特点.以所构建的DHBV S基因重组质粒pGEM-DHBV-S为标准品,建立了荧光定量PCR检测DHBV方法.本研究结果为应用桂林麻鸭作为乙肝动物模型奠定了实验基础.
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基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立
滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA (cccDNA)耐药突变分析等研究.为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法.通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA.然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定.应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性.该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础.
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ε分子内完整的侧向突出结构对鸭乙肝病毒反转录酶启动引发至关重要
通过构建鸭乙肝病毒ε(De)的RNA文库并利用指数级富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选的策略,获得与反转录酶(P蛋白)高度亲和的适配子(Aptamer),再通过体外引发实验和核酸酶切割方法测定全部适配子的RNA二级结构,以研究鸭乙型肝炎病毒(Duck Hepatitis B Virus,DHBV)中对启动P蛋白引发步骤至关重要的t结构信息.本研究发现凡是支持P蛋白启动引发的高亲和力适配子中均包含完整的侧向突出结构;而一旦侧向突出被破坏,则适配子均不再支持P蛋白启动引发.本研究的结果表明Dt分子内部的一个完整侧向突出结构对于P蛋白启动引发是必不可少的.
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鸭乙型肝炎病毒基因组结构及其编码蛋白的研究进展
鸭乙型肝炎病毒(DHBV)属于禽嗜肝病毒属、嗜肝DNA病毒科病毒,与人乙型肝炎病毒(HBV)具有相同的复制方式及相似的基因结构、抗原结构.DHBV基因组是闭合环状不完全双链DNA,3个主要ORF-PreS/S、ORF-PreC/C、ORF-P位于负链,编码L蛋白、S蛋白、C蛋白和P蛋白.本文通过对DHBV基因组结构特征及其编码病毒重要蛋白的基本特性、结构特点与功能进行全面阐释,旨在对DHBV的深入研究提供重要参考和以DHBV人工感染建立的动物模型研究HBV提供重要理论依据.
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中国圆田螺多糖体内抗鸭乙肝病毒作用的研究
目的 探讨中国圆田螺多糖体内抗鸭乙肝病毒(DHBV)作用.方法 PCR检测1d龄绍兴麻鸭血清DHBV-DNA,筛选出先天感染DHBV鸭30只,随机分为模型对照组,3TC对照组和中国圆田螺多糖高、中、低剂量组,每组6只,连续灌胃给药14 d,每天2次,分别于给药前、给药7d、给药14d及停药后5d经腿胫静脉取血,分离血清,采用荧光探针定量PCR检测DHBV-DNA含量变化,采用酶联免疫吸附法检测DHBsAg和DHBeAg滴度变化.结果 中国圆田螺多糖中、高剂量组在给药14d、停药5d时对DHBV-DNA均有明显抑制作用(t值分别为:15.46、17.90、26.92、24.51,P＜0.01);中国圆田螺多糖中、高剂量组在给药14d及停药5d时对DHBsAg表达均有抑制作用(t值分别为:6.88、3.95、11.71、9.45,P＜0.05);中国圆田螺多糖中、高剂量组在给药7d、14 d及停药5d时对DHBeAg的表达亦有抑制作用(t值分别为:3.19、3.79、3.03、4.08、4.25、4.07,P＜0.05);3TC对照组在给药7d和14d时对DHBV-DNA、DHBsAg和DHBeAg有明显抑制作用(P＜0.01),但在停药5d时抑制作用显著下降出现反跳现象.结论 中国圆田螺多糖能抑制鸭血清中DHBV-DNA、DHBsAg和DHBeAg的表达量,即具有体内抗DHBV活性.
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IFN-γ基因对表达DHBV preS/S蛋白质的DNA疫苗诱生免疫应答的影响
目的利用DHBV感染鸭模型,研究鸭IFN-γ真核表达质粒作为免疫佐剂对DNA疫苗诱导免疫应答的影响和预防DHBV感染的作用. 方法用DuIFN-γ真核表达质粒与DHBpreS/S DNA疫苗共免疫,或用DHBpreS/S DNA疫苗单独免疫正常幼鸭,检测经免疫前后鸭PBMC表达DuIFN-γ的mRNA水平(半定量竞争性RT-PCR)、诱生的抗体水平(ELISA)、病毒攻击免疫鸭后血清和肝脏中的病毒DNA变化(斑点和Southern印迹核酸杂交). 结果 IFN-γ表达质粒作为免疫佐剂,可以增强DNA疫苗诱导的鸭PBMC IFN-γ的mRNA表达水平.用大剂量病毒攻击免疫鸭的结果显示,用DuIFN-γ表达质粒和DHBpreS/S DNA疫苗共免疫鸭清除DHBV的速度,明显比仅用DHBpreS/S DNA疫苗免疫鸭清除病毒的速度快,肝脏中DHBV总DNA和共价闭环DNA(cccDNA)的量也低于DHBpreS/S DNA单独免疫组. 结论 IFN-γ真核表达质粒作为免疫调节佐剂在DNA免疫中具有潜在的应用价值.
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HBV与HCV感染及相关标志物
一、HBVHBV是嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)正嗜肝DNA病毒属(orthohepadnavirus)的一员,该属其他成员包括土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)及地松鼠肝炎病毒(dround squirrel hepatitis virus,GSHV).鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)则属于同科中禽嗜肝DNA病毒属(avihepadnavirus).
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乙型肝炎病毒感染模型的研究进展
HBV感染是影响人类健康的主要问题之一.HBV的生物学研究及治疗方法进展缓慢是由于缺乏合适的体内外模型.如何建立一种有效的HBV感染模型,对于探索其感染机制,寻找有效的防治方法及开展抗HBV药物的筛选都具有重要的科研及临床意义.随着医学科学的不断发展,国内外学者进行了大量的研究,建立了多种HBV感染的体内外模型,每一种模型都有其优势和弊端,本文简要综述了各种模型在HBV研究中的应用进展及相应优、缺点.
关键词： 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒感染模型 2.2.15细胞 鸭乙型肝炎病毒 -
无细胞短棒状杆菌纳米制剂抗鸭乙型肝炎病毒作用研究
目的 探讨无细胞短棒状杆菌纳米制剂(NCPP)抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)的活性.方法 麻鸭胫静脉注射抗鸭乙型肝炎病毒阳性血清,建立乙型病毒性肝炎动物模型.无细胞短棒状杆菌纳米制剂给药分高(每羽0.9mg·qod-)、中(每羽0.3 mg·qod-1)、低(每羽0.1 mg·qod-1)3个剂量组,造模后7d肌肉注射,共6次;阳性对照用拉米夫定灌胃(50 mg·kg-1·d-1),共11次;同时设禽α-干扰素对照,口腔滴注(每羽1 000u· qod 1),共6次.分别以斑点杂交法检测给药前,第6天、第12天,停药后第3d鸭血清中抗鸭乙型肝炎病毒-DNA的含量,以病理学检测停药3d后的鸭肝组织.结果 无细胞短棒状杆菌纳米制剂各剂量组与拉米夫定组在各采血时间点的血清抗鸭乙型肝炎病毒-DNA水平与相应的模型组相比均有显著性下降(P＜0.001);中、低剂量组的抑制率均在60％以上,高于拉米夫定在停药3d后的抑制率(58％);禽α-干扰素组对血清中抗鸭乙型肝炎病毒的载量无明显抑制.肝脏病理结果显示,无细胞短棒状杆菌纳米制剂各剂量组肝细胞水肿、脂肪变性及炎性细胞浸润等变化均较模型组有不同程度的改善,以无细胞短棒状杆菌纳米制剂小剂量组对炎性浸润的改善较显著.结论 无细胞短棒状杆菌纳米制剂表现出对鸭乙型肝炎病毒明显的抑制作用,且有利于改善炎症浸润状态.
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疏肝健脾祛湿中药体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究
目的:观察由疏肝健脾祛湿中药组成的加味四逆散醇提物体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用.方法:采用先天感染鸭乙型肝炎病毒的广州麻鸭为动物模型,以斑点杂交法检测用药前后鸭血清DHBV-DNA OD值的变化,并以拉米夫定作阳性对照.结果:加味四逆散大剂量组用药第5天和第10天,血清DHBV-DNA OD值明显下降,与病毒对照组比较,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01),与自身用药前比较,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);加味四逆散中剂量组在用药第5和第10天,血清DHBV-DNA OD值明显下降,与病毒对照组比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.05);与自身用药前比较,用药第10天,血清DHBV-DNA OD值明显下降,差异有显著性(P＜0.05).结论:加味四逆散大、中剂量在鸭体内有抗乙型肝炎病毒作用.
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不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验
目的 探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果.方法 采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果.结果 不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106~108copies/mL,可持续20 d以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致.结论 鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型.
