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亚甲蓝光敏消毒法对人血浆部分成分影响的试验观察
向人血浆中加入亚甲蓝染料浓度为1μmol/L,再以10000lux强度的溴钨灯光照射10min,血浆中主要成分的生化指标只有胆红素与尿酸两种代谢产物有明显降低,其余均无明显变化,各种酶活性未发生明显改变.血浆蛋白分子量SDS-PAGE与盘状PAGE电泳未见明显异常.微量免疫电泳与免疫交叉电泳也未见血浆成分免疫原性改变.
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亚甲蓝光敏消毒法对血浆中凝血因子与酶活性的影响
采用凝固法与生化分析法,对亚甲蓝光敏消毒法处理后人血浆中凝血因子与酶活性所受影响进行了观察.向人血浆中加入1 μmol/L亚甲蓝,以20 000 lx强度的红色光(波长为640~700 μm)照射30 min,血浆中凝血因子Ⅷ促凝活性的破坏低于20%可接受水平,活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)的延长略超过正常允许值(在照射20 min时仍未超过),血浆中谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶和天冬氨酸转氨酶的活性均无明显变化.
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短波紫外线与交联淀粉碘对血浆中辛德比斯病毒灭活的研究
对UVC与CSI分别对血浆中病毒灭活的效果和对血浆中FⅧ凝血活性的影响进行了观察.CSI按100 mg/ml加入血浆,作用30 min与60 min,能使SV分别下降2.55与3 61个对数级,但血浆FⅧ凝血活性亦分别降至57.33%和0;继续延长作用时间至120 min,灭活病毒的效果增加不明显.用剂量为7 170~57 360 J/m2的UVC照射血浆,可使SV下降4.26~6.71个对数级.照射剂量为7 170 J/m2时,病毒灭活速度较快,FⅧ凝血活性也无损害,但超过此剂量后的病毒下降速度减缓,而对FⅧ凝血活性的损害明显加重.
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亚甲蓝光敏法对人血浆中病毒的灭活研究
向人血浆中加入1μmol/L亚甲蓝,以10000 lx强度的溴钨灯光照射5 min,可灭活106.5TCID50的水泡性口炎病毒与107.TCID50的辛德毕斯病毒;作用2 min可灭活10509 TCID50的人免疫缺陷1型病毒.但作用60 min仍不能破坏HBsAg抗原性.
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短波紫外线与交联淀粉碘联用法对血浆中病毒灭活的研究
采用细胞感染试验、全自动生化分析仪、SDS-PAGE等技术,观察短波紫外线(UVC)与交联淀粉碘(CSI)联用对血浆中辛德比斯病毒(SV)的灭活效果及血浆成分的变化.结果,以7 170J/m2 UVC照射后再经100 mg/ml CSI处理60 min,血浆中病毒的灭活可达6个对数级,且两消毒因子有协同增效作用.消毒后的血浆,除乳酸脱氢酶完全消失,总胆红素含量明显下降,钾离子含量比对照增加5.2倍外,多种蛋白含量、蛋白分子量和生化指标均维持在正常值范围.
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油酸钠与紫外线联用灭活血浆中病毒的研究
采用细胞感染法,对油酸钠与短波紫外线(UVC)联用灭活血浆中病毒进行了研究.结果,3 200μW/cm2UVC与3.0 mg/ml油酸钠联合作用30 min或3 200μW/cm2UVC与2.0 mg/ml油酸钠联合作用40 min,可使血浆中水泡性口炎病毒(VSV)滴度下降6.33~6.44 lg TCID50°,辛德比斯病毒滴度下降6 09~6 34 lg TCID50°且两者联用协同系数(T/E)远大于1,有明显增效作用.但该方法使M1 3噬菌体和f2噬菌体滴度下降≤3 lg PFU.用RT-PCR扩增VSV编码N蛋白的一段核酸,研究此消毒方法对VSV核酸的影响.结果,经UVC照射的含VSV血浆目的片段扩增阴性,油酸钠处理的含VSV血浆扩增阳性.表明UVC照射作用于VSV核酸,使之断裂,从而灭活病毒,而油酸钠对VSV的这段核酸无破坏作用.
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短波紫外线与交联淀粉碘联用对血浆中鸭乙型肝炎病毒灭活的研究
采用3H渗入检测法、免疫电镜、ELISA法、雏鸭感染试验等技术,观察短波紫外线(UVC)与交联淀粉碘(CSI)联用对血浆中鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的灭活效果.结果,在7 170 J/m2UVC照射后,再经CSI100 mg/ml作用90 min,血浆中DHBVDNA-P活性下降99.76%,DHBV颗粒破坏,而DHBsAg为阳性,雏鸭感染比率为2/13.若CSI作用时间延长至120 min,血浆中DHBsAg滴度进一步下降但仍呈阳性,雏鸭感染比率却为0/10.
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荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究
以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒(VSV)和辛德比斯病毒(SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化.结果,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加1 μmol/L亚甲蓝并经荧光(30 000 Lux)照射30 min,可将血浆中滴度>7 TCID50(lg)的VSV和SV灭活.消毒后,血浆中的Ⅷ:C、Ⅸ:C、纤维蛋白原的回收率>75%,白蛋白、球蛋白的回收率>85%,蛋白免疫原性无变化.
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油酸钠与紫外线及维生素C灭活水泡性口炎病毒的试验观察
采用细胞感染法,对油酸钠、短波紫外线(UVC)、维生素C(Vit C)灭活水泡性口炎病毒(VSV)的作用进行了试验观察.结果,当油酸钠含量为2.0~3.0 mg/L,作用温度为4~37℃时,随着油酸钠含量和温度的提高,VSV滴度下降值由1.17 1gTCID50增至4.50 1g TCID50;而作用时间在0.5~2 h之间变化,对病毒灭活效果无明显影响.UVC照射剂量为25 500~204 000 J/m2,可使VSV下降2.39~5.00个对数滴度,剂量-效应关系为指数函数关系.Vit C对VSV无明显灭活作用.
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亚甲蓝光敏法消毒血浆的影响因素研究
试验观察了对亚甲蓝光敏法灭活人血浆中病毒的影响因素.结果,血浆中亚甲蓝浓度、光照强度、血浆pH值、血浆容量和作用时间的影响较明显,温度的影响较小.
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亚甲蓝与可见光联合作用对血浆中病毒核酸的影响
用RT-PCR方法检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA,以了解亚甲蓝与可见光联合作用对HCV RNA的影响.结果,向含HCV血浆中加lμmol/L亚甲蓝,经可见光(30000 Lux)照射l 5 min或30 min,HCV RNA含量随照射时间延长而减少;仅加亚甲蓝不经光照者,与阳性对照者基本相同.说明仅甲亚蓝对HCV RNA基本无损伤作用,结合可见光照射时才可.
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亚甲蓝光敏法对人血浆的消毒研究
亚甲蓝 (Methylene blue,下简称MB)是一种吩噻嗪类染料,化学名称为氯化3,7-双(二甲氨基)吩噻嗪-5- 三水合物,结构式为C16Hi8ClN3S@3H2O.在可见光照射下,该化合物可被激发,并在661±2 nm波长处有大吸收峰[1].早在1933年即有报道,MB与可见光结合具有杀灭病毒的作用,但未见应用.直到90年代初,才由Lambrecht首次应用于人血浆的消毒处理[2].近年,各国学者对MB光敏法在人血浆消毒方面的作用功效、病毒灭活机理、药物毒性、对血浆成分的影响等都有一定的研究.现就其主要进展综述如下.
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人血浆中病毒灭活研究的进展
受病毒污染血浆应用的安全性愈来愈受到重视[1].血液传播的病毒主要有脂包膜病毒,如HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV-Ⅰ、HTLV-Ⅱ(人类嗜淋巴病毒),以及蛋白包膜病毒,如HAV和人类细小病毒B19(Human Parvovirus B19)等.其中,HBV、HCV、HIV在人群中的感染率很高,危害特别严重.据估计,美国和西欧每次输入未处理的血浆后感染HIV-1、HIV-2、HBV、HCV的比例分别为1:105、1:108、1:105和1:103~104[2].
关键词: 血浆消毒 病毒灭活 热力 正丁基磷酸盐 亚甲蓝过滤协同灭活病毒作用 -
亚甲蓝光化学法对临床单袋人血浆的消毒研究
目的观察亚甲蓝光化学法对临床单袋人血浆中各种病毒的灭活能力,以及处理后对血浆正常成分的影响.方法采用细胞感染法评价病毒的灭活效果,用生化、免疫测定法判定血浆成分的破坏情况.结果在国产PVC血浆袋中加入200 ml人血浆,然后加入光敏剂亚甲蓝使其终浓度为1 μmol/L时,再给以20 0001ux强度的红色光照射,作用10 min后,可使105.09TCID50的HIV、106.25TCID50的VSV和106.50TCID50的Sindbis病毒完全灭活;作用30 min,血浆中主要成分的生化指标无显著变化,各种酶活性未发生明显改变,凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C)仍大于80%,血浆的抗原性无特殊变化.结论该方法具有良好的灭活输血传播之病毒的能力,并能保证绝大部分血浆的正常活性.
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吖啶橙与长波紫外线灭活血浆中f2噬菌体的形态变化
目的观察吖啶橙(AO)与长波紫外线(UVA)消毒血浆中f2噬菌体后形态的变化.方法以f2噬菌体为试验病毒,通过AO与UVA单用及联用灭活病毒效果测定筛选二者协同作用的佳条件,在此佳消毒条件下利用透射电镜观察f2噬菌体在消毒前后形态的变化.结果经AO处理后再经UVA照射,能明显减少血浆中f2噬菌体的滴度,两因素的T/E值大于1;经有效灭活病毒的剂量(6 μg/ml AO +4 500 J/m2 UVA)消毒后与消毒前相比,血浆中大多数f2噬菌体由球形变为纺锤状和丝状,且轮廓变得不清晰,电子密度降低.结论 AO与UVA两因素具有协同增效作用;消毒后f2噬菌体的形态明显发生了变化,由球形变为纺锤状和丝状.