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辛德比斯病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究
目的 建立辛德比斯病毒的实时荧光RT-PCR检测方法.方法 人工合成辛德比斯病毒特异性核酸序列作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR引物、探针并构建反应体系,对反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度.结果 建立的辛德比斯病毒实时荧光RT-PCR检测方法对辛德比斯病毒核酸检测有高度特异性,与1～4型登革病毒、流行性乙型脑炎病毒和基孔肯雅病毒均无交叉反应,检测灵敏度为103拷贝/反应.结论 该方法灵敏度高、特异性强,适用于对辛德比斯病毒的快速检验.
关键词： 辛德比斯病毒 实时荧光RT-PCR 检测 -
短波紫外线与交联淀粉碘对血浆中辛德比斯病毒灭活的研究
对UVC与CSI分别对血浆中病毒灭活的效果和对血浆中FⅧ凝血活性的影响进行了观察.CSI按100 mg/ml加入血浆,作用30 min与60 min,能使SV分别下降2.55与3 61个对数级,但血浆FⅧ凝血活性亦分别降至57.33%和0;继续延长作用时间至120 min,灭活病毒的效果增加不明显.用剂量为7 170～57 360 J/m2的UVC照射血浆,可使SV下降4.26～6.71个对数级.照射剂量为7 170 J/m2时,病毒灭活速度较快,FⅧ凝血活性也无损害,但超过此剂量后的病毒下降速度减缓,而对FⅧ凝血活性的损害明显加重.
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短波紫外线与交联淀粉碘联用法对血浆中病毒灭活的研究
采用细胞感染试验、全自动生化分析仪、SDS-PAGE等技术,观察短波紫外线(UVC)与交联淀粉碘(CSI)联用对血浆中辛德比斯病毒(SV)的灭活效果及血浆成分的变化.结果,以7 170J/m2 UVC照射后再经100 mg/ml CSI处理60 min,血浆中病毒的灭活可达6个对数级,且两消毒因子有协同增效作用.消毒后的血浆,除乳酸脱氢酶完全消失,总胆红素含量明显下降,钾离子含量比对照增加5.2倍外,多种蛋白含量、蛋白分子量和生化指标均维持在正常值范围.
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荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究
以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒(VSV)和辛德比斯病毒(SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化.结果,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加1 μmol/L亚甲蓝并经荧光(30 000 Lux)照射30 min,可将血浆中滴度>7 TCID50(lg)的VSV和SV灭活.消毒后,血浆中的Ⅷ:C、Ⅸ:C、纤维蛋白原的回收率>75%,白蛋白、球蛋白的回收率>85%,蛋白免疫原性无变化.
