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活血注射液对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞活化的影响
目的:观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达及与人单核细胞黏附作用的影响,并探讨核转录因子kappa B(NF-kB)在其中的调控作用.方法:HUVEC与单核细胞的黏附率用蛋白定量法检测;ICAM-1,VCAM-1mRNA和蛋白表达分别用RT-PCR技术和流式细胞仪检测;NF-kB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值用免疫细胞化学法测定.结果;ox-LDL作用HUVEC后12,24 h时,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高,HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平也均明显升高,HUVEC的NF-kB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值明显增高,明显高于正常组(P<0.05,P<0.01),而活血注射液可明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率和HUVEC ICAM-1,VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平,以及显著降低HUVEC中NF-kB p65的阳性细胞百分率和细胞核/浆染色的灰度比值,与ox-LDL组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强.结论:活血注射液能通过下调内皮细胞表面ICAM-1,VCAM-1 mRNA和蛋白表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,其可能机制是其通过抑制内皮细胞NF-kB p65的活性,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用.
关键词： 血管内皮细胞 单核细胞 细胞黏附分子 核转录因子kappa B 活血注射液 -
抗CD47单克隆抗体(B6H12)对人树突状细胞成熟及其功能的影响
为阐明可溶性的抗CD47单克隆抗体(B6H12)对树突状细胞(DC)的免疫调控作用及分子机理,联合应用rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)在体外诱导扩增人外周血单核细胞来源的DC,并在培养体系中添加抗CD47单克隆抗体(B6H12);采用透射电镜观察DC形态,流式细胞术检测DC膜表面分子的表达;ELISA法检测DC释放的IL-12P70水平;BrdU-ELISA法检测DC刺激同种异型淋巴细胞增殖,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF-κB结合活性变化.结果发现:①经抗CD47单克隆抗体(B6H2)处理的DC,膜表面标记(CD80、CD86、CD1a、CD83、DR)的表达显著地低于未加B6H12单克隆抗体DC组(P＜0.05);其释放IL-12P70蛋白质的能力及刺激同种异型淋巴细胞增殖的能力也显著低于对照组(P＜0.01).②与未加B6H12单克隆抗体DC组相比,B6H12单克隆抗体处理DC组的NF-κB活性显著降低(P＜0.05),并且这种抑制作用随单克隆抗体浓度增大而增强.结论:可溶性的抗CD47单克隆抗体通过抑制NF-κB的结合活性,影响着DC向成熟发育及功能.
关键词： 树突状细胞 B6H12 CD47分子 免疫耐受 核转录因子kappa B -
人巨细胞病毒感染对脐静脉内皮细胞粘附分子和核转录因子表达的影响
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表面细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA和核转录因子kappa B(NF-κB)表达的影响,探讨NF-κB活化与ICAM-1 mRNA表达的关系. 方法用RT-PCR方法检测ICAM-1 mRNA的表达,用凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测NF-κB活性. 结果 HUVEC感染HCMV后1h,NF-κB活性增加(P＜0.05),感染后2h,ICAM-1 mRNA表达增加(P＜0.05),二者均于8h达高峰,至24h时仍维持较高表达(P＜0.01);加入NF-κB活性抑制剂四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)后,NF-κB活性明显减弱,同时ICAM-1 mRNA的表达也明显降低(P＜0.01). 结论 HCMV感染可激活NF-κB,使ICAM-1 mRNA的表达增加,从而引导炎症反应至感染部位,并有利于病毒感染在细胞间扩散.NF-κB参与ICAM-1转录的调控,其活性变化影响ICAM-1 mRNA的表达.
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右美托咪定对烧伤大鼠核转录因子kappaB和肿瘤坏死因子-α的影响
目的 观察右美托咪定预处理对严重烧伤大鼠表达核转录因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-d)的影响.方法 成年健康SD大鼠128只,随机分为4组:假手术组(S组),烧伤对照组(C组),右美托咪定组(D组),右美托咪定+育亨宾组(D+Y组),每组32只.分别收集烧伤后2h,6h,12h和24h的血清,ELISA检测各组大鼠血清内NF-κB和TNF-α的表达变化情况.结果 烫伤后的C组大鼠,随着损伤时间的延长,体内血清含有的NF-κB和TNF-α逐步增高,在伤后高于相对应的S组.D组NF-κB在伤后6h和C组比较,有下调(P＜0.05),D+Y组在伤后12h和24h NF-κB的含量高于D组(P＜0.05),但和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组TNF-α在伤后12h较C组有下调(P＜0.05),D+Y组在伤后12h和24h TNF-α的表达高于D组(P＜0.05),但和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过右美托咪定顸处理后,严重烧伤大鼠体内NF-κB和TNF-a的表达降低,有助于减轻严重烧伤的炎症反应.
关键词： 烧伤 右美托咪定 核转录因子kappa B 肿瘤坏死因子-α -
富氢液对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响
目的 探讨富氢液(HRS)对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-K B信号通路表达的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、富氢液组(HRS组),每组10只.S组麻醉开腹后右肾切除;I/R组行右肾切除,左肾缺血45min,再灌注60min,造肾缺血再灌注模型;HRS组于术前口服40 ml/kg富氢液,连续3d后建立I/R模型.每组于I/R后6h取取血样,分离血浆,多功能生化仪检测肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;ELISA检测IL-1β和TNF-α含量;另取肾脏,HE染色观察病理组织学变化,Western-blot检测TLR4、Myd88、NF-κB表达变化.结果 HRS可减轻由I/R造成的肾损伤,减低血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量,抑制肾脏TLR4、Myd88、NF-κB表达(P＜0.05).结论 HRS减轻由I/R引起的肾功能障碍,抑制炎性反应,对肾脏有一定的保护作用,其机制可能与TLR4/NF-KB信号通路有关.
关键词： 富氢液 肾脏 缺血再灌注 TLR样受体4 核转录因子kappa B -
肺炎支原体感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-κB信号通路表达的影响
目的 探讨肺炎支原体(MP)感染对BALB/c小鼠TLR4/NF-K B信号通路表达的影响.方法 BALB/c小鼠80只,随机分成肺炎支原体感染组和对照组,每组40只,分别于接种后3d、7d、14d、21d,,用ELISA试剂盒检测肺泡灌流液(BALF) IL-4和IL-6含量;HE染色观察肺脏病理组织学变化;用Western blot实验检测肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达变化.结果 肺泡灌流液中IL-4和IL-6含量于感染后7d时达到高峰,而后呈下降趋势;感染MP 3d后,BALB/c小鼠肺组织即出现间质性炎症改变,7d时炎症明显,14d时炎症逐渐减轻;感染MP后,BALB/c小鼠肺组织TLR4、Myd88与NF-κB表达水平显著升高.结论 肺炎支原体感染激活TLR4/NF-κ B信号通路.
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NF－κB P65 siRNA对 IL－17诱导下MCP－1表达的影响作用
目的：研究NF－κB P65 siRNA对IL－17诱导下心肌细胞MCP－1表达的影响作用。方法：差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞进行原代培养。利用阳离子脂质体将NF－κB P65 siRNA瞬时转染入小鼠心肌细胞，荧光定量RT－PCR和酶联免疫吸附法（ ELISA）分别检测NF－κB P65 siRNA对IL－17诱导下MCP－1 mRNA和蛋白的含量变化。荧光定量RT－PCR和Western blot检测IL－17作用下P－P65和P65 mRNA和蛋白含量变化。结果：与转染阴性对照siRNA组相比，转染阴性对照siRNA＋IL－17组MCP－1 mRNA和蛋白表达水平明显增加（P＜0．05）。与转染阴性对照siRNA组相比，转染NF－κB P65 siRNA组MCP－1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0．05）。与转染阴性对照siRNA＋IL－17组相比，转染NF－κB P65 siRNA＋IL－17组MCP－1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0．05）。 NF－κB P65 siRNA转染24 h后，NF－κB P65在基因及蛋白水平表达均被明显抑制（P＜0．05）。 IL－17作用心肌细胞不同时间后，检测发现随时间增加P－P65蛋白含量逐渐增加，15 min到达高峰，随后逐渐下降，各作用时间与空白对照组比较，差异有统计学意义（ P＜0．05），而P65蛋白含量变化不大，各作用时间与空白对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：IL－17可以通过促进心肌细胞内NF－κB P65磷酸化上调MCP－1的表达，而NF－κB P65 siRNA能够通过沉默P65基因表达有效抑制IL－17对MCP－1的上调作用。
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丁苯酚联合尼莫地平对急性脑出血患者神经功能及血清MMP-9、NF-κB水平的影响
目的:探讨丁苯酚联合尼莫地平对急性脑出血患者及神经功能及血清基质金属蛋白酶9 (MMP-9)和核转录因子kappaB(NF-KB)水平的影响.方法:选择90例急性脑出血患者作为研究对象并将其随机分为两组,每组各45例.两组患者均给予口服尼莫地平片治疗,观察组在对照组基础上加以口服丁苯酚软胶囊,疗程均为30天.比较两组患者的临床疗效以及治疗前后血清MMP-9、NF-κB水平和神经功能的变化.结果:观察组患者的临床总有效率显著高于对照组[42(93.99％) vs 37(82.22％)] (P＜0.05).治疗后,观察组的血清MMP-9、NF-KB水平均明显低于对照组[121.51± 14.76vs 137.09± 14.71;0.14±0.04vs0.24± 0.05] (P＜0.05),日常生活质量评分(ADL)明显高于对照组[37.09± 5.91 vs 33.54± 6.74](P＜0.05),神经功能缺损评分(NIHSS)明显低于对照组[15.31± 7.61 vs18.54±5.21](P＜0.05),认知功能评分(MMSE)明显高于对照组[27.54±4.21vs23.72± 5.75] (P＜0.05).结论:丁苯酚联合尼莫地平治疗急性脑出血患者的临床疗效优于口服尼莫地平片单药治疗,可有效改善患者的神经和认知功能,可能与其显著降低血清MMP-9、NF-κB水平有关.
关键词： 丁苯酚 尼莫地平 急性脑出血 基质金属蛋白酶9 核转录因子kappa B -
瑞舒伐他汀联合丹参酮对老年心力衰竭患者血清NF-κB和IL-1β水平的影响
目的:探讨瑞舒伐他汀联合丹参酮对老年心力衰竭患者血清核转录因子kappaB (NF-κB)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响.方法:选择2011年7月～2015年7月于我院进行治疗的老年心力衰竭患者68例,按照电脑生成的随机数字表将所有患者随机分为实验组和对照组,每组各34例,对照组使用瑞舒伐他汀进行治疗,实验组患者在对照组的治疗基础上加用丹参酮进行治疗,对比分析两组患者血清核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)及B型钠尿肽(BNP)水平,并对两组患者的临床疗效进行评价.结果:与治疗前相比,治疗后两组患者血清NF-κB、IL-1β,ET-1、BNP及hs-CRP水平均降低,血清NO水平均升高(P＜0.05),且与对照组相比,实验组患者血清NF-κB、IL-1β、hs-CRP、ET-1及BNP水平较低,NO水平及临床总有效率较高(P＜0.05).结论:瑞舒伐他汀联合丹参酮对老年心力衰竭具有很好的治疗效果,推测其机制与降低血清NF-κB、IL-1β、hs-CRP、ET-1及BNP水平及升高NO水平有关.
关键词： 瑞舒伐他汀 丹参酮 老年心力衰竭 核转录因子kappa B 白细胞介素-1β -
N-myc下游调节基因-2过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响
目的:研究N-myc下游调节基因-2(NDRG2)过表达对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用.方法:以肺缺血再灌注损伤为模型,将已转染的过表达NDRG2重组腺病毒经气管滴注的方法使大鼠肺泡上皮细胞NDRG2过表达.用Western-blot法检测大鼠肺组织内目的蛋白过表达情况.用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的水平,肺组织湿干重比值(W/D)检测肺组织的水肿,双荧光素酶报告系统检测核转录因子kappaB (NF-κB)的活性,HE染色检测肺组织病理变化.结果:在肺缺血再灌注损伤中,过表达NDRG2可抑制炎症因子IL-1β、TNF-α以及IL-6的表达,明显减轻肺水肿,抑制NF-κB的活性和病理组织的炎性改变.结论:NDRG2过表达可减轻缺血再灌注所致急性肺损伤,这可能与其抑制炎症反应有关.
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淋巴毒素α1/β2及其受体在溃疡性结肠炎肠道黏膜免疫中的作用及意义
目的：探讨淋巴毒素α1/β2（lymphotoxinα1/β2, LTα1/β2）、淋巴毒素β受体（lymphotoxinβreceptor, LTβR）及相关信号通路在溃疡性结肠炎肠道黏膜免疫中的作用。方法：研究纳入20名正常对照者及40例活动期溃疡性结肠炎患者，所有入组者均于内镜下取活检标本进行研究。采用实时PCR法、蛋白印迹法、免疫组织化学及免疫荧光法，检测研究对象肠道黏膜的生物功能学指标及LTα1/β2、LTβR和NF-κB途径相关蛋白激酶磷酸化的表达水平。结果：溃疡性结肠炎患者的结肠黏膜中LTα1/β2、LTβR的免疫组织化学检测结果表达水平较正常对照者明显增多（LTα1/β2为39.84±5.24比5.34±1.36；LTβR为40.95±11.37比4.31±3.25；P<0.01）；mRNA表达水平明显高于正常对照者（LTα1/β2为1.58±0.98比0.39±0.32；LTβR为3.12±2.22比1.34±0.58；P<0.01）；溃疡性结肠炎组结肠黏膜中LTα1/β2、LTβR的蛋白表达水平明显高于正常对照者（LTα1/β2：3.67±1.22比1.02±0.78；LTβR为3.45±1.74比1.89±0.69；P<0.01)。溃疡性结肠炎患者LTα1/β2、LTβR的mRNA表达水平与其疾病严重程度Geboes评分呈正相关；溃疡性结肠炎结肠黏膜组织中膜受体LTβR 表达于树突细胞表面；溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中Iκκβ、IκBα和NF-κBp65蛋白磷酸化较正常对照者明显增加（P<0.01）。结论：淋巴细胞表达的LTα1/β2,可能通过结合于树突细胞表面的LTβR并激活NF-κB炎症通路，从而在溃疡性结肠炎患者的肠道黏膜免疫中发挥重要作用。
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他克莫司联合雷公藤多苷对肾病综合征患者NF-κB与炎症细胞因子的影响
目的：探讨他克莫司联合雷公藤多苷对肾病综合征患者核转录因子kappa B（NF-κB）与炎症细胞因子（IL-1、TNF-α）的影响。方法：选取我院肾病综合征患者129例，采用随机数字表法将其分为两组，对照组64例，采用他克莫司治疗；研究组65例，采用他克莫司联合雷公藤多苷治疗。采用Elisa方法检测血清NF-κB、IL-1、TNF-α水平，采用酶动力法测定血肌酐（Scr），采用尿素酶速率法测定血尿素氮（BUN），比较两组的临床疗效。结果：研究组患者临床缓解率明显高于对照组（P<0.05）。治疗后，全部患者NF-κB、IL-1、TNF-α水平明显低于治疗前，治疗前后比较差异具有统计学意义（P<0.05），其中研究组NF-κB、IL-1、TNF-α水平明显低于对照组（P<0.05），治疗后，全部患者Scr、BUN、24 h Upro水平明显低于治疗前（P<0.05），其中研究组Scr、BUN、24 h Upro水平明显低于对照组（P<0.05）。两组患者药物不良反应率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：他克莫司联合雷公藤多苷显著降低肾病综合征患者NF-κB与IL-1、TNF-α炎症细胞因子，改善肾功能，且药物安全性较高。
关键词： 他克莫司 雷公藤多苷 肾病综合征 核转录因子kappa B 炎症细胞 -
异甘草酸镁对创伤性脑损伤后肝损害保护机制的研究
目的：研究异甘草酸镁对创伤性脑损伤后肝损害的保护机制。方法制作颅脑损伤后肝损害大鼠模型，制模1 d后给予异甘草酸镁注射液（30 mg／kg）腹腔注射，1次／d，连续5 d。检测外周血丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）的改变；ELISA法检测外周血肿瘤坏死因子α（ TNF-α）的变化；Real-time PCR检测肝脏组织中TNF-α的变化；Western-blot法检测肝脏组织中核转录因子kappa B（NF-κB）的变化。结果颅脑损伤后肝损害大鼠的血ALT、AST水平明显高于正常大鼠；给予异甘草酸镁注射液的大鼠外周血和肝脏组织中TNF-α表达水平明显低于未用药的大鼠，肝脏组织中NF-κB水平亦显著低于未用药的大鼠。结论异甘草酸镁可通过NF-κB途径减少TNF-α的表达，减轻颅脑损伤后的肝损害，从而保护肝脏组织。
关键词： 异甘草酸镁 颅脑损伤 肝损伤 肿瘤坏死因子α 核转录因子kappa B -
NF-κB、MIF在子宫内膜异位症的表达及意义
目的:探讨NF-κB、MIF与子宫内膜异位症(EMs)发病的关系,及在子宫内膜异位症表达的相关性.方法:采用免疫组化(SABC法)分别检测NF-κB、MIF在35例EMs在位内膜、60例EMs异位内膜及30例正常子宫内膜(对照组)中的表达；ELISA法检测TNF-α、PDTC +TNF-α干预后子宫内膜基质细胞(ESC)上清液中NF-κB、MIF的浓度,并统计分析检测结果.结果:(1) NF-κB、MIF在3组内膜中均有表达,以异位内膜的表达强；(2)NF-κB、MIF的表达与月经周期无关,其在3组内膜的表达有相关性,相关系数为0.875、0.882、0.927；(3) NF-κB、MIF在经TNF-α、PDTC +TNF-α处理过的ESC上清液中有表达,TNF-α促进二者表达,而PDTC可抑制此作用,且两者表达有相关性,相关系数为0.947.结论:NF-κB、MIF在EMs内膜高表达,MIF可能通过NF-κB途径在EMs发病机制中起作用.
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塞来昔布对膝关节骨性关节炎的止痛效果及其作用机制
目的 观察塞来昔布用于膝关节骨性关节炎的止痛效果,并探讨其作用机制.方法 选取60例膝关节骨性关节炎患者,随机分为观察组和对照组各30例,两组均予骨性关节炎常规治疗,在此基础上观察组口服塞来昔布200 mg/次、1次/d(饭后服用),对照组口服双氯芬酸钠片25 mg/次、3次/d(饭后服用),疗程均为3周.两组均在治疗前及治疗第1、3、7天时,于静息状态下行关节疼痛视觉模拟评分(VAS).治疗前和治疗结束时采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞(PBMCs) Toll样受体4(TLR4)、NF-κB mRNA相对表达量,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α.结果 治疗第1、3、7天,两组VAS均逐渐降低,且观察组VAS均低于对照组同时间点(P均＜0.05).治疗后两组PBMCs TLR4、NF-κB mRNA相对表达量及血清IL-6、TNF-α水平均下降,且观察组下降更显著(P均＜0.05).结论 塞来昔布用于膝关节骨性关节炎患者止痛效果好;抑制骨TLR4/NF-κB信号通路、减少炎症因子释放可能是其作用机制.
关键词： 骨性关节炎 Toll样受体4 核转录因子kappa B -
乳铁蛋白调控炎症反应中NF-κB表达的分子机制研究进展
乳铁蛋白是一种天然的免疫调节蛋白,而NF-κB在细胞增殖、分化、免疫调节和炎症反应等过程中具有重要作用.乳铁蛋白与NF-κB在结构与功能上密切相关,其在炎症反应中对NF-κB具有重要的调控作用;在机体的不同疾病状态和炎症反应的不同阶段,不同物种的乳铁蛋白呈现出不同的效应.
关键词： 乳铁蛋白 核转录因子kappa B 炎症 -
17β-雌二醇对大鼠肝纤维化门静脉压力的作用
目的 观察17β-雌二醇(E2)对四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化中门静脉压力变化的作用.方法 40只Wistar雄性大鼠随机分为A、B、C和D共4组,均采用CCl4诱导肝纤维化12周.另外,A组同时采用肌注E2(2mg/kg体重),2次/周;B组采用肌注E2(1mg/kg体重),2次/周;C组作为对照组;D组采用每日口服他莫昔芬6mg/kg体重.第13周将全部大鼠麻醉后测定门静脉压力(PVP)、并采用实时荧光定量(Real-Time)聚合酶链反应(PCR)技术测量大鼠肝脏组织中核转录因子p65(NF-kappa Bp65)mRNA和转化生长因子-β(TGF-β1)mRNA的表达,采用Massion染色检测大鼠肝组织中胶原纤维(CF)含量情况,并将不同组别大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA值、TGF-β1 mRNA值、CF含量以及PVP作相关性分析.结果 (1)各组大鼠PVP高低为:A＜B＜C＜D,各组比较差异有统计学意义(F=54.712,P＜0.05);(2)各组大鼠肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达情况为:A＜B＜C＜D,各组比较差异有统计学意义(F=109.024,P＜0.05);(3)各组大鼠肝组织中TGF-β1 mRNA表达高低比较:A＜B＜C＜D,组间比较差异有统计学意义(F=224.969,P＜0.01);(4)各组大鼠肝组织CF含量比较:A＜B＜C＜D,组间比较差异有统计学意义(F=6.929,P＜0.01);(5)各组大鼠肝组织中NF-kappa ap65 mRNA值和TGF-β1mRNA值呈直线相关(r=0.724,P＜0.05),TGF-β1 mRNA值和CF含量呈直线相关(r=-0.871,P＜0.05),CF含量和PVP也呈直线相关(r=0.902,P＜0.05).结论 E2通过抑制大鼠肝纤维化肝组织中NF-kappa Bp65 mRNA的表达,减弱了TGF-β1 mRNA的表达,使得肝组织中CF含量减少,以致PVP降低.
关键词： 肝纤维化 17β-雌二醇 核转录因子kappa B 转化生长因子-β1 门静脉 -
硫化氢通过核因子-kappa B途径抑制肿瘤坏死因子alpha诱导的角质形成细胞的炎症反应
目的:探讨外源性硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)对肿瘤坏死因子alpha(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)诱导的角质形成细胞分泌炎症因子白细胞介素6 (Interleukin 6,IL-6)、白细胞介素8(Interleukin 8,IL-8)以及一氧化氮(Nitric oxide,NO)的影响,并探讨核转录因子kappa B(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路途径是否参与此过程.方法:应用TNF-α诱导HaCat细胞分泌炎症因子,以硫氢化钠(Sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体,设置不同浓度的量效组.采用ELISA法测定HaCat细胞分泌IL-6和IL-8的水平,RT-PCR法检测HaCat细胞IL-6和IL-8的mRNA水平,Griess法检测HaCat细胞分泌NO水平,Western blot检测HaCat细胞胞内诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、磷酸化I-kappa B-alpha(Phosphorylation of I-kappa B-alpha,p-IKB-α)和胞核内NF-κB P65水平.结果:10 ng/ml的TNF-α能显著诱导HaCat细胞内IL-6和IL-8因子的转录和分泌,培养上清NO产量和胞内iNOS含量明显增高,胞内p-IKB-α和胞核P65水平明显提高.在TNF-α诱导HaCat细胞前1h,给与20～400 μmol/L的NaHS做预处理,结果显示NaHS呈剂量依赖性地抑制HaCat细胞分泌IL-6、IL-8和NO,并能部分抑制NF-κB信号通路的活化.结论:H2S通过抑制NF-κB信号通路的活化来抑制TNF-α诱导角质形成细胞的炎症反应.
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血红素氧合酶-1通过NF-κB信号通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡
目的 探讨血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制.方法 采用免疫组化和Western blot检测正常(LVF组,标本来源于年轻的椎体骨折行手术治疗的患者)及退变(IDD组,标本来源于椎间盘退变性疾病行手术治疗的患者)人椎间盘髓核组织中HO-1和磷酸化的P65(p-P65)的表达差异;体外培养退变髓核细胞,通过IL-1β处理增加髓核细胞凋亡,再用载HO-1质粒的慢病毒及小干扰RNA处理髓核细胞后检测凋亡的变化;通过P65抑制剂PDTC抑制p-P65表达后检测髓核细胞凋亡的变化.结果 免疫组化结果显示,HO-1在IDD组中的阳性表达率为(18.58 ±0.59)％,明显低于LVF组(58.26 ±2.48)％ (P ＜0.05),而p-P65在IDD组中的阳性表达率为(40.27±2.03)％,明显高于LVF组(19.75±1.98)％ (P ＜0.05).IL-1β能增加退变髓核细胞的凋亡,同时引起p-P65表达增加,HO-1-siRNA抑制HO-1表达后可以进一步提高髓核细胞凋亡率(P＜0.05),而过表达HO-1处理细胞后能够降低IL-1β引起的凋亡增加,同时降低p-P65表达(P＜0.05).使用P65抑制剂PDTC抑制髓核细胞P65信号通路后,髓核细胞凋亡率明显降低,此时沉默HO-1不能增加髓核细胞凋亡.结论 HO-1能够通过NF-κB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡.
关键词： 血红素氧合酶-1 核转录因子kappa B p65 髓核 凋亡 -
芍药苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究
目的:研究芍药苷(Paeoniflorin)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护性作用并对其可能机制进行探讨.方法:制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为模型组、假手术组、芍药苷60mg/kg组、30mg/kg组(n=20);取心脏测定心肌梗死面积,HE染色观察组织细胞结构,免疫组化检测心肌组织中NF-κB和ICAM-1的表达;取血测定血清中LDH、AST、CK和CK-MB含量.结果:与模型组比较,芍药苷60mg/kg组和30mg/kg组心肌梗死面积均明显降低;HE染色切片提示各给药组心肌细胞损伤较模型组为轻,且具有浓度相关性;芍药苷60mg/kg组、30mg/kg组NF-κB、ICAM-1的表达明显降低;芍药苷60mg/kg组血清CK含量降低,同时该组CK-MB亦降低显著.结论:芍药苷预处理对大鼠MIRI具有保护性作用,其机制与抑制细胞膜脂质过氧化,以及通过抑制NF-κB蛋白表达进而影响受NF-κB调控的下游炎性反应途径有关.
关键词： 芍药苷 缺血再灌注损伤 肌酸激酶 核转录因子kappa B 细胞间黏附分子-1
