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富氢液对急性胰腺炎大鼠血清内毒素、TNF-α、IL-6及胰腺组织的影响研究
目的 本次研究通过建立大鼠急性胰腺炎模型,测定血清中IL-6、内毒素、TNF-α含量的变化以及HE染色观察胰腺组织的病理改变情况,探讨富氢液对急性胰腺炎的作用机制以及治疗效果.方法 将45只大鼠随机分为3组,分别为假手术组(A组)、生理盐水组(B组)、富氢液组(C组),每组15只,禁食不禁水处理24h后开始建立急性胰腺炎大鼠模型.富氢液组和生理盐水组大鼠胰腺发生水肿充血、局部呈现暗红色、并出现散在出血点时为建模成功,分别给予相同量的生理盐水和富氢液,假手术组仅轻微翻动胰腺几次,每组于第1、3、7天3个时间点分别取5只大鼠穿刺门静脉取全血2ml,并切除胰腺组织,并于取材完毕后采用颈椎脱臼法处死相应大鼠,按照常规方法制作胰腺组织病理切片,HE染色后显微镜下观察大鼠胰腺组织病理变化,并采用鯊试剂偶氮显色法测定血清内毒素,采用酶联免疫法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6浓度,在整个实验过程中观察各组大鼠的一般反应情况,使用SPSS 13.0对实验数据进行分析.结果 在各个时间点,B、C组大鼠内毒素、TNF-α、IL-6含量及病理学评分显著高于A组(P＜0.05),且C组大鼠4种指标显著低于B组(P＜0.05);A组大鼠反应比较灵敏,B组大鼠反应较为迟钝,而C组大鼠的反应与A组相对接近,与B组相比有明显的改善(P＜0.05).结论 富氢液可显著降低急性胰腺炎大鼠体内的血清内毒素、TNF-α、IL-6含量,并减小胰腺组织的损伤,其机制可能与抑制脂质过氧化反应和炎症反应有关.
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富氢液通过PI3K通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤
目的 探讨富氢液对大鼠脑缺血再灌注致海马神经元凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路表达的影响.方法 采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)模型,SD 大鼠随机分为假手术组(Sham 组)、缺血/再灌注组(I/R组)和富氢液处理组(HRS组),每组 10只;各组于再灌注后24 h,ELISA检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α及IL-1β的变化;HE染色观察海马变化,TUNEL 法观察脑组织细胞凋亡情况;Western blot法检测海马p-PI3K、Akt、caspase-3和FoxO1蛋白表达变化.结果 与Sham组相比,I/R组锥体细胞排列疏松,大量锥体细胞死亡,海马凋亡细胞增多,血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、表达显著增加(P< 0.05),脑组织中p-PI3K、Akt、caspase-3表达显著升高,FoxO1蛋白降低,两组间比较均具有统计学差异(P< 0.05);与I/R组相比,HRS组炎症因子显著降低;p-PI3K、Akt、caspase-3表达水平均显著降低,,FoxO1蛋白升高(P< 0.05).结论 富氢液可以减轻缺血再灌注导致的脑损伤,其机制可能与PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关.
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富氢液对脂多糖刺激离体肠上皮 屏障功能障碍的影响
目的：观察富氢液对脂多糖（LPS）刺激人肠上皮细胞（Caco2）单层模型细胞通透性的影响，探讨其对肠屏障功能障碍的保护作用机制。方法人结肠腺癌细胞株Caco2培养于含20%胎牛血清的DMEM培养基中，传代至第28～35代的细胞用于实验。采用随机数字表法将细胞分为空白组、富氢液组、LPS组和LPS+富氢液组。空白组和LPS组用正常培养基培养，富氢液组和LPS+富氢液组用含饱和氢气培养基培养；LPS组和LPS+富氢液组分别加入1g/L的LPS孵育，空白组和富氢液组加入等量生理盐水。建立Caco2细胞单层模型模拟离体肠上皮屏障，孵育0、3、6、12、24、48h测定其跨上皮细胞电阻（TEER）值来反映肠屏障通透性；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别测定细胞活性和损伤情况；孵育6、12、24h采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）测定细胞紧密连接蛋白claudin-1与occludin的蛋白表达；孵育24h采用免疫荧光法观察claudin-1与occludin蛋白的分布。结果空白组与富氢液组各指标比较差异均无统计学意义。LPS组和LPS+富氢液组细胞孵育6h起TEER值即较空白组明显降低，且呈时间依赖性；而LPS+富氢液组细胞孵育6h起TEER值明显高于LPS组。与空白组相比，LPS组细胞活性明显降低〔（67.2±7.9）%比（100.0±0.0）%，P＜0.05〕，细胞损伤明显〔LDH释放率：（38.5±2.1）%比（1.2±0.3）%， P＜0.05〕，孵育6、12、24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显下调〔claudin-1（灰度值）：0.351±0.079、0.272±0.075、0.190±0.049比0.518±0.030，occludin（灰度值）：0.416±0.044、0.290±0.062、0.226±0.019比0.602±0.038，均P＜0.05〕，孵育24h时细胞claudin-1和occludin蛋白分布紊乱且连续性中断。与LPS组相比，LPS+富氢液组细胞活性部分恢复〔（88.8±7.4）%比（67.2±7.9）%，P＜0.05〕，细胞损伤减轻〔LDH释放率：（16.4±4.3）%比（38.5±2.1）%，P＜0.05〕，24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显上调〔claudin-1（灰度值）：0.428±0.046比0.190±0.049，occludin（灰度值）：0.466±0.071比0.226±0.019，均P＜0.05〕，且分布形态的连续性与完整性部分恢复。结论富氢液能够有效改善LPS所致肠上皮细胞屏障功能障碍，其机制可能与调节肠上皮细胞活性、减轻细胞损伤以及改善紧密连接蛋白claudin-1、occludin的表达与分布有关。
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富氢水对创伤性脑损伤大鼠炎性因子及线粒体损伤的影响
目的 观察富氢水对创伤性脑损伤(TBI)大鼠创伤周围脑组织线粒体损伤及炎症反应的影响.方法 将54只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、创伤组(TBI组)及创伤+富氢水组(TBI+HW组),每组分为伤后1、3、7 d 3个亚组,每个亚组6只.采用改良Feency自由落体撞击法制备TBI大鼠模型;Sham组开颅窗后不予以颅脑撞击.TBI+HW组于制模后立即腹腔注射富氢水5 mL/kg,每日1次,直至处死;Sham组和TBI组均给予等量生理盐水.各组于伤后相应时间点进行神经损伤评分(NSS)后断头处死大鼠,取创伤边缘3 mm内脑组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子水平,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达,用荧光酶标法检测线粒体活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和线粒体膜通透性转换孔(MPTP).结果 TBI组和TBI+HW组大鼠伤后出现明显神经功能损害,但TBI+HW组伤后3 d和7 d神经功能损害明显轻于TBI组〔NSS(分):9.67±0.82比11.17±1.17, 6.83±0.75比8.50±1.04,均P<0.05〕.与Sham组比较,TBI组和TBI+HW组各时间点脑组织肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、ROS、Bax蛋白表达均明显升高,并于1 d达峰值后逐渐下降;各时间点MMP、MPTP及Bcl-2蛋白表达均明显下降,并于1 d达谷值后逐渐上升.与TBI组比较,TBI+HW组1 d 起TNF-α、IL-1β、ROS、Bax蛋白表达即明显降低〔TNF-α(ng/L):54.14±1.11比81.49±2.76, IL-1β(ng/L):74.53±1.75比119.44±3.56,ROS(RFU):92.30±2.46比121.33±6.57,Bax蛋白表达:0.89±0.01比1.10±0.01,均P<0.01〕,MMP、MPTP和Bcl-2蛋白表达即明显升高〔MMP(RFU):99.28±3.97比74.72±3.00,MPTP(RFU):188.82±4.44比160.01±2.04,Bcl-2蛋白表达:0.52±0.02比0.30±0.02,均P<0.01〕.结论 大鼠TBI早期即有脑组织炎性因子表达增高及线粒体损伤;早期腹腔注射富氢液可减少线粒体损伤和炎性因子释放,减轻TBI后神经细胞凋亡,从而发挥脑保护作用.
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富氢液对创伤性颅脑损伤大鼠大脑皮质水通道蛋白1表达的影响
目的 探讨富氢液对大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后脑水肿及水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 将90只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、TBI模型组和富氢液干预组,每组30只.采用颅脑撞击法制备TBI模型;Sham组只开颅窗、骨蜡封闭缝合,不撞击.富氢液干预组于制模后经腹腔注射富氢液5 mL/kg,Sham组和TBI组注射等量生理盐水,均每日1次,共5d.各组分别于术后6、12、24、48 h和5d取6只大鼠进行神经损伤严重度评分(NSS);取大脑皮质,光镜下观察脑组织病理学变化;采用免疫组化染色,镜下观察大脑皮质AQP1阳性表达;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大脑皮质AQP1 mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测大脑皮质AQP1蛋白表达.结果 ①Sham组各时间点NSS评分均为0分;TBI组NSS评分随时间延长呈升高趋势,24 h达峰值后逐渐降低;富氢液干预后可明显降低NSS评分,24 h与TBI组比较为明显(分:9.83±2.78比13.50±2.42,P＜ 0.05).②光镜下显示,TBI组大鼠6h大脑皮质神经细胞排列即明显紊乱,24 h脑水肿和出血为严重,之后水肿逐渐消退;各时间点软脑膜处AQP1阳性表达明显增加,以24 h时为明显.富氢液干预组术后12h～5d脑组织病理学改变均较TBI组明显减轻;软脑膜处AQP1阳性表达较TBI组明显减少.③与Sham组比较,TBI组脑组织AQP1的mRNA和蛋白表达均随时间延长逐渐升高,并于24 h达峰值[AQP1 mRNA(2-△△Ct):7.50±0.26比1,AQP1蛋白(灰度值):1.986±0.110比0.336±0.034,均P＜0.05],之后逐渐下降;富氢液干预可明显下调脑组织AQP1的mRNA和蛋白表达[24 h AQP1 mRNA (2-△△Ct):5.40±0.21比7.50±0.26,24 h AQP1蛋白(灰度值):1.246±0.137比1.986±0.110,均P＜0.05].结论 TBI大鼠大脑皮质AQP1 mRNA和蛋白表达上调,可能参与了TBI后脑水肿的病理生理过程;早期腹腔注射富氢液可能通过下调AQP1的表达,减轻TBI后脑水肿,从而起到脑保护作用.
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丙泊酚联合富氢液对脓毒症小鼠器官损伤及炎性因子的影响
目的 探讨丙泊酚联合富氢液对脓毒症所致器官损伤及炎症反应的影响.方法 成年雄性C57BL/6小鼠140只,按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、丙泊酚组、富氢液组、联合治疗组,每组28只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症动物模型;假手术组不进行盲肠结扎和穿孔,其余操作相同.术后1 h和6 h,丙泊酚组腹腔注射丙泊酚各50 mg/kg,富氢液组则注射含氢气生理盐水各5 mL/kg,联合治疗组注射丙泊酚后10 min再给予含氢气生理盐水.各组取20只小鼠观察术后7 d内存活情况.每组余8只小鼠于术后24 h取下腔静脉血及肺、肝和肾组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和各组织匀浆液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)含量,并观察各组织病理学改变及损伤评分.结果 脓毒症组术后1、2、3、5、7 d小鼠存活率分别为80%、40%、20%、10%、0%;给予丙泊酚或富氢液治疗后动物存活率明显提高,二者联合治疗可进一步将存活率提高至90%、75%、60%、55%、55%.与假手术组比较,脓毒症组血清和各组织中炎性因子水平明显增加,肺、肝、肾组织细胞可见变性、坏死、充血及炎性细胞浸润,各组织损伤评分也明显升高;给予丙泊酚或富氢液治疗后,血清和各组织中炎性因子水平明显下降,肺、肝、肾组织细胞变性、坏死、充血及炎性细胞浸润减少,各组织损伤评分也较脓毒症组明显降低,联合治疗组各指标较丙泊酚组、富氢液组进一步改善〔血TNF-α(ng/L):367±74比612±132、588±117,血IL-1β(ng/L):321±68比502±95、476±86,血HMGB1(μg/L):4.6±0.9比7.0±1.4、6.8±1.3;肺TNF-α(ng/g):307±70比512±132、488±102,肺IL-1β(ng/g):367±77比571±108、466±89,肺HMGB1(μg/g):5.1±1.0比7.8±1.7、7.1±1.5;肝TNF-α(ng/g):247±57比431±112、389±87,肝IL-1β(ng/g):267±58比417±85、399±76,肝HMGB1(μg/g):4.2±1.1比7.1±1.6、6.6±1.2;肾TNF-α(ng/g):257±41比480±89、448±82,肾IL-1β(ng/g):258±39比409±68、411±66,肾HMGB1(μg/g):3.9±0.7比6.8±1.2、5.7±1.0;组织损伤评分(分):肺为1.22±0.28比2.61±0.49、2.58±0.44,肝为1.38±0.32比2.76±0.51、2.62±0.46,肾为1.19±0.25比2.43±0.41、2.36±0.40;均P<0.05〕.结论 丙泊酚和富氢液均可提高脓毒症小鼠存活率,减少组织损伤及炎性因子的释放,且两者联合应用效果更佳.
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富氢液联合羟考酮控释片对癌性神经病理性疼痛的临床疗效观察
目的：探讨富氢液（HRW）联合盐酸羟考酮控释片（OHCT）对癌性神经病理性疼痛（MNP）的临床疗效。方法：选择80例 MNP 患者随机分成 OHCT 治疗组（A 组）和 HRW 联合 OHCT 治疗组（B 组），观察两组患者的 VAS 评分、爆发痛情况、疼痛缓解率、OHCT 用量及药物不良反应。结果：用药治疗后两组患者的 VAS 评分和爆发痛发作次数均较治疗前显著降低（P ＜0.05）；在治疗第14 d 和28 d 后 VAS 评分、疼痛缓解率、爆发痛发作次数及 OHCT 用量等方面 B 组比 A组患者改善更明显（P ＜0.05），且便秘、恶心和呕吐等不良反应明显减少（P ＜0.05）。结论：HRW 联合 OHCT 治疗能更有效改善 MNP 临床症状，并减少 OHCT 用量及药物不良反应。
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富氢液对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响
目的 探讨富氢液(HRS)对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-K B信号通路表达的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、富氢液组(HRS组),每组10只.S组麻醉开腹后右肾切除;I/R组行右肾切除,左肾缺血45min,再灌注60min,造肾缺血再灌注模型;HRS组于术前口服40 ml/kg富氢液,连续3d后建立I/R模型.每组于I/R后6h取取血样,分离血浆,多功能生化仪检测肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;ELISA检测IL-1β和TNF-α含量;另取肾脏,HE染色观察病理组织学变化,Western-blot检测TLR4、Myd88、NF-κB表达变化.结果 HRS可减轻由I/R造成的肾损伤,减低血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量,抑制肾脏TLR4、Myd88、NF-κB表达(P＜0.05).结论 HRS减轻由I/R引起的肾功能障碍,抑制炎性反应,对肾脏有一定的保护作用,其机制可能与TLR4/NF-KB信号通路有关.
关键词： 富氢液 肾脏 缺血再灌注 TLR样受体4 核转录因子kappa B -
富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及TLR4/Myd88/NF-κB信号分子的影响
目的 探讨富氢液(HRS)对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及其对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路表达的影响.方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(SEP组)和富氢液处理组(C组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢水和等量生理盐水;三组均于模型建立后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血浆中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western blot检测肠组织TLR4、Myd88和NF-κB表达.结果 富氢液可以减轻脓毒血症大鼠肠黏膜损伤,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,降低炎症因子TNF-α、IL-6表达,促进IL-10升高(P＜0.05),抑制肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达(P＜0.05).结论 富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,可能与TLR4/Myd88/NF-κB信号通路有关.
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富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障保护作用及机制研究
目的：探讨富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组( sham组)、脓毒血症组( SEP组)及富氢液处理组( C组),每组10只。 sham组仅开腹,显露盲肠；C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢液和等量生理盐水。3组大鼠均于模型建立4h后处死,观察小肠组织病理学结果；酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)浓度；蛋白质印迹(Western-blot)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果光镜下sham组未出现病理损伤,SEP组损伤较重,C组损伤较轻。与sham组比较,SEP组I-FABP、D-乳酸升高[(817．12±50．39) ng/ml比(378．54±40．50)ng/ml；(513．84±42．91)ng/ml比(329．98±38．11)ng/ml,P<0．05]。与SEP组比较,C组I-FABP、D-乳酸降低[(548．92±42．19)ng/ml比(817．12±50．39)ng/ml；(437．89±36．12)ng/ml比(513．84±42．91)ng/ml,P<0．05]。与sham组比较, SEP 组 TNF-α、IL-6、IL-10升高[(196．51±30．31) ng/ml 比(75．54±10．21) ng/ml；(68．69±3．39) ng/ml 比(20．97±2．38)ng/ml；(149．61±20．21)ng/ml比(80．69±13．51)ng/ml,P<0．05]；与SEP组比较,C组TNF-α、IL-6降低,IL-10升高[(118．47±10．14)ng/ml比(196．51±30．31)ng/ml；(45．36±5．14)ng/ml比(68．69±3．39)ng/ml；(178．52±26．31) ng/ml比(149．61±20．21)ng/ml,P<0．05]。与sham组比较,SEP组Bcl-2蛋白表达升高,Bax与Caspase-3降低(P<0．05)；与SEP组比较,C组Bcl-2蛋白表达降低,Bax与Caspase-3升高(P<0．05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,其机制与抑制凋亡相关因子有关。
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富氢液对大鼠骨癌痛行为学及脊髓低密度脂蛋白受体1/核因子-κB通路的影响
目的 探讨富氢液对大鼠骨癌痛行为学及脊髓低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoproteinreceptor-1,LOX-1)/NF-κB通路的影响. 方法 清洁级健康雌性SD大鼠32只,体重180～200 9,按照随机数字表法分为4组(每组8只):假手术组(S组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+富氢液组(BH2组)和骨癌痛+生理盐水组(BS组).BH2组在造模后1、3、5、7、9、11、13 d腹腔内注射富氢液(5 mg/kg),BS组注射等量的生理盐水(5 mg/kg).分别在造模前1d,造模后1、3、5、7、10、12、14 d测定大鼠的机械缩足反射阈值(paw mechanical withdrawal threshold,PMWT)和热缩足反射潜伏期(paw thermal withdrawal latency,PTWL).术后14 d行为学测定后处死大鼠,取脊髓腰膨大节段,利用Western blot技术检测脊髓LOX-1、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的表达. 结果 与S组比较,BCP组造模后3～14 d大鼠PMWT和PTWL明显下降(P＜0.05);与BS组比较,BH2组术后7～14 d PMWT和PTWL明显升高(P＜0.05).与S组比较,BCP组和BS组LOX-1、p-NF-κB表达明显升高(P＜0.05);与BS组比较,BH2组LOX-1、p-NF-κB表达明显下降(P＜0.05). 结论 腹腔内注射富氢液明显抑制大鼠骨癌痛,其机制可能与抑制LOX-1/NF-κB通路活化有关.
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富氢液对糖尿病大鼠周围神经病变血红素氧合酶1表达的影响
目的 探讨富氢液对糖尿病大鼠周围神经病变血红素氧合酶1(HO-1)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重180～200 g,采用随机数字表法将其均分为三组:健康对照组(C组)、糖尿病神经病变组(DPN组)和富氢液组(HRS组).DPN组与HRS组大鼠采用腹腔注射1％链脲佐菌素(STZ) 65 mg/kg的方法制备糖尿病模型.HRS组于注射STZ 14 d后腹腔注射富氢液5ml·kg-1·d-1,连续14d,C组和DPN组注射等容量生理盐水.分别于STZ注射前2 d(To,C组注射生理盐水)、注射后7 d(T1)、14 d(T2)、21 d(T3)和28 d(T4)测定机械刺激缩足阈值(PWT)和热刺激缩足阈值(PWL),观察三组大鼠疼痛行为学变化;在T4时测定右后肢运动神经传导速度(MNCV)和神经传导潜伏期.测定结束后,采用HE染色观察三组大鼠坐骨神经损伤情况,采用免疫组化法与Western blot法检测HO-1在坐骨神经中的表达,同时检测丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CTA)活性.结果 与C组比较,DPN组和HRS组T1～T4时PWT明显降低,T2～T4时PWL明显缩短,T4时MNCV明显减慢,神经传导潜伏期明显延长,DPN组和HRS组坐骨神经中HO-1阳性细胞率与HO-1表达明显升高,MDA含量明显增加,CAT活性明显降低(P＜0.05).与DPN组比较,HRS组T3、T4时PWT明显增高,PWL明显延长,T4时MNCV明显增快,神经传导潜伏期明显缩短,坐骨神经中HO-1阳性细胞率与HO-1表达明显增高,MDA含量明显降低,CAT活性明显升高(P＜0.05).结论 富氢液可能通过上调HO-1表达,产生抗氧化作用对糖尿病大鼠周围神经损伤发挥保护作用.
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富氢液对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔的影响
目的 探讨富氢液对局灶性脑缺血-再灌注(I-R)损伤大鼠线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响.方法 72只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(S组)、I-R组、生理盐水组(NS组)、苍术苷组(A组)、富氢液组(H组)和富氢液十苍术苷组(HA组).以线栓法制备大鼠大脑中动脉I-R损伤模型,缺血120 min后再灌注.A组和HA组于再灌注前10 min行侧脑室注射苍术苷15μl(3×10-5 mmol),NS组和H组侧脑室注射等容量生理盐水,其余组不注射生理盐水;H组和HA组于再灌注即刻腹腔注射富氢液5 ml/kg,其余组腹腔注射等容量生理盐水.再灌注48 h行神经功能缺陷评分后处死大鼠,取缺血侧顶叶皮层组织,分离细胞线粒体,测定mPTP活性、线粒体膜电位和细胞凋亡情况.结果 与S组比较,其余各组再灌注48 h神经功能缺陷评分均升高,mPTP活性升高,线粒体膜电位降低,TUNEL阳性细胞增多(P＜0.05);与I-R组比较,H组和HA组神经功能缺陷评分降低,mPTP活性降低,线粒体膜电位升高,TUNEL阳性细胞减少(P＜0.05);与H组比较,HA组神经功能缺陷评分升高,mPTP活性升高,线粒体膜电位降低,TUNEL阳性细胞增多(P＜0.05).结论 富氢液通过抑制神经细胞mPTP开放、减少线粒体膜电位降低而减轻大鼠局灶性脑I-R损伤.
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富氢液在肝移植手术患者腔静脉阻断期的肾功能保护
目的 探究富氢液对于肝移植手术患者腔静脉阻断期肾功能的保护作用.方法 选取60例肝移植术患者,随机将其分为对照组(n=30)和富氢液组(n=30),麻醉诱导后分别经胃管注射250 mL的等渗盐水和富氢液.于麻醉诱导(T0)、新肝期(T3)以及术毕(T5)时分别采集2组患者的静脉血和尿液标本,并检测血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)、肌酐清除率、白细胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystain C)、肾损伤分子-1(KIM-1)以及中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)等指标.结果 2组患者在T3和T5期血清Cr和BUN浓度较T0期升高,肌酐清除率下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,富氢液组患者的血清Cr[(164.8±18.4)μmol/L vs(116.7±14.8)μmol/L]、BUN浓度[(8.0±2.7)mmol/L vs(5.8±1.3)mmol/L]明显降低(P<0.05),肌酐清除率[(73.2±20.1)mL/min vs(86.3±18.4)mL/min]明显升高(P<0.05).与对照组相比,富氢液组IL-18、Cystain C、KIM-1以及NGAL含量在T0期差异无统计学意义(P>0.05),但在T3和T5期表达量均显著下降(P<0.05).结论 富氢液对于肝移植手术患者腔静脉阻断期肾功能有一定的保护作用.
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富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注海马氧化应激水平的影响
目的 在脑缺血再灌注过程中,富氢液和浅低温均可影响机体的氧化应激水平.探讨腹腔注射富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注海马氧化应激水平的影响. 方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、四血管结扎模型组(C组)、富氢液+模型组(W组)、浅低温+模型组(P组)和低温+富氢液+模型组(WP组).W和WP组在脑缺血再灌注即刻腹腔注射富氢液5 ml/kg,S、P和C组注射等容量等渗盐水.P和WP组通过全身物理降温15 min内将体温降至目标温度32～34℃,维持6h,其余3组维持在37～38℃.所有大鼠在缺血再灌注6h时处死,分离海马.苏木精-伊红染色(HE染色),观察海马神经元形态；免疫组化法观察血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达；化学分光光度计法测海马谷胱甘肽过氧化物酶( glutathion eperoxidase,GSH-Px)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性. 结果 与C组比较,P、W和WP组海马神经元结构排列紧凑、变性神经元减少；海马HO-1免疫阳性细胞增多.与C组比较,P、W、和WP组MPO含量降低(P＜0.05),GSH-Px含量增高(P＜0.05),WP组变化明显. 结论 富氢液联合浅低温治疗可通过诱导海马HO-1蛋白表达、降低MPO和上调GSH-Px活性影响大鼠全脑缺血再灌注损伤氧化应激水平.
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富氢液对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响
目的 脑组织缺血缺氧后,过量自由基产生,破坏组织细胞,形成再灌注损伤.近,学者研究报道氢气溶解在液体中可选择性中和培养细胞中的羟自由基和亚硝酸阴离子.文中观察腹腔注射富氢液对大鼠暂时性全脑缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠90只,建立四血管阻塞全脑缺血(15min)再灌注损伤模型,分为3组:假手术组(n=30),模型组(再灌注同时腹腔注射等渗盐水5ml/kg,n=30)和治疗组(再灌注同时腹腔注射0.6mmol/L富氢液5ml/kg,n=30),检测各组再灌注 24h海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)免疫组化阳性细胞数和活化caspase-3的表达水平以及再灌注72h海马CA1区HE染色未损伤锥体细胞数.结果 与模型组相比,治疗组海马MDA浓度、TNF-α浓度和NF-κB阳性细胞数活均显著下降(P<0.01);活化caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05);海马CA1区锥体细胞数显著增多(P<0.01).结论 腹腔注射富氢液能够有效减轻全脑缺血(15min)后再灌注时大鼠脑的氧化应激和炎症反应,进而缓减再灌注损伤.
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大鼠全脑缺血再灌注损伤富氢液不同时间点给药的疗效比较
目的：评价再灌注后富氢液不同时间点给药，对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响。方法：清洁级成年雄性SD大鼠72只，随机均分为4组：假手术组（S组）、全脑缺血再灌注损伤组（I／R组）、再灌注即刻给药组（H1组）、再灌注期间给药组（H2组）。 I／R组、H1组、H2组按照四血管阻塞法制作全脑缺血再灌注损伤模型。 H1组大鼠在再灌注即刻，经腹腔注射富氢液5 mL／kg（浓度0．6 mmol／L）。 H2组大鼠在再灌注后6 h，经腹腔注射富氢液5 mL／kg（浓度0．6 mmol／L）。 I／R组大鼠经腹腔注射等容量的生理盐水。再灌注24 h后，分别测定海马组织丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）和白细胞介素－6（IL－6）的含量。结果：与I／R组相比较，H1组和H2组海马组织的MDA含量、TNF－α、IL－6水平降低（P＜0．05）。 H1组与H2组海马组织的MDA含量、TNF－α和IL－6水平无显著差异（ P＞0．05）。结论：再灌注后不同时间点给予富氢液均能改善大鼠全脑缺血再灌注损伤，但两种给药方法之间无明显差异。
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富氢液激活自噬减轻带状疱疹后神经痛大鼠痛敏并降低炎症因子的水平
目的 探讨自噬在富氢液治疗带状疱疹后神经痛(PHN)中的作用.方法 雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=20):对照组、PHN组、富氢液处理的PHN组(PHN-H2组)、富氢液和3-MA同时处理的PHN组(PHN-H2-3-MA组)、富氢液和雷帕霉素(Rap)同时处理的PHN组(PHN-H2-Rap组).通过水痘带状疱疹病毒(VZV)接种建立PHN大鼠模型.造模成功的大鼠给予腹腔注射15 mg/kg 3-MA或10 mg/kg Rap,隔日1次,连续3次.富氢液处理方式为于造模后每天2次,腹腔注射富氢液10 mL/kg,连续7d.50只大鼠分别于造模后3、7、14、21 d,测定机械缩足反应阈(PWT);另50只大鼠,于造模后7 d,收集脊椎腰膨大处,ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的含量,Westernblot法测定自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3、beclin 1、P62的水平.结果 与对照组比较,PHN组大鼠PWT值减少,TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3Ⅱ和beclin 1水平增加,P62含量减少;与PHN组比较,PHN-H2组和PHN-H2-Rap组大鼠PWT值增加,TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,LC3和belin 1表达进一步增加,P62含量增加;与PH-N-H2组比较,PHN-H2-3-MA组大鼠PWT值明显减少,TNF-α、IL-1β、IL-6水平增加、LC3和beclin 1水平降低、P62含量增加.结论 富氢液可以通过激活自噬减轻PHN大鼠的机械痛敏和炎症因子的释放.
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口服富氢液对肝癌射频消融术患者围术期血浆细胞因子的影响
目的：探讨口服富氢液对肝癌射频消融术患者围术期血浆细胞因子的影响。方法：原发性肝癌患者100例，ASAⅠ－Ⅱ级，男73例，女27例，年龄38～75岁，体重（45～78）kg。随机分为对照组（C 组）和富氢液组（H 组），每组50例，择期行超声引导下经皮肝穿刺肝癌射频消融术。H 组患者于术前4h 口服富氢液5ml／kg，而 C 组患者于术前4h 口服等量的无氢对照液。分别于麻醉诱导前（T0）、手术开始时（T1）、手术结束时（T2）及术后24h（T3），采集静脉血，应用酶联免疫吸附（ELISA）方法测定血浆 IL －4、IL －10、HMGB1及 VEGF－1浓度。结果：T0、T1、T2及 T3时间点，H 组与 C 组患者血浆中细胞因子 IL －4、IL －10、HMGB1和 VEGF －1的浓度分别随时间升高，T3时间点血浆中细胞因子浓度达到释放高峰。在 T2及 T3时间点，与 C 组比较，H组 IL －4及 IL －10升高，HMGB1和 VEGF －1的浓度降低，具有统计学意义（P ＜0．05）。T0及 T1时间点，C组和 H 组患者血浆中 IL －4、IL －10、HMGB1和 VEGF －1浓度差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论：术前口服富氢液可有效改善肝癌患者围术期血浆炎症因 IL －4、IL －10、HMGB1、VEGF －1的生成，从而提高肿瘤患者的抗炎能力。
