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MRSA/MSSA对红霉素及克林霉素的诱导耐药性比较研究
目的 比较医院分离到的耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄葡萄球菌(MSSA)中诱导型克林霉素耐药的发生率,并比较VITEK COMPAT 2微生物分析系统和双纸片扩散法检测其诱导性的能力. 方法 对临床分离得到的金黄葡萄球菌进行耐甲氧西林检测,然后用VITEK COMPAT 2微生物分析系统和双纸片扩散法检测其诱导性,并比较检测结果. 结果 291例金黄葡萄球菌,MRSA占45.02％(131/291),MSSA占54.98％ (160/291),红霉素和克林霉素同时耐药的比例分别为58.02％和36.25％,红霉素和克林霉素同时敏感的比例分别为24.43％和21.88％,crm基因介导诱导型耐药的比例分别为12.98％和38.75％,泵出型耐药比例分别为为4.57％和3.12％.MRSA和MSSA中红霉素耐药克林霉素敏感株诱导率分别为73.91％和92.54％. 结论 VITEK COMPAT 2和双纸片法两种方法检测能力无显著差别,均可在临床使用.金黄葡萄球菌红霉素诱导克林霉素耐药问题十分突出,应对红霉素耐药而克林霉素敏感的葡萄球菌进行诱导耐药试验,以保证克林霉素药物敏感试验的准确性.
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检测克林霉素诱导耐药的葡萄球菌
为了检测葡萄球菌中克林霉素诱导性耐药,正确报告药物敏感试验结果,临床实验室标准化委员会(CLSI,即NCCLS)2004年发布M100-S14[1],增加了克林霉素对葡萄球菌纸片诱导试验,国内陈民钧教授作了介绍[2].我们根据文件规定,在128株金黄色葡萄球菌(金葡)和283株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中操作D试验,现将结果报告如下.
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脓肿分枝杆菌复合群亚种鉴定的方法学研究
目的 研究脓肿分枝杆菌复合群亚种鉴定的有效方法.方法 将19株克拉霉素敏感的脓肿分枝杆菌临床分离株扩增hsp65和rpoB基因相关序列,分别用Mega软件和PhyML软件单独及联合对其构建系统进化树以鉴定其亚种,对鉴定结果不一致的菌株进行16S-23S间隔序列测序加以判定.扩增分析rrl和erm(41)基因特征,采用微量肉汤稀释法对菌株进行克拉霉素诱导耐药检测,分析各亚种的基因表型模式.结果 19株脓肿分枝杆菌复合群中,hsp65和rpoB基因鉴定结果一致的有Mycobacterium massiliense(M.massiliense)亚种10株、Mycobacterium abscessus(M.abscessus)亚种4株和Mycobacterium bolletii(M.bolletii亚种1株,其余4株采用hsp65基因分类为M.massiliense,采用rpoB基因分类为M.abscessus,终采用间隔序列测序鉴定为M.massiliense.rrl基因分析19株均未发现与克拉霉素耐药相关的突变.erm(41)基因分析结果表明,M.abscessus的-35位启动子序列与M.bolletii和M.massiliense不同,第28位碱基存在多态性(T28或C28),M.bolletii和M.massiliense的-35位启动子序列及第28位碱基分子特征一致.14株M.massiliense菌株均存在erm(41)基因276 bp长片段和2 bp短片段缺失,4株M.abscessus和1株M.bolletii均携带完整的erm (41)基因.克拉霉素诱导耐药试验结果显示,3株携带T28的M.abscessus(菌株号:CI02、CI04和CI12)和1株M.bolletii均可诱导产生克拉霉素高水平耐药,其余14株M.massiliense和1株携带C28多态性的M.abscessus(菌株号:CI17)对克拉霉素始终保持敏感.暂未发现-35位启动子序列差异与克拉霉素诱导耐药相关.结论 hsp65基因适用于脓肿分枝杆菌复合群亚种分子鉴定,且脓肿分枝杆菌复合群的erm(41)基因分子特征及相关克拉霉素诱导耐药表型特征均有亚种特异性,hsp65基因和erm(41)基因检测可用于脓肿分枝杆菌复合群亚种鉴定.
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312株金黄色葡萄球菌耐药特性的研究
目的 研究金黄色葡萄球菌(SAU)临床分离株的耐药特性.方法 用K-B法测定20种常用抗菌药物的敏感性;头孢西丁纸片法测定MRSA;D试验测定克林霉素的诱导耐药情况.结果 SAU的耐药性普遍较高,除万古霉素、米诺环素、替考拉宁、呋喃妥因和利福平外,其余抗菌药物耐药率均≥42.6%;312株SAU检出MRSA209株,检出率67.0%;克林霉素结构性耐药占29.5%,诱导耐药检出率51.4%.结论 SAU的总耐药率日趋严重,MRSA和D试验高阳性率,对临床抗菌药物的选择构成极大的困难,必须引起临床的高度重视.
关键词： 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 克林霉素 诱导耐药 -
烧伤创面葡萄球菌属分离株的耐药性分析
100.0%;MRsA检出率为81.5%,MRCNS检出率分别为55.6%和66.7%.在红霉素耐药,而克林霉素敏感的葡萄球菌属中,D试验总阳性率48.2%,分别为金黄色葡萄球菌49.1%,表皮葡萄球菌44.2%,溶血葡萄球菌57.1%.结论 葡萄球菌属是引起烧伤创面感染蕈要的病原菌之一,且耐药率日趋严重,MRSA、MRCNS和克林霉素诱导耐药率高,已对创面感染治疗构成极大的困难,必须引起临床的高度重视.
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耐甲氧西林表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌常见耐药基因及红霉素对克林霉素的诱导耐药性研究
目的 了解临床分离的耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)和耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)中,常见耐药基因存在状况及红霉素对克林霉素的诱导耐药率.方法 用PCR技术检测耐药基因,采用CLSI(NCCLS)推荐的D试验方法测定红霉素对克林霉素的诱导耐药表型.结果 7株MRSE中,mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)、ermA/B/C、tetM、vanA、vanB和qacA/B基因的阳性株数分别为7、3、1、2、3、0、0、0和2;5株MRSH中此9种基因的阳性株数分别为5、4、2、1、4、0、0、0和1;对红霉素耐药而对克林霉素敏感的5株MRSE和5株MRSH中D试验阳性株数分别为3株和1株.结论 临床分离的MRSE和MRSH中存在mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)、ermA/B/C和qacA/B基因;D试验检测红霉素对克林霉素的诱导耐药性有助于临床医生正确选用MLSB类抗菌药物.
关键词： 耐甲氧西林表皮葡萄球菌 耐甲氧西林溶血葡萄球菌 耐药基因 红霉素 克林霉素 诱导耐药 -
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌D试验检测与耐药性分析
目的：了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（M RS A ）的感染特点和耐药性，为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法统计分析2013年1月－2014年8月儿童医院住院及门诊973例SAU感染患儿临床资料，使用VIT EK‐2 Compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定、药敏试验和D试验检测，用头孢西丁和苯唑西林两个指标确认MRSA。结果检出金黄色葡萄球菌共973株，其中检出MRSA 168株、检出率为17．27％，＜2岁患儿中检出M RS A 132株、检出率为18．38％；M RS A中D试验阳性率为27．38％，M RS A对红霉素耐药、克林霉素敏感D试验阳性率为92．00％，MSSA诱导克林霉素耐药率为87．30％；MRSA对万古霉素、利奈唑胺、喹奴普汀／达福普汀、替加环素敏感率均为100．00％。结论 M RS A耐药严重，且多见于婴幼儿，患儿克林霉素诱导率较成人高，应加强对M RS A的管理与监测，防止其暴发与流行。
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 D试验 诱导耐药 耐药率 -
金黄色葡萄球菌对大环内酯、林可酰胺和链阳霉素B类耐药性检测
目的 调查医院金黄色葡萄球菌临床分离株对大环内酯类(红霉素)、林可酰胺类(克林霉素)和链阳霉素B类(MLSB)抗菌药物的耐药性,检测克林霉素诱导耐药的发生情况及耐药菌株的耐药相关基因.方法 单一纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,再以D-试验检测红霉素诱导克林霉素耐药表型;PCR反应检测各耐药菌株的红霉素耐药相关基因.结果 临床分离的金黄色葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药率分别为80.3%和70.2%,对两者同时耐药(结构型MLSB耐药)的菌株占70.2%;克林霉素诱导耐药(D-试验阳性)菌株占所检测菌株的9.6%,占红霉素耐药、克林霉素敏感菌株的95.5%;在所有的红霉素耐药菌株中检出ermA、ermC和msrA基因.结论 医院感染金黄色葡萄球菌对MLSB 类抗菌药物的耐药性比较严重;在红霉素耐药、克林霉素敏感菌株中克林霉素诱导耐药率很高,临床实验室对该类菌株必须进行D-试验,以指导临床正确使用MLSB类抗菌药物.
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耐药基因和两种表型试验检测诱导克林霉素耐药葡萄球菌
目的 调查微量肉汤稀释法、纸片扩散试验(2种表型试验)检测葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的现状(及其)耐药基因mecA、ermA、ermB、ermC、msrA在本地区的流行分布,指导临床合理使用抗生素.方法 通过革兰染色、凝聚因子、凝固酶试验、触酶试验和Vitek 2 compact鉴定菌株.PCR检测细菌的mecA、ermA、ermB、ermC、msrA耐药基因.结果 微量肉汤稀释法、纸片扩散试验检测葡萄球对克林霉素诱导耐药与基因检测有很好的一致性.ermC为葡萄球菌诱导克林霉素耐药的优势基因.ermC、ermA在S.aureus、S.epidermidi、S.haemolytic所占比例分别75.0%(81/108)、65.9%(91/138)、74.2%(92/124);21.3%(23/108)、22.5%(31/138)、15.3%(19/124).结论 2种表型方法 检测葡萄球对克林霉素诱导耐药试验与PCR检测耐药基因方法 符合率高,微量肉汤稀释法可用于自动化仪器、纸片扩散试验可用于常规试验.
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葡萄球菌属红霉素诱导克林霉素耐药检测
目的:测定葡萄球菌属对红霉素和克林霉素耐药性及诱导克林霉素耐药率.方法:药敏试验采用K-B法,D-试验检测红霉素对克林霉素诱导耐药表型.结果:269株葡萄球菌红霉素和克林霉素同时耐药占48.7%.D-试验阳性占所检测葡萄球菌的24.5%,占红霉素耐药克林霉素敏感株的68.0%.结论:D-试验检测葡萄球菌属中红霉素对克林霉素诱导性耐药可帮助临床正确选用大环内酯-林可酰胺-链阳霉素B类(BLSB)抗菌药物.
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肠球菌的分布及耐药性变迁
肠球菌是人和动物胃肠道正常菌群之一,可引起抵抗力低下宿主的多种机会感染,现已成为医院感染的重要致病菌.肠球菌对多种抗菌药物具有天然耐药或诱导耐药,监测肠球菌的耐药性,对合理选用抗菌药物,减少耐药菌株的产生以及流行病学具有重要意义.
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临床分离的葡萄球菌克林零素诱导耐药的检测与分析
目的 了解葡萄球菌对克林霉素和红霉素的耐药性和红霉素对克林霉素诱导耐药的情况,以及纸片边缘距离对试验结果的影响.方法 采用纸片扩散法检测克林霉素和红霉素的耐药性,用D-试验方法检测并判读红霉素对克林霉素诱导耐药,对D-试验阳性菌株再次按纸片边缘不同距离分组,分别再做D-试验,了解纸片边缘距离对D-试验结果的影响.结果 462株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌214株,克林霉素敏感,红霉素耐药有66株占金黄色葡萄球菌30.8%,其中D-试验阳性菌株有37株,占克林霉素敏感,红霉素耐药株56.1%.248株凝固酶阴性的葡萄球菌中克林霉素敏感,红霉素耐药有87株占凝固酶阴性的葡萄球菌35.1%,其中D-试验阳性菌株有56株对克林霉素敏感,红霉素耐药株占64.4%.纸片边缘距离为17～24 mm时有明显的"D"形.纸片边缘距离大于26 mm时D-试验有漏检情况出现.结论 临床微生物实验室应开展D-试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药,这样可以避免临床医生盲目使用克林霉素而导致治疗失败.
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MRSA对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺体外诱导耐药性比较
[目的]通过比较万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺体外诱导耐甲氧西林金葡菌( methicillin - resistant Staphylococcus aureus,MRSA)前后的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)变化,探讨此3种抗菌药物在诱导耐药性上有无差别.[方法]琼脂二倍稀释法检测9株MRSA分别对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺的MIC,筛选出2株对3种药物均敏感的MRSA,用上述3种药物分别诱导2株MRSA25代,后检测诱导后的MRSA菌株对3种药物的MIC,应用统计学软件进行数据分析.[结果]经万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺分别诱导25代后的MRSA菌株与各自诱导前比较,万古霉素和利奈唑胺的MIC升高2倍,替考拉宁的MIC升高2.67倍,但各纽间MIC变化无差别,均未见耐药株产生；各组对照组的MRSA菌株经无药平皿传代,各药对其MIC无变化.[结论]3种抗菌药物在诱导MRSA耐药上无差别.
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红霉素诱导呼吸道分离金黄色葡萄球菌耐药状况研究
目的 探讨呼吸道分离的金黄色葡萄球菌耐药情况、耐药的菌株是否有遗传稳定性,及对其他种类的抗生素有无交叉耐药.方法 把试验菌株与标准菌株在不同含药平皿中接种传代,观察MIC值的变化,再测定遗传稳定性及有无交叉耐药.结果 试验菌株与标准菌株多次传代后,耐药突变菌株获得的耐药性是稳定的.未对其他种抗生素发生交叉耐药.结论 合理选用抗生素,监测细菌耐药性、掌握耐药机制等综合措施的实施,才能减缓细菌耐药性的增长.
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DNA测序技术在不同药物压力下大肠埃希菌耐药性产生机理研究中的应用
目的:对比长时间传代前后细菌对抗生素和抑菌中药敏感性的改变情况,检测某些耐药基因是否发生基因突变.方法:分别在含有左氧氟沙星和银花泌炎灵片的M-H肉汤培养基中对大肠埃希菌ATCC25922进行200代传代培养,测定小抑菌浓度(MIC)并与给药前MIC进行对比,以PCR法扩增细菌解旋酶基因(gyrA)和拓扑异构酶Ⅳ基因(parC),进行测序.结果:与给药前比较,经含左氧氟沙星的培养基中连续传代的大肠埃希菌对左氧氟沙星的MIC明显上升(P＜0.01),而经含银花泌炎灵片培养基连续传代的大肠埃希菌对银花泌炎灵片的MIC未出现明显差异(P＞0.05).基因测序结果,只有经左氧氟沙星培养基中连续传代的大肠埃希菌ATCC25922编码parC基因第381位发生突变,腺嘌呤(A) →胸腺嘧啶(T),其编码的赖氨酸(127)→天冬酰胺,并在第386位碱基插入胸腺嘧啶(T);而gyrA基因未见有碱基突变或插入.结论:在特定的环境压力下左氧氟沙星比银花泌炎灵片更容易诱导大肠埃希菌耐药性的产生,而parC基因突变可能是细菌耐药性产生的原因之一.
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146例金黄色葡萄球菌中红霉素对克林霉素诱导耐药分析
目的 了解金黄色葡萄球菌(SA)对红霉素和克林霉素的耐药性,检测红霉素对克林霉素诱导耐药的发生率及诱导耐药基因.方法 采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的纸片扩散法,用头孢西丁纸片检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)并以红霉素、克林霉素双纸片法(D试验)分析红霉素对克林霉素诱导耐药表型,用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因.结果 146株SA中MRSA占57.5％.SA对红霉素及克林霉素同时耐药的有82株,占56.2％,红霉素耐药而克林霉素敏感或中介的有34株,其中D试验阳性26株,红霉素诱导克林霉素耐药率76.5％.红霉素耐药而克林霉素敏感或中介的MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中D试验阳性分别为80.0％和71.4％.克林霉素耐药菌株主要由erm基因决定,结构型耐药菌株主要耐药基因为ermA,诱导型耐药菌株的主要耐药基因为ermC.结论 临床微生物实验室应加强对SA中克林霉素诱导耐药的检测,以指导临床医师合理选用大环内酯类、林可酰胺类抗菌药物.
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用微量肉汤稀释法检测葡萄球菌诱导克林霉素耐药的状况
目的 调查微量肉汤稀释法单个孔内红霉素和克林霉素结合诱导葡萄球菌对克林霉素耐药的能力,为仪器自动化检测提供依据.方法 以D-试验结果 作为"金标准".红霉素/克林霉素在微量稀释板孔内有4种组合,浓度分别为4/0.5、 6/1、8/1.5、0.5/2 μg/mL,35 ℃ 24 h孵育,孔内有菌生长为诱导耐药阳性.菌株鉴定用API Staph.结果 4/0.5、6/1、8/1.5 μg/mL 3种红霉素/克林霉素联合浓度与"金标准"符合率分别为100.0%、99.0%和100.0%,其中D-试验阳性2株、克林霉素低抑菌浓度(MIC)为2 μg/mL的凝固酶阴性葡萄球菌在联合浓度为6/1 μg/mL时孔内无菌生长.当联合浓度为0.5/2 μg/mL时,与"金标准"符合率较低.结论 4/0.5、6/1、8/1.5 μg/mL 3种红霉素/克林霉素联合浓度均可用于自动化仪器检测诱导克林霉素耐药.
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重组溶葡萄球菌酶体外诱导的金黄色葡萄球菌耐药株生物学特征
目的：探究重组溶葡萄球菌酶体外诱导金黄色葡萄球菌（金葡菌）耐药发生规律和机制。方法用3株临床分离金葡菌，体外以亚抑菌浓度重组溶葡萄球菌酶一步法诱导耐药，观察耐药株对多种抗菌药物的药敏改变情况，测序分析肽聚糖甘氨酸五肽桥联的关键合成酶编码基因 femABX。并观察其中1株耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和1株甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）的生长曲线、小鼠感染毒力情况。结果金葡菌耐药发生频率为10－4～10－8水平，与原代株比较，耐药株体外生长速率和小鼠体内毒力显著降低，对β内酰胺类敏感性提高2～4000倍。测序结果显示耐药株 f emA编码基因存在突变，可致终止密码子提前。结论重组溶葡萄球菌酶体外可诱导金葡菌耐药性产生，但耐药株生长繁殖力、致病力及抵抗β内酰胺类抗生素的能力显著降低。
关键词： 重组溶葡萄球菌酶 金黄色葡萄球菌 诱导耐药 f emA B X基因 基因突变 -
71株葡萄球菌克林霉素诱导耐药分析
目的了解我院2004年葡萄球菌临床分离株的克林霉素诱导耐药分布情况以及纸片距离对试验结果的影响.方法收集我院2004年分离到的红霉素耐药、克林霉素敏感和中介的葡萄球菌临床株71 株,其中金葡菌16株, 凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)55株.双纸片法检测克林霉素诱导耐药(D试验),对D试验阳性菌株再次用纸片边缘距离分别为10～15 mm,16～20 mm,21～25 mm,26～28 mm 4组测定D试验结果,了解纸片距离对D试验结果的影响.结果克林霉素的诱导耐药比例为45.1 %,其中金葡菌组68.8 %,CNS组38.2%,P<0.05,差异具有非常显著性,纸片距离大于26mm会对D试验结果造成影响.结论实验室必须加强对葡萄球菌诱导耐药检测.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌呼吸道定植和感染的临床意义及其对策
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)自1961年被发现至今已成为医院感染的重要病原菌之一,且有成为社区感染的重要病原体的趋势.多元回归分析显示,MRSA是医院获得性肺炎(HAP)和呼吸机相关性肺炎(VAP)中与病死率相关的唯一病原体独立危险因素[1].由于上呼吸道病原体的定植是一个普遍规律,而鼻前庭是MRSA定植的常见部位,因此呼吸道标本中常可分离培养到MRSA,在住院患者和护理机构中的患者中更为常见.然而很大一部分培养阳性者无发热、脓肿等感染的临床症状.加拿大的流行病学调查资料显示,在所有检测到MRSA的患者中被认为是定植的占68％[2].若对定植患者进行抗MRSA治疗,将导致抗菌药物过度使用,发生相关的诱导耐药及不良反应等问题.目前,对于呼吸道标本MRSA培养阳性结果的解读及相应临床决策已成为研究的难点和热点.
