中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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特异性敲除β-连环蛋白基因对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响
目的 通过构建特异性敲除小鼠模型观察β-连环蛋白(β-catenin)基因在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用.方法 应用Cre-lox系统构建肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠模型,90 min半肝血流阻断制造肝脏缺血再灌注小鼠模型,分为β-catenin基因敲除组及对照组,再灌注后0、3、6、20 h测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及其肝脏组织学改变.结果 肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠基因表型为:ctnnb纯合(loxP/loxP)并且Alb-Cre阳性表达,Western blot 方法证实其β-catenin蛋白表达丰度明显低于对照组.再灌注3、6、20 h敲除组小鼠血清ALT水平分别为282、405及128 U/ml;对照组分别为221、295及101 U/ml.敲除组AST水平分别为603、805及396 U/ml;对照组分别为421、398及336 U/ml,各时间点两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).其肝细胞坏死、窦状隙充血以及炎细胞浸润程度明显重于对照组.结论 β-catenin对肝脏缺血再灌注引起的肝损伤起保护作用.
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枝化状聚乙二醇对牛跟腱Ⅰ型胶原结构与构象稳定性的影响
目的 观察枝化状聚乙二醇对牛跟腱Ⅰ型胶原结构与构象稳定性的影响.方法 以牛跟腱Ⅰ型胶原为原料,以枝化状聚乙二醇为交联剂,在有效交联的前提下,通过测定羟脯氨酸含量观察聚乙二醇交联对胶原酶解稳定性的影响,采用示差扫描量热法(DSC)观察胶原热变性温度,采用圆二色光谱法(CD)观察聚乙二醇对胶原三螺旋构象稳定性的影响.结果 枝化状聚乙二醇交联组24 h降解率为26.79%,而对照组则达97.39%,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).交联组热变性温度为(79.1±1.2)℃,与对照组(68.6±1.9)℃比较,差异有统计学意义(P＜0.05);CD谱测定特征性吸收峰差异无统计学意义(P＞0.05).结论 枝化状聚乙二醇可显著提高其热变形温度和抗酶性分解能力,而对其三螺旋结构与构象无明显不利影响,是较理想的生物高分子交联剂,可有望用于胶原分子的交联改性.
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创伤性急性肺损伤时兔肺微血管内皮细胞Cx40调控内皮细胞通透性的研究
目的 观察创伤性急性肺损伤(ALI)兔血清对肺微血管内皮细胞连接蛋白40(Cx40)表达和间隙连接通道(GJC)功能的影响,及后者与内皮细胞单层通透性的关系.方法 组织块贴壁法分离、培养兔肺微血管内皮细胞.细胞分为3组,对照组、创伤血清处理组和阻滞剂组.在阻滞剂组,细胞GJC阻滞剂1-庚醇(0.5 mmol/L)加入到培养液中.1 h后,阻滞剂组和创伤血清组的20%胎牛血清的培养液均被更换为含有20%创伤血清的培养液.对照组则只更换培养液.3组细胞继续孵育6 h后,进入实验观察.分别行划痕实验、Cx40蛋白免疫印迹、单层细胞通透性和细胞内Ca2+钙浓度检测.结果 Cx40蛋白印迹见创伤血清组与阻滞剂组蛋白表达水平较对照组有明显降低,且2组之间亦不同,阻滞剂组蛋白水平较创伤血清组低,吸光度和值减少(对照组726293.2±83 684.1,创伤血清组397 798.1±87 145.7,阻滞剂组316977.6±76 325.9,n=4,P＜0.05).3组细胞划痕边缘的细胞均被染料荧光黄(LY)染色,LY在对照组细胞扩散得远,显色的周边细胞的数量多,创伤血清组次之,阻滞剂组显色的细胞数量少,相邻细胞与边缘细胞比值的差异有统计学意义(23±5、11±3比7±2,n=4,P＜0.05).3组细胞伊文思蓝清除率均随着时间的延长而增加,且3组细胞间亦有不同,阻滞剂组清除率高于创伤血清组和对照组.组间差异和时间点差异均有统计学意义(P＜0.05).通过共聚焦显微镜的观察,3组细胞荧光强度不相同,阻滞剂组荧光强,对照组弱.创伤血清组和阻滞剂组细胞内Ca2+浓度均显著高于对照组[(494.80±41.94)、(569.80±6.70)nmol/L比(158.80±13.09)nmol/L,P＜0.05].结论 创伤性ALI动物血清抑制肺微血管内皮细胞Cx40表达,进而引起GJC功能下降,导致肺血管内皮细胞单层通透性增加,该机制可能参与了胸部创伤后肺血管通透性增加的形成,促进了伤后急性肺损伤的发病.
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SLC22A18基因表达对胶质瘤细胞生物学特性的影响
目的 观察SLC22A18基因表达对人胶质瘤U251细胞生物学特性的影响.方法 U251细胞分别转染pcDNA3.SLC22A18和pcDNA3表达质粒后,筛选3个表达不同水平SLC22A18的U251克隆和2个不表达SLC22A18的U251克隆,研究SLC22A18蛋白表达水平对U251细胞黏附、迁移及聚集能力的影响.结果 与不表达SLC22A18的U251细胞比较,表达SLC22A18的U251细胞在附着后1 h和4 h时的细胞黏附能力均显著增强,分别平均增强65.7%和26.5%(P＜0.01),而其细胞过河实验显示过河时间平均延长67.8%(P＜0.05),并且细胞迁移能力平均下降71.5%(P＜0.01).同时,SLC22A18表达诱导显著的同源细胞聚集,聚集指数平均下降53.2%(P＜0.01).结论 SLC22A18蛋白表达显著抑制人胶质瘤U251细胞的恶性生物学特性.
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表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒的制备与表征
目的 制备表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米粒(EPI-PBCA-MNPs)并进行表征.方法 以化学共沉淀法制得粒径(15.2±4.6)am的Fe3O4纳米磁流体,采用微乳液反相界面聚合法制得EPI-PBCA-MNPs,反应条件:pH=2.0,搅拌速度2000 r/min,然后对其进行相关表征.结果 EPI-PBCA-MNPS粒径为(152.0 ±28.5)nm,分布均匀,胶体溶液长期稳定,平均包封率为(81.30 ±15.20)%,平均载药量为(14.65±2.05)%,饱和磁化强度为:0.35 KA/m.结论 制备的EPI-PBCA-MNPs粒径合适,分布均匀,其主要指标符合肝癌靶向治疗的要求.
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细胞外信号调节激酶在失血性休克后活性变化及其在血管反应性调节中的作用
目的 观察失血性休克后细胞外信号调节激酶(ERK)的活性变化及其对休克血管反应性的影响.方法 采用72只健康成年SD大鼠,复制失血性休克模型,观察休克后不同时期大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管组织中ERK活性的变化,同时测定血管反应性的变化;并观察改变ERK活性对休克血管反应性的影响.结果 失血性休克后,大鼠肠系膜上动脉血管组织中ERK活性升高,在休克30 min时达到高点(为正常组的2.6倍,P＜0.01),随着休克时间的延长,ERK的活性逐渐降低,在休克后2 h降低为正常对照组的56.1%(P＜0.05);失血性休克大鼠的血管反应性变化也呈现休克早期升高、休克晚期降低的趋势.给予AngII处理可使休克2 h血管组织内ERK活性升高为休克2 h组的1.9倍(P＜0.01),同时休克血管反应性明显升高,而ERK的抑制剂PD98059可拮抗AngII诱导ERK活性增加和血管反应性升高的作用.结论 ERK在失血性休克大鼠血管反应性调节中具有重要作用.
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平阳霉素纳米活性炭的研制及其淋巴靶向性研究
目的 制备淋巴靶向平阳霉素纳米活性炭(PYM-ACH-NP),观察经荷瘤鼠癌周黏膜下注射PYM-ACH-NP后,活性药物平阳霉素在体内各组织器官的药物分布特点,探讨PYM-ACH-NP对淋巴结转移灶的靶向性.方法 制备活性炭纳米微粒(ACH-NP),观察ACH-NP对平阳霉素(PYM)吸附效率.采用改良氯胺T法将放射性核素125I-NaI标记PYM,应用淋巴结高转移癌株U14建立昆明小鼠颈淋巴结转移动物模型,随机分为PYM组和PYM-ACH-NP组,于癌周黏膜下按10mg/kg的剂量分别注射PYM水溶液和PYM-ACH-NP,给药72 h后处死小鼠,取血、心、肝、脾、肺、肾和颈淋巴结,检测各组织器官内的PYM的比放射活性,以考察药物在体内的组织分布情况,对所得数据行t检验.结果 PYM-ACH-NP平均粒径为178 nm,随ACH-NP投入比例的增高,对PYM的吸附率相应增高,10∶1质量比下吸附率达99.38%.癌周黏膜下注射给药后,PYM-ACH-NP组颈淋巴结转移灶内药物比放射活性为(148.72±29.35)cpm/mg远高于PYM组(10.17±2.11)cpm/mg(P＜0.01);PYM-ACH-NP组血、心、肝、脾、肺、肾等器官中的药物比放射活性分别为(2.18±0.39)、(1.19±0.21)、(2.41±0.50)、(1.09±0.24)、(1.95±0.47)、(2.21±0.44)cpm/mg,显著低于PYM组相应各组织中的值(17.22±3.04)、(2.48±0.47)、(6.94±1.38)、(4.12±0.79)、(8.25±2.04)、(18.83±3.89)cpm/mg,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ACH-NP对PYM的吸附率高,PYM-ACH-NP具有良好的淋巴靶向性,经癌周黏膜下给药后,可显著提高淋巴结内的药物浓度,同时减少全身重要脏器的药物分布,降低了药物的全身不良反应.
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血管内皮细胞生长因子和内皮型一氧化氮合酶在大鼠单侧隐睾对侧睾丸损害中的表达
目的 探讨大鼠隐睾中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达与单侧隐睾对侧睾丸损害的关系.方法 将45只雄性SD大鼠(22 日龄)随机分成单侧隐睾并生殖股神经离断组(A组)、单侧隐睾组(B组)和假手术组(C组),每组15只.动物模型建立后(65日龄),苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸生精上皮形态,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测对侧睾丸生精细胞的凋亡,免疫组织化学和Western blot方法检测对侧睾丸组织中eNOS和VEGF基因表达的变化.结果 B组相对于A组和C组对侧睾丸组织中生精细胞的凋亡率高(t1=3.04,t2=3.94,t1,t2＞t28,P＜0.01),Western blot和免疫组织化学方法检测结果也显示B组eNOS和VEGF的表达含量较A组和C组都显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),而A组和C组的各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 eNOS和VEGF的高表达和生殖股神经在单侧隐睾对侧睾丸的损害中起重要作用,而切断生殖股神经可以阻断这一损害过程.
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Wnt/β-catenin通路及靶基因c-myc在肝细胞癌组织中的表达
目的 观察Wnt通路激活在肝细胞癌起源中的作用.方法 应用免疫组织化学方法检测31例肝细胞癌患者肿瘤组织(实验组)与癌旁正常组织(对照组)中Wnt2、β-catenin及其靶基因c-myc的表达.结果 在肿瘤组织与癌旁正常组织中,Wnt2蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05);β-catenin的胞质表达在癌旁组织中明显增高(P＜0.05),而其胞核表达则在肿瘤组织中增高(P＜0.05);c-myc在肿瘤组织中表达增高,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 β-catenin及其靶基因c-myc在肝细胞癌组织中表达增高,提示Wnt通路激活的过程在肝细胞癌的起源中起到重要作用.
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L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用
目的 观察L-精氨酸(L-Arg)和氨基胍对大鼠肺移植后缺血再灌注的保护作用.方法 建立大鼠左单肺移植模型,术后随机分为A组(对照组,腹腔注射生理盐水),B组(腹腔注射L-Arg)、C组(腹腔注射氨基胍)和D组(腹腔注射L-Arg和氨基胍),每组6只.移植肺再灌注2 h后,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性并测定移植肺干湿重比(W/D)及静脉血中一氧化氮(NO)含量,观察移植肺的病理学形态.结果 再灌注2 h后,B组移植肺的W/D(5.10±0.21)、MPO(1.74±0.26)U/g和MDA(20.87±2.90)μmol/g均低于A组W/D(5.74 ±0.14)、MPO(2.36±0.32)U/g和MDA(31.33 ±3.46)μmol/g;SOD活性(424.29±27.86)U/mgprot、NO含量(175.12 ±17.40)μmol/L、iNOS活性(3.62 ±0.26)U/mgprot和eNOS活性(5.36±0.28)U/mgprot均较A组SOD活性(268.01±26.06)U/mgpro、NO含量(98.29±6.95)μmol/L、iNOS活性(2.53 ±0.22)U/mgprot和eNOS活性(3.57 ±0.40)U/mgprot高(P＜0.05).C组的NO含量(84.13±5.18)μmol/L、iNOS活性(1.81 ±0.09)U/mgprot均较A组低(P＜0.05).D组的W/D(4.79 ±0.19)、MPO(1.24±0.13)U/g、MDA(14.60±4.14)μmol/g、iNOS活性(1.99±0.17)U/mgprot低于A组,SOD活性(493.75±24.95)、NO含量(149.61±10.70)μmol/L、eNOS活性(5.50±0.27)U/mgprot高于A组(P＜0.05).与B组比较,D组的W/D、MPO、MDA、NO含量、iNOS活性降低,SOD升高(P＜0.05).病理形态学检查显示D组炎细胞浸润及渗出轻,B组次之,A组和C组差.结论 移植后再灌注早期应用L-Arg可减轻缺血再灌注损伤,应用氨基胍并不能减轻移植肺的损伤,但联合应用L-Arg和氨基胍优于单纯应用L-Arg.
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饱和氢盐水对大鼠下肢缺血再灌注及远隔肺组织损伤的保护作用
目的 观察饱和氢盐水对大鼠下肢组织缺血再灌注及远隔肺组织损伤的保护作用.方法 将30只健康SD雄性大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、生理盐水组(C组)、氢水治疗组(H组).建立大鼠下肢缺血再灌注损伤模型(阻断腹主动脉4 h,再灌注4 h),在再灌注前10min分别注入饱和氢盐水1 ml/100 g(H组),生理盐水1 ml/100 g(C组).再灌注4 h后比较肺及腓肠肌湿/干重(W/D)比值、观察病理切片的改变,测定血清、肺及腓肠肌组织中丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6含量变化.结果 H组肌(4.04±0.22)、肺(4.47±0.23)组织湿/干重比低于C组肌(4.67±0.27),肺(4.67±0.27)、组织(P＜0.05),MDA、TNF-α及IL-6血浆[分别为(2.08±1.27)μmol/L、(528.22±221.17)、(41.14±13.01)ng/L]及组织[肺组织分别为(3.58±1.62)μmol/L、(1.17±0.15)、(0.79±0.29)ng/L;肌组织分别为(8.91±3.13)μmol/L、(3.13±0.41)、(3.07±1.69)ng/L)含量均低于C组(P＜0.05),腓肠肌及肺病理学损害明显减轻,与S组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血再灌注前输注饱和氢盐水可有效保护大鼠下肢缺血再灌注及远隔肺组织的损伤.
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中脑胶质细胞神经营养因子前多肽对大鼠神经元的保护作用
目的 观察中脑胶质细胞神经营养因子(MANF)前多肽对由谷氨酸所致大鼠下丘脑神经元损伤的保护作用及量效关系.方法 将培养Wistar大鼠下丘脑神经元分为正常对照组(CG)、谷氨酸组(GG)、MANF前多肽+谷氨酸组(MGG1～4,MANF前多肽浓度分别为1×10-7、1×10-8、1×10-9、1×10-10 mol/L).各组神经元培养24 h后,分别检测培养细胞死亡率、神经元轴突长度、长树突长度和树突数量.结果 GG组神经元死亡率为(0.342±0.055)%,显著高于CG组的(0.065±0.017)%(P＜0.01);MGG1组细胞死亡率低(0.157±0.038)%,并随MANF浓度降低依次增高,MGG4的细胞死亡率高,达(0.285±0.035)%,MGG1组神经元轴突长度、长树突长度和树突数量均为高,分别为(133.5±21.6)μm、(128.4±18.6)μm、(1.84±0.27)个/细胞,并随MANF浓度降低依次减少,MANF组细胞死亡率和神经元形态均较GG组明显改善(P＜D.05),但仍较CG组较差(P＜0.05),MANF前多肽浓度越高者,神经元情况改善越好.结论 MANF前多肽对谷氨酸所致神经元损伤有显著的保护作用,且在1×10-7～1×10-10 mol/L浓度范围内随浓度增高,保护效果增强.
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细胞周期素D1蛋白和mRNA在胆管癌中的表达及其意义
目的 检测胆管癌和癌旁0.5 cm胆管组织及手术切缘的正常胆管组织细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白及mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用流式细胞分析术检测42例胆管癌和20例正常胆管黏膜组织Cyclin D1蛋白的表达,同时应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例术中所取的新鲜的胆管癌、17例同个体癌旁胆管黏膜和20例正常胆管组织中Cyclin D1 mRNA表达,并与临床资料进行相关分析.结果 正常胆管组织、癌旁组织、胆管癌组织中Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为0.5845±0.0310、0.5608 ±0.0577、0.6288±0.0942,Cyelin D1 mRNA在3组之间表达呈上升趋势(P＜0.05).Cyclin D1蛋白表达趋势同其相对应的基因表达趋势一致,即Cyclin D1的mRNA在胆管癌组织中高表达(P＜0.05).结论 Cyclin D1基因转录和蛋白可能参与了胆管癌的发生发展过程.
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非小细胞肺癌K-ras突变小分子对吉非替尼耐药细胞的作用
目的 观察针对K-ras突变小分子NSC-741909是否可特异性杀伤吉非替尼原发耐药细胞,并探讨其机制.方法 选取吉非替尼耐药细胞;观察NSC-741909作用后细胞增殖与凋亡的变化;共聚焦显微镜观察细胞骨架改变;Western blot检测K-ras、JNK、P-JNK的改变.结果 NSC-741909可使耐药细胞在作用24 h后,在1 μmol/L和2 μmol/L时,FITC-A+/PE-A+细胞增加至(6.9±0.6)%和(21.1±3.2)%(P＜0.01);作用30 min后,K-ras表达在2 h下降达70%;p-JNK表达增加,并持续至少15 h,而总JNK蛋白表达无改变;细胞骨架蛋白F-actin呈稀疏、不规则、发散状排列.结论 针对K-ras突变的小分子NSC-741909可特异性杀伤吉非替尼原发耐药细胞,这是通过持续激活JNK途径从而导致细胞凋亡实现的.
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大鼠肝大部分切除术三种麻醉剂的效果比较
目的 寻找建立大鼠肝大部分切除术模型时合适的麻醉剂和麻醉方法.方法 将75只大鼠随机平均分成A、B、C 3组,分别为乙醚组、水合氯醛组、戊巴比妥钠组.观察大鼠麻醉诱导时间、术后苏醒时间和死亡率.结果 A、B、C 3组的麻醉诱导时间分别为(4.11±0.65)、(13.02±0.61)、(10.13±0.48)min,差异有统计学意义(P＜0.01);术后苏醒时间分别是(22.12±5.23)、(167.09±4.52)、(93.26±3.56)min,差异有统计学意义(P＜0.01),3组的死亡率分别是8%、40%、32%,A组与B组差异有统计学意义(P＜0.01),而它们与C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 建立大鼠大部分肝切除模型时,采用乙醚麻醉时诱导时间短、术后苏醒时间短、术后死亡率低,是较为合适的麻醉方法.
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饥饿诱导对纤维环细胞自噬因子LC3和Beclin-1表达的影响
目的 观察饥饿诱导对椎间盘纤维环细胞自噬因子LC3和Beclin-1表达的影响.方法 用EBSS(Earle's balanced salt)液饥饿诱导处于对数生长期的纤维环细胞,0、1、2、3 h后用单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法检测自噬体形成、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测纤维环细胞微管相关蛋白1轻链3(MAPLC3)和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.结果 随饥饿时间的延长,MDC阳性细胞数及自噬泡数量增多;1 h后LC3-Ⅱ及Beclin-1 mRNA表达开始增加,且随时间增加有增加趋势(LC3-Ⅱ:0.21±0.02、0.45±0.12、0.60±0.05、0.74±0.03,P＜0.05;Beclin-1:0.20±0.06、0.37±0.11、0.52±0.07、0.69±0.07,P＜0.05);1 h后蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加,且随时间增加有增加趋势(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ:0.12.±0.05、0.32±0.09、0.63±0.07、0.92±0.04,P＜0.01;Beclin-1:0.61±0.10、0.83±0.11、1.09±0.05、1.35 ±0.10,P＜0.05).结论 饥饿可诱导椎间盘纤维环细胞自噬的发生,这可能与椎间盘退变的发生、发展有关.
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携带γ-干扰素的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ治疗肝癌
目的 观察鼠源γ-干扰素(mIFN-γ)基因插入溶瘤腺病毒CNHK300后,该病毒对不同的肝癌细胞株及其裸鼠移植瘤的增殖力及特异性杀伤作用.方法 用噻唑蓝(MTT)法观察CNHK300-mIFN-γ(简称CNHK300-Mγ)对人正常肝细胞WRL-68、人肝癌细胞SMMC-7721、HepG Ⅱ的特异性杀伤作用.裸鼠肝癌SMMC-7721模型观察CNHK300-Mγ、CNHK300和ONYX-015的抗肿瘤疗效,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中mIFN-γ的表达量.结果 CNHK300-Mγ能选择性地杀伤肝癌细胞,在肿瘤细胞中半数抑制浓度(IC50)＜1,而在正常肝细胞中为370.肝癌模型中,CNHK300-Mγ治疗组能表达mIFN-γ,治疗结束后第3天和第7天血清中的mIFN-γ分别为(231±101)ng/L和(1733±191)ng/L.CNHK300-Mγ具有明显的肿瘤生长抑制作用,与CNHK300、ONYX2015和对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 mIFN-γ的插入使病毒对肿瘤细胞的杀伤能力提高,CNHK300-Mγ具有明显的肿瘤生长抑制作用.
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不同细胞因子诱导对树突状细胞体外分化的影响
目的 观察不同细胞因子诱导对于体外培养的树突状细胞(DC)免疫刺激活性的影响.方法 通过1000 U/ml人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和500 U/ml白细胞介素(IL)-4体外诱导的人单个核细胞来源的DC,经1000 U/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α、1 mg/L脂多糖(LPS)、1 mmol/L丁酸钠、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,分别以流式细胞仪、FITC-Dxtran内吞检测、混合淋巴细胞反应(MLR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC的表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌的变化.结果 鸡尾酒法诱导下的DC成熟标志显著上调,内吞能力减弱186.74±38.66,刺激淋巴细胞增殖能力增强18.23 ±2.22,并且IL-12的分泌能力增加(656.18±38.52)ng/L,说明其显著促进DC成熟.而丁酸钠诱导下的各项成熟指标均下调,导致DC免疫刺激源性减弱.结论 细胞因子鸡尾酒法是诱导DC成熟的佳方法;而丁酸钠可以抑制DC成熟,改变DC的免疫状态.
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人两种胆囊结石的胆汁差异蛋白质组学研究
目的 比较胆固醇性与胆色素性胆囊结石患者的胆囊胆汁蛋白质表达谱差异,寻找两种不同胆囊结石形成及调控相关的蛋白质.方法 采集胆囊结石患者胆囊胆汁及结石,结石胆固醇比例＞70%入选胆固醇结石组,胆色素比例＞40%入选胆色素结石组.胆汁予脱盐、脱脂等预处理后,二维色谱/串联质谱分析,Mascot检索数据库.结果 分别从胆固醇和胆色素结石胆汁中鉴定出495和511种蛋白质.两组共检测到抗成核因子1种,促成核因子12种,其中Mucin-5B等两种蛋白在胆固醇组高表达,载脂蛋白A-I等11种蛋白在胆色素组高表达.结论 二维色谱/串联质谱技术是高效的人胆汁蛋白质组研究技术.两组胆汁的蛋白质差异表达提示两种结石的形成机制差异,胆色素结石形成与促成核因子密切相关,载脂蛋白A-I抗成核作用减弱参与胆固醇结石形成.
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儿茶酚-O-甲基转移酶基因多态性在新疆伊犁地区人群中的分布及与食管鳞癌的关系
目的 探讨儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)基因Vall58Met多态性在新疆伊犁地区人群中的分布及与食管鳞癌(ESCC)的关系.方法 研究对象共487例,包括169例ESCC,318例正常对照.采用病例-对照研究方法,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析COMT基因G/A(Val/Met)多态性.结果 487例新疆伊犁地区受试者COMT基因型频率分布依次为GG型50.7%,GA型41.1%,AA型8.2%;等位基因G为71.3%,A为28.7%;分层分析显示,新疆伊犁地区年龄≤60岁的ESCC组与对照组之间差异有统计学意义(P＜0.05);将年龄及性别校正后,ESCC组与对照组COMT Vall58Met多态性于哈族、汉族差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 COMT基因Vall58Met多态性可能不是新疆伊犁地区哈萨克族、汉族ESCC危险性的遗传标志.
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同种异体脱钙骨复合骨髓间充质干细胞在兔膝关节腔内培养组织工程软骨的研究
目的 比较同种异体脱钙骨和细胞因子诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)制成细胞-支架复合物在兔膝关节腔内环境较体外培养出组织工程软骨的优点.方法 BMSC向软骨细胞诱导后与同种异体脱钙骨支架复合分别在体外培养(A组)和成年雄性新西兰白兔(15只)左侧膝关节腔内(B组)培养,右侧膝关节腔内(C组)培养单纯脱钙骨支架做空白对照.每4、8、12周各组标本分别取材,制石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学等组织学观察,并通过形态学分析软件计算免疫组织化学平均光度(A)值.结果 标本石蜡切片HE染色:4周时A组标本见软骨细胞散在分布于支架表面,内部基本未观察到细胞.B组标本支架内软骨细胞数量明显较多,软骨陷窝形成,陷窝周围基质深染,可见由单个细胞分裂形成的同源细胞群.8周时B组标本以成熟软骨细胞为主,细胞数量多,出现柱状排列的同源细胞群,细胞周围分泌着色均一的玻璃样基质,且渗入支架结构内部,脱钙骨支架有部分被吸收.12周时各组支架结构明显被吸收,A组支架内填满软骨细胞,部分已纤维化,但结构排列紊乱.B组支架呈透明软骨样,软骨细胞充分渗透进入支架内,呈一定应力方向排列.Ⅱ型胶原免疫组织化学A值统计学分析比较发现:第4,8,12周B组Ⅱ型胶原免疫组织化学的A值均高于A组,差异有统计学意义(P＜0.01).两组间A值随时间的变化趋势差异有统计学意义(P＜0.01).结论 同种异体脱钙骨支架复合经细胞因子诱导的BMSC,在膝关节腔内进行培养,利用关节腔内低氧、多种生长因子的微环境以及关节活动时的应力刺激等优势,较体外培养可以培养出组织学特点更好的工程软骨.
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Sonic hedgehog信号通路中Shh蛋白及其下游转录因子Glil在胃癌组织中的表达及意义
目的 探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路中Shh蛋白及其下游转录因子胶质母细胞瘤转录因子(Gli1)在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者生存的相关性.方法 选取胃癌病理标本100例,正常胃黏膜上皮标本10例.使用SP法对上述病理标本及正常胃黏膜切片后进行Shh及Gli1抗体的免疫组织化学染色.结果 所有胃癌标本Shh、Gli1抗体染色阳性率为100%,正常胃黏膜标本Shh抗体染色阳性率30%,Gli1抗体染色阳性率为0%.正常胃黏膜的Shh及Gli1抗体染色强度明显低于胃癌组织标本(P＜0.01).Shh及Gli1随恶性程度增高、TNM临床分期升高而表达强度升高,且伴有淋巴结转移及远处转移者表达强度升高.Shh与Gli1表达强度呈线性正相关,Pearson相关系数为0.747(P＜0.01).胃癌患者生存期随着Shh及Gli1表达强度的增强而下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Sonic hedgehog信号通路参与胃癌的发生发展,其过度激活提示胃癌患者的预后不良.
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蛋白质组学方法分析PRL-3功能相关蛋白
目的 蛋白质组学方法分析转染肝再生磷酸酶-3(PRL-3)后结肠癌细胞LoVo的蛋白表达改变.方法 构建绿色荧光蛋白载体PAcGFP-C3-PRL-3并转染至结肠癌细胞LoVo中,获得稳定表达GFP-PRL-3的结肠癌细胞LoVo-PRL-3.Western blot检测转染后细胞的PRL-3表达.采用双向凝胶电泳(2-DE)分离LoVo-PRL-3细胞及转染空载体PAcGFP-C3的LoVo-Control细胞总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 Western blot结果显示PRL-3在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而未检测到在LoVo-Control细胞中表达.通过双向凝胶电泳图谱分析发现20个差异蛋白质斑点,质谱成功鉴定出17种蛋白.与LoVo-Control细胞比较,10种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而7种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中表达降低.结论 成功鉴定出PRL-3功能相关蛋白,为进一步研究PRL-3促进结直肠癌转移机制奠定基础.
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人脑胶质瘤中全长新基因PPIL3的生物信息学研究
目的 应用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中1条基因进行初步研究.方法 抽提正常成人脑组织与人腩胶质瘤组织中的mRNA制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异,对681 F05克隆子进行Northern blot和生物信息学分析.结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达.BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%.cDNA序列分析发现此两个克隆是同一个基因[命名为cyclophilin-like gene(PPIL3)]的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPIL3b).结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少、高质量、高速度、高敏感等特性.681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因.
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内源性大麻素对人肝癌细胞生长及黏附和侵袭性的影响
目的 观察内源性大麻素(AEA)对人肝癌高转移细胞MHCC97H细胞生长、黏附、侵袭性等的抑制作用.方法 不同浓度AEA(100、50、0μmol/L)作用细胞后,应用体外细胞-基质黏附实验方法,检测细胞对Fibronectin黏附能力的改变;应用体外细胞趋化实验和侵袭实验,检测细胞的运动功能及对人工基底膜的侵袭能力;应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率.结果 (1)不同浓度的AEA(100、50、0 μmol/L)作用细胞3、6、12 h后,细胞黏附抑制率分别为:3 h(24.4%、20.6%和20.8%)、6 h(23.6%、21.3%和19.6%)及12 h(25.2%、24.1%和22.8%),组间及组内比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)100μmol/L的AEA作用细胞48 h后,平均每个视野的透膜细胞数为(13.00±4.30)个,与对照组(15.70±3.30)个比较,差异无统计学意义(P＞0.05);平均每个视野的侵袭细胞数为(4.10±1.65)个,与对照组(3.40±1.24)个比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(3)不同浓度的AEA(100、50、0μmol/L)作用细胞24 h后,细胞生长抑制率分别为(39.30 ±9.17)%、(35.60±8.25)%和(28.70±0.04)%,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AEA对体外生长的人肝癌细胞MHCC97H的生长、黏附和侵袭性等方面无明显抑制作用.
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Bim蛋白在骨肉瘤细胞株中的表达及其意义
目的 检测Bim蛋白在3种骨肉瘤细胞中和1种正常成骨细胞中的表达.方法 提取成骨肉瘤细胞Saos-2和成骨细胞hFOB 1.19中总RNA,通过全基因组表达谱芯片比较Bim基因在Saos-2和hFOB 1.19中表达;对骨肉瘤细胞MG-63、U2-OS、Saos-2及成骨细胞hFOB 1.19细胞进行细胞爬片免疫荧光、提取4种细胞中的总蛋白进行Western blot、提取4种细胞中的总RNA进行荧光定量聚合酶链反应(PCR),检测4种细胞内Bim的表达,观察骨肉瘤细胞与成骨细胞中Bim的差异,并通过查阅文献分析全基因组表达谱芯片中筛查出与Bim蛋白表达有关的基因.结果 全基因组表达谱芯片结果为Saos-2/hFOB 1.19=0.32,Saos-2中Bim基因表达比hFOB 1.19下调2倍以上;免疫荧光显示Bim在3种骨肉瘤细胞中的表达显著低于hFOB 1.19;Western blot条带结果表明Bim蛋白在hFOB1.19里面表达多,定量分析条带灰度显示MG-63、U2-os、Saos-2及hFOB1.19细胞里面的表达值为0.04±0.02、0.15±0.01、0.12±0.02、0.39±0.02,3种骨肉瘤细胞Bim蛋白水平明显低于成骨细胞(P＜0.05);荧光定量PCR检测得出骨肉瘤细胞MG-63、U2-os、Saos-2及hFOB1.19里Bim mRNA的2-△△CT为:1.00±0.03、1.96±0.21、1.20±0.14、0.64±0.07,3种骨肉瘤细胞Bim mRNA明显低于成骨细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);通过文献报道+基因芯片筛查出了10种可能跟Bim蛋白表达及生物学作用相关联的基因.结论 Bim在mRNA和蛋白水平下,骨肉瘤细胞中表达量明显少于成骨细胞.
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转化生长因子-β1及凋亡相关因子在泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中的表达及其意义
目的 探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义.方法 8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细胞TGF-β1以及凋亡相关因子Caspase-3的表达与分布,原位末端标记技术(TUNEL)检测病灶旁免疫细胞凋亡.结果 泡型包虫患者及泡球蚴感染小鼠病灶旁及汇管区均有大量炎性细胞灶性浸润,TGF-β1(P＜0.01)和凋亡相关因子Caspase-3(P＜0.01)高表达,TUNEL结果表明病灶旁免疫细胞发生凋亡,与对照比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 泡球蚴在感染宿主过程中可能通过引起宿主TGF-β1高表达,造成免疫细胞发生凋亡而达到逃避宿主免疫反应长期寄生的目的.
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大鼠坐骨神经夹伤后葡萄糖调节蛋白78的表达变化
葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与热休克蛋白70(HSP70)家族具有高度同源性,被认为是HSP70家族的成员之一[1].已有研究表明,坐骨神经损伤后4 dHSP70在胶质细胞内表达增强[2].我们通过建立周围神经损伤模型,观察GRP78在周围神经损伤后的表达变化及细胞定位.
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恶性肿瘤与Lumican的关系研究进展
基膜聚糖(Lumican)是一种蛋白聚糖,隶属于富含亮氨酸低分子蛋白聚糖(SLRP)家族[1],早在牛角膜基质中发现[2].和其他SLRP蛋白一样,Lumican在结构上主要由4个结构域组成:(1)16个氨基酸残基构成的信号肽;(2)N端结构域,包含硫化酪氨酸及二硫键;(3)用于蛋白质相互作用的亮氨酸高度重复的分子结构;(4)羧基端结构域,包含两个保守半胱氨酸残基.根据其聚糖修饰形式的不同,Lumican以核心蛋白共价连接未硫酸化的聚乙酰氨基乳糖的糖蛋白形式和核心蛋白共价连接硫酸化的硫酸角质素侧链的蛋白聚糖形式存在[3].
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应用自体和异体半腱肌重建兔前交叉韧带后移植物血供
前交叉韧带(ACL)重建移植物的选择和康复程序存在争议[1].本研究旨在观察不同ACL移植物重塑过程中的组织学改变及血循环重建,为临床重建ACL选材提供实验依据.
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重型颅脑损伤患者血清LGT蛋白质组的变化及其和预后的关系
我们采用表面增强激光解吸/电离飞行质谱(SELDI-TOF-MS)技术观察重型颅脑损伤(sTBI)患者血清蛋白质组变化规律,初步发现该类患者血清中存在LGT(lost goodwill target)蛋白质组表达并检测其丰度.
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膀胱癌CD4+ CD25high Foxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布及Foxp3基因表达与肿瘤分期的相关性
我们用四色流式细胞术准确界定CD4+ CD25high Foxp3+ Treg,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测Treg的特异性功能基因Foxp3 mRNA的表达水平,分析不同分期膀胱癌患者的该群细胞数量、膀胱癌不同部位的分布及Foxp3的表达差异与膀胱癌临床TNM分期的关系,探讨Treg在膀胱癌患者中表达水平及临床意义.
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一种小鼠弥漫性腹膜炎致脓毒症模型的建立
本研究旨在建立一种小鼠升结肠置管致弥漫性腹膜炎的脓毒症(CASP)实验动物模型,为脓毒症临床实验提供参考.一、材料和方法1.材料与分组:雄性C57BL/6小鼠,体质量20～25 g,随机分为假手术组、16 G手术组、18 G手术组3组,每组小鼠20只.
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立体定向建立SD大鼠脑干出血模型
为提高脑干出血患者治疗效果,我们建立了大鼠脑干出血模型,观察大鼠脑干出血后不同时间点的病理变化,为人类脑干出血的临床治疗提供依据.一、材料和方法1.实验动物:清洁级140只SD雄性大鼠,随机抽取20只进行脑干出血成模实验,剩余大鼠随机分为实验组和对照组,取成模术后3、6、24 h 3个时间点随机处死大鼠.
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经皮肾镜取石术39例手术期管理分析
近年来,腔内碎石设备的不断创新发展使经皮肾镜取石术(PCNL)成为目前治疗肾结石的首选方法[1].我院泌尿外科从2007年3月至2010年11月行经皮肾镜碎石清石治疗上尿路结石39例,临床效果较好.
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不同热缺血时间对肾部分切除大鼠细胞间黏附分子-1表达的影响
我们以细胞间黏附分子-1(ICAM-1)为观察指标,探讨不同热缺血时间对肾脏组织的影响和肾血流阻断的安全时限.一、材料和方法1.动物分组:健康的SD大鼠44只,8～10周龄,体质量250～300 g.将其中40只大鼠随机分为肾蒂阻断组和肾动脉阻断组,每组20只.根据阻断血供所致肾脏热缺血时间(WIT)的长短,两组均分为5个亚组(WIT 20=20 min、WIT 30=30 min、WIT 40=40 min、WIT 50=50 min、WIT 60=60 min,n=4).其余4只健康大鼠作为假手术对照组,单纯行开腹手术分离肾蒂但不阻断肾脏血供(WIT 0=0 min).
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新型自制套管在经膀胱自然腔道内镜手术中的应用
经自然腔道内镜手术(NOTES)越来越受到人们的关注,大量的动物实验正在进行之中[1-2].然而,由于缺乏合适的经膀胱途径操作鞘管,该手术的推广在泌尿外科领域受到一定的限制.本研究旨在探讨新型自制套管在经膀胱自然腔道内镜手术中的应用.
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短肠综合征肠黏膜代偿机制研究进展
短肠综合征(SBS)是指因小肠广泛切除或各种原因造成小肠吸收面积减少而引起的一个临床症候群,主要表现为水、电解质和营养物质吸收障碍,出现腹泻、体质量下降、进行性营养不良等临床表现,继而出现器官功能衰退、代谢功能障碍、免疫功能下降,由此而产生的系列综合症,是肠衰竭的主要原因之一[1].近年来随着对SBS的研究不断深入,对SBS患者病理生理改变和残存肠道代偿有了一定的了解,特别是对短肠发生后细胞因子、上皮增殖及凋亡调控在肠代偿中的作用研究进展较快,现对近年SBS代偿调控机制的研究作一综述.
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血小板衍化内皮细胞生长因子/胸腺嘧啶磷酸酶和血管内皮生长因子在间质性膀胱炎诊断中的应用
目的 检测血小板衍化内皮细胞生长因子/胸腺嘧啶磷酸酶(PDECGF/TP)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨血管生长因子在间质性膀胱炎(IC)患者膀胱中的表达活性与膀胱镜下的表现及临床症状的关系.方法 选择符合NIH/NIDDK诊断标准的IC患者12例为实验组和12例Ⅲ型前列腺炎患者为对照组.实验组行麻醉下水扩张,膀胱组织活检,常规苏木素-伊红(HE)染色观察肥大细胞数量.应用免疫组织化学检测PDECGF/TP和VEGF表达,进行免疫组织化学阳性细胞计数及免疫组织化学评分(IHS).结果 实验组12名患者在麻醉下水扩张时发现膀胱黏膜点片状出血.常规HE染色病理切片观察可见IC组膀胱组织标本中肥大细胞数目明显高于对照组(P＜0.05),且IC患者的肥大细胞多存在于膀胱组织的黏膜下层,而对照组膀胱组织仅偶见肥大细胞.实验组患者膀胱黏膜PDECGF/TP和VEGF阳性细胞百分比计数、阳性细胞染色强度及HIS评分明显高于对照组(P＜0.05).结论 IC患者血管生长因子PDECGF/TP和VEGF呈高水平表达,通过检测PDECGF/TP和VEGF能够筛选或确诊间质性膀胱炎.
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自荧光支气管镜在非小细胞肺癌术前评估中的应用
目的 探讨自荧光支气管镜(AFB)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者术前评估中的应用价值.方法 将254例患者随机分为白光支气管镜(WLB)检查组和AFB检查组,比较两组手术患者的切缘癌细胞阳性率、切缘不典型增生阳性率,和两组术后患者的复发率及生存率.结果 AFB组NSCLC术后切缘癌细胞阳性率(1.9%)及不典型增生阳性率(3.8%),显著低于WLB组(5.7%、23.8%)(x2=21.755,P＜0.05),AFB组术后局部复发率(10.4%)显著低于WLB组(38.5%)(x2=23.692,P＜0.05),1、2、3年生存率AFB组分别为91.5%、78.3%、63.2%显著高于WLB组69.7%、48.4%、33.6%(x2=16.815、14.167、13.413,P＜0.05).结论 AFB有助于识别NSCLC并确定其边界,为手术治疗提供可靠依据,降低术后患者局部复发率,提高患者生存率,在NSCLC患者术前评估中有重要意义.
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米非司酮诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡过程中PKB/Akt激酶的调控作用
目的 观察米非司酮在体外诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的作用机制以及Akt激酶在前列腺癌生长过程中的作用.方法 采用Western blot方法检测不同前列腺癌细胞株癌细胞以及米非司酮作用后PC-3细胞中Akt蛋白磷酸化后蛋白含量,以及相关蛋白的表达量.结果 前列腺癌PC-3细胞中Akt磷酸化后蛋白即[p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)]的含量明显高于激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞中的蛋白表达量,其表达量分别为0.27±0.05和0.22±0.07;0.46±0.09和0.37±0.10(P＜0.05).10 μmol/L米非司酮作用于PC-3细胞后p-Akt(Th308邶)和p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白的含量均明显下降,但其中p-Akt(Thr308)蛋白表达量变化尤为显著,4～24h4个时间组蛋白含量分别为0.24±0.08、0.11±0.03、0.05±0.01和0.01±0.00;其蛋白表达量下降速度较p-Akt(Ser473)快且显著,p-Akt(Ser473)磷酸化蛋白4～24 h 4个时间组蛋白含量分别为0.56±0.17、0.42±0.11、0.28±0.09和0.12 ±0.05.米非司酮作用于PC-3细胞后使Caspase-9、Caspase-3被激活裂解出有活性的激活片段.结论 Akt激酶在前列腺癌生长、发展以及激素依赖性向激素非依赖性的转变过程中起着重要作用.p-Akt(Thr308)蛋白磷酸化水平在Akt磷酸化激活过程中占主导地位,是Akt激活的必要过程.米非司酮抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其可能是通过抑制Akt信号转导通路,从而激活Caspase.
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ABL-N诱导前列腺癌细胞凋亡及其机制
目的 探讨旋覆花内酯(ABL)-N诱导前列腺癌细胞凋亡的作用及其机制.方法 0～40μmol/L ABL-N分别处理前列腺痛细胞后,利用噻唑蓝(MTF)检测对细胞增长的抑制作用;流式细胞学、TUNEL染色等方法检测其诱导凋亡的作用,并检测Capase活性,Western blot测定bax、bel-2水平变化.结果 ABL-N明显抑制前列腺癌细胞PC3、LNCaP及DU145的生长,并呈剂量依赖性.40 μmol/L ABL-N作用24 h后,(73.34±4.41)%的PrEC细胞存活,而3种前列腺癌细胞分别为(11.92±2.31)%、(12.55±1.94)%、(13.28±2.26)%.膜联蛋白/碘化丙锭(Annexin V/PI)及TUNEL染色表明ABL-N呈剂量依赖性诱导PC3凋亡.ABL-N可激活Caspase活性,尤其Caspase-3,20μmol/L ABL-N作用24 h后其活性是对照组的4.23倍;bax/bcl-2比率随浓度增加明显增高.结论 ABL-N可通过Caspase途径及bax/bcl-2蛋白途径,诱导PC3等前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞增殖.
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人膀胱癌bcl-2-siRNA慢病毒载体的构建及稳定转染细胞株的建立
目的 构建表达人膀胱癌bcl-2基因的小分子RNA(siRNA)的慢病毒载体并建立稳定转染细胞株.方法 根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计3条针对bcl-2 siRNA序列,分别构建pSIH1-H1-copGFP重组质粒.筛选出有效沉默靶基因的siRNA后,将携带目的 序列的慢病毒载体转染到293T细胞中,感染膀胱癌细胞株T24,建立稳定转染细胞株.结果 设计的针对bcl-2的序列中第3条的抑制效果好,下调59.0%.以此目的 序列构建稳定转染细胞株,对bcl-2 mRNA抑制率达65.6%,对bcl-2蛋白的抑制率高达74.5%.结论 成功构建表达人膀胱癌bcl-2-siRNA的慢病毒载体,它能有效沉默bcl-2基因在膀胱癌细胞株T24中的表达并建立了稳定转染细胞株.
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E-钙黏素与肌动蛋白交联蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义
目的 探讨肌动蛋白交联蛋白(Fascin)、E-钙黏素(E-cadherin)在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测Fascin、E-cadherin蛋白在78例BTCC患者中的表达,分析其表达与BTCC临床病理特征之间的关系.结果 BTCC中Fascin和E-cadherin阳性表达率分别是75.6%和48.7%,表达呈负相关(r=-0.397,P＜0.05).两者表达水平均与肿瘤病理分级及临床分期有关.结论 Fascin与E-cadherin蛋白表达可作为判断膀胱移行细胞癌生物学行为的重要指标.
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肾上腺髓质素在肾肿瘤组织中的表达及其与肿瘤组织微血管密度的关系
目的 探讨肾上腺髓质素在肾细胞癌(RCC)组织中的表达及其与微血管密度(MVD)的关系.方法 采用免疫组织化学(SP染色法)和流式细胞学方法检测33例肾肿瘤组织中肾上腺髓质素的表达,并定量计数肿瘤组织微血管.结果 肾上腺髓质素在33例肾肿瘤组织中表达阳性率100.0%,在33例正常肾组织中仅有3例表达阳性,阳性表达率9.1%;并且肾上腺髓质素在肿瘤组织中表达强度(1267.84±127.52)明显高于其在正常组织中的表达(970.36±171.46,P＜0.05).肾上腺髓质素在肿瘤组织中高表达与MVD呈正相关.结论 肾上腺髓质素在肾肿瘤组织中表达与MVD呈正相关,肾上腺髓质素可能参与肾肿瘤新生血管生成.
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骨髓间充质干细胞干预对缺血再灌注致小鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)干预对缺血再灌注(I/R)诱导的急性肾损伤小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)自身修复的影响.方法 Percoll密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化出C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞(mMSCs),5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记.雄性C57BL/6小鼠45只,分为正常对照组(15只)、I/R组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放)、I/R+Brdu-mMSCs组(15只、夹闭双侧肾蒂30 min开放的同时尾静脉注射BrdU标记的mMSCs).留取动脉血及肾组织,检测血尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平,制作肾组织切片行苏木素-伊红(HE)染色,荧光组织化学观察mMSCs在受体小鼠肾组织的分布,免疫组织化学观察RTECs增强细胞核抗原(PCNA)的表达,TUNEL法检测RTECs凋亡,Western blot检测建模后第2天肾小管组织中Caspase-3、bcl-2蛋白的表达.结果 BrdU标记mMSCs的阳性率可达(98.71±0.32)%.I/R+BrdU-mMSCs组小鼠的BUN及Scr水平较I/R组为低,肾小管损伤病理明显减轻,且小鼠的肾脏中可检测到BrdU+细胞的分布.mMSCs干预后,RTECs细胞核PCNA阳性表达明显增多(P＜0.05或P＜0.01),而细胞凋亡的水平却较I/R组明显减少(P＜0.05或P＜0.01).Western blot进一步显示:I/R+BrdU-mMSCs组小鼠的肾组织中Caspase-3蛋白水平明显下降[(1.16±0.33)比(1.64±0.27),P＜0.01],而bcl-2水平却明显增高[(0.94±0.27)比(0.68 ±0.15),P＜0.01].结论 小鼠发生I/R诱导的急性肾损伤后可诱导移植的MSCs向损伤肾组织归巢,锚定在肾脏的MSCs可促进损伤RTECs的再生,抑制其凋亡,从而有助于RTECs的自身修复,延缓肾损害进展.
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mTORC1和mTORC2调控前列腺癌雄激素受体和Akt磷酸化
目的 观察mTORC1和mTORC2在前列腺癌C4-2细胞中的作用.方法 噻唑蓝(MTY)比色法检测转染siRNA raptor和siRNA rictor后C4-2细胞增殖改变;流式细胞术(FCM)检测敲除mTORC1(raptor)和mTORC2(rictor)后C4-2细胞凋亡;Western blot检测siRNA raptor和siRNArictor后C4-2细胞雄激素受体(AR)和Akt磷酸化表达.结果 MTT显示敲除raptor生长抑制率无显著变化[(25.37±2.63)%比(27.49±2.96)%,P＞0.05],而敲除rictor组[(25.37±2.63)%比(62.86±5.61)%,P＜0.01]显著地抑制了细胞的生长;FCM显示敲除raptor显著增加了细胞凋亡[(11.76±1.45)%比(38.23±3.71)%,P＜0.01],而敲除rictor对C4-2细胞凋亡无显著性变化[(11.76±1.45)%比(14.25 ±1.68)%,P＞0.05];Western blot检测显示敲除mTORC1显著增加C4-2细胞AR[(0.21±0.04)%比(0.73 ±0.12)%,P＜0.01]和Akt磷酸化表达[(0.23±0.06)%比(0.68±0.11)%,P＜0.01],而敲除mTORC2显著地抑制了C4-2细胞AR[(0.21 ±0.04)%比(0.07 ±0.02)%,P＜0.01]和Akt磷酸化表达[(0.23±0.06)%比(0.06±0.03)%,P＜0.01].结论 mTORC2对前列腺癌C4-2细胞的存活是必须的,mTORC2是治疗前列腺癌有希望的靶目标.
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CpG寡聚脱氧核苷酸增强树突状细胞疫苗诱导的特异性抗前列腺癌作用
目的 观察CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对截短的人前列腺特异性膜抗原(tPSMA)基因修饰的树突状细胞(DCs)诱导的抗前列腺癌效应.方法 利用复制缺陷性腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-tPSMA及Ad-eGFP.将Ad-tPSMA和Ad-eGFP感染鼠源性DCs,用含10μg/L粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-4和含10%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培养基诱导培养6 d后,然后再添加1 mg/L的CpG-ODN体外培养1 d,后添加1 mg/L的脂多糖(LPS)继续培养1 d,使其成熟.流式细胞仪检测DCs细胞表型,CCK-8法检测混合淋巴细胞反应T细胞增殖能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测T细胞分泌细胞因子[IL-2、干扰素(INF)-γ]的影响,CCK-8试剂检测T细胞特性杀伤靶细胞活性.结果 CpG-ODN促进Ad-tPSMA感染的DCs(CpG/DCs-Ad-tPSMA)高表达MHC Ⅱ(83.8±3.7)%、CD80(79.8±5.6)%和CD86(78.3 ±2.8)%,且刺激同种异体T细胞增殖能力明显高于DCs-Ad-tPSMA组、DCs-Ad-eGFP组和未转染的DCs组(P＜0.05);培养上清中细胞因子IL-2(179.64±2.72)ng/L和INF-γ(1581.75±28.61)ng/L,表达水平均明显高于DCs-Ad-tPSMA组、DCs-Ad-eGFP组和未转染的DCs组(P＜0.05);CpG/DCs-Ad-tPSMA组诱导RM-1-tPSMA细胞特异性杀伤率为(55.3±1.2)%,明显高于DCs-Ad-tPSMA组(40.7±1.4)%、DCs-Ad-eGFP组(12.7±1.2)%和未转染的DCs组(10.8±1.7)%(P＜0.05).结论 CpG-ODN能增强PSMA基因修饰的DCs疫苗诱导的特异性抗前列腺癌效应.
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慢病毒-血管内皮生长因子165载体的构建及其在脂肪组织来源的干细胞中过表达的研究
目的 构建慢病毒-血管内皮生长因子165(VEGF165)载体并转染脂肪组织来源干细胞(ADSCs)以得到用于基因治疗的种子细胞.方法 通过聚合酶链反应(PCR)方法将EHS10016895048 5313912克隆突变成VEGF165(NM_001025368)转录本后采用三质粒系统(pGC-FU、pHelp1.0和pHelp2.0)进行包装慢病毒.通过定时定量PCR测定滴度后使用慢病毒-VEGF165转染ADSCs.免疫荧光、Western blot鉴定VEGF165在ADSCs中的表达.结果 PCR(535 bp)、DNA测序、Western blot(49×103)检测证明成功构建的载体为VEGF165与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体.实时定量PCR确定病毒滴度达到2×108TU/ml.慢病毒-VEGF165载体转染ADSCs后经免疫荧光验证约95%ADSCs可表达VEGF165同时Western blot也证明基因稳定表达.结论 通过获得稳定表达VEGF165的ADSCs,为血管性疾病特别是糖尿病性勃起障碍的治疗奠定了基础.
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子修饰MB49制备膀胱肿瘤疫苗及应用
目的 链亲和素标记的细胞因子锚定MB49细胞和成瘤小鼠膀胱,探讨锚定率、锚定量与时间的关系.方法 MB49细胞与链亲和素标记的绿色荧光蛋白(SA-GFP)体外锚定后,在荧光显微镜下观察;建立小鼠原位表浅膀胱癌模型后,实验组膀胱灌注锚定链亲和素标记的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(SA-GM-CSF);对照组小鼠不锚定直接膀胱灌注SA-GM-CSF.取膀胱作冰冻切片免疫组织化学分析.结果 MB49细胞基本被SA-GFP锚定,锚定率为98.78%;冰冻切片免疫组织化学显示实验组膀胱黏膜有阳性显色,以第1天浓,以后逐日变淡,至第7天仍可见较明显染色;对照组膀胱黏膜无阳性显色.结论 链亲和素标记的细胞因子可以锚定在细胞表面,且锚定效率高、保留时间长.
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DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响
目的 观察DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响.方法 使用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,使用甲基化酶(M.SssI、M.HpaII、M.HhaI)诱导Ki-67启动子DNA片段发生不同程度的甲基化,将甲基化的启动子片段插入pGL3-Basic载体得到甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒,并以非甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒作为对照,分别转染正常细胞(HL-7702、HUVEC)和肿瘤细胞(A549、EJ、Kert-3、Hela和SGC-7901),使用双荧光素酶报告基因检测系统测定甲基化的Ki-67启动子在这些细胞中的转录活性.结果 甲基化Ki-67启动子的转录活性均有不同程度的下降,其下降幅度依次为M.SssI处理组＞M.HhaI处理组＞M.HpsII处理组,其中M.SssI处理组启动子的转录活性几乎完全消失.结论 Ki-67启动子的甲基化抑制了其转录活性,抑制程度与DNA甲基化程度和甲基化位置有关.
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体外RNA干扰抑制骨桥蛋白表达对肾癌细胞生长和侵袭的影响
目的 观察体外RNA干扰(RNAi)抑制骨桥蛋白(OPN)表达对人肾癌细胞生长和侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 构建短发夹RNA(shRNA)重组质粒,转染肾癌ACHN细胞株,筛选获得稳定转染的细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测OPN mRNA表达水平;Western blot检测OPN、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达;流式细胞术、噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell实验分别检测细胞周期变化、细胞生长和和侵袭能力.结果 与未转染的ACHN细胞(4.16±0.12)比较,转染重组质粒后的细胞(ACHN/OPN)中OPN mRNA的表达量(1.68±0.15)下降了59.6%(P＜0.05),而OPN、MMP-2和MMP-9蛋白的表达量(51.15±6.03、89.26±5.15、167.85±13.42)较转染前(214.01±12.08、187.53±9.56、233.12±15.78)分别下降了76.1%、52.4%和28.0%(P＜0.05),细胞分裂出现S期停滞,凋亡二倍体数量增加,细胞的生长、迁移和侵袭能力受到明显抑制.结论 OPN在人肾癌细胞的生长和侵袭过程中发挥重要作用,这些过程与MMP-2和MMP-9的表达密切相关.
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FK506对干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α诱导间充质干细胞免疫抑制的影响
目的 观察用免疫抑制剂FK506对干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的间充质干细胞(MSCs)免疫抑制功能的影响及其作用机制.方法 将经过不同炎症因子预处理的小鼠MSCs与脾细胞共培养,并在FK506作用72 h后,以噻唑蓝(MTT)比色法检测脾细胞增殖;以流式细胞术检测脾细胞凋亡;以实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测MSCs发挥免疫抑制作用的主要分子,观察FK506对其影响.结果 IFN-γ和TNF-α联合预处理后的MSCs可以显著抑制脾细胞增殖,促进脾细胞凋亡,凋亡率可达(53.5±2.5)%,明显高于IFN-γ或TNF-α预处理的MSCs组以及对照组(P＜0.05),并且IFN-γ和TNF-α仅可以显著上调MSCs中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,MSCs的免疫抑制作用可以被iNOS特异性抑制剂1400W所拮抗;但FK506则可以抑制MSCs中iNOS的表达,使MSCs对脾细胞增殖的抑制作用显著降低,脾细胞凋亡减少,凋亡率降至(44.3±3.2)%(P＜0.05).结论 FK506通过抑制IFN-γ和TNF-α联合预处理的MSCs中iNOS表达从而抑制其免疫抑制功能.
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草酸钙尿石症患者肾脏组织中VKORC1基因剪接异构体的表达和鉴定
目的 对草酸钙尿石症患者肾脏组织中维生素K环氧化物还原酶亚单位1(VKORC1)剪接异构体进行分析.方法 收集草酸钙肾结石患者肾脏组织标本21例,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对肾脏组织中的VKORC1进行扩增,经过PCR产物纯化,通过直接测序和克隆测序的方法分析得到肾脏组织中VKORC1的剪接异构体.结果 应用RT-PCR的方法成功地在草酸钙尿石症患者肾脏组织中扩增出VKORC1,并且得到2个剪接异构体,3%琼脂糖凝胶电泳显示1条约500 bp的电泳条带(V1)和另1条约400 bp的电泳条带(V2),经过测序鉴定可见两者碱基相差110 bp,其余序列完全一致.结论 草酸钙尿石症患者肾脏组织中存在VKORC1的剪接异构体.
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膀胱癌细胞RT4和253J中转移相关蛋白的差异表达及意义
目的 检测转移相关蛋白上皮型钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)在膀胱癌细胞RT4和253J中的表达,从细胞黏附性和骨架蛋白角度探讨膀胱癌恶性进展的分子机制.方法 用Western blot法测定RT4和253J两种细胞中E-cadherin和Vimentin的表达差异,Millicell小室检测RT4和253J的体外侵袭能力,分析RT4和253J的细胞特性.结果 E-cadherin在RT4细胞中高表达、在253J细胞中低表达,而Vimentin在RT4细胞中表达缺失、在253J细胞中表达很高;Millicell证实253J细胞穿膜数较RT4细胞显著增多.结论 人膀胱癌细胞RT4和253J的E-cadherin、Vimentin表达及两种细胞的侵袭潜能差异无统计学意义,提示这两种蛋白的表达差异在促进或抑制膀胱癌的恶性进展中起重要作用.
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新型铁螯合剂CHGN2957对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察新型铁螯合剂CHGN2957对大鼠肾缺血再灌注损伤(I/R)急性期的保护作用.方法 选用雄性SD大鼠90只,随机分成5组(n=18):假手术组、CHGN2957高剂量组、低剂量组、溶剂组和阳性对照组.建成大鼠急性肾I/R模型.药物干预均从手术前2 d开始,直至术后12 d结束.观察大鼠死亡率、体质量变化,测定肾功能和肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽(GSH)还原酶活力和丙二醛(MDA)含量并进行肾组织病理切片观察.结果 术后第3天CHGN2957溶剂组的体质量(242.1±16.2)g、SOD活力(1.23±0.13)U/mg、GSH还原酶活力(336±15)U/L明显低于其他各组(P＜0.05),而血清尿素氮(62.3±3.1)mmol/L、血清肌酐(310.00±21.02)μmol/L、MDA含量(186.5±16.7)nmol/mg明显高于其他各组(P＜0.05).肾组织病理评分显示CHGN2957溶剂组的肾小管损伤明显重于其他各组(P＜0.05).结论 CHGN2957作为一种新型铁螯合剂,在大鼠急性肾I/R过程中能有效减轻大鼠肾I/R,并对肾起保护作用.
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bcl-2反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞株BIU87对顺铂的敏感性
目的 观察bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌顺铂(DDP)耐药细胞耐药性的逆转并增强其敏感性的作用.方法 以膀胱癌顺铂耐药细胞株BIU87/DDP为模型,用脂质体转染和电转染的方法,将bcl-2反义寡核苷酸(bcl-2-AODN)转染BIU87/DDP细胞,同时以转染bcl-2正义链(bel-2-SODN)及RPMI 1640作对照.采用DNA凝胶电泳检测转染后是否诱导细胞凋亡,应用免疫组织化学技术检测bcl-2蛋白表达变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2 mRNA表达水平的变化.噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞抑制率与药物半数抑制浓度(IC50).结果 转染AODN的细胞IC50值(20.400 ±2.590)mg/L,较未转染耐药细胞(66.000±4.637)mg/L,差异有统计学意义(P＜0.05);脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸12 h后,倒置显微镜下即可见BIU87/DDP有30%细胞出现变化(但不能分辨死亡或凋亡),DNA凝胶电泳出现明显的DNA梯带状条带,对照组无变化.采用电穿孔转染48 h后,细胞在倒置显微镜下的变化不明显,以顺铂10mg/L作用于转染细胞24 h,分别收集细胞检测.bcl-2蛋白表达降低;实验组BIU87/DDP+AODN细胞bcl-2 mRNA表达(0.72 ±0.07)与转染前(2.94±0.09)比较,mRNA表达率下降(P＜0.05).结论 bcl-2反义寡核苷酸可通过增加细胞的凋亡而一定程度地逆转膀胱癌细胞的顺铂耐药性,提高膀胱癌细胞对化学治疗药物的敏感性.
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前列腺增生症患者膀胱逼尿肌中转化生长因子-β1和结缔组织生长因子的表达及临床意义
目的 探讨良性前列腺增生症(BPH)患者逼尿肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测29例BPH患者膀胱逼尿肌标本中TGF-β1和CTGF的表达并检测平均吸光度(MA),依据各临床参数参考值进行分组比较.结果 所有标本均有不同程度的TGF-β1和CTGF表达.前列腺体积(PV)＞50 ml组与PV≤50 ml组患者逼尿肌中TGF-β1的表达差异无统计学意义(P＞0.05);而CTGF在PV＞50 ml组的表达量显著高于PV≤50 ml组(P＜0.01).TGF-β1和CTGF的表达量在移行区指数(TZI)＞0.65、残余尿量＞50 ml组患者逼尿肌中分别高于TZI≤0.65、残余尿量≤50 ml(P＜0.01),而与IPSS、Qmax和病程大小无明显相关(P＞0.05).Pearson积差相关分析可见TGF-β1与CTGF的表达呈正相关(r=0.761,P＜0.01).结论 逼尿肌中TGF-β1和CTGF的高表达与前列腺体积、移行区指数及残余尿量相关,提示这些临床参数可作为评估BPH患者膀胱逼尿肌纤维化程度的指标.
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TMSG-1在人前列腺癌细胞株与前列腺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1,亦称LASS2)在人不同转移潜能前列腺癌细胞株中与前列腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及细胞爬片免疫荧光组织化学方法,检测TMSG-1在人不同转移潜能前列腺癌细胞株低转移潜能(PC-3M-2134)和高转移潜能(PC-3M-IE8)中的表达.并采用免疫组织化学方法检测TMSG-1在人前列腺增生及前列腺癌组织中的表达,同时探讨其与临床病理特征之间的关系.结果 TMSG-1在PC-3M-284细胞株中的mRNA及蛋白表达(2.70±0.30、75.26±2.68)均明显高于在PC-3M-IE8细胞株中的表达(1.10±0.20、38.08±1.84),差异有统计学意义(P＜0.05).通过免疫组织化学观察表明TMSG-1在前列腺增生及前列腺癌组织中均有表达,但在前列腺增生中的阳性表达率(32/40)明显高于在前列腺癌中的阳性表达率(21/60).两者差异有统计学意义(P＜0.05).并且TMSG-1在前列腺癌组织中的表达与年龄、Gleason分级、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05),而与肿瘤的大小无明显相关.结论 TMSG-1在低转移潜能前列腺癌细胞株中的mRNA及蛋白表达明显高于在高转移潜能前列腺癌细胞株中的表达,证明它是一种肿瘤转移抑制基因.TMSG-1在人前列腺增生与前列腺癌组织中的表达之间差异有统计学意义,并且TMSG-1在前列腺癌中的表达与年龄、Gleason分级、淋巴结转移及TNM分期密切相关.
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碱性成纤维细胞生长因子对精原细胞MAPK途径信号转导的影响
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠精原细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径分子Erk1和Erk2磷酸化的影响.方法 分离并培养大鼠精原细胞;5、10、20、40 ng/L4个浓度的bFGF刺激培养的精原细胞;采用Western blot方法检测Erk1/2分子的磷酸化.结果 成功获得体外培养的精原细胞,bFGF刺激后精原细胞Erk1/2分子的磷酸化水平显著增强(条带吸光度相对值分别依次为:13.72±1.54、17.05±1.35、22.93±1.79、27.83±1.48,P＜0.05),bFGF浓度与Erk1/2磷酸化水平呈正相关.结论 bFGF增强Erk1/2分子的磷酸化水平可能是bFGF促进精原细胞增殖和提高大鼠生精能力的重要分子机制.
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加兰肽等对人嗜铬细胞瘤细胞儿茶酚胺分泌功能的影响
目的 探讨糖皮质激素、加兰肽(GAL)等对于嗜铬细胞瘤细胞分泌儿茶酚胺功能的影响及其作用机制.方法 培养人原代嗜铬细胞瘤细胞28例,功能组16例,功能隐匿组12例.用不同浓度地塞米松、GAL、转化生长因子(TGF)、U0126、GF109203X作用后检测细胞培养基中儿茶酚胺水平,并用噻唑蓝(MTT)比色法观察嗜铬细胞瘤细胞的生长曲线变化.结果 地塞米松可导致原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞儿茶酚胺分泌显著增加,而且其增加是与剂量相关的,培养第3天时0.1 μmol/L浓度的地塞米松使去甲肾上腺素由(20.10 ±7.25)ng/105增加至(42.07±9.41)ng/105,肾上腺素由(22.12±5.78)ng/105增加至(42.12±9.78)ng/105,而对增殖没有影响.GAL可使儿茶酚胺分泌增加,0.01 μmol/L浓度的GAL使去甲肾上腺素增加至(33.24±7.17)ng/105,肾上腺素增加至(33.09±8.05)ng/105,较地塞米松作用弱,同时增强细胞增殖,这种作用可以被U0126或GF109203X阻断.TGF增强细胞增殖但抑制儿茶酚胺分泌.结论 地塞米松、GAL可以刺激人嗜铬细胞瘤细胞合成、分泌儿茶酚胺,受体GALR2可能是GAL上述生理作用机制的主要介导途径.GAL及受体GALR2缺乏可能是部分嗜铬细胞瘤功能隐匿的主要原因.
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电穿孔法介导雄激素受体基因沉默抑制裸鼠膀胱癌移植瘤生长的研究
目的 观察电穿孔法转染靶向雄激素受体(AR)的小干扰RNA(siRNA)对裸鼠人膀胱癌移植瘤生长的影响.方法 建立人膀胱癌细胞124的荷瘤裸鼠模型,于肿瘤直径0.5 cm大小时,瘤体接受AR-siRNA的电转染治疗,转染无效序列siRNA为阴性对照组,瘤体未受电穿击为空白对照组.观察裸鼠肿瘤生长;4周后处死,绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡.结果 电转染AR-siRNA后瘤体组织AR基因的表达显著被抑制,也能明显抑制裸鼠移植瘤的生长;TUNEL检测凋亡率为(13.1±6.9)%,显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 电穿孔法靶向AR的siRNA可有效阻断种植瘤内AR表达,阻断雄激素受体途经信号传导,进而诱导细胞凋亡,能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的生长.
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高强度聚焦超声对淋巴管的生物学效应
目的 用高强度聚焦超声(HIFU)辐照大鼠淋巴管,观察产生的生物学变化,探讨HIFU治疗乳糜尿的可行性.方法 将SD大鼠32只随机均分为4组;用高强度聚焦超声辐照大鼠右侧腹股沟区,左侧对照;分别于辐照后24 h、72 h、7 d、30 d观察辐照区及周围组织肉眼及病理改变.结果 HIFU辐照后,大鼠腹股沟淋巴管24 h及72h组表现为管腔变形、破裂等急性损伤改变,7 d及30 d组表现为淋巴管数量减少、管腔闭塞、管周瘢痕形成;各时间组实验侧淋巴管密度(LVD)比自身对照侧明显减少:24 h组为1.100±0.428比1.450±0.411(P＜0.01);72 h组为0.725±0.238比1.575±0.362(P＜0.01);7 d组为0.375±0.198比1.575±0.249(P＜0.01);30 d组为0.175±0.198比1.500±0.400(P＜0.01);辐照后,随时间延长,实验侧LVD明显减少(F=16.669,P＜0.01);辐照后7 d,LVD减少不明显(P＞0.05).结论 高强度聚焦超声可靶向损伤淋巴管,终使管腔粘连闭塞,因此高强度聚焦超声治疗乳糜尿有可行性.
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大鼠肾冷缺血再灌注损伤模型的建立
目的 建立大鼠肾冷缺血再灌注损伤(IRI)的模型.方法 封闭群SD大鼠24只,随机分为2组(n=12):A组(对照组),B组(实验组).A组切除右肾并游离左肾蒂,60 min后关闭腹腔切口.B组采用冷缺血再灌注模型,主要步骤:(1)冷灌注:右肾动脉插管对左肾原位灌注.通过右肾静脉插管将灌注液引流出体外,完成冷灌注后切除右肾,阻断左肾蒂.(2)冷缺血保存:将已充分游离的左肾牵至腹腔外,在自制保存袋中冷保存.(3)再灌注:60min后,去除保存袋,开放血流,再灌注左肾,左肾复位,缝合切口;2组大鼠均在术后24 h再次手术切除左.肾.肾组织进行光镜、电镜形态学检查,检测肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,术前与术后24 h取血标本进行测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)评估肾功能.结果 (1)形态学检查(光镜与电镜超微结构):A组肾脏组织形态结构正常,B组损伤表现明显;(2)A组手术前后比较血浆BUN、Cr测定值差异均无统计学意义(P＞0.05).IR后的B组均高于术前,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)IRI后A组肾组织匀浆SOD活力高于B组(P＜0.05),A组肾组织匀浆MDA含量测定值低于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 建立的模型要求条件简单、易行,可用于肾移植冷缺血再灌注损伤相关的研究;
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尿液中膀胱癌特征性物质的研究进展
膀胱癌早期诊断并根据其生物学特点采取有效的治疗方法,治疗后严密随访提高患者的总体生存率,一直是泌尿外科研究的重要课题.膀胱镜检查是诊断和治疗后随访的主要手段,被视为膀胱肿瘤诊断的金标准,但其是有创检查,往往会带给患者痛苦和恐惧,还可能导致尿路感染,这使膀胱镜检查的临床应用受到限制.因此,人们不断努力寻找对膀胱癌理想的早期诊断和监测的方法--敏感性高,特异性强,且操作简便,费用低廉,并且在形成肉眼可见瘤体之前作出客观诊断的非侵袭性方法.所以,无创性的尿液检查替代膀胱镜诊断膀胱癌、检测复发及判断预后,一直是研究的热点.现就近年来对检测膀胱癌患者尿液中微量元素、代谢化合物、肿瘤标记物等特征性物质的研究作评述.
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膀胱肿瘤实验研究现状及展望
膀胱肿瘤的发病率居全球范围内所有恶性肿瘤的第9位,在我国也是泌尿外科常见的肿瘤之一.95%以上的膀胱肿瘤来源于移行上皮,具有多发和容易复发的特点,且复发的肿瘤有恶性程度增加的趋势.因此,认识膀胱肿瘤发生进展的分子机制,探索早期诊断及有效治疗的方法一直是泌尿外科领域研究的重点.近年来,随着高通量基因组学及蛋白组学等学科的迅速发展,膀胱肿瘤各方面实验研究也取得了新的进展.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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