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肝再生磷酸酶-3在胃癌中的研究进展
胃癌是世界范围内常见肿瘤之一,因胃癌死亡的患者数占据肿瘤相关死因的第3位.肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regeneratingliver 3,PRL-3)作为一个新近发现的蛋白酪氨酸磷酸酶,近年来研究发现其在胃癌组织中高表达,在胃癌淋巴转移、腹膜转移等发挥重要作用,与胃癌患者预后负相关.其后,越来越多的研究关注其在胃癌发生、发展中的调控机制,以期阐明PRL-3在胃癌发生、发展中的具体调节通路及影响因素.尽管随着研究的不断深入,对于PRL-3在胃癌中的作用机制得到一部分阐释,但对于PRL-3在促进胃癌淋巴转移、腹膜转移等恶性进展及复发的机制仍然不是很清楚,本文即对近年来PRL-3的相关研究进展作一综述.
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肝再生磷酸酶-3与恶性肿瘤关系的研究进展
肝再生磷酸酶-3（PRL-3）属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族，它发挥作用的方式是通过调节酪氨酸残基的磷酸化状态实现对蛋白质活性的调控。已有的研究表明，P R L-3与人多种肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关，可能参与调节肿瘤细胞的骨架重建、细胞黏附性和上皮间充质化的过程，这可能成为治疗多种类型肿瘤的药物靶点。本文对PRL-3与肿瘤关系的研究现状和进展做一综述。
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慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响
目的 观察慢病毒介导的shRNA沉默肝再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组.将携带PRL-3 shRNA的慢病毒载体转染结肠癌SW480细胞,建立稳定沉默PRL-3的细胞株,real-time PCR检测转染后PRL-3 mRNA的相对表达水平.采用MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用Transwell侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化.结果 稳定沉默PRL-3的细胞株构建成功,转染组PRL-3 mRNA的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组(P<0.05),空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义.PRL-3 shRNA转染SW480细胞72 h后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染120 h时明显(P<0.05).转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降(P<0.05).转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加(P<0.05).结论 结肠癌SW480细胞转染PRL-3 shRNA可减少PRL-3的表达,有效抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3可能成为治疗结肠癌的靶基因.
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肝再生磷酸酶-3与恶性肿瘤转移关系的研究进展
浸润和转移是恶性肿瘤重要的生物学特性之一,是导致肿瘤患者死亡的主要原因.目前已知转移的肿瘤细胞通常会发生一系列生理生化的改变,包括细胞骨架的重排、运动能力的提高等[1].
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肝再生磷酸酶-3小干扰RNA对异位子宫内膜间质细胞骨架的影响
目的 探讨肝再生磷酸酶-3小干扰RNA( PRL-3 si RNA)对异位子宫内膜间质细胞骨架的影响.方法 选择2009年11月至2010年5月在浙江大学医学院附属妇产科医院行卵巢内异囊肿剔除术的子宫内膜异位症患者32例,原代培养异位子宫内膜间质细胞并鉴定,运用si RNA技术干扰沉默PRL-3基因,Western blot检测PRL-3蛋白表达,激光扫描共聚焦显微镜观察PRL-3 si RNA对异位子宫内膜间质细胞骨架的影响.结果 经PRL-3 si RNA干扰后PRL-3蛋白表达明显下降,与对照组相比较,实验组异位子宫内膜间质细胞中应力纤维数目明显增多、变粗而清晰,而细胞的丝状、板状伪足却明显减少.结论 PRL-3 si RNA能有效沉默PRL-3,并且使异位子宫内膜间质细胞骨架构型显著改变,从而导致异位子宫内膜细胞迁移能力下降.
关键词： 子宫内膜异位症 肝再生磷酸酶-3 小干扰RNA 激光扫描共聚焦显微镜 细胞骨架 -
人肝内胆管癌细胞PRL-3的表达与侵袭转移研究
目的:探讨PRL-3在人肝内胆管癌侵袭转移中的作用.方法:利用小RNA技术干扰肝内胆管癌细胞株PRL-3表达,并采用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验评价PRL-3对肝内胆管癌细胞侵袭转移能力的影响.结果:RT-PCR和Western blot结果均显示转染PRL-3特异性siRNA-2组PRL-3表达明显降低(P＜0.05).PRL-3 siRNA-2组在划痕培养24h后划痕区域宽度占初始划痕区域宽度的百分比为(62.12±6.28)％,阴性对照组为(23.88±2.55)％,空白对照HCCC-9810组为(21.20±6.07)％.PRL-3siRNA-2组细胞的划痕两端距离相比明显较宽,分别与阴性对照组细胞和空白对照HCCC-9810组细胞相比均有统计学意义(P＜0.05),后两者无显著性差异(P＞0.05).Transwell体外侵袭实验结果显示,PRL-3 SiRNA-2组细胞侵袭能力明显减弱,穿膜细胞数为(19.40±2.30)个/HP,明显少于阴性对照组(64.00±2.73)个/HP和正常HCCC-9810组(67.20±3.l1)个/HP,差异有显著性(P＜0.05)；正常HCCC-9810组和阴性对照组无明显差异(P＞0.05).结论:PRL-3特异性siRNA能够抑制肝内胆管癌细胞HC-CC-9810中内源性PRL-3的表达,并可以明显抑制肝内胆管癌细胞的迁移侵袭能力.
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PRL-3在肿瘤中作用机制的研究进展
肝再生磷酸酶-3(PRL-3)是一种与肿瘤转移相关的酪氨酸磷酸酶,在多种肿瘤如急性髓性白血病、结直肠癌、乳腺癌和非小细胞肺癌中高表达,具有促进细胞增殖、迁移和侵袭的作用.近年来,随着研究手段的不断深入,对PRL-3在肿瘤中的作用机制的研究逐渐增多.研究发现PRL-3在不同肿瘤中促进肿瘤发生及转移的作用通路不尽相同,在肿瘤的靶向治疗中有广阔的临床应用前景.本文就PRL-3在肿瘤中作用机制的相关研究进展作一简要综述.
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肿瘤转移相关分子PRL-3:结构、功能及其作为抗肿瘤治疗药物靶点的可能性
肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)是肝再生磷酸酶家族中的一员,因在肿瘤转移过程中的突出作用而备受关注.本文从PRL-3与肿瘤发生发展的关系出发,结合作者的科研工作实践,对PRL-3在肿瘤转移中的作用及其机制的研究现状进行综述,并对其作为肿瘤治疗和药物作用靶点的可能性进行展望.
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肝再生磷酸酶-3相关信号传导通路研究进展
肝再生磷酸酶-3(PRL-3)作为蛋白酪氨酸磷酸酶中的一员,目前发现其在结直肠癌、胃癌、卵巢癌、黑恶色素瘤等肿瘤中高表达,并与肿瘤的发生、发展密切相关.随着PRL-3在肿瘤特别是转移性肿瘤中的作用被明确,针对PRL-3调控机制的研究也越来越多,文章即对近年来与PRL-3相关的整合素、PTEN/PI3K/Akt、Rho-GTP、KCNN4等信号传导通路进行综述.
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肝再生磷酸酶-3与肿瘤
肝再生磷酸酶-3(PRL-3)是新发现的与肿瘤转移相关的蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP),较多证据表明,PRL-3在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌等表达明显升高,其表达异常与肿瘤的浸润和转移密切相关,可能成为抗肿瘤浸润和肿瘤治疗的一个新靶点.
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原发性肝癌血管内皮细胞的分离及肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达
目的 本研究通过分离纯化肝癌血管内皮细胞,检测在肝癌血管内皮细胞中肝再生磷酸酶3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)的表达,以探讨PRL-3与肿瘤血管生成和侵袭的关系.方法 收集山东大学附属省立医院肝胆外科行手术切除的肝癌组织和癌旁组织,采用CD31单抗标记的免疫磁珠分离并纯化血管内皮细胞.检测血管内皮细胞中PRL-3、基质金属酶蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP) MMP-2和MMP-9的表达.结果 分选所获得的肝癌血管内皮细胞的纯度在90％以上.PRL-3在肝癌血管内皮细胞mRNA水平(PRL-3 vs β-actin:11.50±2.95 vs 1.76±1.04,P＜0.001)和蛋白水平的表达均明显升高.结论 PRL-3在肝癌血管生成和侵袭中起重要作用,有望成为新的肿瘤治疗靶点.
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肝再生磷酸酶-1和肝再生磷酸酶-3在膀胱尿路上皮癌细胞株的表达
目的 观察肝再生磷酸酶(PRL)-1和PRL-3在膀胱尿路上皮癌细胞株中的表达及其在膀胱癌侵袭转移中的作用.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学法检测PRL-1和PRL-3在BIU-87和T24细胞株种的表达,采用博伊登室(Boyden chamber)体外侵袭性实验计算BIU-87和T24细胞株穿膜情况.结果 BIU-87和T24细胞株中PRL-1 mRNA的相对表达量分别为0.772±0.037和0.304±0.033,差异有统计学意义(t=20.930,P=0.000);PRL-3 mRNA的相对表达量分别为0.828±0.039和0.298±0.038,差异有统计学意义(=21.494,P=0.000).PRL-1mRNA和PRL-3 mRNA在BIU-87和T24细胞株中的表达均呈正相关(r=0.941、0.997,P=0.017、0.000).BIU-87和T24细胞株中PRL-1蛋白相对表达量分别为7.000±1.870和4.400±1.140,差异有统计学意义(t=2.654,P=0.029);PRL-3蛋白分别为8.200±0.836和5.200±1.303,差异有统计学意义(t =4.330,P=0.003).PRL-1和PRL-3在BIU-87和T24细胞株中的蛋白表达均呈正相关(r=0.958、0.942,P=0.010、0.017).Boyden chamber体外侵袭实验显示,BIU-87细胞株穿越Matrigel膜的细胞数为(148.800±6.418)个,T24细胞株为(102.200±6.340)个,差异有统计学意义(t=11.549,P=0.000).结论 PRL-1和PRL-3膀胱尿路上皮癌细胞株中呈高表达,这可能在膀胱尿路上皮癌侵袭转移中起重要作用.
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肝再生磷酸酶-3上调缝隙连接蛋白26诱导结肠癌LoVo细胞间质上皮化
目的 探讨在结肠癌肝转移的肿瘤微环境中肝再生磷酸酶-3(PRL-3)对缝隙连接蛋白26(Cx26)的影响及促进结肠癌细胞间质上皮化(MET)的机制.方法 将稳定转染PRL-3的LoVo细胞(LoVo-P)、对照组(LoVo-C)分别和肝细胞(L02)模拟肿瘤微环境进行体外共培养0～3d后,Western blot检测Cx26、上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和间质标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)的蛋白表达.Transwell侵袭小室法检测LoVo细胞侵袭能力变化.采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测20例Ⅳ期结肠癌及肝转移灶中Cx26和E-cadherin的表达.结果Western blot检测结果显示,LoVo-P细胞经共培养后Cx26的蛋白表达分别上升31.03％、58.39％、93.95％(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达明显上升,N-cadherin蛋白表达受到抑制(P＜0.05),对照组中蛋白表达变化不明显.经过共培养后LoVo-P细胞侵袭能力明显降低(P＜0.05).免疫组织化学结果显示,Cx26和E-cadherin在肝转移灶中的阳性表达率(65％和75％)高于原发灶(40％和45％),差异有统计学意义(P＜0.05).在结肠癌肝转移灶中Cx26和E-cadherin呈正相关(r=0.545,P＜0.05).结论 在共培养环境中PRL-3能通过上调Cx26诱导LoVo细胞MET并降低其侵袭能力.
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肝再生磷酸酶-3激活核因子-κB信号通路调控结肠癌LoVo细胞血管内皮生长因子的表达
目的 探讨在结肠癌肝转移肿瘤微环境中肝再生磷酸酶-3(PRL-3)对调控结肠癌LoVo细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其机制.方法 将稳定表达PRL-3的LoVo细胞(LoVo-P)、对照组(LoVo-C)与人正常肝细胞(L02)模拟肿瘤微环境进行体外共培养0、24、48、72 h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠癌细胞VEGF表达水平;并加入核因子-κB(NF-κB)抑制剂BAY 11-7082(10μmoL/L)后检测VEGF表达及其培养基上清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成能力的影响.结果RT-PCR结果显示,共培养后LoVo-P组VEGF在mRNA水平表达明显升高(P＜0.01),LoVo-C组变化不明显;ELISA检测结果显示,LoVo-P组VEGF蛋白升高值为(779±160)ng/L,LoVo-C组为(173±88)ng/L,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测结果显示,LoVo-P组共培养24、48、72 h VEGF表达分别升高1.9、2.2、3.5倍;共培养后LoVo-P细胞IκB激酶(IKK)磷酸化水平明显增加,加入NF-κB抑制剂BAY1l-7082后,IKK磷酸化水平降低,VEGF表达降低(P＜0.01).HUVEC管腔形成实验显示,共培养后培养基上清能增加HUVEC的成环性,加入NF-κB抑制剂BAY11-7082后,HUVEC的成环性减弱(P＜0.05).结论 在与肝细胞共培养的体外模拟肿瘤微环境中,PRL-3能够激活NF-κB通路上调结肠癌LoVo细胞VEGF的表达.
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肝再生磷酸酶-3促进结肠癌细胞分泌趋化因子26对肿瘤相关性巨噬细胞的趋化作用
目的 观察肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞LoVo分泌趋化因子26(CCL26),对肿瘤相关性巨噬细胞的趋化、聚集作用.方法 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CCL26 mRNA水平表达差异;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CCL26蛋白水平表达差异,检测添加核因子κB(NF-κB)抑制剂BAY 11-7082(5、10、15 mol/L)后,CCL26蛋白水平;Transwell迁移实验检测LoVo-P、LoVo-C与TAM共培养24h后,对TAM迁移作用.结果 RT-qPCR检测结果显示,LoVo-P对比LoVo-C,CCL26升高(46±5)倍,ELISA检测CCL26蛋白水平,LoVo-P为(91±5) ng/L,LoVo-C为(61 ±3) ng/L,LoVo-P加入核因子(NF)-κB抑制剂BAY 11-7082(5、10、15 mol/L)后,CCL26蛋白水平呈浓度梯度降低(P＜0.01);Transwell迁移实验结果显示,LoVo-P对比LoVo-C明显对TAM有趋化作用,加入NF-κB抑制剂BAY 11-7082后,迁移作用明显减弱,不同浓度的CCL26(1、10、100 μg/L),能对TAM的趋化作用呈浓度梯度增高(P＜0.01).结论 PRL-3能促进结肠癌LoVo细胞分泌CCL26,通过CCL26可以诱导TAM趋化、聚集.
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肝再生磷酸酶-3上调白细胞介素-6和白细胞介素-8促进结肠癌侵袭的机制研究
目的 观察细胞因子白细胞介素(IL)-6和IL-8在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)诱导结肠癌细胞LoVo的侵袭和转移中的作用机制.方法 将实验分别空白对照组和实验转染组.酶联免疫吸附试验(ELISA)以及Western blot分别检测IL-6和IL-8蛋白的表达变化,IL-6和IL-8中和抗体(5 mg/L)处理细胞后,Transwell检测LoVo细胞增殖和侵袭的能力的变化.结果 将成功合成的PRL-3真核表达载体并转染入LoVo细胞中,ELISA结果提示结肠癌细胞稳定表达PRL-3后,PRL-3可明显促进结肠癌细胞分泌IL-6[(125±11) ng/L比(176±14) ng/L]和IL-8[(157±12) ng/L比(214 ±15) ng/L].Western blot结果提示PRL-3使IL-6的表达升高了3.2倍,IL-8的表达升高2.5倍(P＜0.05).分别使用IL-6和IL-8中和抗体可以明显抑制PLR-3的促肿瘤侵袭效应[(78.0±3.5)个比(45.8±4.5)个,(78.0±3.5)个比(35.7±6.5)个].结论 PRL-3可以有效诱导结肠癌LoVo细胞分泌IL-6和IL-8,从而诱导结肠癌细胞迁移和侵袭.
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肝再生磷酸酶-3和E-钙黏蛋白参与胃癌淋巴结转移过程
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)与胃癌淋巴结转移状态、患者生存预后的关系.方法 应用免疫组织化学技术[链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法]检测53例胃癌组织和30例胃正常组织中PRL-3和E-cadherin的表达,分析两者与临床病理特征的关系.结果 PRL-3在正常胃黏膜组织中没有表达,在胃癌组织中PRL-3的阳性表达率为45.3％(24/53).E-cadherin存在于大多数腺细胞的胞质膜,在胃癌组织中E-cadherin的阳性表达率为54.7％(29/53).PRL-3的表达与淋巴结转移(P＜0.01)、Goseki分级(P＜0.01)、Borrmann分类(P＜0.01)和幽门螺旋杆菌感染(P＜0.05)明显相关.E-cadherin的表达与淋巴结转移(P＜0.01)、Borrmann分类(P＜0.01)和幽门螺旋杆菌感染(P＜0.01)明显相关.Lauren's分型、PRL-3表达和E-cadherin表达是影响胃癌患者生存期的独立影响因素.结论 PRL-3和E-cadherin的表达均与淋巴结转移状态密切相关,并且两种蛋白均为影响胃癌患者生存期的独立影响因素.
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肝再生磷酸酶-3诱导肿瘤相关性巨噬细胞分泌白细胞介素-6促进结肠癌细胞转移
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRLd)在结肠癌微环境中通过肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)促进结肠癌细胞转移的机制.方法 将TAMs与稳转染PRL-3的结肠癌Lovo细胞(Lovo-P)进行体外共培养的方式,再通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)筛选出TAMs中上调的细胞因子.Western blot检测细胞因子蛋白水平.免疫荧光法检测结肠癌患者肿瘤切片中相关TAMs表达,Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线.结果 Real-time PCR检测结果显示,TAMs与Lovo-P细胞共培养比与Lovo-C细胞共培养后白细胞介素(IL)-6 mRNA表达明显升高(8.3±2.2)倍.Western blot检测结果显示TAMs与Lovo-P细胞共培养后IL-6表达上调180％.在共培养体系中预处理IL-6中和抗体(5mg/L及10 mg/L)后,Lovo-P细胞侵袭性下降[(220±13)个比(132±12)个比(83±7)个].免疫荧光检测结果显示结肠癌患者癌灶处肿瘤切片中TAMs与IL-6荧光重合,分布于肿瘤间质中,并且Ⅰ期患者IL-6阳性TAMs数量要少于Ⅳ期患者[(24±4)个比(56±9)个].生存曲线分析发现IL-6阳性且TAMs＞ 20个的患者生存期明显短于IL-6阳性且TAMs≤20个患者(27.3个月比12.2个月).结论 PRL-3能够通过诱导TAMs分泌IL-6,促进结肠癌细胞转移,并影响患者的预后和生存.
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肝再生磷酸酶-3和微小RNA17-92家族成员在结肠癌细胞中异常表达的意义
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)和微小RNA17-92 (miR-17-92)家族成员在结肠癌中异常表达的意义.方法 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo-PRL-3和LoVo-VC,用MicroRNA芯片筛查表达异常的促癌microRNA,从中选取miR-17-92家族成员miR-17、miR-19a行荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证.在LoVo-PRL-3细胞中对STAT3信号传导与转录激活因子-3(STAT3)进行RNA干扰,检测miR-17、miR-19a的表达,在稳转细胞株中转染miR-17、miR-19a或对其进行敲除,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Tanswell试验对细胞增殖侵袭能力的变化进行研究.在13例患者结肠癌原发灶、转移灶及癌旁正常组织中行免疫组织化学及qRT-PCR检测PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达.结果 在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-17、miR-19a的表达明显上调(P＜0.05),干扰STAT3可以抑制miR-17、miR-19a的表达.在LoVo-VC细胞中过表达miR-17、miR-19a促进了细胞的增殖(P＜0.05及P＜0.01)和侵袭(P＜0.01),而在LoVo-PRL-3细胞中敲除miR-17、miR-19a抑制了细胞的增殖侵袭(P＜0.05).在结肠癌组织中PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达呈正相关.结论 PRL-3通过上调miR-17、miR-19a的表达在结肠癌细胞增殖侵袭中起到促进作用.
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肝再生磷酸酶-3-信号传导和转录激活子3-微小RNA21信号通路促进结肠癌细胞增殖侵袭的研究
目的 观察肝再生磷酸酶-3-信号传导和转录激活子3-微小RNA21(PRL-3-STAT3miR-21)信号通路对结肠癌细胞增殖侵袭的作用.方法 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo-PRL-3和LoVo-VC,用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测稳转细胞株中miR-21的表达并在瞬时转染PRL-3的SW480及CaCO2细胞中进行验证.用Western blot法对PRL-3调控STAT3的表达进行检测,在LoVo-PRL-3细胞中对STAT3进行RNA干扰,检测miR-21的表达,在稳转细胞株中转染miR-21或对其进行敲除,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验对细胞的增殖侵袭能力的变化进行研究.结果 LoVo-PRL-3细胞在72、96 h的增殖能力以及在Transwell实验24 h后的侵袭能力要强于对照组LoVo-VC细胞(P＜0.01).在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中pSTAT3、miR-21的表达明显上调,干扰STAT3可以抑制miR-21的表达(P＜0.05).在LoVo-VC细胞中过表达miR-21促进了细胞的增殖侵袭(P＜0.01),而在LoVo-PRL-3细胞中敲除miR-21抑制了细胞的增殖侵袭(P＜0.05).结论 PRL-3-STAT3-miR-21信号通路在结肠癌细胞增殖侵袭中起促进作用.
关键词： 肝再生磷酸酶-3 信号传导和转录激活子3 微小RNA21
