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人肺动脉平滑肌细胞中精氨酸酶Ⅱ与微小RNA-17的相互作用
背景：已有研究证实 microRNA-17-92簇在肺动脉高压中发挥着重要作用，精氨酸酶Ⅱ又参与低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖，而人肺动脉平滑肌细胞中微小 RNA-17与精氨酸酶Ⅱ之间的相互作用尚未见研究报道。
目的：分析人肺动脉平滑肌细胞中，微小RNA-17与精氨酸酶Ⅱ的关系及其相互作用机制。
方法：选用4-8代的人肺动脉平滑肌细胞，分别给予转染微小RNA-17的抑制剂、增强剂、精氨酸酶Ⅱ小干扰RNA等处理，分别在常氧(体积分数21%O 2)及低氧(体积分数1%O 2)条件下培养。提取RNA和微小RNA，采用实时定量PCR法检测各组平滑肌细胞中微小RNA-17和精氨酸酶ⅡmRNA的表达，提取蛋白，采用Western blot法比较各组细胞中精氨酸酶Ⅱ等蛋白水平的表达。
结果与结论：低氧下人肺动脉平滑肌细胞中微小RNA-17及精氨酸酶Ⅱ的表达均明显增加，抑制微小RNA-17的表达可阻止低氧诱导的精氨酸酶Ⅱ的表达增加，微小 RNA-17的过表达可使精氨酸酶Ⅱ表达上调，精氨酸酶Ⅱ基因敲除后，低氧诱导的微小 RNA-17的表达受到抑制。提示人肺动脉平滑肌细胞中，精氨酸酶Ⅱ是微小RNA-17的一个新的靶基因，而且精氨酸酶Ⅱ可以反馈调节微小RNA-17的表达。 -
前列腺癌组织中具有潜在生物标记物特性的miRNA及其靶基因生物学功能、信号通路分析
目的 筛选前列腺癌组织中具有潜在生物标记物特征的微小RNA(miRNA),并分析其靶基因的生物学功能及信号通路.方法 采用癌症和肿瘤基因图谱计划(TCGA)数据库下载前列腺癌相关数据集,分析前列腺癌组织与癌旁组织miRNA的表达情况,筛选差异表达miRNA,采用Kaplan-Meier生存曲线分析前列腺癌患者的生存情况,筛选出具有潜在生物标记物特性(高表达、预后差)的miRNA.采用生物信息学在线网站预测有潜在生物标记物特性miRNA的靶基因,进行基因本体(GO)富集分析和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,分析有潜在生物标记物特性miRNA的靶基因主要参与的生物学功能及肿瘤相关通路.结果 前列腺癌组织、癌旁组织共159个差异表达miRNA,其中表达下调59个、表达上调100个.生存分析结果显示,miR-17高表达的胰腺癌患者预后差.前列腺癌组织、癌旁组织miR-17的相对表达量分别为3852.66±1800.41、1581.22±391.71,二者比较,P<0.001.miR-17共138个靶基因,主要参与转录DNA模版化、蛋白质磷酸化、甲基胞嘧啶分解代谢、正调控凋亡过程、钠离子跨膜转运、胞质分裂等生物学过程;主要分子功能包括它们与蛋白激酶结合、核酸结合、金属离子结合、钙离子结合、蛋白质结合等.与miR-17靶基因有关的信号通路有雌激素信号通路、cAMP信号传导途径、趋化因子信号通路、HIF-1信号通路和癌症蛋白聚糖信号通路等13条信号通路.结论 miR-17可作为前列腺癌发生和预后评价的潜在生物标记物.
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miR-17调控自噬保护高糖环境下内皮细胞
目的:研究miR-17调控的自噬对高糖环境下内皮细胞氧化应激反应和凋亡的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),并加入5. 5mmol/L(对照组)和16. 7mmol/L(高糖组)的葡萄糖进行干预,通过检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量及自噬相关基因LC3、Beclin-l和SQSTM1的表达,比较各组HUVECs氧化应激和自噬水平的改变.再将HUVECs转染miR-17 mimics,并以自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预,非转染miR-17 mimics作为对照,观察miR-17对HUVECs自噬、氧化应激和凋亡的影响,并评价3-MA抑制HUVECs自噬后上述指标的改变.结果:与对照组比较,高糖组HUVECs的SOD活性下降,MDA水平增加,同时LC3II/I比例和Beclin-l上调,SQSTM1表达减少(P<0. 01).在高糖环境下,转染miR-17 mimics后的 HUVECs的LC3II/I比例和Beclin-1表达上调,SQSTM1水平降低,SOD活性部分恢复,MDA水平下降,细胞凋亡减少(P<0. 01).经3-MA干预后,HUVECs上述效应明显减弱(P<0. 01).结论:miR-17可上调内皮细胞的自噬水平,减轻高糖诱导的内皮细胞氧化应激反应,减少内皮细胞凋亡.
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肝再生磷酸酶-3和微小RNA17-92家族成员在结肠癌细胞中异常表达的意义
目的 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)和微小RNA17-92 (miR-17-92)家族成员在结肠癌中异常表达的意义.方法 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo-PRL-3和LoVo-VC,用MicroRNA芯片筛查表达异常的促癌microRNA,从中选取miR-17-92家族成员miR-17、miR-19a行荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)进行验证.在LoVo-PRL-3细胞中对STAT3信号传导与转录激活因子-3(STAT3)进行RNA干扰,检测miR-17、miR-19a的表达,在稳转细胞株中转染miR-17、miR-19a或对其进行敲除,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Tanswell试验对细胞增殖侵袭能力的变化进行研究.在13例患者结肠癌原发灶、转移灶及癌旁正常组织中行免疫组织化学及qRT-PCR检测PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达.结果 在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-17、miR-19a的表达明显上调(P＜0.05),干扰STAT3可以抑制miR-17、miR-19a的表达.在LoVo-VC细胞中过表达miR-17、miR-19a促进了细胞的增殖(P＜0.05及P＜0.01)和侵袭(P＜0.01),而在LoVo-PRL-3细胞中敲除miR-17、miR-19a抑制了细胞的增殖侵袭(P＜0.05).在结肠癌组织中PRL-3、pSTAT3和miR-17、miR-19a的表达呈正相关.结论 PRL-3通过上调miR-17、miR-19a的表达在结肠癌细胞增殖侵袭中起到促进作用.
