中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脊索瘤与脆性组氨酸三联体基因的相关性研究
目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因改变与脊索瘤发生的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP)方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测.结果 RT-PCR检测可见11例(61.1%)存在FHIT基因RNA转录本缺失,1例还同时含有正常和异常转录本.对其中2例进行测序,证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段;另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子.脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55.6%(10/18),瘤周正常组织为100.0%(18/18),差异有统计学意义(P<0.05),FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低.结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一,可能与脊索瘤的发生机制有关.
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α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人瘢痕成纤维细胞的条件优化
目的优化α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸(ASODN)转染人增生性瘢痕成纤维细胞的条件.方法 ASODN经FITC标记,以阳离子脂质体Oligofectamine为载体转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,转染后24 h激光共聚焦显微镜下记录荧光素的细胞内分布;流式细胞术计数荧光细胞百分率、作细胞凋亡分析,以荧光细胞百分率高者为佳转染效率,依次筛选细胞接种数量、ASODN浓度和脂质体量.结果 (1)脂质体转染ASODN,所用各转染条件未引起成纤维细胞凋亡;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集.(2)接种细胞数量为14.25×104个/孔的荧光细胞百分率为74.0%,接种数量为30.00×104个/孔的为73.3%,接种数量为32.25×104个/孔的为94.3%,接种数量为39.00×104个/孔的为64.2%.(3)转染液中ASODN浓度100 nmol/L,荧光细胞百分率为38.1%;150 nmol/L时,为62.6%;200 nmol/L时49.5%;250 nmol/L时35.8%.(4)转染所用的脂质体量2 μl时,荧光细胞百分率为77.01%,3 μl时85.05%,4 μl为71.64%.结论α1(I)型前胶原基因ASODN脂质体转染人增生性瘢痕成纤维细胞的佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104个/孔,反义核酸浓度150 nmol/L,脂质体3 μl/孔.通过优化转染条件可提高转染效率,为下一步设计药物开发研究提供基础.
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人激肽释放酶对离体动物阴茎海绵体平滑肌的舒张效应
目的探讨人组织激肽释放酶对离体动物阴茎海绵体平滑肌的舒张效应,以初步探讨其对阴茎勃起的调节作用.方法通过离体阴茎海绵体平滑肌肌条实验方法,利用PowerLab 4SP微弱生物信号采集系统记录人组织激肽释放酶对离体家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌的舒张效应.结果 100 mU人组织激肽释放酶可分别使去氧肾上腺素诱导的家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌舒张(65.98±6.98)%和(54.86±9.65)%.结论人组织激肽释放酶可强力地舒张离体家兔和大鼠阴茎海绵体平滑肌,推测其对人阴茎海绵体平滑肌也会有较强的舒张效应,可能是勃起功能障碍药物开发的一个新靶点.
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人胚神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤
目的探讨人胚神经干细胞(hNSC)移植治疗脊髓损伤(SCI)的可行性.方法分离、培养和鉴定hNSC;用5溴-2脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记hNSC,并将其移植到14只T10半横断的Wistar大鼠损伤脊髓内(另外14只T10半横断损伤的大鼠作为对照组,仅损伤脊髓内注射DMEM/F12培养液),用BrdU的FITC免疫荧光染色检测移植细胞的存活和迁徙,用NF-200、GFAP免疫组织化学鉴定移植细胞的分化,BBB评分评定大鼠功能恢复情况.结果 (1)获得了大量的hNSC;(2)用免疫组织化学可以检测到移植的hNSC能在体内长时间存活(达2个月)并向远处迁徙,并分化为神经元和胶质细胞;(3)检测到实验组大鼠BBB得分明显高于对照组大鼠(P＜0.01),在SCI后第10周时实验组和对照组BBB得分大差距达到2.1分.结论 hNSC移植能促进SCI大鼠后肢功能恢复,它是SCI移植治疗较有价值的细胞资源.
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体神经-内脏神经吻合后再生神经逆行追踪和组织化学研究
目的对大鼠体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经的物质转运功能和递质性质进行定性研究.方法在建立了人工体神经-内脏神经膀胱反射弧的5只大鼠的左侧盆神经节(MPG)、尿道外括约肌(EUS)分别注射荧光金(FG)和快蓝(FB),通过逆行追踪检测再生神经的物质转运功能,酶组织化学方法检测再生神经中的乙酰胆碱酯酶(AChE).结果逆行追踪结果显示FG、FB单标神经元及FG和FB双标神经元主要分布于脊髓L3尾部至L5头侧左侧前角.神经吻合口远心端和近心端,以及支配膀胱的节前有髓神经纤维,支配EUS的有髓神经纤维多为AChE反应阳性.结论人工体神经-内脏神经膀胱反射弧建立后,再生的传出神经有物质转运功能,体神经-内脏神经(副交感神经)吻合后再生神经纤维多为胆碱能.
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黏附分子T-cadherin表达对胶质母细胞瘤C6细胞的生抑制作用
目的探讨T-cadherin分子表达对胶质母细胞瘤C6细胞增殖的影响.方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin表达质粒转染C6细胞,以克隆形成试验和细胞增殖试验研究T-cadherin表达对C6细胞增殖的影响.结果转pcDNA3.T-cadherin质粒的C6细胞形成的细胞克隆数显著少于转染pcDNA3载体质粒的C6细胞形成的克隆数,两者差异有统计学意义(P＜0.01).转染后表达T-cadherin分子C6细胞的生长速度明显慢于转染空载体不表达T-cadherin的C6克隆(P＜0.01),且T-cadherin表达水平与C6细胞增殖速度呈负要关.结论 T-cadherin分子表达显著抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖.
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转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因在异种移植中的研究
目的研究转人α-1,2岩藻糖苷转移酶基因(HT)在克服超急性排斥反应(HAR)中的作用.方法通过脂质体转染将人HT基因转入猪血管内皮细胞(PIECs)中,利用显微注射建立转HT基因小鼠模型,经流式细胞仪检测转HT基因阳性的PIECs表面抗原及小鼠外周血单核细胞表面抗原的变化.结果转HT基因的PIECs表面的α-1,3半乳糖(α-Gal)比阴性对照下降了50%～60%,H抗原由无表达到44%～78%表达阳性;转HT基因小鼠白细胞表面的α-Gal比阴性对照下降了63%左右,H抗原阳性表达率为95%以上.结论 HT基因在细胞和小鼠体内均有较好的表达,可减少异种抗原与异种抗体的反应,在克服超急性排斥反应中能发挥一定的作用.
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α-干扰素对人功能性垂体腺瘤细胞的作用
目的采用体外细胞培养,免疫组织化学染色和放射免疫测定方法,研究α-干扰素(α-IFN)对体外培养人垂体功能性腺瘤细胞激素分泌的影响.方法对11例垂体生长激素(GH)及GH/催乳素(PRL)腺瘤和15例垂体PRL腺瘤进行体外细胞培养,观察细胞形态的改变和生长特点.采用免疫组织化学染色技术研究α-IFN和αR-IFN在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤、功能性和非功能性垂体腺瘤之间阳性表达率差异.结果大多数垂体腺瘤细胞有α-IFN和αR-IFN表达,尤其在侵袭性垂体腺瘤细胞中呈高表达;α-IFN对垂体腺瘤细胞激素分泌有较强的抑制作用;α-IFN对大多数溴隐亭(BC)或奥曲肽(SMS)耐药的腺瘤细胞仍有抑制激素分泌效应;α-IFN能增强BC对垂体PRL腺瘤分泌的抑制作用.结论α-IFN具有用于临床治疗功能性垂体腺瘤的可能性.
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乙酰肝素酶在膀胱癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系
目的探讨乙酰肝素酶(HPSE)mRNA在膀胱癌中的表达及其与肿瘤临床病理特征和血管生成的关系.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例膀胱癌及16例癌旁组织中HPSE mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测膀胱癌组织的微血管密度(MVD),结合患者临床病理指标及预后进行分析.结果 42例膀胱癌中,HPSE mRNA阳性23例(54.8%),16例癌旁组织中表达阳性者2例(12.5%),两组差异有统计学意义(P<0.01);HPSE mRNA的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期、肿瘤大小及淋巴结转移有相关性(P<0.05);术后生存3年以下者HPSE mRNA的表达阳性率87.5%,明显高于生存3年以上者之46.9%(P<0.05);HPSE mRNA表达阳性者MVD值为90.8±13.6,表达阴性者肿瘤MVD计数均值为65.8±6.6,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 HPSE在膀胱癌的生长浸润、侵袭转移和血管生成中发挥重要作用,可作为判断膀胱癌生物学行为和预后的客观指标.
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硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响
目的研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinⅤ法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2及bax基因的表达,观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用.结果硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖,1.0 mg/L浓度的硫化砷作用24 h后,MG-63细胞的抑制率可达26.43%.倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变,流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关.在硫化砷的作用下,MG-63细胞的bcl-2表达下调,而bax表达无明显改变.结论硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡,bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制.
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胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/Fas配体表达在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用
目的探讨大鼠胰腺移植后细胞凋亡的变化、Fas/Fas配体(FasL)的表达及其与急性排斥反应的关系.方法实验分为同基因移植组和异基因移植组.分别于术后第3、5、7天处死受体,取移植胰腺,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI),应用免疫组织化学及Western blot检测Fas/FasL的表达.结果细胞凋亡主要发生在胰腺腺泡细胞,同基因移植组有散在的腺泡细胞凋亡,AI在术后无明显变化,Fas/FasL表达阴性;异基因移植组在术后第3、5、7天胰腺腺泡细胞凋亡发生率逐渐增加(28.40±3.75,39.40±5.59,57.30±8.53,P<0.01),Fas/FasL表达逐渐增强,AI与急性排斥反应程度呈显著正相关(rs=0.932,P<0.01).结论胰腺腺泡细胞凋亡和Fas/FasL表达在胰腺移植急性排斥反应中发挥重要作用,凋亡指数对胰腺移植急性排斥反应的诊断有一定的参考价值.
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bcl-xL基因转染对脊髓损伤半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响
目的探讨bcl-xL基因转染对大鼠脊髓损伤Caspase-3表达的影响和对神经细胞的保护作用.方法制备大鼠胸段脊髓T8,9压迫损伤模型,随机分为2组:对照组,bcl-xL组,将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓,伤后1、3和7 d利用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学检测bcl-xL和Caspase-3表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡,观察对神经细胞的保护作用.结果与对照组相比,bcl-xL组各时间段Caspase-3表达明显降低(P<0.05),TUNEL阳性凋亡的神经细胞明显减少(P<0.05).结论外源性bcl-xL基因体内转染在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡,可能与其下调Caspase-3的有关.
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微创与切开复位张力带固定治疗横断型髌骨骨折的生物力学比较
目的评价微创张力带固定法治疗横断型髌骨骨折的生物力学稳定性及牢固性.方法保留胫骨、股骨及完整膝关节新鲜成人尸体膝关节标本.制作髌骨横断骨折模型,采用微创或开放手术的张力带固定.膝关节屈曲36°位固定胫骨及股骨端将标本安装在MTS实验机上,通过牵拉股四头肌来拉伸和疲劳循环载荷来测试固定的稳定性.用线性传感器测量骨折分离距离,大于1 mm为固定失败.结果所有固定在500 N外加拉力作用下骨折分离距离均小于1 mm,大于固定后即可活动所需小294 N的限度.微创和开放手术在即时和疲劳后的生物力学差异无统计学意义(p＞0.05).空心钉张力带的稳定性好(P＜0.05).结论根据生物力学原则,微创张力带固定法治疗髌骨骨折能够满足骨折愈合所需的稳定性,允许骨折固定后即可活动和功能锻炼.
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猪全层皮肤缺损创面bax和bax mRNA的表达
目的观察bax和bax mRNA在猪全层皮肤缺损创面中心和新生上皮下的表达.方法在6头小型猪的背部各造成8个直径为4 cm的圆形全层皮肤缺损创面.在创面形成后当日及3、6、9、12、15、20、25和40 d,取创面中心及创面边缘的组织,采用免疫组织化学染色和原位杂交检测bax和bax mRNA的表达.结果伤后15 d和伤后20 d可以在创面中心观察到bax mRNA的表达,bax mRNA阳性细胞数分别为(65.83±9.35)和(10.33±5.57)个/400×视野;伤后20 d可以在创面中心观察到bax的表达,bax阳性细胞数为(62.30±17.78)个/400×视野;新生上皮下观测不到bax和bax mRNA的表达.结论在猪全层皮肤缺损创面愈合后期,创面中心的肉芽组织中bax和bax mRNA的表达增高,且该部位的细胞凋亡可能与bax有关;新生上皮下的细胞凋亡与创面中心的细胞凋亡机制不同.
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预制微血管样结构凝胶的植入研究
目的观察含有微血管样结构的凝胶块植入体内后与体内血液循环的连通情况,以及血管内皮细胞生长因子(VEGF165)对凝胶血管化的影响.方法在纤维蛋白凝胶中以VEGF165诱导小鼠微血管内皮细胞(MVEC)形成微血管样结构,设无VEGF165为对照,将制作的凝胶块用有微孔的塑料薄膜包裹后植入小鼠肠系膜间,2周后取样进行组织学切片,苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色,图像分析并测量血管化面积.结果凝胶植入2周见实验组凝胶周围有丰富的新生血管网经过塑料薄膜的小孔与凝胶内血管相连,对照组表面新生血管较少.组织学切片(HE染色)见VEGF组血管化总面积约为对照的50倍(P<0.01).实验组新生血管直径10～100 μm,分布于凝胶中心和周边部位;而对照组新生血管大直径＜20 μm,主要分布于凝胶的周边.结论含微血管样结构的预制凝胶植入后能形成具有血流灌注的微血管网.纤维蛋白凝胶在此过程中充当了一种较为合适的细胞外基质的作用,而VEGF在这一过程中起到一种诱导、刺激和强化作用.
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减压脊髓神经恢复分子机制的研究
目的探讨手术减压对慢性脊髓损伤的治疗分子机制.方法采用大鼠后路渐进性脊髓压迫模型,然后行手术减压.经观察行为评分(BBB),常规病理及胆碱乙酰转移酶(ChAT)和脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB的免疫组织化学检测.结果脊髓损伤后ChAT免疫组织化学阳性细胞数减少,BDNF和TrkB表达增加,BBB下降;减压后,ChAT阳性细胞数增多,BDNF和TrkB表达恢复,BBB改善,减压组与压迫组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论手术减压作用的分子机制可能是其促进了慢性压迫性损伤脊髓运动神经元合成ChAT和运动神经递质-乙酰胆碱,且减压可加速BDNF和TrkB的转运,从而加速实验动物行为功能的恢复.
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Survivin反义寡核苷酸联合顺铂治疗裸鼠荷骨肉瘤
目的探讨反义基因治疗与化疗联合应用提高骨肉瘤疗效的可行性及其机制.方法构建荷骨肉瘤裸鼠模型,采用瘤内注射和腹腔给药方式,以Survivin反义寡核苷酸(ASODN,5 mg/kg体重)配合顺铂(DDP,3 mg/kg体重)对瘤鼠进行联合干预治疗,观测裸鼠肿瘤生长情况及瘤体病理形态,免疫组织化学法检测肿瘤Survivin蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数(AI).结果联合治疗组裸鼠瘤重(0.36±0.01) g仅为对照组(1.08±0.05) g 33%,抑瘤率IR(66.9±1.4)%显著高于ASODN组(38.9±0.8)%和DDP组(49.8±9.6)%,χ2=5.14,P＜0.05,Survivin蛋白表达明显减弱,AI(45.1±3.7)%显著高于对照组(5.8±1.2)%及各单药组(23.9±3.1)%、(24.1±4.8)%,χ2=146.03,P＜0.01.结论 ASODN对DDP具有明显增效作用,可弥补DDP耐药缺陷,两者联合可望发挥协同抗瘤效应.
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脂氧合酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响
目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线及检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞凋亡.结果 MTT法显示NDGA对MCF-7细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖效应;流式细胞仪结果显示NDGA阻滞细胞周期于S期,诱导细胞凋亡;在光镜和扫描电镜下,NDGA诱导细胞发生凋亡形态学变化,导致细胞表面超微结构的改变和凋亡小体的形成.结论 NDGA能够抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为脂氧合酶抑制剂临床应用于乳腺癌提供了科学依据.
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葛根素对兔肺缺血再灌注损伤的保护作用
目的探讨葛根素对离体兔肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法应用离体肺缺血再灌注模型,将20只健康家兔随机分为2组,实验组将葛根素(100 mg/L)加入含前列腺素E1(PGE1)的低钾右旋糖酐(LPD)液进行肺灌注及保存,对照组则以含PGE1的LPD液灌注及保存,4 ℃保存12 h再灌注1 h后测定肺组织湿/干重比(W/D)及超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肺凋亡细胞并观察肺组织结构变化.结果实验组肺组织W/D及MPO活性分别为(4.90±0.86)、(3.21±0.48) U/100 mg蛋白,明显低于对照组的(5.52±1.05)、(4.02±0.69) U/100 mg蛋白(P＜0.05),SOD活性为(61.37±10.08) U/100 mg蛋白,则明显高于对照组的(50.85±11.40) U/100 mg蛋白(P＜0.05),其细胞凋亡指数(AI)为6.25±0.72亦较对照组的7.96±0.61显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),肺组织病理变化较对照组轻.结论葛根素能减轻肺缺血再灌注损伤,其作用机制与抑制中性粒细胞聚集、清除氧自由基、抗氧化及抗细胞凋亡有关.
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肾静脉上结扎大鼠下腔静脉的肾功能改变和川芎嗪对其的影响
目的探讨肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉(IVC)及应用川芎嗪后的肾功能及肾脏病理改变.方法分别在肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉、肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗,术后6、12、24 h、2、3、4、5、7 d检测血肌酐、尿素氮、24 h尿量及NAG酶并观察肾脏病理改变.结果肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉后血肌酐、尿素氮、尿NAG酶升高,肾脏瘀血并见大量管型.术后第3天,肾脏恢复正常结构;术后第4天,血肌酐、尿素氮恢复正常;术后第5天,尿NAG酶恢复正常.肾静脉平面以上结扎下腔静脉并川芎嗪治疗术后第4天,血肌酐、尿素氮、尿NAG酶恢复正常,肾脏瘀血较轻.结论肾静脉平面以上结扎大鼠下腔静脉,可因双肾瘀血而影响肾功能,若同时加用川芎嗪则可保护肾脏功能.
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急性早幼粒性白血病基因重组逆转录病毒载体构建及表达
目的构建重组人早幼粒白血病基因(PML)的逆转录病毒载体及稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.方法应用DNA重组技术,将PML基因亚克隆后连接在逆转录病毒载体pLXSN上,经酶切鉴定正确后,磷酸钙沉淀法转染到PA317包装细胞包装病毒,并计算重组病毒的滴度.聚合酶链反应(PCR)鉴定重组PML逆转录病毒能够成功感染靶细胞.激光共聚焦和Western blot鉴定PML蛋白的表达.结果经酶切分析证实有大约2.1 kb大小的片段插入到逆转录病毒载体中.PCR结果显示感染重组PML逆转录病毒的细胞可以扩增出304 bp大小的片段.激光共聚焦显微镜显示,感染重组PML病毒的膀胱肿瘤细胞胞核内有散在的斑点样的绿色荧光亮点.Western blot也发现感染PML组有大约90×103的特异性的蛋白条带.结论我们成功构建重组人PML基因的逆转录病毒载体并且建立了稳定表达PML的膀胱肿瘤细胞株.
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赫赛汀联合干扰能对肾癌细胞的杀伤抑制作用
目的了解赫赛汀联合干扰能(IFNα-2b)对肾癌细胞在体外的杀伤抑制作用,同时检测肾癌细胞在药物作用前后表皮生长因子受体2(HER2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达情况.方法肾癌细胞系通过细胞培养技术进行培养,用噻唑蓝(MTT)法观察赫赛汀联合IFNα-2b对该细胞系的抑制杀伤效果,过河实验检测癌细胞的侵袭能力,进而运用链霉抗生物素-过氧化物酶免疫组织化学(SP)法对HER2、MRP1表达情况进行测定.结果赫赛汀联合IFNα-2b对肾癌细胞的生长抑制及耐药性呈时间和剂量依赖性.经药物处理后,HER2、MRP1表达明显下降,由用药前的62.82%、69.42%降到用药后的24.35%、16.87%(P<0.05).结论联合用药能有效抑制肾癌细胞的生长,对瘤细胞的耐药性也有一定的逆转作用.
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猫脑缺血时脑不同部位脑血流与氨基酸的变化
目的比较缺血时猫脑不同部位脑血流、氨基酸的变化并研究两者之间的关系.方法利用激光多普勒血流计,持续监测猫脑不同部位(颞叶、枕叶)在脑缺血时脑皮层表面的血流变化;利用微透析技术,测定相同位置细胞间隙中的氨基酸变化.结果在阻断猫大脑中动脉(MCA)后,颞叶和枕叶部位的脑血流迅速下降,分别为正常值的21.44%和23.61%,并在2 h内缓慢下降;微透析液中谷氨酸浓度迅速增加,可达到正常值的80余倍.结论缺血时猫颞叶和枕叶的脑血流与谷氨酸浓度变化相同,差异无统计学意义.
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反义转化生长因子-βⅡ型受体对支气管成形术后吻合口狭窄的影响
目的评价反义转化生长因子(TGF)-βⅡ型受体-腺病毒表达系统对支气管成形动物模型吻合口胶原合成的影响.方法将行左上肺支气管成形术的试验犬分为3组,A组雾化吸入蒸馏水,B组吸入腺病毒空白载体,C组吸入反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒各1周,4周后取吻合口组织检测TGF-βⅡR mRNA和I型胶原的合成量.结果 C组的TGF-βⅡR mRNA合成量(0.75±0.13)和I型胶原的合成量(829.50±78.30)较A(1.96±0.20和1 167.20±94.10)B(1.89±0.17和1 291.30±103.50)两组均减少,差异有统计学意义(P＜0.05);AB两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论应用反义TGF-βⅡ型受体-腺病毒表达系统阻断TGF-β的作用可以减少细胞外胶原的合成,从而发挥抑制吻合口瘢痕增生的作用.
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二氧化碳气腹对直肠恶性肿瘤生长和转移的影响
腹腔镜能否应用于肿瘤外科一直存在争议,焦点之一是二氧化碳(CO2)气腹是否会促进肿瘤的生长和转移扩散.我们应用经直肠黏膜下接种建立直肠恶性肿瘤淋巴结转移动物模型对此进行观察,现将结果报道如下.
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腹腔镜巨脾切除术中脾蒂的处理
腹腔镜脾切除术目前取得了较好的效果.但对于巨脾患者则多进行手助腹腔镜脾切除术[1],完全腹腔镜脾切除术较少见.我们自2003年7月至2004年11月对7例巨脾患者进行了腹腔镜脾切除术.
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肿瘤浸润树突状细胞在肺癌组织中浸润的研究
本研究旨在观察100例肺癌实体瘤组织中肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)浸润情况,探讨影响肺癌患者生存与预后的内在因素.
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肥大细胞与胃癌增殖细胞核抗原、bcl-2基因表达的关系及其意义
为探讨肥大细胞对胃癌生长的影响机制,我们采用组织化学、免疫组织化学及显微图像分析系统,同步检测分析胃癌组织中肥大细胞的数量与其邻近癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2基因表达的关系,以期阐明肥大细胞对胃癌发生发展的影响及可能的分子生物学机制.
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基质条件对骨髓间充质干细胞定向肝细胞分化率的影响
在体外适当条件下,骨髓来源的干细胞可跨胚层分化为肝细胞和胆管细胞[1,2].但肝细胞作为"锚着"性细胞,体外培养时,需要接触与基底膜相似的物质才能稳定而充分地发挥其功能.由骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导产生的肝细胞也需要接触基底膜.我们通过应用多聚赖氨酸和胶原蛋白作为基底膜结构,在其中向肝细胞诱导,来探讨提高诱导分化率的机制和条件.
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突变体富集聚合酶链反应检测胰腺癌K-ras基因突变的研究
胰腺癌是一种恶性程度极高,早期难以诊断,预后极差的恶性肿瘤,临床确诊者大多属于晚期癌,5年生存率总体低于5%.我们采用突变体富集聚合酶链反应(PCR)检测胰腺癌细胞系K-ras基因点突变,以期为早期诊断胰腺癌提供一种简便、灵敏而有效的检验方法.
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Survivin 基因在原发性胆囊癌中的表达及其意义
为探讨Survivin 基因与原发性胆囊癌(PGC)发生、发展的关系,我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PGC组织中Survivin基因的表达情况,并将结果进行了相关分析,为原发性胆囊癌的综合治疗及基因治疗提供依据.
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Nucleostemin基因在前列腺癌中的表达及其与血清中前列腺特异抗原的关系
Tsai等[1]近发现多种癌细胞中均存在Nucleostemin(NS)蛋白,其对癌细胞维持增殖状态是必须的.我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学技术检测前列腺癌(PCa)及前列腺增生(BPH)组织中NS基因的表达,探讨其在PCa中的作用及其与患者血清中前列腺特异抗原(PSA)的关系.
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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对小鼠体内肺瘤的抑制作用
我们通过小鼠模型注射超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),观察SEA对小鼠体内肿瘤的抑瘤效果,并探讨其作用机制.
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Survivin反义寡核苷酸对bcl-2、bax表达的影响
人Survivin 基因是经效应细胞蛋白酶受体(EPR-1)cDNA在人类基因组库的杂交筛选中分离出来的,因其具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重生物学特性受到关注[1,2].我们以Survivin SAO转染C6胶质瘤细胞,进一步观察对其bcl-2和bax 的影响及其相关性.
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前腹壁悬吊腹腔镜辅助下婴儿先天性巨结肠根治术的研究
目的探讨前腹壁悬吊(免气腹)腹腔镜辅助下婴儿先天性巨结肠(HD)根治术的特点.方法用气囊导尿管充生理盐水1.5～2.0 ml前腹壁悬吊行13例前腹壁悬吊腹腔镜辅助下婴儿HD根治术,比较了13例免气腹组和17例CO2气腹组手术中血流动力学参数和量化手术效果参数.结果气腹组在术中因腹内压增高可以致血流动力学参数平均动脉压(MAP)、PaCO2、心脏指数(CI)、HCO3-发生显著性变化,前腹壁悬吊组则保持稳定的参数值.两组在手术效果上差异无统计学意义.结论前腹壁悬吊腹腔镜辅助下HD根治术其前腹壁提拉装置构思新颖,实用性强,具有安全性,可行性,大大减少了由于腹内高压对血流动力学参数的影响,该手术方法值得在临床上推广.
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纳络酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素含量变化及其临床意义
目的探讨纳络酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素(ET)含量变化及其临床意义,评价纳络酮治疗急性重型颅脑损伤的意义.方法观察了52例纳洛酮治疗急性重型颅脑损伤患者血浆ET含量在治疗前1 d、治疗后3、8 d及2周的变化,并且以46例颅脑损伤患者按常规治疗作对照组.结果颅脑损伤24 h内两组患者血浆内皮素较正常人均明显升高(P<0.05),伤后第3天、第8天两治疗组血浆内皮素较治疗前均明显下降(P<0.05),但纳络酮治疗组低于常规治疗组(P<0.05),治疗2周后两组ET水平基本恢复到正常水平.结论急性重型颅脑损伤患者血浆内皮素含量明显升高,与病情轻重相关,纳络酮治疗较常规治疗能更迅速地降低血浆ET水平.
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Barrett食管研究的新进展
Barrett食管是形成食管腺癌的主要危险因素,因而对Barrett食管的研究成为上消化道疾病研究的重点之一.目前在Barrett食管的发病机制、与食管腺癌的关系以及诊断、预防和治疗等多方面都取得了很大的进展.
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改良法重建肝动脉血供的大鼠原位肝移植模型
目的建立一种稳定的重建肝动脉血供的大鼠原位肝移植模型,为研究肝移植术后移植免疫、胆道并发症等提供一个更加符合生理的动物模型.方法以经典的"双袖套"大鼠原位肝移植模型为基础,将带有主动脉的供肝动脉与受体腹主动脉行端侧吻合重建肝动脉血供.结果共施行重建肝动脉血供的大鼠原位肝移植35例.术后24 h动物存活率85.7%,术后1周动物存活率82.9%.结论用带有主动脉的供肝动脉与受体腹主动脉行端侧吻合重建肝动脉血供的方法稳定可靠,易于标准化.该模型是研究肝移植术后免疫排斥、胆道并发症的理想模型.
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雌激素受体表达和微血管密度改变在肝门部胆管癌中的意义
目的研究在肝门部胆管癌(HCCA)中雌激素受体(ER)表达水平和微血管密度(MVD)的改变,探讨它们在HCCA中可能发挥的作用.方法使用免疫组织化学的方法检测HCCA组织中ER和CD34的表达情况.结果 ER的阳性率为66.7%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组的MVD计数明显高于对照组(P<0.01).结论 ER可能通过影响血管的生成在HCCA的发生、发展中起重要作用,为诊断和治疗HCCA提供新途径.
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血管化组织工程肝小块构建的研究
目的利用组织工程方法和原理初步构建血管化肝小块组织.方法肝细胞和肝窦内皮细胞取自小鼠肝脏.采用内管网高分子聚酯类聚合物(PLGA)材料作为支架.肝窦内皮细胞接种在内管网PLGA支架管道的内壁使之在体外预内皮化.肝细胞与纤维蛋白原混合制成肝细胞/纤维蛋白原混合液,接种在喷洒有凝血酶的预内皮化的内管网支架上.构建的复合物分别植于小鼠肠系膜部位(A组)和肝组织表面(B组),2周后将支架取出观察,比较不同部位的植入效果.结果支架体外预血管化后,其管道内可见内皮细胞均匀贴壁;体内植入后内皮细胞优势生长;A组小鼠肠系膜间支架中有血管长入,但未见有肝细胞留存;B组可见支架内有少量肝细胞团,并有血管长入.结论简易PLGA内管网多孔支架可以用于肝组织小块的构建,而肝组织表面更适合组织工程肝小块的体内植入.
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对肝癌患者组织中自然呈递的MAGE-3表位进行鉴定和定量分析
目的尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析.方法肝癌细胞和肝细胞取自同1名男性肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;检测MAGE-3 mRNA的表达;肽混合物进行高压液相纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱检定和定量分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 MAGE-3在肝癌细胞样品中表达阳性,在肝细胞中阴性;随后从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位抗原肽:FLWGPRALV(38-39拷贝/细胞),并从患者外周血中检测出针对该表位的特异性T细胞反应.结论本实验从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3271-279表位,并揭示了该表位的潜在应用价值,同时也初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,而这些特点对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计是非常重要的.
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携带反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的产病毒细胞系的建立及对肝癌细胞的靶向杀伤效应
目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系.方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400 mg/L)筛选、病毒滴度测定.以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southern blot分析;观察GCV(100 mg/L)对细胞生长的影响.结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中.导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6 d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01).结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中.
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奥曲肽对胰腺炎相关性腹水诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用
目的探讨奥曲肽对胰腺炎相关性腹水(PAAF)诱导的大鼠肝细胞凋亡的保护作用及其相关机制.方法以PAAF诱导的大鼠肝损伤模型(B组)为研究对象,监测4、7 h血清肝功能酶学指标(ALT、AST)、总胆红素(TBiL)、淀粉酶(AmYL)及转化生长因子(TGF)-β1浓度.同时对胰腺、肝组织进行组织学观察;TUNEL法流式细胞术定量检测肝细胞凋亡情况,以及应用奥曲肽后(C组)对上述指标的变化.对比评估B组与急性坏死性胰腺炎模型(ANP组)胰腺损伤程度.结果 B组各血清学指标均比空白对照组(A组)显著升高(P＜0.01);C组上述各指标显著下降(P＜0.01);ANP组与B组相比,7 h时间点AmYL浓度明显升高(P＜0.01).PAAF诱导7 h后(20.13±3.84)%的肝细胞发生凋亡,其中(49.04±1.44)%细胞生长停滞在G2/M期.电镜(TEM)下可见典型的晚期凋亡肝细胞;ANP组胰腺损伤程度明显重于B组.结论 (1)TGF-β1在肝细胞增殖(G2/M)期诱导其凋亡损伤;(2)奥曲肽通过抑制TGF-β1在肝脏的表达而对PAAF诱导的大鼠肝细胞凋亡具有良好的保护作用;(3)PAAF诱导的大鼠肝损伤模型中的胰腺病变明显轻于ANP时的胰腺病变.
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骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞及肝内移植研究
目的观察体外诱导骨髓间充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况.方法首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养,加入肝细胞生长因子(HGF,20 μg/L)和表皮生长因子(EGF,1.5 mg/L)诱导定向分化.肝纤维化形成的大鼠随机分成2组,每组10只.使用5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记诱导的骨髓间充质干细胞,经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植,对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞.2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU+/ALB+细胞数量.结果体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性.移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞,与对照组相比诱导后骨髓间充质干细胞组BrdU+/ALB+细胞数较多,差异有统计学意义(P＜0.05).结论经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞,移植在大鼠肝纤维化形成环境中,白蛋白表达细胞数更多.
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半离体体外肝手术不同术式对肝脏缺血再灌注损伤的影响
目的观察3种半离体体外肝手术方式对肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组(A组)、单纯离断肝下下腔静脉手术组(B组)、单纯离断肝上下腔静脉手术组(C组)和联合离断肝上、肝下下腔静脉手术组(D组),每组各10只,手术后4、24 h分组收集血清和肝组织,分别进行血清谷丙转氨酶(ALT)监测、病理切片、免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 ALT随各组手术复杂程度和再灌注时间的增加而升高;病理切片见各手术组肝脏炎症反应随手术复杂程度和再灌注时间的增加而有所加重;B组术后4和24 h肝组织中过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)α的表达无明显变化,但术后24 h原癌基因B淋巴瘤-xL(bcl-xL)的表达强;C、D组肝组织术后4 h PPARα和bcl-xL的表达增加,术后24 h PPARα的表达明显强于4 h组,而bcl-xL的表达较4 h明显下降.结论 PPARα和bcl-xL参与体外肝手术后肝组织缺血再灌注损伤,两者的表达在一定程度上反应了肝细胞受损的程度.B组手术方式简单、对肝脏的损伤较小;C、D两组手术复杂,对肝组织的再灌注损伤较重.
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反应停对人肝细胞癌生长侵袭的作用
目的观察反应停对人肝细胞癌(HCC)血管生成和肿瘤生长侵袭的干预作用.方法建立高转移潜能人肝癌裸鼠肝原位移植模型,随机分成4组.各组模型自建立次日起分别经腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)、反应停(200 mg/kg体重)、紫杉醇(13 mg/kg体重)、反应停(200 mg/kg体重)+紫杉醇(13 mg/d).给药第30天处死裸小鼠,观察肿瘤生长、转移情况,分别用免疫组织化学和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测癌组织CD34和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达并记录微血管密度(MVD).结果反应停组肿瘤重量、体积均与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).各药物处理组肺转移灶计数、MVD和VEGF均低于对照组,以联合用药组为显著.结论反应停对HCC生长无明显抑制作用,但能抑制肿瘤血管生成并降低肺转移.
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过氧化物酶体增殖物激活受体对小鼠原代肝细胞即时反应基因和细胞周期蛋白D1表达的影响
目的转染小鼠pSG5-过氧化物酶体增殖物激活受体α(pSG5-mPPARα)质粒对小鼠原代肝细胞细胞周期调节基因表达的影响.方法在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体(WY-14643)后,检测即时反应基因(IEG)如fos癌基因 (c-fos)、jun癌基因(c-jun)和早期生长反应因-1(EGR-1),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的变化.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)方法.结果 EGR-1基因表达在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体WY-14643组与未转染加药组差异无统计学意义,而c-jun、c-fos和Cyclin D1基因表达,较未转染加药组明显增强.结论 EGR-1、c-jun、c-fos和Cyclin D1基因在肿瘤发生前阶段肝脏中的异常表达,对肿瘤形成可能具有一定的重要性.
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内毒素受体Tlr4及CD14基因在脓毒症大鼠肺、肝组织中的表达及其意义
目的采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型,探讨脓毒症时大鼠肺、肝组织内毒素受体Tlr4及CD14 mRNA的改变及其意义.方法 50只SD大鼠,随机分为正常对照组(10只)、CLP组(40只),CLP后24、48、72和96 h处死动物,留取肺、肝、肾及空肠组织,分别检测Tlr4、CD14 mRNA的表达.CLP组24、48、72和96 h肺、肝组织Tlr4及CD14 mRNA的表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而肾、空肠组织Tlr4及CD14 mRNA的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论提示肺、肝组织中Tlr4及CD14基因的表达改变与脓毒症的发生发展过程有密切的关系.
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乙酰肝素酶mRNA在肝细胞癌中的表达及点突变研究
目的探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达及点突变的意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测33例HCC中HPA的表达,用T-A克隆测序法检测其扩增产物有无突变,并与HCC临床病理学指标分析.结果有16例癌组织HPA表达阳性,阳性率(48.5%)显著高于癌周肝组织(P<0.01).术后转移复发组HPA阳性率显著高于无转移复发组(P＜0.01).7例PCR产物测序发现有4例均存在2处点突变,其中一处为有义突变,突变率为57.1%.结论 HCC中HPA mRNA表达率增高,可作为HCC术后预测转移复发的一个重要指标.HPA基因点突变可能是其表达率增高的原因之一.
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氯化钆抑制枯否细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响
目的探讨抑制枯否细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法制作部分肝脏缺血再灌注大鼠模型80只,实验组注射氯化钆,对照组注射生理盐水,检测两组大鼠缺血前、再灌注后5 min、1和6 h血压、心率的变化,血清转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平及肝组织超微结构的改变.结果实验组再灌注6 h血清TNF-α和IL-1为(0.475±0.069) μg/L和(0.221±0.056) μg/L,显著低于对照组的(0.831±0.167) μg/L和(0.335±0.127) μg/L(P<0.05),两组血压、心率和AST变化的差异也有统计学意义(P<0.05),实验组大鼠肝脏超微结构的损伤程度轻于对照组.结论抑制枯否细胞活化可减轻肝脏缺血再灌注损伤,枯否细胞在肝脏缺血再灌注损伤中的作用很重要.
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细胞周期素D1反义cDNA治疗肝癌的研究
目的通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cyclin D1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右强;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示Cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示Cyclin D1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制.结论 Cyclin D1反义cDNA 可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株Cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性.Cyclin D1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景.
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肝癌细胞系BEL-7402与正常肝组织基因表达概况差异
目的观察肝癌细胞系的基因表达概况,寻找在肝癌细胞系及正常肝组织中差异表达基因.方法以肝癌细胞系及正常肝组织的总RNA反转录合成含有α-32P dATP的cDNA为探针,与Atlas微阵列表达分析膜进行差异杂交,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交验证.结果放射自显影结果经AtlasImageTM软件分析显示:在所分析的588种已知基因中,TFDP2、Akt1、E2F-3等26个在肝癌细胞系中表达上调,TDGF1、BAK、Caspase-3等22个表达下调,参与细胞增殖、凋亡、分化、细胞间相互作用、与细胞侵袭相关的基因表达水平发生了明显改变.结论通过Atlas微阵列系统分析发现的这些基因的表达改变组成了一个肝癌特异的基因表达谱,系统地研究肝癌细胞系的基因表达改变,可为肿瘤早期诊断和治疗提供线索.
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大鼠肝卵圆细胞的分离培养和体外分化研究
目的观察大鼠肝卵圆细胞的活化,为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法.方法利用2-乙酰氨基芴/部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型,采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞,并做免疫细胞荧光鉴定.用丁酸钠诱导其分化.结果成功地建立了肝卵圆细胞活化模型,并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞.在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化.结论利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞,并且其具有肝干细胞的特征.
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肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞形态及表达结缔组织生长因子的影响
目的通过观察肿瘤坏死因子(TNF)-α对肝星状细胞(HSC)形态和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨TNF-α在肝纤维化中的作用机制.方法采用体外培养大鼠肝星状细胞,加入TNF-α和TGF-β1,透射电镜观察肝星状细胞的形态学改变并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同处理组HSC中CTGF的表达.结果 TNF-α、TGF-β1均诱导HSC中CTGF表达;10 μg/L浓度的TNF-α作用6、24和48 h后,检测到CTGF mRNA表达,而TGF-β1在1 μg/L浓度作用4 h后,即可诱导HSC中CTGF mRNA表达.结论 TNF-α诱导HSC中CTGF的表达可能参与早期肝纤维化的形成.
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活体转染肝细胞生长因子基因对小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用
目的研究肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对小鼠急性肝衰模型的治疗作用.方法构建人肝细胞生长因子(hHGF)表达载体,利用脂质体介导法在活体内转染肝细胞生长因子基因,利用荧光显微镜检测肝组织内绿色荧光蛋白(GFP)表达了解目的基因的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中人肝细胞生长因子的含量,通过观察小鼠急性肝衰模型的生存率、肝功能变化、肝组织病理改变来检测肝细胞生长因子基因对急性肝衰的治疗作用,通过检测肝组织中PCNA指数的变化了解肝脏的增殖能力的变化.结果荧光显微镜下可见肝组织内有绿色荧光蛋白的表达,转染人肝细胞生长因子基因后在血清中可检测到hHGF的表达,而且可持续1周以上,与对照组相比,转染hHGF基因组的生存率明显提高(40.0% vs 11.5%,P<0.05),血清ALT、TBi明显降低,肝组织中PCNA指数也明显升高.结论活体转染肝细胞生长因子基因可获得表达,而且肝细胞生长因子基因对急性肝衰小鼠有治疗作用.
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肝组织工程研究
近年来肝脏移植已在我国广泛开展起来,并取得了令人瞩目的进展.然而供体器官的严重短缺却一直在困绕着我们.近年来干细胞生物学和组织工程学的发展为人工再造组织器官开辟了新的途径.在结构类组织工程研究取得很大发展的今天,肝组织工程研究已成为该研究领域的一个新的重要方面.
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外科细胞分子生物学10年与我们的实践
1992年,"分子外科"一词在国际性外科学杂志上出现.1994年,"外科细胞分子生物学(MCBS)"的概念在中国提出.3年后(1997年),<中华外科杂志>10%以上的论文涉及MCBS,<中华实验外科杂志>20%以上的论文涉及MCBS,"第十三次全国外科学术会议"(郑州)上,30%以上的发言涉及MCBS.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
