中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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缓激肽体外选择性开放血肿瘤屏障的机制
目的原代培养大鼠脑微血管内皮细胞及星形胶质细胞,在体外探讨不同剂量缓激肽的作用靶细胞.方法细胞原代培养成功后,运用免疫荧光测定脑血管内皮细胞、星形胶质细胞及C6胶质瘤细胞在不同剂量缓激肽作用前后的细胞内钙离子变化,根据给药前后的荧光改变来确定大、小剂量缓激肽的作用靶点细胞.结果小剂量缓激肽可以引起肿瘤细胞内的钙离子水平升高,而只有大剂量缓激肽才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平变化,脑微血管内皮细胞对大、小剂量缓激肽均无任何反应.结论缓激肽的直接作用靶点是胶质细胞及肿瘤细胞,缓激肽调节脑血管内皮细胞通透性的作用可能需要某些细胞间信使的参与.
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脱细胞猪主动脉基质替代犬食管缺损的实验研究
目的探讨应用脱细胞猪主动脉基质制备人工食管进行食管替代的可行性.方法应用胰酶、Triton X-100制备脱细胞猪主动脉基质.切除5 cm实验犬食管,用两片脱细胞猪主动脉基质缝制成人工食管进行重建,观察存活情况和愈合过程.结果6只实验犬无围手术期死亡,发生吻合口瘘1只,1只在行内镜下扩张治疗时导致新生食管破裂死亡.组织学结果显示术后2周时有疏松结缔组织及大量新生血管形成,4周时大部分人工食管被上皮细胞覆盖,12周时上皮细胞分化至8-10层,有黏膜下腺体结构及肌肉组织.原人工食管已完全吸收,无法用肉眼分辨人工和正常食管.结论猪胸主动脉脱细胞血管基质可作为理想的代食管材料,能较好诱导组织的再生,有较好的应用前景.实验为人工食管的临床应用研究提供了依据.
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大鼠肌源性干细胞的培养与鉴定
目的探讨大鼠肌源性干细胞体外原代培养的方法,为临床应用自体肌源性干细胞注射治疗压力性尿失禁提供实验依据.方法采用胶原酶和胰蛋白酶等分离大鼠骨骼肌细胞,应用差速贴壁法进行纯化获取肌源性干细胞,在倒置显微镜下观察干细胞的形态,通过免疫组织化学法进行鉴定.结果通过差速贴壁法可获取高纯度的肌源性干细胞,免疫组织化学技术可鉴定其肌源性和干细胞特性.结论肌原性干细胞可通过体外原代培养获取,适用于组织工程和基因治疗,临床应用有待进一步研究.
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孕羊深低温体外循环对胎羊温度和血流动力学及血气的影响
目的探讨孕羊深低温体外循环(CPB)对胎羊温度、血流动力学和血气的影响.方法5头健康怀孕山羊常规建立CPB,转流降温、复温各1 h.监测孕羊和胎羊的温度、心率、平均动脉压、血气值.结果孕羊低温度(17.4±1.5)℃,胎羊低温度(24.6±1.5)℃.降温期胎羊温度始终高于孕羊温度,复温期孕羊-胎羊温差逆转,转流结束胎羊温度低于孕羊温度.降温期胎羊心率逐渐减慢,复温期不能恢复正常心率.低温转流15 min,胎羊pH值从转流开始的7.30±0.03降到7.17±0.07(P＜0.05)、PO2从转流开始的(32.5±4.0)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)降到(17.5±3.0)mm Hg(P＜0.05),PCO2从转流开始的(44.8±2.2)mm Hg升到(56.8±5.1)mmHg(P＜0.05),BE值从转流开始的(-3.2±0.6)升到(-5.7±1.3)(P＜0.05),此后血气值进一步恶化,复温阶段胎羊血气值也没有好转.CPB结束胎羊存活率为60%.结论孕羊深低温CPB影响胎盘的热交换和气体交换功能,对胎羊存活不利.
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黏着斑激酶对胶质瘤细胞生物学行为的影响
目的探讨反义黏着斑激酶(FAK)对U251人胶质瘤细胞株生物学行为影响.方法以LipofecTAMINETM介导的反义FAK寡核苷酸转染U251人胶质瘤细胞株,用Western blot检测胶质瘤细胞株FAK含量的改变,研究其多种细胞生物学行为的变化.结果脂质体介导FAKODN转染率为85.9%.转染反义FAK后,U251人胶质瘤细胞株FAK表达明显减少,U251细胞生长抑制率为64.52%,侵袭细胞下降至21.7个,细胞周期分析显示S期细胞降至25.16%,细胞凋亡率升至34.5%.透射电镜观察到凋亡细胞.结论反义FAK寡核苷酸可显著降低FAK在U251中的表达,降低FAK表达能够显著抑制U251人胶质瘤细胞株侵袭能力,抑制细胞增殖和诱导凋亡.
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单平面和多平面截骨术治疗脊柱后凸的生物力学特征
目的探讨单平面截骨Dick钉固定和多平面截骨Luque棒固定治疗脊柱后的生物力学特点.方法12具新鲜小牛胸腰段脊柱标本(T8-L5)随机分成完整组(INT组),单平面截骨Dick钉固定组(Dick组)和多平面截骨Luque棒固定组(Luque组),每组4具.进行生理负荷下的前屈、后伸、左右侧弯、顺逆时针轴向旋转6种运动范围(ROM)的测试,记录载荷值的变化,对ROM值进行统计学分析.结果在生理负荷下,两种术式的脊柱标本的屈伸和侧弯运动的稳定性均达到或超过完整组标本,其中多平面截骨Luque棒固定组的稳定性更好;在轴向旋转稳定性上,两种术式的标本稳定性均不能达到完整组水平.结论实验中多平面截骨Luque棒固定的稳定性稍优于单平面截骨Dick钉固定组,但不足以构成临床应用中决定取舍的依据.
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降主动脉"Y"形血管桥在微创冠状动脉搭桥术中的应用
目的探讨降主动脉"Y"形血管桥在冠状动脉搭桥术的临床疗效和价值.方法对16例升主动脉增宽、钙化的冠心患者在胸腔镜下游离乳内动脉,小切口左侧开胸非体外循环下实施冠状动脉搭桥术,其中男11例,女5例.年龄51～75岁,平均(60.5±10.5)岁.均为多支冠状动脉病变.术中应用"Y"形血管桥与降主动脉端侧吻合.结果全组无死亡,术后机械辅助呼吸平均(8.7±6.5)h.ICU滞留时间平均(3.1±0.5)d.全组病例均未输血.术后随访1～17个月.所有患者心绞痛症状消失,活动量增加.结论采用降主动脉"Y"形血管桥供血可避免升主动脉壁损伤是实施冠状动脉搭桥术微创化的一种新术式,早期结果令人满意.
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胸腺修饰诱导大鼠心脏移植耐受与白细胞介素-2,10的关系
目的在手术当天进行胸腺修饰,诱导大鼠同种心脏移植免疫耐受,并对其可能机制作初步分析.方法通过胸腺注射和围手术期短程使用FK506来诱导心脏移植耐受,观察供心存活天数、混合淋巴细胞反应及受体鼠血清中白细胞介素(IL)-2、IL-10水平的变化.结果无处理组、对照组、经典诱导组和实验组供心存活时间分别为(6.8±1.9)、(17.4±5.1)、(73.8±8.6)、(55.0±24.7)d,实验组与经典诱导组比较差异无统计学意义(P＞0.05).无处理组、经典诱导组和实验组的供受体脾细胞混合淋巴细胞培养刺激效应分别为198.72%、95.80%、67.94%,实验组和经典诱导组较无处理组增殖反应均明显降低(P＜0.05),而两者间增殖反应差异无统计学意义(P＞0.05).IL-10水平在无处理组移植心脏被排斥时为(48.10±5.14)ng/L较移植前(52.60±10.14)ng/L差异无统计学意义(P＞0.05);而在实验组早期呈低水平表达,为(36.10±2.30)ng/L,术后中期(281.80±65.44)ng/L晚期(80.90±12.39)ng/L较移植前水平高得多,差异有统计学意义(P＜0.05).受体IL-2水平在无处理组发生排斥时为(159.80±59.19)ng/L较移植前(54.80±8.42)ng/L明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论心脏移植手术当日胸腺内注射供体同种抗原,与术前21 d胸腺注射的经典诱导组同样能诱导宿主对移植物的低反应状态;IL-2的水平与排斥反应的发生有关,而IL-10可能是免疫耐受的特异性指标,IL-10更可能与免疫耐受的维持有关.
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散发型甲状腺髓样癌酪氨酸激酶受体基因第918位点基因突变及意义
目的研究不同人种散发型甲状腺髓样癌(sMTC)酪氨酸激酶受体基因(RET)第918位点基因突变及意义.方法提取17例中国人sMTC基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增RET基因第16外显子,PCR产物经纯化后直接测序,分析中国人sMTC RET基因第918位点处基因突变,并与文献报道的其他人种sMTC该位点处基因突变比较.结果中国人sMTC此位点处未发现基因突变;黄种人、白种人、棕种人此位点处基因突变率分别为:7.1%、33.5%、50.0%,基因突变形式均为ATG→ACG点突变.白种人与黄种人,棕种人与黄种人间比较均差异有统计学意义(P＜0.05).结论中国人sMTC发病与RET基因第918位点处基因突变无关;不同人种sMTC此位点处基因突变率有差异;不同人种sMTC发病的基因基础可能不同.
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血管内皮生长因子D基因转移对胆汁性肝硬变大鼠肝纤维化和门静脉压力的影响
目的观察胆汁性肝硬变大鼠门静脉注射血管内皮生长因子D(hVEGF-D)后的促血管形成效应以及对肝纤维化和门静脉压力的影响.方法30只SD大鼠胆总管结扎法制作胆汁性肝硬变模型,治疗组门静脉注射PCHO/hVEGF-D 150μg/只,2周后比较肝组织纤维化程度(苏木素-伊红染色、浸银染色法)、门静脉压力、VEGF蛋白质表达、肝组织微血管密度改变.结果肝组织纤维化程度较注射前明显降低;门静脉压力治疗前为(15.45±1.97)cm H2O(1 cmH2O=0.098 kPa);治疗后则变为(12.56±1.86),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组VEGF蛋白质表达平均染色积分为6.56±1.81,肝硬变对照组4.4±1.02,差异有统计学意义(P＜0.01).治疗组血管计数为14.33±3.24;肝硬变对照为9.2±1.48(P＜0.01).结论胆汁性肝硬变大鼠门静脉注射血管内皮生长因子D表达载体后可以一定程度上促进肝内血管形成、减缓肝纤维化程度降低门静脉压力.
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急性肺栓塞时心肌血流灌注的变化
目的观察急性肺栓塞(APE)后冠状动脉血流量及心脏肌钙蛋白T(cTnT)与肌红蛋白(Mb)含量变化,探讨心肌血流灌注在急性肺栓塞继发心肌损伤机制中的作用.方法通过介入方法经导管注入自体血栓选择性栓塞肺动脉,建立不同栓塞面积的急性肺栓塞动物模型.监测栓前、栓后5、30 min,1、2 h冠状动脉血流量变化及栓后4 h血清cTnT与Mb含量.结果急性肺栓塞后血清cTnT与Mb含量升高.急性肺栓塞导致冠状动脉血流量显著下降,肺血管栓塞后15～30 min降至低值,30 min后趋于平稳.右冠血流量下降程度与肺栓塞面积有显著相关性.结论冠状动脉血流量减少及血清心肌结构蛋白含量升高为急性肺栓塞继发心肌缺血改变提供了直接证据.急性心肌缺血严重影响急性肺栓塞的预后.
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动脉瘤模型栓塞前后血流动力学的改变
目的评价动脉瘤模型行腔内微弹簧圈栓塞前后血流动力学的改变,用以判断疗效.方法运用改进的显微外科技术建立犬颈总动脉(CCA)动脉瘤模型22个,其中侧壁型12个,分叉部4个,末端型6个.术后7～14 d行彩色多普勒超声、经颅多普勒(TCD)、数字减影动脉血管造影(IADSA)及经微导管动脉瘤内测压,然后以微弹簧圈紧密填塞动脉瘤腔,栓塞后重复进行上述检查,比较栓塞前后血流动力学变化.结果所建模型均获成功.实验证实,动脉瘤微弹簧圈栓塞前后其血流动力学参数的差异有统计学意义(P＜0.01).结论实验所建动物模型是研究动脉瘤血管内栓塞治疗的理想方法;动脉瘤微弹簧圈栓塞后,能减低、改变或消除载瘤动脉及动脉瘤内异常血流动力学状态,终止动脉瘤行为,防止动脉瘤扩大和破裂.
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人瘦素蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化
目的构建人瘦素因子(Leptin)的原核表达质粒pGEX-4T-3-LEP,并诱导该基因在原核细胞中大量表达.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA重组技术,从人皮肤成纤维细胞内将编码人Leptin的cDNA序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-3上,选取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序.同时应用SDS-PAGE和蛋白质印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定.结果克隆出的Leptin基因的cDNA由469bp组成,包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分,含有Letinp基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3在DH5α细菌体内能够表达,并且随着诱导时间的延长,Leptin基因的表达量增加,重组Leptin蛋白主要存在于包涵体中.结论Leptin基因可以在原核细胞中获得表达,为深入研究该蛋白在创伤愈合中的具体作用奠定了基础.
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丝裂原蛋白激酶信号转导通路在机械通气相关性肺损伤中的作用
目的观察机械通气介导肺损伤(VILI)过程中丝裂原蛋白激酶(MAPK)的活性变化以及对细胞因子的影响,从中探讨VILI发生机制和MAPK的作用.方法72只SD大鼠随机分为未处理的对照组(不行机械通气)、正常通气组、过度通气组和采用MAPK抑制剂SP600125(JNK)、SB203580(p38)、PD98059(ERK)分别预处理上述3组.机械通气4 h后取大鼠肺组织采用Western blot方法测定各组的总JNK、ERK、p-38蛋白激酶的表达及其磷酸化水平变化.同时以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定大鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)浓度.结果正常和过度机械通气4 h后均能激活JNK、ERK、p38激酶,但以过度通气组为著(P＜0.01).过度通气组大鼠肺组织、BALF、血浆中的TNF-α、MIP-2含量显著高于其他组(P＜0.01).JNK、ERK、p38抑制剂显著降低肺组织、BALF中的TNF-α、MIP-2含量(P＜0.05或0.01),且JNK和ERK抑制剂作用强于p38抑制剂.结论过度机械通气激活了肺细胞中的JNK、ERK、p38激酶,且JNK、ERK、p38参与了VILI细胞因子的产生,即MAPK信号转导通路的激活可能是VILI发生机制之一.
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异丙酚对大鼠内脏抗伤害作用与中枢γ-氨基丁酸受体A受体的关系
目的探讨异丙酚对大鼠内脏抗伤害作用与中枢7-氨基丁酸受体A(BABAA)的关系.方法49只雄性SD大鼠,体重180～240 g,随机均分为7组:腹腔异丙酚10 mg/kg体重组(Pi.p.)、侧脑室荷包牡丹碱0.25 组(Bic i.c.v.)、脊髓蛛网膜下腔荷包牡丹碱0.25μg组(Bic i.t.)、侧脑室与脊髓蛛网膜下腔荷包牡丹碱各0.125μg组(Bic i.c.v./i.t.)、侧脑室预注荷包牡丹碱0.25μg+腹腔异丙酚10 mg/kg体重组(Bic i.c.v.+P i.p.)、脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱0.25μg+腹腔异丙酚10 mg/kg体重组(Bici.t.+Pi.p.)、侧脑室与脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱各0.125μg+腹腔异丙酚10 mg/kg体重组(Bic i.c.v./i.t.+Pi.p.).侧脑室或/和脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后10 min腹腔给药.采用结直肠扩张内脏痛模型,以腹壁明显收缩变平的小扩张压力值为痛阈,观察给药前及给药后各时间点的大鼠痛阈变化.结果腹腔注射异丙酚10 mg/kg体重,5 min后结直肠扩张痛阈显著提高(P＜0.05,P＜0.01),10～15 min达高峰,持续20 min;侧脑室、脊髓蛛网膜下腔或侧脑室+脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后结直肠扩张痛阈均无明显变化(P＞0.05);侧脑室、脊髓蛛网膜下腔或侧脑室+脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱后10 min腹腔注射异丙酚10 mg/kg体重,3组给药后5～20 min内结直肠扩张痛阈也均有提高,但其增高值均明显低于P i.p.组(P＜0.05,P＜0.01);且这3组之间大镇痛效应差异无统计学意义(P＞0.05).结论侧脑室、脊髓蛛网膜下腔、侧脑室+脊髓蛛网膜下腔预注荷包牡丹碱,均可部分拮抗异丙酚的内脏抗伤害作用,因而异丙酚的内脏抗伤害作用受脊髓与脊髓上中枢7-氨基丁酸A受体介导.
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白三烯C4增强小鼠骨髓来源树突状细胞迁移及肿瘤免疫治疗作用
目的应用白三烯C4(LTC4)调节体外培养DC表面CCR7表达,观察对其迁移能力和抗肿瘤免疫作用的影响.方法体外培养小鼠骨髓细胞来源DC,负载乳腺癌抗原后,加入LTC4培养,检测其表型、CCR7表达及其功能的变化.结果与对照组相比,LTC4组DC表达CD80、CD86增高,CCR7 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),但MLR和CTL活性不受影响.LTC4使DC对其配体CCL19反应性增强(P＜0.05).在乳腺癌动物模型中,LTC4培养DC抑制肿瘤生长作用比对照组好.结论以LTC4培养可以通过增强DC表面CCR7表达,促进其在体内迁移能力,提高抗乳腺癌DC疫苗的功效.
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RNA干扰双位点抑制Survivin基因诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡
目的研究采用RNA干扰技术抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中Survivin基因的表达对PC-3细胞增殖及凋亡的影响.方法设计2条靶向Survivin mRNA的Survivin shRNA,克隆至同一质粒载体,并鉴定分析;质粒转染PC-3细胞,绘制细胞生长曲线;并于转染48 h后进行Survivin基因蛋白表达及细胞凋亡检测.结果酶切鉴定、测序分析证实负载双片段Survivin shRNA的质粒载体构建成功.转染PC-3细胞后,细胞生长曲线示实验组PC-3细胞增殖明显受抑制;转染后48 h,实验组、阴性对照组、空白对照组Survivin蛋白表达强度分别为(4.62±0.84)%、(38.83±7.96)%和(40.98±3.83)%,实验组与两对照组相比差异均有显著性意义(P＜0.05);转染48 h后PC-3细胞凋亡率开始增加.结论负载双片段Survivin shRNA的质粒载体转染PC-3细胞后能明显抑制PC-3细胞增殖,抑制PC-3细胞Survivin蛋白表达,并能诱导PC-3细胞凋亡.但诱导PC-3细胞凋亡明显的时机需要进一步观察.
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肺癌淋巴结细胞培养及体内外的杀伤作用
目的探讨肺癌淋巴结细胞的培养方法及体内外杀伤作用.方法将肺癌引流淋巴结剪碎小于1 mm3,悬于含有白细胞介素2(IL-2)的RPMI 1640培养基,置于37℃,5%CO2培养箱培养,并行显微镜下观察和细胞计数.细胞扩增后用流式细胞仪测定细胞的免疫表型,测定其对自体肿瘤细胞的杀伤活性.将肺癌组织接种于裸鼠皮下,观察TDLN对移植瘤的抑制效果.结果淋巴组织在低浓度的IL-2培养1周,开始释放细胞群落,持续产生1～2月.1.0 g淋巴组织中在7、14、21 d分别获得1.0×108、1.4×108和1.2×108细胞.表型分析显示TDLN细胞主要由CD3+T细胞(84.22%),和CD83+成熟树突细胞(20.40%)组成,TDLN细胞对自体肿瘤细胞的杀伤率为69.21%,明显低于外周血LAK细胞的杀伤率(30.17%,P＜0.05).TDLN处理后4周,移植瘤体积为(388.75±33.64)mm3,而生理盐水组、IL-2组和LAK组分别为(742.56±160.14)mm3、(672.24±86.17)mm3、(544.79±30.88)mm3(P＜0.01).结论肺癌淋巴结细胞可在肺癌免疫治疗中发挥重要作用.
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泛素-蛋白酶体制剂在胰岛移植排斥反应中的作用
目的在小鼠胰岛移植模型上,研究泛素-蛋白酶体抑制剂在控制同种异基因移植排斥反应中的作用.方法泛素-蛋白酶体抑制剂用二肽硼酸类似物(DPBA)作代表.测定小鼠被注射DPBA后的血生化变化观察其可能的副作用.建立小鼠胰岛移植模型.受体糖尿病鼠随机分为3组:实验组,同种异基因移植24 h时后,每天静脉注射处理DPBA持续17 d.对照1组同基因移植;对照2组,同种异基因移植.两对照组移植后不作任何药物处理.结果DPBA对肝脏胰腺轻度毒性,有一过性的肾毒性和较明显的心脏毒性,停药后毒性明显下降.实验组同种异基因移植的移植物平均存活(33.88±24.54)d;对照2组同种异基因移植的移植物平均存活(4.33±2.42)d.两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论泛素-蛋白酶体抑制剂可以有效地抑制移植排斥反应,可以使用作为新的免疫抑制剂.
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Omi/HtrA2对前列腺癌细胞的促凋亡作用
目的检测人前列腺癌细胞(PC-3M)中Omi/HtrA2的表达情况,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体,探讨Omi/HtrA2对PC-3M凋亡的影响.方法以细胞免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Omi/HtrA2在前列腺癌细胞系(PC-3M)和正常前列腺细胞中的表达.利用软件辅助设计Omi/HtrA2特异性siRNA序列,体外合成后将其克隆入真核表达载体psiRNA-hH1neo.以脂质体法转染psiRNA-Omi/HtrA2载体至PC-3M中,以RT-PCR和Western blot法检测psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2转录和表达的沉默效应.用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞法检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后,PC-3M细胞凋亡的变化.结果细胞免疫组织化学和RT-PCR均显示Omi/HtrA2在PC-3M细胞中高表达.酶切和DNA测序证实合成的siR-NA基因序列正确,并已被准确克隆入psiRNA-hH1neo载体中.psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制PC-3M细胞中Omi/HtrA2的表达.转染psiRNA-Omi/HtrA2载体的PC-3M细胞凋亡下调.结论促凋亡因子Omi/HtrA2可导致前列腺癌细胞凋亡,Omi/HtrA2的表达对前列腺癌的发展有重要作用.
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核素显像活体示踪脊髓内移植的间充质干细胞
目的探索脊髓内移植间充质干细胞的活体监测方法.方法从胎儿血分离培养人间充质干细胞,流式细胞分析、免疫荧光染色、放射性配基结合实验检测其转铁蛋白受体的体内外表达.移植于兔正常脊髓后,放射性碘131I标记铁饱和转铁蛋白为示踪剂,进行活体闪烁扫描成像和脊髓切片放射自显影(A组);放射性碘标记人血清白蛋白为示踪剂作为非特异显像对照组(B组);单纯移植磷酸盐缓冲液(PBS)作为移植对照组(C组).结果体外培养和移植于脊髓第2天的间充质干细胞表达转铁蛋白受体,第10天不表达.移植第2天,活体闪烁扫描成像和脊髓切片放射自显影均显示A组细胞移植部位放射性聚集,B、C组仅见本底影像,A组与B、C组之间在脊髓移植部位的相对放射性(RI/RN)差异均有统计学意义(P＜0.05);移植后第10天,3组脊髓内移植部位均未见阳性显像.结论放射性碘标记铁饱和转铁蛋白为示踪剂,进行活体闪烁扫描成像可以示踪到脊髓内移植第2天的间充质干细胞.提供了一种以移植干细胞表面标志为靶点进行核素显像的活体示踪方法.
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脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义
目的探讨脓毒症大鼠心肌组织内毒素信号转导复合受体-Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白-2(MD-2)基因表达的变化情况,研究其与心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的关系.方法采用腹腔注射5 mg/kg体重内毒素(LPS)制作大鼠脓毒症模型.动物分为正常对照组(10只),内毒素注射后1、2、6 h组(各10只),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织TLR4/MD-2以及TNF-α的基因表达.结果LPS注射后1 h,TLR4/MD-2及TNF-α基因表达开始升高,2 h达高峰,6 h逐渐下降,各时间点的表达均显著高于对照组(P＜0.01).相关分析表明,心肌TLR4/MD-2基因表达分别与TNF-α基因表达呈显著正相关(P＜0.05).结论LPS可上调心肌组织TLR4/MD-2基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α基因表达.TLR4识别LPS信号是以TLR4/MD-2复合受体的形式完成的,而且在识别过程中,MD-2是TLR4必需的作用分子.
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PCNA和C-erbB-2及nm-23-H1在乳腺癌组织中的表达及临床意义
目的探讨PCNA C-erbB-2和nm-23-H1在乳腺癌组织中的表达及其与病理分型、临床分期、淋巴结转移、肿瘤大小、组织学分级的关系.方法采用免疫组织化学SP法测定76例乳腺癌组织石蜡切片中PCNA C-erbB-2和nm-23-H1蛋白的表达.结果PCNA C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移数目、TNM分期呈正相关(P＜0.01),与病理分型、肿瘤大小无关.nm-23-H1与淋巴结转移数目、肿瘤大小、TNM分期呈负相关(P＜0.01),与病理分型、组织学分级无关.PCNA和C-erbB-2的表达呈正相关(P＜0.01).C-erbB-2和nm-23-H1的表达呈负相关(P＜0.01).PCNA和nm-23-H1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论PC-NA C-erbB-2和nm-23-H1可以作为判断乳腺癌生物学行为,后续治疗和预后的三个重要的客观标记物.
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体外诱导小鼠骨髓干细胞转化为肝细胞的实验研究
目的模拟体内肝脏发生发育的环境和条件,建立以细胞因子为主的体外诱导培养体系,探讨骨髓干细胞体外转化肝细胞的可行性.方法获取小鼠骨髓干细胞,建立以细胞因子为细胞诱导的培养体系.在细胞培养过程中,观察细胞形态和数量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞特异性基因的表达,Western blot和流式细胞仪检测ALB和CK18在蛋白水平的表达情况.糖元染色法行细胞糖原染色、尿素合成试验检测细胞的合成和代谢功能.结果在诱导培养12 d,可以观察到多极性的肝细胞样细胞,且细胞逐渐增多、集落不断增大.诱导细胞在培养7 d开始表达AFP mRNA并维持到第21天,此后表达逐渐减弱;培养7天开始表达ALB mRNA和CK18mRNA,随着培养时间的延长表达不断增强;培养14 d开始表达TTR mRNA,随着培养时间的延长表达不断增强.通过Western blot检测,诱导21 d的细胞表达ALB和CK18蛋白,流式细胞术分析ALB阳性细胞的比例为60.45%,CK18阳性细胞的比例为67%.诱导培养21 d,细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒;诱导培养6 d,细胞开始合成尿素,尿素合成功能随诱导时间的延长而增强,于第15天达到高峰.结论我们建立的以细胞因子FGF、HGF、OSM、EGF为主的细胞诱导培养体系能促使骨髓干细胞定向转化为肝细胞.
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精原细胞分离纯化方法的建立及其免疫化学鉴定
我们通过程序性复合酶消化结合差速贴壁及非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞,探讨精原细胞的分离纯化方法,并对纯化后细胞进行免疫化学鉴定.
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Flt3配体重组腺病毒治疗小鼠胃癌的实验研究
Flt3配体(FL)是新的早期造血生长因子[1].研究表明,它能显著增加树突状细胞(DC)[2]、自然杀伤细胞(NK)[3]的数量和功能.DC和NK细胞在机体抗肿瘤免疫反应中起着关键作用,因此如何增加DC、NK细胞的数量和功能,一直是我们研究的热点.虽然Flt3有此作用,但其在体内表达的水平很低,时间短,不能达到抗肿瘤的需要,因此在早期我们设计了Flt3配体重组腺病毒感染小鼠前胃癌细胞的研究,并证实被感染的胃癌细胞能介导所携带的mFL高效表达[4].在此基础上我们用Flt3配体重组腺病毒对小鼠胃癌进行局部治疗,观察其小鼠体内抗肿瘤效果.
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大鼠L5/6小关节感觉神经的支配模式
下腰痛十分常见,由于其原因和发生机制十分复杂,因此临床上诊治仍十分困难.腰椎小关节病变是导致下腰痛的主要原因之一[1,2,3].因此阐明腰椎小关节源性下腰痛的神经支配与传导模式十分必要.本实验采用逆行神经追踪和免疫组织化学方法研究大鼠L5/6小关节在生理和炎症状态下神经支配途径和对应背根神经节内不同神经元的表达,从而探讨腰椎小关节的神经支配模式以及小关节源性下腰痛可能的产生机制.
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白藜芦醇对U251人胶质瘤细胞抑制生长作用的研究
白藜芦醇(Res)是一种广泛存在于植物中的植物补体.而Res对胶质瘤的抑瘤作用报道甚少,近年来有关胶质瘤的大量的研究证实,表皮生长因子受体(EGFR)介导的信号转导通路在恶性胶质瘤发生、发展中发挥着关键的作用[1].本实验进一步就Res对U251脑胶质瘤细胞生长增殖的抑制、诱导细胞凋亡及其与胶质瘤增殖及其相关机制进行了探讨.
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18β-GA对逼尿肌不稳定缝隙连接介导细胞间通讯功能影响
缝隙连接(GJ)是相邻细胞间跨膜离子及低分子通道[1],逼尿肌缝隙连接介导细胞间通讯(GJIC)功能在DI发病机制中具有重要意义.本研究旨在利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及荧光漂白后恢复技术(FRAP)观察缝隙连接阻滞剂18β-GA对培养大鼠DI细胞GJIC功能的影响,为采用阻断细胞间兴奋传递来治疗DI提供依据.
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臂丛神经损伤患者肱二头肌和小指展肌蛋白质表达的差异
臂丛神经损伤后,同一神经丛支配的手内在肌群往往比外在肌群更早地发生不可逆的萎缩,造成神经再植后手内在肌群的收缩功能不能得到恢复,手部精细功能恢复不完全.因此,我们以臂丛神经损伤的患者为对象,通过比较蛋白质组学方法,探索失神经后萎缩的骨骼肌中,蛋白质表达的变化,以阐明骨骼肌失神经萎缩的分子机制和临床诊治以及药物开发提供依据.
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体外循环术后患者Toll样受体变化及其意义
全身炎症反应综合症(SIRS)是体外循环术后常见及严重的并发症,单核细胞在CPB早期即参与了其中的炎症反应[1].本研究旨在观察体外循环(CPB)围术期外周血单核细胞TLR4和CD14的变化规律,寻求新的抗炎途径.
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人脑胶质瘤U251耐药细胞株的建立及耐药相关蛋白的筛选
我们通过模拟模拟临床给药方法,以阿霉素为诱导剂,建立理想的多药耐药细胞模型,并对已建立的耐药细胞株进行了多药耐药基因1(MDR-1)编码蛋白P-gp以及其它的耐药基因表达的蛋白如多药耐药蛋白耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、谷光甘肽转移酶π(GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)进行了定量研究,为阐明胶质瘤多药耐药机制并逆转耐药奠定基础.
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脑保护剂在兔局灶性脑缺血中的联合应用
针对目前不能完全、有效地阻断缺血性损伤的级联反应的脑保护剂治疗脑缺血的现状,我们联合应用作用于脑缺血不同损伤机制的脑保护剂-胞二磷胆碱(Citicoline)、促红细胞生成素(EPO)和非氨酯(FBM),观察其对兔脑组织缺血后的脑梗死体积和神经元凋亡等的影响.
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S-腺苷蛋氨酸对大鼠缺血再灌注肝脏线粒体的保护作用
肝移植手术过程中移植肝不可避免地要经历缺血再灌注损伤阶段.S-腺苷蛋氨酸(SAM)为甲基供体和生理性巯基化合物的前体,参与体内许多重要的氧化还原反应.我们利用大鼠肝脏缺血再灌注模型,以线粒体为研究对象,旨在探索SAM预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.
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环氧化酶-2抑制剂对前列腺癌细胞增殖影响的研究
本实验通过研究雄激素非依赖性前列腺癌PC-3、PC-3m细胞中环氧化酶-2(COX-2)的表达和前列腺素E2(PGE2)的释放,分析两者与前列腺癌的相关性,并观察塞来昔布(celecoxib)对PC-3和PC-3m细胞增殖的影响,探讨选择性COX-2抑制剂用于防治晚期前列腺癌的机制.
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黄芪对腹腔镜气腹所致红细胞免疫功能损伤的保护作用
红细胞免疫系统是机体免疫系统的重要组成部分,腹腔镜CO2气腹对患者红细胞免疫功能可造成不同程度的损害[1].为探讨黄芪对腹腔镜CO2所致红细胞免疫功能损伤的保护作用,我们对一组腹腔镜胆囊切除患者静脉应用黄芪前后红细胞免疫功能指标进行了检测和分析.
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PTEN基因转染对人膀胱癌细胞系BIU-87增殖和侵袭力的影响
PTEN是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,它通过发挥磷酸酶作用,阻断信号传导通路,抑制细胞的生长、黏附、铺展和迁移,诱导凋亡,从而对肿瘤的生长和侵袭产生负性调节作用[1].研究发现,在人类多种肿瘤中均有PTEN的丢失或突变,其表达与肿瘤的发生、发展及预后有一定的相关性.本实验将外源性PTEN转染入人膀胱癌细胞系BIU-87中,观察其对肿瘤细胞增殖力和侵袭性的影响,以探索膀胱癌基因治疗的新靶点.
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腹腔镜手术时乌司他丁对肝肾功能的保护作用
目的观察腹腔镜手术前后肝肾功能的变化,评价应用乌司他丁(UTI)的治疗效果.方法60例择期行腹腔镜手术的患者随机分为两组.U组:UTI治疗组,在手术前和术后第1、2、3天给予UTI 20万U静滴;C组给予等量生理盐水静滴.比较两组肝肾功能和促炎性细胞因子的变化.结果两组患者术后第1、3天谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和血肌酐(Cr)较术前均明显升高(P＜0.05),U组升高程度明显低于C组(P＜0.05),第5天两组ALT、AST和Cr均恢复至术前水平(P＞0.05);术毕、术后第1、3天C组肿瘤坏死因子(TNT-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-8较术前显著升高(P＜0.05),术后第5天恢复至术前水平,U组则无明显变化.结论乌司他丁对腹腔镜手术时肝肾功能具有保护作用.
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医学实验肝癌动物模型的研究进展
肝癌是我国常见的恶性肿瘤,具有发展快、预后差的特点.动物模型是动物实验研究的基础,由于种属之间的差异及人类肝癌形成过程中的多因性,建立一个完全反映人类肝癌的动物模型比较困难,但可依据不同的实验目的选择相应的动物实验模型.随着转基因技术、基因敲除技术、克隆技术等分子技术在实验动物模型制作中的广泛应用,实验动物的品种、品系及具有人类疾病特征的模型动物种类数量快速增长[1].
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肌源性干细胞的研究进展
骨骼肌中含有丰富的细胞成分,从原始的干细胞到终末分化的成熟细胞.近年在骨骼肌中发现了一群被称为MDSCs(muscle-derived stem cells)的细胞群体,预期它们在组织工程应用领域特别是细胞移植和基因治疗方面前景广阔.而当某些骨髓疾患(如再生障碍性贫血或肿瘤)使得骨髓源性干细胞不敷使用时,这种干细胞更可派上用场.本文就其特征、来源、与其他干细胞群的关系及应用等问题作一综述.
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预防肝移植后乙型肝炎复发的治疗现状
由于缺乏有效防止移植肝脏再感染HBV的方法,HBV相关的肝脏疾病一度被认为是肝移植(OLT)的手术禁忌症.上世纪90年代,随着乙肝免疫球蛋白(HBIG)以及拉夫米啶(LAM)的广泛应用HBV相关肝脏疾病的患者接受OLT术后的效果有了显著提高.
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RNA干预研究及其在肿瘤基因治疗中的应用
近年来研究表明,一些小的双链RNA(dsRNA)通过特异性结合互补链,可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干预(RNAi).它是体内抵御外在感染的一种重要保护机制,可以作为简单、有效的代替基因敲除的遗传工具.RNAi正在彻底改变基因组学领域的研究步伐,因而被Science杂志在2001年至2003年连续3年评为十大重要的科学成果之一.
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肝细胞性肝癌实验研究的热点与展望
近20年来,随着医学影像学、麻醉学及外科技术的快速发展,我国肝细胞性肝癌(HCC)的治疗取得了长足的进步,手术切除率、术后生存率及生存质量均有较大提高.但与其他肿瘤相比,HCC的疗效远未如人意.影响因素很多,除治疗方法的选择外,更与HCC生物学特性、分期密切相关.肝癌基础研究已进入一个平台期,目前怎样激活HCC的基础研究,需从更深层次阐明HCC癌变、早期诊断、转移复发、浸润的免疫细胞功能等,才能探索出新的综合治疗模式,进一步提高HCC的治疗效果.
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正确对待实验研究的结果
实验研究所得的结果与预期的结果不符,是经常遇到的事.这时当如何对待和处理?谨就自己遇到过的实际问题谈一谈体会.
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再生医学研究中需要重视的几个问题
再生医学是通过研究机体正常的组织特征与功能、受创后修复与再生机制及干细胞分化机制,寻找有效的生物治疗方法,促进机体自我修复与再生,或构建出新的组织与器官,以改善或恢复损伤组织和器官功能的科学.也有专家认为,再生医学是指利用生物学及工程学的理论和方法,创造出丢失或功能损害的组织和器官,使其具备正常组织和器官的机构和功能.此外,还有专家认为再生医学的概念可有广义和狭义之分.
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环孢素A与他克莫司对人肝癌HepG-2细胞生物学行为的影响
目的探讨环孢素A(CsA)与他克莫司(FK506)对肝癌的增殖、凋亡、复发及转移的影响.方法培养人肝癌细胞HepG-2,分别经5、10、100、500、1 000、5 000μg/L的CsA、FK506处理24～48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡、荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转化生长因子(TGF)-β、细胞间黏附分子(ICAM)、骨桥蛋白(OPN).结果肝癌细胞增殖能力48 h明显受到抑制,CsA、FK506使G2期显著延长;FK506在小于100μg/L及CSA在小于1000μg/L时,随浓度增加,肝癌凋亡率逐渐增加,当两者分别超过100、1 000μg/L时,则出现凋亡率减低;FK506、CSA分别在100、1 000μg/L低浓度时对OPN无影响,在1 000、5 000 μg/L高浓度时基因量显著增加.FK506在低浓度时对ICAM及TGF-β无影响,在高浓度时基因量显著增加;而CSA对两者无明显影响.结论CsA、FK506均对肝癌增殖有抑制作用,使G2期阻滞,促凋亡;低浓度时对肝癌转移无影响,高浓度时增加转移危险.
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应用激光捕获显微切割技术对肝细胞癌8号染色体短臂杂合性缺失的研究
目的探讨8p杂合性缺失(LOH)的特点及其与肝细胞癌(HCC)临床病理特征的相关性.方法选择8p上5个具有高度多态性的微卫星标记,对62例HCC组织利用激光捕获显微切割(LCM)技术进行LOH分析.结果有56.5%(35/62)的HCC患者在1个或多个基因位点发生LOH.LOH频率高的3个位点依次为D8S298(51.1%,24/47)、D8S1771(48.8%,21/43)和D8S264(43.5%,20/46).D8S298位点肝内转移者的LOH频率明显高于无转移者(P＜0.05);在D8S1771位点,肿瘤直径＞3 cm的LOH频率明显高于≤3 cm组(P＜0.05).结论HCC在染色体8p特定位点上LOH明显,在这些区域可能存在一个或多个与HCC发生发展相关的肿瘤抑制基因.8p上部分位点的LOH与临床病理特征有一定的相关性.
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EphA2在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义
目的检测原发性肝细胞癌中EphA2的mRNA和蛋白的表达及临床意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术及免疫组织化学方法检测EphA2的mRNA及蛋白在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝脏组织中的表达,并分析其与临床病理特点之间的关系.结果半定量分析显示EphA2 mRNA的表达在肝癌组织(0.836 8±0.205 7)、癌旁肝组织(0.768 9±0.118 0)和正常肝组织(0.720 8±0.091 0)中的表达差异无统计学意义(P＞0.05);从正常组织、癌旁肝组织到肝癌组织,EphA2蛋白的阳性表达率分别为50.0%、57.5%和87.5%,呈递增趋势(χ2=20.21,P＜0.01);EphA2蛋白的过表达与肝癌患者的门脉癌栓、卫星灶及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论EphA2蛋白的过表达与肝癌的淋巴结转移、卫星灶的形成和门脉癌栓有密切的联系,提示其在肝癌的侵袭和转移中发挥重要的作用.
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飞行质谱技术筛选肝癌肿瘤标志物的临床意义
目的探讨蛋白质质谱分析方法鉴定肝癌生物标志物的临床应用价值.方法用美国CipherGen公司金属亲和表面(IMAC3)芯片和蛋白芯片仪,检测24例肝癌患者,56例正常人血清中的蛋白质相对含量.结果肝癌患者与正常人血清蛋白质在质荷比为3 500Da至12 000Da间有6个蛋白质含量差异有统计学意义(P＜0.05).经Biomarker Pattern软件分析,用4 801 Da蛋白质可将其中24例肝癌患者中全部被正确分组,56例正常人均被正确识别,准确率为100%(80/80),灵敏度和特异性分别为100%(24/24),100%(56/56).结论本实验中查获的4801Da蛋白质可能为肝癌患者的特异蛋白,该方法可快速、准确检测肝癌,灵敏度、特异性高,临床应用前景广阔.
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免疫抑制剂对肝癌细胞增殖、运动侵袭的影响
目的探讨免疫抑制剂对肝癌细胞增殖、运动侵袭能力的影响,为肝癌肝移植术后免疫抑制剂的选用提供指导.方法用裸鼠人高转移肝癌模型LCI-D20,研究环孢素A(CsA)、他克莫司(FK506)、雷帕霉素(RPM)对肿瘤生长及自发肺转移的影响.采用扫描电镜、噻唑蓝比色法(MTT)、流式细胞仪、Boyden小室等方法分别研究各免疫抑制剂对人肝癌高转移细胞株MHCC97H增殖、凋亡、细胞周期、运动及侵袭的影响.结果体内实验中,RPM抑制了LCI-D20模型移植瘤的生长[(0.76±0.38)gvs(2.09±0.75)g,P＜0.05]及肺转移的发生(2/7 vs.7/7,P＜0.05);CsA组肺部转移灶的数目明显多于对照组(6±2 vs.4±1,P＜0.05);FK506组肺转移发生率虽较对照组减少,但差异无统计学意义.CsA及FK506均对移植瘤的生长无影响.体外实验中,RPM抑制了MHCC97H增殖,并使细胞周期停滞于G0～G1期.RPM及FK506抑制了MHCC97H的运动、侵袭(P＜0.05),而CsA则促进了MHCC97H的运动、侵袭(P＜0.05).结论CsA促进了肝癌的转移;FK506不促进肝癌的转移;而RPM则抑制了肝癌细胞的增殖及转移.
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肝细胞癌高表达新基因BC047440功能的研究
目的探讨肝细胞癌高表达新基因BC047440在肝癌形成中的作用.方法通过DOTAPTM脂质体介导的转染技术,将BC047440基因反义真核表达载体导入HepG2肝癌细胞,经G418筛选,获得稳定表达BC047440反义基因的HepG2肝癌细胞,采用半定量RT-PCR检测反义基因对转染细胞的内源性BC047440基因抑制效果,噻唑蓝(MTT)比色法观察转染细胞生长曲线及流式细胞术比较细胞周期的变化.结果转染BC047440反义基因的肝癌细胞内源性BC047440基因受到有效抑制,细胞生长速度明显减慢,细胞周期中G1期细胞比例明显增高.结论肝细胞癌高表达基因BC047440可能是一个新的肝癌相关基因,在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有一定的促进作用.
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9种耐药相关蛋白在肝癌中的表达及其临床意义
目的探讨肝细胞癌(HCC)及癌旁肝组织中9种多药耐药(MDR)相关蛋白表达的差异,并结合肿瘤的病理学特征进行分析.方法未经化疗的98例肝癌及其癌旁肝组织构建组织芯片,应用免疫组织化学方法检测P-gp、MRP3、LRP、GST-π、Cyclin D1、Cyclin E、p16INK4a、p21WAF1和p27Kip1共9种耐药相关蛋白的表达水平.结果除Cyclin D1外,其余8种耐药相关蛋白在HCC与癌旁肝组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.01);Cyclin D1在伴门静脉癌栓HCC中的表达显著高于不伴癌栓组(P＜0.01).结论HCC的天然耐药现象具有复杂性和多样性,Cyclin D1的高表达可能与HCC的转移和预后有关.
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巨噬细胞吞噬功能受损对肝癌自发性破裂的影响
目的检测巨噬细胞吞噬功能,探讨肝癌自发性破裂的发病机制.方法收集肝癌破裂组和非破裂组患者标本各9例,采用流式细胞术和免疫组织化学的方法,检测两组患者肝脏标本内巨噬细胞吞噬功能.结果自发性破裂组巨噬细胞吞噬免疫复合物能力明显低于非破裂组[6.35‰(4.05、8.42‰)vs9.16‰(6.42、10.82‰),P＜0.05];自发性破裂组内巨噬细胞表面受体CD11b、CD18和CD16的表达量百分率明显少于非破裂组[6.19%(4.70、7.02%)vs 10.25%(8.83、11.95%),P＜0.05;4.46%(3.85、5.77%)vs 7.09%(5.55、12.60%),P＜0.05;2.64%(1.74、4.11%vs 6.43%(4.83、9.67%),P＜0.05].结论患者肝脏内巨噬细胞吞噬功能下降导致血管壁免疫复合物沉积、血管受损及小动脉脆病弱性变,在稍受外力的情况下极易破裂出血,并可能与肝癌自发性破裂有关.
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利用噬菌体肽库筛选高转移潜能人肝癌细胞结合肽
目的筛选高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽.方法以高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3作为靶细胞,低转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L为吸附细胞对噬菌体随机7肽库进行差减筛选,采用噬菌体结合实验和抗噬菌体免疫细胞化学染色对阳性克隆的特异性进行鉴定.结果经3轮筛选,随机挑选48个噬菌体克隆进行DNA序列分析,展示AWYPLPP肽的噬菌体被高度富集77%(37/48);噬菌体结合实验显示,与低转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、PLC/PRE/5和无转移潜能人肝癌细胞系Hep3B以及正常人肝细胞系CCL13相比,AWYPLPP噬菌体特异性与高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3、HCCLM6、MHCC97H和MHCC97结合(P＜0.01);抗噬菌体免疫细胞化学染色证实AWYPLPP噬菌体特异性靶向高转移潜能人肝癌细胞系HCCLM3、HC-CLM6、MHCC97H和MHCC97.结论从噬菌体肽库中获得与高转移潜能人肝癌细胞特异性结合肽,可作为肝癌转移复发靶向治疗研究的载体.
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聚乙二醇化干扰素-α联合卡培他滨对肝癌生长作用的影响
目的探讨联合应用聚乙二醇化干扰素-α与肿瘤选择性化疗药卡培他滨抑制肝癌生长的作用.方法用30只LCI-D20人肝癌高转移裸鼠模型,随机分为对照组、聚乙二醇化干扰素-α组(1.875μg/周)、卡培他滨组(每日2.10mmol/kg体重)和联合用药组.用药4周后,观察裸鼠肝内移植瘤体积变化及肝内转移情况,检测血常规、肝肾功能和体重变化.结果对照组、聚乙二醇化干扰素-α组、卡培他滨组和联合用药组肿瘤体积分别为(2 275±1 337)、(336±220)、(889±614)和(26±56)mm3.与对照组相比,用药组肿瘤体积明显缩小,联合用药组尤为突出(P＜0.01).各用药组血常规、肝功能和体重的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论聚乙二醇化干扰素-α与卡培他滨联合应用能显著抑制LCI-D20裸鼠模型中肝移植瘤的生长和浸润,副作用不明显.
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羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌和结肠癌细胞生长的抑制作用
目的研究羟基磷灰石纳米粒子(nano-HAP)对人肝癌BEL-7402细胞和结肠癌SW-480细胞生长及凋亡的影响.方法用羟基磷灰石纳米粒子以不同终浓度作用于这二株细胞.用噻唑蓝(MTT)比色法观察其对两株细胞的生长抑制,荧光显微镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术(FCM)等方法从细胞凋亡的角度探讨其作用机制.结果羟基磷灰石纳米粒子对BEL-7402和SW-480细胞的半数有效抑制浓度(IC50)值分别为29.28 mg/L和36.66 mg/L.50～100mg/L的纳米粒子处理48 h后,癌细胞即可表现出细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态改变.作用48 h后,琼脂糖凝胶电泳观察到DNA"梯带".流式细胞仪定量分析显示人肝癌、结肠癌细胞经0、50、100、200 mg/L作用48 h后的细胞凋亡率分别为2.23%、20.35%、29.34%、53.64%和3.57%、21.45%、37.10%、49.45%.结论羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌BEL-7402和结肠癌SW-480细胞有明显的生长抑制作用,诱导癌细胞凋亡可能是其主要作用机制.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
