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促进治疗血管新生的新中成药--麝香保心丸
在冠心病(CAD)患者中,进行性动脉阻塞经常导致侧支血管形成,籍以为缺血区提供血液.然而,这一自身代偿过程并不足以改善组织的缺血状况,以致绝大多数患者仍需手术或介入治疗使血管重建.闭塞血管造成缺血区域的部分代偿性血管生成不足的原因,可能是自身生成的促血管生长因子产量太少.治疗性血管新生则是通过外源干预促进血管的生成,以改善缺血组织的血液供应.目前,治疗性血管新生已进入临床前和临床试验阶段,蛋白治疗、基因治疗、干细胞抑制等技术的研究逐步深入,但也面临着安全性、有效性、临床可行性等问题的挑战.
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心脏病人的夜间观察
心脏是受交感神经系统的心交感神经和副交感神经系统的迷走神经双重支配.前者对心脏有兴奋作用,后者对心脏有抑制作用.夜间,人安静时,为心迷走神经紧张的作用较大.处于主导地位,即对心脏有抑制作用,也就是说心迷走神经节后纤维末梢释放的乙酰胆碱与M受体结合,引起心脏细胞抑制,呈现心率减慢,心房收缩力减弱,心房肌不应期缩短.房室传导速度减慢,甚至出现房室传导阻滞.
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咔唑生物碱HY-1诱导K562细胞凋亡作用的研究
目的研究咔唑生物碱HY-1对人慢性骨髓性红白血病K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制.方法通过SRB法检测HY-1对K562细胞体外增殖的影响;通过PI荧光染色法、罗丹明123染色法、AnnexinⅤ-PI染色法等流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳法,观察HY-1处理K562细胞后凋亡相关指标的变化; 通过Western blot检测凋亡相关蛋白的变化.结果 HY-1对K562细胞体外增殖的半数抑制浓度(IC50)为 (29.05±0.90) μmol/L.随着HY-1药物浓度的增加和作用时间的延长,SubG1期细胞明显增加,线粒体膜电位迅速下降,发生凋亡的细胞比例也显著增加,而且经琼脂糖凝胶电泳检测到了典型的DNA Ladder.Western blot结果显示,细胞色素c (Cyt c)表达明显增加;caspase-9酶原被剪切,且活化程度呈时间依赖性;caspase-3酶原及其作用底物PARP也发生了剪切; caspase-8表达无明显变化.结论 HY-1能够以剂量-时间依赖方式,通过线粒体激活途径,诱导K562细胞发生凋亡,并由此发挥其抗肿瘤活性.
关键词： 咔唑生物碱 人慢性骨髓性红白血病K562细胞 细胞增殖 细胞抑制 细胞凋亡 -
多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌细胞的抑制及促凋亡作用研究
目的 探讨多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人膀胱癌EJ细胞的抑制作用.方法 应用细胞培养、活细胞摄影技术、伊红染色细胞计数和原位DNA片段末端标记,观察DFMO抑制人膀胱癌EJ细胞的增生及诱导其凋亡.结果 活细胞摄像结果显示:与空白对照组相比4,6,8 mmol/L DFMO给药第5天,细胞生长明显抑制,随DFMO剂量增大,上述变化逐渐明显.伊红染色结果显示:4,6,8 mmol/L的DFMO均可抑制EJ细胞生长,并随剂量的增加,抑制作用逐渐增强.原位DNA片段末端标记结果显示:4,6,8 mmol/L DFMO均可诱导EJ细胞凋亡;6 mmol/L为较适宜剂量;3种检测方法均显示同时加入外源性腐胺(Pu)后,EJ细胞的凋亡与对照组无明显差别.结论 DFMO可以抑制膀胱癌EJ细胞的增生并诱导其凋亡.
关键词： 多胺生物合成抑制剂DFMO 人膀胱癌 细胞抑制 凋亡 -
人参皂苷Rg3脂质体的制备、表征及对黑色素瘤细胞的生长抑制作用
目的:制备人参皂苷Rg3脂质体并考察其相关性质.方法:采用薄膜分散法制备脂质体,葡聚糖凝胶微柱离心-高效液相色谱法测定脂质体的包封率,激光粒度测定仪和Zeta电位测定仪测定脂质体的粒径和Zeta电位.设计正交试验,以包封率、粒径为指标,综合加权评分法筛选人参皂苷Rg3脂质体的优处方和佳工艺;MTT法考察人参皂苷Rg3脂质体的A375黑色素瘤细胞抑制作用.结果:按优化处方和工艺制得的人参皂苷Rg3脂质体具有明显的脂质体双分子层结构,包封率为(93.92±2.34)％,平均粒径88.2 nm,Zeta电位-26.75 mV,人参皂苷Rg3脂质体对A375黑色素瘤细胞具有良好的抑制作用.结论:优选的人参皂苷Rg3脂质体的处方和制备工艺合理可行.
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中药防治化疗药物毒副作用的研究概况
恶性肿瘤是当代威胁人类健康严重的疾病之一,手术、放疗、化疗是肿瘤临床治疗的三大手段,其中化疗对患者体内残余肿瘤细胞的杀伤力强,可提高疗效,改善预后.但抗癌药物缺乏特异的选择性,在杀死癌细胞的同时,也会杀伤正常细胞,特别是对增殖旺盛的骨髓造血细胞抑制更为严重[1][2].因此,提高癌组织对化疗的敏感性,保护正常组织免受化疗的损害从而减轻毒副作用,是提高肿瘤治疗效果的重要途径.多年来,我国在用中药防治化疗毒副反应方面,取得了较大的进展和许多成功的经验,现简要综述如下.
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Omi/HtrA2基因表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药影响的实验研究
目的：研究凋亡促进因子Omi/HtrA2基因过表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药性的影响。方法用脂质体包裹转染人食管癌EC9706细胞，实验分为对照组、空载体组、Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组，采用RT-PCR检测不同干预组Omi/HtrA2基因mRNA表达的变化，MTT法检测不同干预组细胞生长抑制率，流式细胞术检测不同干预组细胞的凋亡率，分析Omi/HtrA2基因蛋白表达对细胞耐药性的影响。结果①Omi/HtrA2基因mRNA在EC9706细胞中的表达：对照组为（0.113±0.009），空载体组为（0.106±0.006），Omi载体组为（0.436±0.021），顺铂组为（0.196±0.013），Omi+顺铂联合组为（0.639±0.032），顺铂组、Omi+顺铂联合组较对照组、空载体组明显增强，差异有统计学意义（P<0.01，P=0.011，P=0.000），对照组与空载体组比较无显著性差异（P>0.05，P=0.725）。②MTT法检测Omi/HtrA2的表达对细胞生长的抑制率：对照组为0，空载体组为2.89%，Omi载体组为27.61%，顺铂组为30.02%，Omi+顺铂联合组为48.47%，与对照组相比，Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组均显著抑制EC9706细胞的生长，差异具有显著性（P=0.000）。③流式细胞术检测Omi/HtrA2的表达对凋亡的影响：对照组细胞凋亡率为10.76%，空载体组为13.26%，Omi载体组为38.14%，顺铂组为45.86%，Omi载体+顺铂联合组为56.64%，与对照组、空载体组比较，Omi载体组、顺铂组、Omi载体+顺铂联合干预组细胞凋亡率明显提高，差异具有显著性意义（P=0.000）。结论 Omi/HtrA2基因过表达可以明显抑制癌细胞的生长，提高癌细胞的凋亡率及癌细胞对化疗药物的敏感性，且Omi/HtrA2基因的表达与化疗药物具有协同抗癌作用。
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MEX3A在人膀胱癌组织细胞中的表达及分析
目的 探讨MEX3A基因沉默对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,并验证MEX3A蛋白在人膀胱癌组织中的表达.方法 选取8例病理诊断证实为膀胱癌患者的癌组织和癌周组织标本,其中男性5例,女性3例;年龄50～84岁,平均年龄63.4岁.实验组应用MEX3A-shRNA慢病毒颗粒转染5637膀胱癌细胞株,对照组采用阴性对照慢病毒转染.实时定量聚合酶链反应(PCR)检测MEX3A基因敲减效率,使用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Caspase3/7法检测细胞凋亡.应用免疫组织化学染色检测膀胱癌及癌周组织细胞中MEX3A蛋白表达量.结果 实时荧光定量PCR检测经shRNA慢病毒感染两组目的基因mRNA水平的表达丰度,实验组为(0.26±0.05),对照组为(1.00±0.05);两组比较,MEX3A基因在实验组5637膀胱癌细胞中的mRNA水平的表达量受到抑制(t=17.7,P<0.05).实验组与对照组相比,细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),细胞凋亡显著增加(P<0.05).在400倍光学显微镜下观察,棕黄色颗粒为人MEX3A蛋白与兔MEX3A抗体反应后染色所致,表示有MEX3A蛋白表达;在癌组织中较多,着色较深,癌周组织中较少,着色较浅.MEX3A蛋白在癌及癌周组织总的表达量分别为(7.33±2.73)分、(4.42±1.98)分,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中的表达量约是癌周组织中的1.66倍.结论 MEX3A基因可以促进膀胱癌细胞增殖,并抑制其凋亡;MEX3A蛋白在膀胱癌组织中呈现高表达.
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唑来膦酸盐对骨髓瘤细胞的增殖及CD138表达的影响
目的 研究唑来膦酸盐对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞KM3生长增殖及CD138表达的影响.方法 采用锥虫蓝拒染法检测1×10-5mol/L、5×10-5moL/L、1×10-4mol/L、5×10-4mol/L、1×10-3mol/L唑来膦酸盐处理后的KM3细胞存活率,用流式细胞术分析不同浓度唑来膦酸盐作用下KM3细胞凋亡率及细胞周期的变化,并进一步检测KM3细胞表面CD138表达的改变.结果 在1×10-5mol/L～1×10-3mol/L的浓度范围内,唑来膦酸盐对KM3细胞生长增殖均有抑制作用,抑制效果与唑来膦酸盐浓度呈剂量依赖性.不同浓度的唑来膦酸盐能诱导细胞凋亡,使细胞明显阻滞于S期,且呈剂量依赖趋势.在唑来膦酸盐作用下CD138+细胞数及荧光强度均降低(P值均＜0.05).结论 唑来膦酸盐对KM3细胞具有增殖抑制作用,机制可能涉及诱导凋亡、细胞周期阻滞,也可能涉及影响CD138的表达.
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血液系统疾病(二)
5 急性白血病急性白血病是造血干细胞恶变、大量增殖的白血病细胞抑制正常造血并浸润全身器官和组织的恶性血液病.其病情发展迅速,自然病程仅数月.根据主要受累的细胞系列可将急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病.
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CD4+CD25+调节性T细胞抑制自身免疫性糖尿病的作用机制探讨
1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)是由于自身反应性T细胞持续活化并破坏胰岛β细胞,使胰岛素分泌功能受损引发的代谢紊乱综合征,属于自身免疫性疾病.在T细胞发育过程中,胸腺可通过阴性选择消除自身反应性T细胞克隆,从而避免自身免疫应答的发生,此即中枢耐受机制.然而,一些自身反应性T细胞能够逃避阴性选择,识别外周组织抗原,从而引起自身免疫病.事实上,所有个体体内都存在自身反应性T细胞,但是自身免疫病仅仅发生在5%的人身上,这是因为体内还具有抑制从中枢耐受机制中逃逸的自身反应性T细胞活化及发挥效应的外周耐受机制.而调节性T细胞(Regulartory T cell,Treg)则是参与建立外周耐受机制的重要因素,尤其是CD4+CD25+Treg,一直是近年来的研究热点.对T1D患者的研究发现,病人体内的CD4+CD25+T细胞普遍出现数量减少或者调节能力减弱[1,2];同样,对非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠的观察也发现患病小鼠体内该亚群T细胞水平降低.因此,CD4+CD25+Treg可能在抑制胰岛自身抗原特异性T细胞活化,控制自身免疫性糖尿病发生发展方面发挥着重要作用.
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软肝冲剂对大鼠肝星状细胞增殖及分泌TGFβ1影响的血清药理学研究
软肝冲剂是我院30年来防治肝硬化的协定处方,已进行的实验研究证实其具有抗鸭乙型肝炎肝纤维化的作用.为进一步从细胞分子水平揭示其抗肝纤维化的机理,我们通过建立大鼠肝星状细胞(HSC)体外培养体系,用3H-TdR掺入法测定HSC的增殖,用细胞抑制MTT比色法测定总转化生长因子β1(TGFβ1)的活性来进行软肝冲剂对大鼠HSC增殖和分泌TGFβ1影响的血清药理学研究,现报告如下.
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高压电场不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞凋亡的实验研究
目的:不可逆电穿孔是治疗肿瘤的新兴技术,本文探讨高压电场引起的不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞凋亡的特点.方法:选择处于生长周期的A549细胞,共分为A-G7个组进行研究,其中A组为不施加电场的空白对照组,B-G组为实验组,B组施加500 V/cm强度高压电场,G组施加1750 V/cm的高压电场,BG组之间各组的高压电场强度间隔为250 V/cm.采取细胞抑制实验、不可逆电穿孔示踪实验、细胞凋亡实验,检验A549细胞细胞凋亡与电场强度的关系.结果:①各实验组与对照组、各实验组之间的细胞抑制率,均存在显著性差异(P＜0.05);②电场强度≥1000 V/cm时,细胞不可逆电穿孔率明显增加,有统计学意义(P＜0.05);电场强度≥1500 V/cm时,细胞不可逆电穿孔率增加不明显,无统计学意义(P＞0.05);(③电场强度≥1250 V/cm时,细胞早期凋亡率明显增加,有统计学意义(P＜0.05).结论:高压电场不可逆电穿孔诱发A549肺癌细胞发生早期凋亡的强度为1250 V/cm,发生晚期凋亡的强度为1500 V/cm,且凋亡率随着电场强度的增加持续升高.这对于高压电场不可逆电穿孔效应引起的肿瘤细胞凋亡机制的研究具有重要意义.
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熊果酸对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用
目的:本文通过不同浓度的熊果酸( ursolic acid,UA)作用于人胃癌SGC - 7901细胞,探讨UA对其生长的影响.方法:采用体外培养人胃癌细胞株SGC - 7901,MTT法观察不同浓度UA对细胞生长的影响；用10μmoL/L,20μmoL/L,40μmoL/L和80 μmoL/L不同浓度UA处理SGC - 7901细胞12h后,倒置显微镜观察细胞形态变化以及MTT检测细胞的生长情况.结果:在细胞抑制实验中20～401μmoL/L UA可使SGC - 7901细胞发生皱缩,40～80μmoL/L UA作用12 h后,SGC -7901细胞形态明显变圆,出现不同程度的漂浮；同时MTT实验结果表明,不同浓度的UA能抑制SGC - 7901细胞的生长并呈浓度依赖性.结论:UA能够抑制SGC - 7901细胞的生长,具有较强的抗肿瘤活性.
关键词： 熊果酸UA 胃癌细胞SGC - 7901 MTT 细胞抑制 -
ASP2215联合SAHA对FLT3-ITD突变细胞株体外协同机制研究
目的:探究FLT3急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia,AML)抑制剂ASP2215联合组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase inhibitor,HDAC)抑制剂SAHA,对伴FLT3-ITD突变的细胞株MV4-11的协同作用及其作用机制.方法:用不同浓度的ASP2215、SAHA单药或两药联合处理白血病细胞株MV4-11,观察细胞形态变化,采用CCK-8试剂盒检测其细胞活力.用流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹检测FLT3及下游信号分子STAT5的磷酸化,分析凋亡调控蛋白Mcl-1、Bcl-xL、Bcl-2、Bax和caspase-9、caspase-3的蛋白含量.结果:①相较于FLT3野生型细胞株THP-1,ASP2215能够特异性地抑制FLT3-ITD突变AML细胞株MV4-11细胞的增殖.②ASP2215和SAHA单药处理均能抑制MV4-11细胞的活性,这种抑制作用呈浓度和时间依赖性,且两药联合使用时能够协同抑制MV4-11细胞株的活性,不同药物浓度联合的联合指数(combination index,CI)值皆小于1.③ASP2215和SAHA呈浓度和时间依赖性诱导MV4-11细胞凋亡,两者联合能够进一步增加MV4-11细胞凋亡.MV4-11细胞凋亡的过程中,伴caspase-3和caspase-9蛋白剪切活化,且活化程度随细胞凋亡增加而上升.相较于单药作用,两药联合能够引起更多的caspase-3和caspase-9剪切活化.形态学上,细胞凋亡和坏死改变随着药物浓度增加依次增多,且两药物联合能够引起细胞更明显的凋亡和坏死改变.④FLT3抑制剂ASP2215能够降低FLT3受体及下游分子STAT5的磷酸化水平,SAHA对FLT3及下游STAT5分子磷酸化也有轻度抑制作用.ASP2215和SAHA都能引起Mcl-1和Bcl-xL抗凋亡蛋白水平的降低,轻度下调Bcl-2蛋白和轻度上调Bax蛋白表达水平.两药联合相较于单药能够进一步下调Mcl-1、Bcl-xL的蛋白表达水平和Bcl-2/Bax蛋白比例.结论:ASP2215联合SAHA能够协同抑制伴FLT3-ITD突变MV4-11细胞株增殖,促进细胞凋亡,其机制涉及两药对FLT3-STAT5通路不同程度抑制作用,以及对凋亡相关蛋白Mcl-1、Bcl-xL及Bcl-2/Bax蛋白比例的调控.
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外周血淋巴细胞参数LYMPH-Y在人类免疫缺陷病毒感染者中的变化及应用价值探讨
淋巴细胞在机体免疫系统中起重要作用,机体未受到刺激时其大部分处于静止期和记忆状态[1].HIV感染机体后,侵犯血液系统的CD4+T淋巴细胞,造成其数量减少,并产生一系列抑制信号[2],进而使淋巴细胞失能、凋亡,抑制其细胞周期及自我更新.失能、凋亡的淋巴细胞及效应淋巴细胞抑制核酸及蛋白质的合成,从而使其核酸含量发生相应变化[3],因此淋巴细胞核酸含量与免疫功能有着必然的联系.
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氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制
目的 探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制.方法 采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期.结果 在0.1～150 μmol·L~(-1)范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72 h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变.用10 μmol·L~(-1)的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成.结论 (+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX.
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帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用
目的观察帕米磷酸二钠(PAM)及埃本磷酸二钠(IBN)对体外培养的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP生长的抑制作用,探讨双磷酸盐类药物抑制前列腺癌细胞生长的机制.方法采用MTT法检测不同剂量的PAM、IBN对DU145、LNCaP细胞系生长的影响,并计算2种药物的IC50值,应用流式细胞仪检测DNA含量以探讨双磷酸盐类药物的作用机制.结果 PAM、IBN对前列腺癌DU145、LNCaP细胞系的生长均有抑制作用,抑制效应与药物剂量、作用时间成正比,150 μg/ml PAM和100 μg/ml IBN作用72 h后,2种细胞的生存率均低于40.00%(P<0.05).根据IC50值可知IBN对前列腺癌细胞的抑制作用比PAM强.结论 PAM、IBN对体外生长的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP产生剂量、时间依赖性的抑制作用,其抑制细胞的作用机制为促进癌细胞凋亡和干扰DNA合成.
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IFN-γ与乳腺癌发生发展关系的研究进展
IFN-γ是一种多效性的细胞因子,参与体内固有免疫和获得性免疫.乳腺癌作为全世界女性常见的恶性肿瘤,其发生发展是一个多因素、多阶段的变化过程,已确定很多细胞因子在乳腺癌的发展以及治疗中起作用.IFN-γ作为一种双向性的细胞因子,在乳腺癌的发生发展中,既能起到抗肿瘤作用又能参与肿瘤的发展.
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人羊膜细胞抑制异体淋巴细胞增殖的实验研究
人羊膜上皮细胞位于羊膜的内层,是在受精后第8天从外胚叶发育而来,理论上可以分化成各种组织细胞[1].本实验探讨羊膜细胞分离和培养方法,并通过混合淋巴细胞反应体系观察其免疫调节特性,为将来的细胞移植应用提供实验依据.
