首页 > 文献资料
-
前列腺癌转移细胞模型--LNCaP细胞模型
前列腺癌是严重威胁欧美国家男性健康的恶性肿瘤.研究前列腺癌发生与发展的分子机制,尤其是从雄激素依赖性向雄激素非依赖性转化的分子机制对该病的诊断和治疗极为重要.前列腺癌转移LNCaP细胞模型包括LNCaP、C4、C4-2和C4-2B等一系列的遗传背景相同的细胞系,成功模拟前列腺癌细胞从雄激素依赖性发展到雄激素非依赖性,从不转移到转移各个阶段的基本生物行为学的特征,已成为当前应用为广泛的前列腺癌细胞模型之一.
-
PSMA增强子/启动子特异性驱动shRNA靶向干扰EGFP的研究
目的:探讨前列腺特异性膜抗原增强子、启动子(PSMAe/p)驱动shRNA转录效果,比较何种终止序列有效.方法:分别以poly(A),minipoly(A),poly(U)为终止序列设计针对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的干扰序列,克隆入经Sal Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切的pPSMAe/p载体上.然后通过脂质体介导,将各重组干扰质粒与pEGFP-C1质粒共转染PC-3和LNCaP细胞.采用荧光显微镜,流式细胞仪,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测EGFP在各组细胞中的干扰效果.结果:重组质粒中成功插入了目的基因片段;荧光显微镜和流式测定结果显示各干扰质粒与pEGFP-C1质粒共转染LNCaP后,各干扰组荧光表达均有不同程度减少,与空载体组相比均有统计学差异(P＜0.01),pPSMAe/p-shEGFP-poly(A)组减少与pPSMAe/p-shEGFP-minipoly(A)组相比有统计学差异(P＜0.05),与pPSMAe/p-shEGFP-poly(U)组相比有显著统计学差异(P＜0.01).各干扰载体与pEGFP-C1质粒共转染PC-3后各组荧光表达无统计学差异(P＞0.05).EGFPmRNA和蛋白表达水平无明显差异;LNCaP细胞各干扰组中EGFPmRNA和蛋白表达与空载体对照组相比均有不同程度下降,以pPSMAe/p-sh.EGFP-poly(A)组为明显.结论:成功构建了针对EGFP的RNA干扰表达载体pPSMAe/p-shEGFP-poly(A)、pPSMAe/p-shEGFP-minipoly(A)和pPSMAe/p-shEGFP-poly(U);PSMAe/p可特异性驱动shRNA转录;poly(A)终止信号终止转录有效.
-
激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系
目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定.方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10 d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况.结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长.CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR.结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系.
-
双氢睾酮对LNCaP细胞系Smad3和Smad4转录及表达的影响
目的: 探讨双氢睾酮(DHT)对前列腺癌细胞系LNCaP中转化生长因子β(TGF-β)信号通路的下游信号蛋白Smad3、Smad4的基因转录及表达是否有影响,氟他胺对这些影响有无拮抗作用.方法:用含不同浓度DHT(2、10、50 nmol/L)和氟他胺(100nmol/L)的RPMI 1640培养液培养LNCaP细胞株.RT-PCR检测LNCaP细胞中Smad3、Smad4 mRNA水平,Western印迹法检测Smad3、Smad4蛋白表达情况.结果:与不含DHT和氟他胺的对照组比较,10、50 nmol/L DHT明显增强LNCaP细胞中Smad3 mRNA的表达(P<0.05),不同浓度的DHT均使Smad3蛋白的表达增高(P<0.05),氟他胺明显抑制DHT的这种增强作用(P<0.05);10 nmol/L浓度的DHT对Smad4 mRNA的转录有明显的抑制作用(P<0.05),这种抑制作用受氟他胺的抑制,不同浓度的DHT均可以使Smad4蛋白的表达下降,而且下降程度要比Smad4 mRNA下降更为明显(P<0.05),氟他胺能够减轻这种抑制作用.结论: DHT能够增强Smad3 mRNA的转录和表达,而对Smad4 mRNA的转录和表达有抑制作用,氟他胺可以不同程度地抑制DHT的这些作用.雄激素受体(AR)信号通路和TGF-β信号通路可能在Smads水平上存在交联.
-
帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用
目的观察帕米磷酸二钠(PAM)及埃本磷酸二钠(IBN)对体外培养的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP生长的抑制作用,探讨双磷酸盐类药物抑制前列腺癌细胞生长的机制.方法采用MTT法检测不同剂量的PAM、IBN对DU145、LNCaP细胞系生长的影响,并计算2种药物的IC50值,应用流式细胞仪检测DNA含量以探讨双磷酸盐类药物的作用机制.结果 PAM、IBN对前列腺癌DU145、LNCaP细胞系的生长均有抑制作用,抑制效应与药物剂量、作用时间成正比,150 μg/ml PAM和100 μg/ml IBN作用72 h后,2种细胞的生存率均低于40.00%(P<0.05).根据IC50值可知IBN对前列腺癌细胞的抑制作用比PAM强.结论 PAM、IBN对体外生长的前列腺癌细胞系DU145、LNCaP产生剂量、时间依赖性的抑制作用,其抑制细胞的作用机制为促进癌细胞凋亡和干扰DNA合成.
