首页 > 文献资料
-
含有RSV G蛋白片段和CTL表位融合蛋白的表达及纯化
目的:构建表达呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段(G126,来自100～225氨基酸)和来自RSV M2蛋白的CTL表位的原核表达质粒,探索适宜的表达和纯化条件,获得融合表达产物,为进行体内外实验检测奠定基础.方法:利用PCR技术,从质粒pUC18(G10)、pUC18(CTL)中扩增G126和CTL基因,通过DNA重组技术构建含DsbA-G126-Linker-CTL(DsbA-GLC)融合基因的表达载体pET(GLC).转化宿主菌E.coli BL21(DE3)plysS进行诱导表达,并采用亲和层析纯化目的蛋白.结果:DsbA-GLC在E.coli BL21(DE3)plysS中可获得高效表达,表达量可达菌体总蛋白的21%.通过可溶性测试,DsbA-GLC能以可溶性形式表达.纯化后目的蛋白的纯度可达到95%以上.结论:实现RSV G126和M2蛋白CTL表位的融合表达,所获得的重组蛋白可作为抗原用于RSV重组蛋白疫苗的筛选.
-
鼠疫菌抗原CTL表位预测方法的建立
目的 建市鼠疫菌抗原CTL表位的预测方法 ,为鼠疫菌表位组学研究提供行之有效的研究平台.方法 采用nHLAPred,BIMAS和SYFPEITHI网络预测法对IJcrV抗原的CTL表位进行预测.结果 预测得到了LcrV的特异性CTL优势表位:V8～16 NPQHFIEDL,V311～319 KYDSVMQRL和V258～264SYNKDNNEL.结论 结合小同预测方法 进行工细胞表位的预测,可得到鼠疫菌LcrV抗原的CTL表位,具有较高的准确率,可为表位网谱的绘制提供参考依据.
-
MART-1 HLA-A2限制性CTL表位的预测
目的预测黑色素瘤分化抗原MART-1的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位.方法采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法,对目的抗原MART-1的HLA-A2限制性CTL表位进行预测.结果预测出了6个九肽表位.结论两种方法预测结果的一致性较好,所预测出的6个MART-1的HLA-A2限制性CTL表位经后续实验筛选、鉴定后,可望用于新型MART-1肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究,为临床特异性治疗恶性黑色素瘤奠定基础.
-
O-糖基化HBV Pre-S(2)CTL表位分子模建及免疫学活性研究
目的研究O-糖基化(Glycosylation)修饰对HBV Pre-S(2)上CTL表位结构及其免疫学活性的影响.方法选择HBV Pre-S(2)上公认的HLA-A2限制性CTL表位44～53(SILSKTGDPV),以Ser44为糖基化位点,进行计算机分子模建,并利用糖肽合成技术,固相合成α-GalNAc糖基化CTL表位,免疫BALB/c(H-2Db)小鼠,观察其诱导CTL活性.结果α-GalNAc-糖基化可改变表位形态使之更适宜与HLA-A2类分子结合,糖基部分基团可从HLA-A2结合沟中向外伸出.与对照组比Ser44α-D-GalNAc O-糖基化44～53肽,诱导出较强的针对经抗原预刺激P815细胞的CTL应答,特别是50 μg和500 μg组,而且有明显的剂量-效应关系.结论Ser44α-D-GalNAc-糖基化修饰能改变Pre-S(2)上CTL表位44～53的结构,并促进特异性CTL应答,表明表位糖基化修饰可以调节CTL应答.
-
穿膜肽HIV-Tat49-57和CTL表位融合多肽疫苗的初步免疫学效应研究
目的探讨穿膜肽HIV-Tat49-57将CTL表位带入活细胞胞质并将其投入MHC-Ⅰ类抗原提呈途径的可能性.方法应用多肽固相合成技术,分别合成含HIV Tat49-57和HLA-A2.1限制性CTL优势表位MART-127-35的18肽和该CTL表位9肽.采用间接免疫荧光与激光共聚焦显微镜技术,分别对上述18肽和9肽的穿膜能力进行了动态观察.进一步用标准51Gr释放试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2.1阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位MART-127-35特异性CTL活性.结果 18肽能够穿过活哺乳动物细胞质膜进入胞质,并呈现出时间、剂量依赖关系;而9肽则无此效应.与9肽相比,18肽在体外诱导出了明显增强的特异性CTL活性(P<0.05).结论穿膜肽HIV Tat49-57可有效携带CTL表位穿过细胞膜进入胞质,并有效激发出针对该表位的特异性CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供新思路.
-
肿瘤抗原 CTL 表位修饰策略研究进展
肿瘤抗原 CTL 表位能诱导特异性的细胞毒性 T 淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）杀伤肿瘤细胞，但是单一表位存在分子量小、免疫原性低等缺点。表位修饰可增加其分子量，提升其免疫原性，诱导更有效的肿瘤杀伤效应。CTL 表位修饰包括表位分子氨基酸残基的改造和引入修饰分子。改造天然表位的氨基酸残基改变了表位分子的氨基酸序列，但保留其特异的抗原性，并可提高表位呈递效率。常用的 CTL 表位修饰分子包括 Toll 样受体配体、C 型凝集素受体特异性抗体、β2微球蛋白、病毒样蛋白微粒等，其可改变表位构象，但保留表位特异的抗原性，提高表位呈递的靶向性，且能诱导特异性高、强度大的免疫反应。本文将对表位修饰的具体策略作一简要综述。
