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多沙唑嗪诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡机制的研究
我们采用体外实验方法观察α1受体阻断剂多沙唑嗪对人雄激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3增殖的抑制作用,探讨其细胞凋亡的信号传导途径.
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雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞亚系模型的建立
目的 利用雄激素递减法建立雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞亚系模型LNCaP-AI.方法 利用活性炭/葡聚糖处理的血清模拟去雄激素环境培养LNCaP细胞,逐渐递减培养基中雄激素10 d,然后在无雄激素环境中继续培养6个月,培养出能够在无雄激素环境中生长的LNCaP-AI细胞亚系.采用MTT和ELISA法检测LNCaP-AI细胞在去雄激素环境下的增殖能力和前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果 LNCaP细胞在去雄激素环境培养初期生长缓慢,细胞形态呈神经内分泌样改变,经过6个月的连续无雄激素培养,细胞恢复以前的形态和生长.MTT检测表明LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中生长,通过ELISA检测PSA的分泌提示LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中恢复分泌PSA的功能.结论 激素递减法成功的建立了AIPC细胞亚系模型LNCaP-AI,利用该模型能够模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.
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前列腺癌雄激素依赖转化后雄激素受体基因表达变化的研究
背景与目的:前列腺癌雄激素依赖性转化的机制目前尚不完全清楚,多数认为雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的变化可能起重要作用,本研究主要探讨AR基因表达变化在前列腺癌雄激素依赖转化过程中的作用.方法:通过对33例晚期前列腺癌患者进行雄激素阻断治疗并长时间的随访,期间有18例患者发生了雄激素依赖转化,15例患者未发生雄激素依赖转化.采用RT-PCR法测定18例患者雄激素依赖转化前后及15例患者雄激素阻断治疗前后癌细胞内AR基因的表达情况.结果:18例患者雄激素依赖转化前后AR基因的表达分别为[(28.4±3.4) Ct vs (36.7±1.8)Ct],两者之间差异有统计学意义(t=14.43,P<0.001),15例患者雄激素阻断治疗前后AR基因的表达分别为[(29.5±3.1)Ct vs (29.1±3.2)Ct],两者之间差异无统计学意义(t=0.409,P>0.05).结论:AR基因表达增强是前列腺癌雄激素依赖转化的原因之一.
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前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达
目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.
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激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系
目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定.方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10 d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况.结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长.CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR.结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系.
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雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立
目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI.方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适直无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系.MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系.LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%.结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.
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前列腺癌神经内分泌分化的研究进展
神经内分泌( neuroendocrine,NE)细胞又称内分泌-旁分泌细胞或amine precursor uptake and decarboxylation(APUD)细胞,正常的前列腺组织中存在着散在的NE细胞,参与构成弥散性神经内分泌调节系统,分泌多种生物活性物质,对前列腺上皮生长、分化及外分泌的调节发挥着重要作用.前列腺癌(PCa)组织内的神经内分泌分化( neuroendocrine differentiation,NED)现象与PCa的进展、雄激素非依赖性转化和不良预后等有重要关系,可为PCa的诊断、治疗及预后判断提供依据[1].
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基于文献挖掘的雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的生物信息学分析
目的:比较雄激素依赖型与非依赖型前列腺癌的基因表达差异,加深对雄激素非依赖型前列腺癌形成的分子机制的认识,为前列腺癌防治找到新的有效手段. 方法:通过FACTA工具从PubMed找出前列腺癌的相关基因进行分类,利用GATHER、PANTHER、STRING和ToppGene等在线工具对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因进行生物信息学分析. 结果:筛选雄激素非依赖型前列腺癌特异基因128个,这些特异表达基因在细胞信号转导、凋亡、肿瘤生成、细胞粘附、细胞增殖和分化等生物学过程起着重要作用. 结论:通过生物信息学对雄激素非依赖型前列腺癌特异表达基因的挖掘发现,MMP9、EGFR、MMP2、ADM、MIF、IGFBP3、IL2、MET、BAD、RHOA、SPP1、EP300、SMAD3、RAF1、PTK2、TGFB2等基因在雄激素依赖型转变成非依赖型前列腺癌中可能起着重要作用.
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雄激素受体突变在前列腺癌进展中的作用
前列腺肿瘤的生长几乎完全依靠雄激素受体途径,因此对前列腺癌的治疗围绕阻断这条途径为中心来制定.但是这种治疗往往是肿瘤发展到雄激素非依赖阶段终治疗失败,在这些病例雄激素受体几乎都发生了突变,更多迹象表明肿瘤仍然继续生长发展.这种机制就是雄激素受体突变后仍然保持着其活性功能.雄激素受体突变后促进肿瘤继续发展的分子机制及其治疗策略仍缺乏统一认识,现就此作一综述.
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细胞内胆固醇代谢在前列腺癌神经内分泌转化中的变化及意义
目的:建立前列腺癌雄激素非依赖进展过程中的神经内分泌转化(NED)体外细胞模型,分析前列腺癌NE细胞转化时细胞内胆固醇代谢及其调控可能的变化及意义. 方法:去雄激素诱导建立前列腺癌LNCaP细胞NE模型,通过细胞形态学观察、蛋白印迹检测多种NE标记物(SgⅢ、NSE、CgA)表达、体外细胞增殖实验检测NE的发生；利用免疫荧光染色检测细胞内胆固醇和SgⅢ的表达及分布；利用半定量RT-PCR检测多种参与胆固醇合成、摄取相关蛋白基因(LDL-R、SREBP-1、SREBP-2)的表达. 结果:去除雄激素后体外培养,LNCaP细胞胞体缩小,轴突增长,呈NE样改变；SgⅢ、NSE、CgA等多种NE标记物表达上调,并随着时间延长逐渐增多；同时细胞增殖能力显著降低(P＜0.05).NE转化后的LNCaP细胞内胆固醇分布呈现明显的轴突末端聚集趋势,但表达量并无显著改变,相应的细胞内参与胆固醇合成、摄取相关蛋白基因的表达也无显著性差异(P＞0.05). 结论:短期去雄激素体外培养可成功诱导雄激素依赖的前列腺癌LNCaP细胞发生NED,NED后的细胞内胆固醇分布发生显著的轴突末端聚集趋势,以增强细胞内多种神经内分泌颗粒的形成.
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前列腺癌雄激素依赖转化后细胞内雄激素受体表达变化的研究
目的:探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中的作用.方法:对33例晚期前列腺癌患者进行雄激素阻断治疗并作长时间随访,其间有18例发生了雄激素依赖转化.15例未发生雄激素依赖转化.采用免疫组织化学及RT-PCR法测定18例患者雄激素依赖转化前后及15例患者雄激素阻断治疗前后癌细胞内AR蛋白及AR基因的表达情况.结果:18例患者雄激素依赖转化前后AR蛋白及AR基因的表达分别为(1.33±0.97 vs 3.11±0.76)和(28.41±3.38Ct vs 36.73±1.81Ct),两者之间差异有统计学意义(P<0.01);15例患者雄激素阻断治疗前后AR蛋白及AR基因的表达分别为(1.47±0.83 vs 1.404±0.99)和(29.50±3.08Ct vs 29.14±3.23Ct),两者之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:AR基因及AR蛋白表达增强是前列腺癌雄激素依赖转化的原因之一.
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前列腺特异性启动子rPB的改造及其载体质粒的构建和活性测定
目的构建一个前列腺特异性的、可启动针对雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗的改良启动子并测定其活性.方法选择前列腺特异性启动子rPB,通过两次PCR对其进行改造,用维甲酸反应元件(RARE)替代雄激素反应元件(ARE)或直接插入RARE,构建成为不同拷贝条件的rPB-DR,并与质粒连接.转染细胞后,进行荧光素酶活性测定.结果通过电泳鉴定及基因测序,证实构建成功.结论根据实验设计,构建出的rPB-DR应具有在维甲酸的调控下,针对雄激素非依赖性前列腺癌特异性启动基因治疗的功能,现构建成功不同拷贝条件的rPB-DR,证实实验设计构想,同时通过活性测定比较各种拷贝条件的rPB-DR启动子活性的优劣,为下一步与治疗基因的连接及功能测定奠定基础.
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具有前列腺癌特异性的启动子rPB-DR的活性测定
目的 测定本组构建的一个前列腺特异性的、可启动针对雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗的改良启动子rPB-DR的活性.方法 将已构建的4种不同拷贝条件的rPB-DR,与质粒连接,转染细胞后,进行荧光素酶活性测定.结果 测定结果显示用维甲酸反应元件(RARE)替代雄激素反应元件(ARE)或直接插入RARE,保持了该启动子的活性.结论 根据实验设计,构建出的rPB-DR应具有在维甲酸的调控下,针对雄激素非依赖性前列腺癌特异性启动基因治疗的功能,现构建成功不同拷贝条件的rPB-DR,通过活性测定证实了实验设计构想,也比较了各种拷贝条件的rPB-DR启动子活性的优劣,为下一步与治疗基因的连接及功能测定奠定基础.
