受体型酪氨酸磷酸酶的抗体制备与细胞定位研究

PCP-2是王红阳教授等于1996年在胰腺癌细胞株中克隆并鉴定的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(R-PTPs)家族的新成员[1],可通过近膜区与重要的肿瘤相关基因β-catenin相互作用.

区域隔离肝脏灌注的研究

本研究旨在探讨区域隔离肝脏灌注(RIHP)的可行性,并初步评价其隔离效果,化疗药物局部积聚效果及肝脏损害情况.

增生性瘢痕中丝裂素活化蛋白激酶基因表达的变化

增生性瘢痕的形成受多种信号通路的调控,其中丝裂素活化蛋白激酶(MAPKs)可能起着十分重要的作用.MAPKs家族成员主要包括细胞外信号调节蛋白激酶(erk1/2),应急活化蛋白激酶(sapk)和蛋白激酶p38MAPK[ 1].

胚胎脊髓不同移植方法对大鼠损伤脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响

创伤后一个重要的继发性损伤是释放兴奋性氨基酸(EAA),随后作用于N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR).

大鼠体肺分流性肺动脉高压模型的建立

大鼠尤适于分子水平研究,但个体小,建立分流性肺动脉高压(HPH)难度大,尚鲜见成功报道.

一种改良的大鼠脊髓半横断模型制备

为了更好地观察和治疗脊髓损伤,制备动物损伤模型非常必要.目前多用Ramberg[1]和Borgens[2]建立的大鼠半横断脊髓损伤模型,本研究主要进一步改进脊髓半横断损伤模型,克服缺点,使其操作简单、实用,从而提高实验效率.

大鼠肝卵圆细胞的体外分离、培养及脾内移植

我们在成功建立和优化大鼠肝卵圆细胞增殖模型的基础上[1,2],在体外对大鼠肝卵圆细胞进行分离与培养,并将其移植入同种异体大鼠脾脏内,观察其在脾内的演变结果,为肝干细胞移植的临床应用提供实验依据.

曲张静脉壁的胶原和弹性纤维改变的研究

下肢静脉曲张是常见的周围血管疾病,其病因尚不清楚.我们对静脉曲张患者和正常对照的大隐静脉标本采用Weigert染色方法检测胶原和弹性纤维的含量及形态分布,探讨静脉壁中胶原和弹性纤维的改变与静脉曲张形成的联系.

丙氨酰-谷氨酰胺对外科危重患者术后免疫功能的影响

目的研究丙氨酰-谷氨酰胺(Ala-Gln)对外科危重患者术后免疫功能的影响.方法将30例外科急症大手术后APACHEⅡ评分大于12分的患者随机分成实验组和对照组.两组均于术后给予常规外科治疗并于术后第1～3天输入全营养混合液,其中实验组的部分氮量由20%L-丙氨酰-L-谷氨酰胺双肽注射液按每天0.5g/kg体重提供,余部分氮量由氨基酸溶液供给.对照组仅用氨基酸溶液为氮源.分别取治疗前(术后第1天)及治疗后第7天的外周血标本测量CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、IgG、IgA、IgM、总淋巴细胞计数(TLC).结果实验组IgG、IgA治疗后(14.12±3.70)g/L、(3.51±1.10)g/L较治疗前(9.19±4.10)g/L、(2.49±1.20)g/L显著升高(P＜0.01);TLC(1.13±0.87)×109/L较治疗前(1.03±0.79)×109/L显著升高(P＜0.05).结论丙氨酰-谷氨酰胺强化的肠外营养能提高外科危重患者术后免疫球蛋白和淋巴细胞计数,提高免疫功能.

血栓前体蛋白对瓣膜置换术后血栓形成的意义

目的探讨血栓前体蛋白(TpP)对监测机械瓣膜置换术后血栓形成的意义.方法分别测定19例瓣膜置换术在术前、术后2 h、第1、2、3天外周静脉血TpP、D-二聚体(D-Dimer)、纤维蛋白原含量.结果TpP含量术前处于正常水平,术后逐渐升高,2 h达高峰,然后缓慢下降,第3天再次升高(P＜0.01);D-Dimer含量术后2 h、第1、2、3天明显增加(P＜0.01),呈持续高水平;纤维蛋白原含量术后先降低后升高,第2天超过正常水平;瓣膜置换合并冠脉搭桥术后2 h和第1天TpP含量比单纯瓣膜置换术升高.结论瓣膜置换术后早期机体存在活动性血栓形成倾向,检测TpP对指导术后抗凝有一定价值.

记忆T细胞及粘附分子的表达与胃癌TNM分期关系的研究

目的研究胃癌组织中记忆T细胞及细胞粘附分子(ICAM)-1的表达,探讨其与TNM分期的关系.方法正常胃粘膜组织20例;胃癌75例按TNM分期分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,标本经链霉素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组织化学法染色后,对阳性结果进行分析.结果正常胃粘膜组织中CD45RO(由记忆T细胞表达)的表达率为100%,阳性细胞数(125.7±14.7)/HP,ICAM-1表达率95.0%;胃癌组CD45RO表达率44.0%,阳性细胞数(83.7±26.7)/HP,ICAM-1表达率37.3%,两组间差异有显著性(P＜0.05).从胃癌Ⅰ至Ⅳ组,上述3项值均呈下降趋势,且各组间差异均有显著性(P＜0.05).结论胃癌中记忆T细胞、ICAM-1表达率及阳性细胞数降低,提示T细胞有免疫耐受,机体对肿瘤的免疫杀伤作用下降,有利于判断机体的预后.

鼻胆管引流灌注治疗急性胰腺炎的临床价值

目的探讨鼻胆管引流灌注(ENBD)治疗急性胰腺炎的临床价值.方法40例经B超或CT检查无胆总管、肝总管结石的急性胰腺炎患者随机分为ENBD治疗组和对照组,ENBD治疗组在常规逆行性胰胆管造影(ERCP)检查时做胆汁常规检查及细菌培养,术后留置鼻胆管引流并交替应用0.9%氯化钠50 ml+庆大霉素8万U 8 h和0.5%灭滴灵50 ml 8 h灌注持续3～5 d,对照组应用善宁0.1 mg皮下注射8 h持续3 d并观察其1年内的复发情况.结果ENBD治疗组20例患者胆汁中均发现有白细胞及黄、黑色泥沙样物,6例培养出微生物(30%),ENBD治疗组与善宁治疗组的腹痛消失时间分别为(8.45±8.40)h和(38.10±35.43)h(P=0.002),血清淀粉酶恢复至正常所需时间分别为(18.00±8.26)h和(56.40±48.80)h(P=0.002),两组的1年复发率分别为5%和40%,其差异均有非常显著性(P＜0.01).结论鼻胆管引流灌注治疗急性胰腺炎疗效确切而安全,能减少复发,胆汁淤积和感染在急性胰腺炎的发病中起重要作用.

急性肺损伤患者血清C5a对肺血管内皮细胞依赖性粘附的影响

目的探讨急性肺损伤(ALI)早期肺血管内皮细胞损伤的机制及介导血管内皮细胞依赖性粘附的分子基础.方法夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定和比较正常人及ALI后患者血清中C5a的含量;用流式细胞术(FCM)检测ALI患者血清刺激人肺血管内皮细胞,观测其表面粘附分子:P选择素和细胞间粘附分子(ICAM)-1的表达变化,同时通过检测粘附于血管内皮细胞表面的中性粒细胞(PMN)中髓过氧化物酶(MPO)活性,间接反映血管内皮细胞表面PMN的粘附和聚集.结果ALI患者血清中C5a含量明显升高,同正常组比较差异有显著性;原代培养的肺血管内皮细胞,受ALI患者血清刺激后,其表面P-选择素的表达迅速增加,20 min达到高峰,60 min后开始降低,而ICAM-1的表达较慢,3 h开始升高,12 h达到高值,24 h内无明显下降,仍维持在较高水平;血管内皮细胞表面粘附的PMN中MPO的活性,3 h明显升高,12 h后达到高值.结论ALI患者血清中C5a含量明显升高,促进了PMN在肺微血管内的扣押、聚集进而同血管内皮细胞相粘附;而血管内皮细胞依赖性粘附的增强,主要是源血管内皮细胞上P-选择素和ICAM-1的表达增加,它们在ALI的发生、发展中起到重要作用.

肾细胞癌中bcl-2、p53、增殖细胞核抗原表达与细胞增殖和凋亡

目的探讨肾细胞癌(RCC)中bcl-2、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖、凋亡及病理参数之间的关系.方法应用链霉亲和素辣根过氧化物酶(SABC)法分析34例RCC标本中bcl-2、p53和PCNA蛋白的表达,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果34例RCC标本中,15(44.1%)例bcl-2阳性表达,表达阳性率与增殖指数(PI)、凋亡指数(AI)及RCC病理学参数无关;仅有3例p53表达阳性;PI为6.0%～24.0%(平均为12.3%),AI为2.0%～8.0%(平均为5.4%);PI与肿瘤分级、分期密切关系,AI与肿瘤分级有明显关系.结论明显增高的PI和AI与肿瘤恶性表型有关,提示在RCC中肿瘤细胞过度增殖伴有频繁的凋亡发生.

Ephrin-B2在人胰腺癌的表达

目的Ephrin-B2基因及其受体在人胰腺癌组织中表达的意义.方法通过Westernblot检测5例入正常胰腺和15例不同分化程度胰腺癌中Ephrin-B2基因的表达,HPIAS图象分析仪分析各组样本相对密度.结果人正常胰腺组织中无Ephrin-B2基因表达,无转移性胰腺癌中明显表达(0.90±0.03),转移性胰腺癌中Ephrin-B2基因表达(1.01±0.22、1.00±0.31)较无转移性肿瘤表达明显升高(P＜0.05).结论Ephrin-B2基因在人胰腺癌中异常表达,其可能通过和受体相互作用参与胰腺癌生物学行为的调控.

原发性肝癌及其癌旁组织生长激素受体的表达及意义

目的通过了解原发性肝癌及其癌旁组织的表达情况,初步探讨重组人生长激素(rhGH)在肝癌患者中的适用问题.方法采用放射配体法对32例原发性肝癌(HCC)组织及其癌旁组织进行生长激素受体(GHR)的检测,并以6例正常肝组织作为对照;肝组织GHR的受体大结合量(RT)和平衡解离常数(Kd)采用Scatchard法计算;并分析肝癌GHR受体结合容量(RT)值与肝癌临床病理特点之间的关系.结果在28例HCC组织与32例癌旁组织检测到GHR的存在,RT在有GHR表达的肝癌为(18.430 0±4.163 3)fmol@mg-1@protein,平衡解离常数(Kd)为(0.643 2±0.196 1)nmol/L,癌旁组织GHR的RT值为(32.744 1±3.510 6)fmol@mg-1 protein,Kd为(0.610 9±0.110 5)nmol/L,同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的RT值均降低(P＜0.05),而肝癌组织GHR的RT又低于癌旁组织,但三者之间Kd差异无显著性(P ＞0.05);肝癌组织GHR的RT值与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有4例肝癌组织未检测到GHR存在.结论大多数原发性肝癌组织及其癌旁组织均表达GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的使用可能需慎重.

骨髓间充质干细胞研究进展

近年来,骨髓间充质干细胞(MSC)受到学者的广泛关注,该细胞易于分离扩增,在适宜的条件刺激下,可向多方向分化,被称为组织工程的"种子细胞",又由于该细胞在体内外表达各种治疗性外源目的基因,被公认为是一种基因治疗的靶细胞,本文试就其生理功能、表面标记研究进展作一综述.

缺血对失神经肌肉超微结构及酶组织化学的影响

目的研究肢体缺血对失神经支配骨骼肌组织学、超微结构及Na、K-ATP酶和Ca-ATP酶活性的影响.方法选用SD大鼠24只,建立双下肢失神经支配腓肠肌实验模型后,结扎右侧股动脉,观察肌细胞的组织学,超微结构及Na、K-ATP酶和Ca-ATP酶活性变化.结果缺血侧肢体肌细胞直径及截面积较对照侧下降速度快25.48%及32.33%(t=2.94,P＜0.05;t=2.88,P＜0.05);缺血加速肌细胞线粒体,肌质网退变;Na、K-ATP酶活性术后2周实验侧较对照侧增高59.68%,而术后4周缺血侧较对照侧下降17.45%(t=2.24,P＜0.05);Ca-ATP酶活性下降速度缺血侧较对照侧分别快26.42%及21.87%(t=2.64、2.24,P＜0.05).结论缺血加速失神经支配骨骼肌萎缩的发生与发展,周围神经损伤合并肢体动脉损伤时,动脉尽可能予以全部修复.

nm23和血管内皮生长因子表达及微血管密度与骨肉瘤转移的关系

目的探讨nm23和血管内皮生长因子(VEGF)表达及微血管密度与骨肉瘤转移的关系.方法用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织中nm23、VEGF的表达和微血管(MV)密度.结果骨肉瘤中nm23阳性信号呈浆型和/或核浆型,阳性表达率为85.00%,其中有肺转移的病例阳性率为81.25%,无肺转移病例的阳性率为87.50%,差异无显著性(P＞0.05);VEGF的阳性率为65.00%,其中有肺转移者的阳性率(87.50%)明显高于无肺转移者(50.00%),阳性信号主要位于细胞胞浆,其阳性信号强度与骨肉瘤的组织学类型无关,但与是否有肺转移显著相关(P＜0.01).骨肉瘤中VEGF表达强度与MV密度呈明显正相关(r=0.725 6);有肺转移患者的骨肉瘤组织中MV密度明显高于无肺转移者(P＜0.01).结论在骨肉瘤的发生发展中VEGF是促进MV生成的主要细胞因子;VEGF可能是通过促进MV生成而增加恶性肿瘤细胞侵入血管,导致早期血道转移,但nm23的表达水平与骨肉瘤的转移发生无关,检测VEGF表达与MV密度值可作为判断骨肿瘤预后的重要指标.

下颈椎后路内固定器对失稳颈椎固定作用的生物力学评价

目的评价下颈椎后路内固定器重建失稳颈椎稳定性的生物力学性能.方法5具新鲜颈椎尸体标本制造脱位模型后依次用棘突钢丝、侧块螺钉、自制螺钉、椎弓根螺钉固定,用脊柱三维运动测量系统测算其运动范围.结果棘突钢丝在屈伸和侧弯时的运动范围可恢复完整颈椎水平,但旋转时的运动范围比完整颈椎大.侧块螺钉和自制螺钉的运动范围均较完整颈椎小,且侧弯和旋转的运动范围明显小于棘突钢丝.椎弓根螺钉侧弯和旋转的运动范围小.内固定相邻节段的运动范围虽有变化,但差异无显著性(P＞0.05).结论棘突钢丝可重建失稳颈椎的屈伸稳定性,但侧弯和旋转稳定性欠佳,侧块螺钉和自制螺钉优于棘突钢丝,椎弓根螺钉的稳定性强.

黄芪对兔周围神经再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄芪注射液对家兔周围神经缺血再灌注损伤的影响.方法40只家兔建立周围神经再灌注模型,随机分成5组:对照组、缺血组、再灌注组、黄芪治疗Ⅰ组、黄芪治疗Ⅱ组,动态观察坐骨神经相应各项指标变化.结果随制成血再灌注时间延长,缺血组、再灌注组运动神经传导速度分别减慢为(4.102±0.992)m/s、(5.898±8.891)m/s,动作电位波幅分别降低为(4.271±1.071)mV、(2.252±1.527)mV,潜伏期延长为(1.921±0.204)ms、(2.393±0.231)ms;组织超氧化物歧化酶(SOD)活性降低分别为(18.93±9.88)μU/L、(28.13±9.72)μU/L、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量增加(1.29±0.21)μmol/L、(4.29±0.14)μmol/L(P＜0.05),病理改变加重.黄芪Ⅰ组相对缺血组、黄芪Ⅱ组相对再灌注组神经传导速度增快(3.182±0.839)ms、(3.271±1.013)ms,动作电位波幅增高(1.867±0.512)mV、(2.467±0.219)mV,潜伏期缩短(1.317±0.324)ms、(2.387±0.175)ms;组织SOD活性增加(10.64±0.79)μU/L、(13.94±0.83)μU/L,脂质过氧化产物MDA含量降低(1.69±0.01)mol/L、(1.06±0.20)mol/L(P＜0.05或P＜0.001),病理改变减轻.结论黄芪注射液对家兔周围神经缺血再灌注损伤具有保护作用.

表皮细胞、成纤维细胞和几丁质-胶原蛋白复合人工皮的体外构建

目的探讨几丁质-胶原蛋白膜作为表皮细胞、成纤维细胞培养支架的可能性,体外构建包含双层细胞的复合皮.方法取健康成人环切包皮,分离成纤维细胞、表皮细胞,分别制成单细胞悬液,将几丁质-胶原蛋白膜(有孔面向上)平铺于60mm培养皿中,首先接种成纤维细胞,培养2 d后,将含10%小牛血清的DMEM更换成完全型DMEM,翻转膜,使光滑面朝上,再种植表皮细胞,每日换液.定期观察细胞与材料的粘附、细胞贴壁及其生长增殖情况.结果几丁质-胶原蛋白膜对成纤维细胞、表皮细胞无明显毒性作用,成纤维细胞培养1 d后,细胞贴附于材料支架,细胞胞体较大,呈典型的梭形.加入表皮细胞复合培养2 d示表皮细胞贴壁生长,并分化、增殖.复合皮构建2周,网格支架及孔内均有大量细胞生长,膜表面细胞融合成片,表皮细胞分化形成复层.结论几丁质-胶原蛋白膜对细胞无毒性,有利于培养细胞的粘附、生长.在体外可以构建成功类似生理性皮肤的人工皮肤.

大鼠先天性马蹄内翻足患肢及脊髓的病理观察

目的在建立先天性马蹄内翻足(CCF)的动物模型基础上,探讨其病因、发病机制及病变特点.方法应用83只雌性Wistar大白鼠从孕第10天起,将维甲酸(120 mg/kg体重)石蜡油混悬液(0.04g/L)经胃管单次注入,建立胎鼠CCF动物模型.结果动物模型的CCF发病率为53.7%,单足为79.4%,双足为20.6%.距骨持续停滞在胚胎阶段,距骨、跟骨间重叠不良和跟骨内翻,踝角随胎鼠发育而逐渐增大.脊髓前角细胞有凋亡现象.结论CCF在胚胎期即有足的马蹄内翻且畸形随生长发育而加重,其病因可能与脊髓病变相关.

不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较

目的通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据.方法取小耳畸形残耳软骨和肋软骨,体外分别用0.05%和0.15%Ⅱ型胶原酶消化16 h分离,台盼蓝染色计活细胞数,得原代细胞获得率.体外单层培养6代,观察形态学改变,群体倍增时间(PDT),免疫细胞化学染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律.结果人残耳软骨组织平均细胞获得率为(1.54±0.14)×106/g,肋软骨平均获得率为(0.46±0.09)×106/g,两类软骨细胞P1的PDT短,前3代增殖力较强,P3以后PDT明显延长,P6代细胞不再增殖.免疫细胞化学及RT-PCR均证实耳软骨细胞3代内、肋软骨细胞4代内软骨细胞表型稳定.结论第2代的耳软骨细胞与第3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞.

骨髓间质干细胞体外定向肌样分化的研究

目的研究兔骨髓间质干细胞经5-氮杂胞苷诱导,在体外定向肌样分化的情况.方法取兔胫骨骨髓,分离并培养骨髓间质干细胞,用5-氮杂胞苷(10μmol/L)定向诱导,分别在培养的第7、14、21、28天用免疫组织化学的方法检测细胞中的肌球蛋白重链,取未经5-氮杂胞苷诱导正常培养的细胞为对照组.结果兔骨髓间质干细胞经5-氮杂胞苷诱导,在其培养的第21、28天免疫组织化学染色方法检测细胞中的肌球蛋白重链呈阳性,而在其培养的第7、14天以及对照组,免疫组织化学染色方法检测细胞中的肌球蛋白重链呈阴性.结论骨髓间质干细胞是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在5-氮杂胞苷的定向诱导下,可以肌样分化.

坐骨神经损伤后脊髓前角神经元形态学的观察

目的研究大鼠坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元胞体形态学的变化,以探讨其主要死亡性质.方法切断大鼠右侧坐骨神经,再原位吻合,手术后不同时间取腰4～腰6(L4～L6)节段脊髓,作石蜡切片,通过苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察脊髓前角运动神经元胞体的形态学变化特征;作超薄切片,电镜下观察脊髓前角运动神经元胞体超微结构的变化情况.结果右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩(光镜下);电镜下,细胞膜内陷,将细胞分割成凋亡小体,然后裂解、细胞体消失;而左侧脊髓前角运动神经元胞体均一、无变化.结论坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元有死亡,死亡性质主要是细胞凋亡.

骨组织工程研究现状与展望

组织工程学是一门多学科交叉的边缘学科,是继细胞生物学和分子生物学之后,生命科学发展史上又一个新的里程碑,标志着医学将走出器官移植的范畴,步入制造组织和器官的新时代.

中国组织工程研究回顾与发展

组织工程学是根据细胞生物学和工程学的原理,应用正常具有特定生物学活性的组织细胞与生物材料相结合,在体外或体内构建组织、器官或其生物性替代物,以维持、修复、再生或改善损伤组织和器官功能的一门科学.

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