中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人肾癌环氧化酶-2的表达及与细胞增殖的关系
目的检测环氧化酶(COX)-2及细胞增殖核抗原Ki-67蛋白在肾癌组织中的表达,探讨COX-2在肾癌发生发展中的意义及其与细胞增殖的关系.方法采用链霉素抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶免疫组织化学染色.结果 COX-2在肾癌中的表达率为23/45,主要为癌组织的表达,而在癌旁正常组织中无表达或弱表达,COX-2的高表达与肿瘤的分级(P<0.01)、分期(P<0.01)与分型(χ2=10.761,P<0.01)差异有统计学意义;Ki-67在全部肾癌组织中均有表达,而在癌旁正常组织中低表达,程度不同,与分级(P=0.000)、分期(P<0.01)与分型(χ2=40.853,P<0.01) 差异有统计学意义;COX-2与Ki-67的表达差异有统计学意义(P<0.01).结论肾癌中COX-2的高表达与肾癌的分级、分期、分型及细胞增殖有关.
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Lipofectamine介导转染神经干细胞的研究
目的观察阳离子脂质体法转染体外培养神经干细胞的转染效率和外源基因的表达.方法从1 d龄新生鼠大脑皮层组织培养神经干细胞,带有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTract-CMV经Lipofectamine介导转染神经干细胞后观察GFP表达,用流式细胞仪测定转染率.并观察阳离子脂质体对神经干细胞的毒性作用.结果荧光显微镜观察到被转染的神经干细胞长期表达绿色荧光蛋白.流式细胞仪结果显示转染率高可达到39.99%.转染时,阳离子脂质体浓度超过24 ml/L时表现出细胞毒性.结论阳离子脂质体lipofectamine介导转染神经干细胞效率较高,外源基因表达时间长.
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带蒂大网膜对主动脉裂口感染的保护作用
目的探讨带蒂大网膜覆盖主动脉裂口或人造移植物对治疗主动脉裂口感染的保护作用.方法选杂种犬35条,在腹主动脉壁作全层切开造成1.2～1.5 cm长裂口并予感染后,随机分为3组:A组:单纯缝合加大网膜覆盖组(9条犬)、B组:人造血管片修补加大网膜覆盖组(11条犬)及C组:对照组(15条犬),观察各组犬存活情况、大网膜与主动脉间的血循环交通情况及组织病理学改变.结果采用带蒂大网膜治疗主动脉裂口感染的死亡率显著低于对照组(3/9、3/11、15/15,P<0.01);组织学观察发现治疗组主动脉切口内面或移植物的管腔面内膜完整,周围的主动脉壁组织结构完整,亦无明显的炎性反应或异物反应;血管造影示大网膜血管与主动脉壁的滋养血管和移植物之间均有血管沟通.结论采用带蒂大网膜覆盖主动脉裂口或人造移植物,能有效地减少并发症、降低死亡率、提高治愈率.
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多发性结直肠癌中抑癌基因p53的表达与突变
目的探讨抑癌基因p53与多发性结直肠癌的关系.方法实验组为同时多发性结直肠癌19个癌灶和结直肠再发癌12个癌灶,对照组为散发性结直肠癌17个癌灶.分别采用免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)方法和单链DNA构像多态性(PCR-SSCP)方法对癌组织和癌旁正常组织进行p53蛋白以及p53基因第5、7、8外显子突变的检测,比较各组蛋白表达和基因突变的不同.结果在同时多发癌组、再发癌组以及对照组中p53蛋白阳性表达率分别为73.7%、75%、35.3%,3组比较差异有统计学意义(χ2＝6.952,P＜0.05);突变率3组分别为52.6%、41.7%、29.4%,差异均无统计学意义.癌旁正常组织均未检出突变;但蛋白表达在同时性三发性癌患者中为阳性.结论多发性结直肠癌中p53基因突变率和蛋白表达高于散发性结直肠癌.p53过度表达的结直肠癌患者要警惕多发癌的发生.
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脂质体转染碱性成纤维细胞生长因子-mRNA的反义寡核苷酸对大鼠前列腺组织的影响
目的探讨脂质体介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-mRNA的反义寡核苷酸(AS-ODN)对大鼠前列腺组织的影响.方法将45只SD大鼠随机分为反义组、正义组和对照组,向大鼠前列腺组织中分别注入人工合成的bFGF-mRNA的反义寡核苷酸脂质体,正义寡核苷酸脂质体和无药脂质体,分别在术后第4、7、14天取出大鼠前列腺,测大鼠前列腺重量及前列腺指数,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠前列腺组织中bFGF-mRNA的表达,免疫组织化学染色结合计算机图像分析对大鼠前列腺组织中bFGF和增殖细胞核抗原(PCNA)表达进行定量分析.结果将拟给药物注入大鼠前列腺内后7 d,正义组大鼠前列腺指数(2.03±0.17)和对照组大鼠前列腺指数(2.02±0.18)相比差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于反义组大鼠前列腺指数(1.62±0.05,P<0.01),正义组bFGF-mRNA表达水平(0.589 4±0.024 5)和对照组bFGF-mRNA表达水平(0.644 2±0.056 9)相比差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于反义组bFGF-mRNA表达水平(0.265 8±0.033 7,P<0.01).正义组和对照组大鼠前列腺组织中bFGF表达和PCNA指数相比差异无统计学意义(P>0.05),而反义组大鼠前列腺组织中bFGF表达和PCNA指数则显著低于正义组和对照组(P<0.01),且有随时间推移而逐渐下降的趋势.结论脂质体转染bFGF-mRNA AS-ODN对大鼠前列腺组织的增殖有一定的抑制作用.
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p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体蛋白在甲状腺肿瘤中的表达
目的探讨p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义.方法采用免疫组织化学法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织(其中包括11例甲状腺滤泡癌(FTC)、12例乳头状癌(PTC)、4例髓样癌(MTC)以及1例未分化癌(UDTC)中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达.结果 p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、36%;15%、75%;90%、7%,这3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有统计学意义(P<0.05).p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在FTC与腺瘤之间,PTC与腺瘤之间有统计学意义(P<0.05),p53及FHIT的表达在MTC与腺瘤间差异有统计学意义(P<0.05).p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别以及淋巴结转移无关.另外p14ARF与FHIT蛋白的表达正相关,并且它们与p53均负相关.结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及癌蛋白p53的高表达是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一;联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌.
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大鼠胰腺癌模型及其化学趋化因子mRNA表达与肿瘤相关巨噬细胞计数的关系
目的研究SD鼠胰腺导管癌和非癌胰腺组织白细胞介素(IL)-8、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α mRNA表达及其与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)计数的关系.方法将二甲基苯并蒽(DMBA)置入大鼠胰腺实质内及设立曲古霉素(TSA)干预组(B组),3～5个月内处死观察胰腺癌发生情况;行3种mRNA原位杂交及TAM免疫组织化学染色.结果A组肿块直径明显大于B组(P<0.05),A组和B组纤维肉瘤均发生胰腺外转移.(2)A组和B组胰腺导管癌3种mRNA表达阳性率及其评分均明显高于非癌组织(B组中MCP-1 mRNA除外)(P<0.01),C组均呈阴性表达;且A组明显高于B组(P<0.05).(3)A组和B组胰腺导管癌TAM计数明显高于非癌组织和C组(P<0.01);3～4个月A组和B组TAM计数低于5个月组(P<0.01).(4)IL-8 mRNA阳性胰腺癌TAM数明显高于阴性者(P<0.01),其评分值与TAM计数之间呈正相关(r=0.32,P<0.05).结论 DMBA置入胰实质内可在短期获得较高的SD鼠胰腺癌发生率,TSA能抑制胰腺癌发生和生长,其作用可能与抑制化学趋化因子表达和TAM浸润有关;3种化学趋化因子和TAM可能与胰腺癌发生发展有较密切关系.
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血管内皮生长因子-A、C在大肠癌及淋巴结转移中的表达及其意义
目的探讨大肠癌及淋巴结转移中血管内皮生长因子(VEGF)-A、C的表达特点及其与临床病理特征的关系.方法应用链霉抗生物素蛋白-过氧化酶染色方法,检测12例正常大肠黏膜、18例大肠腺瘤、63例大肠腺癌原发灶以及19例淋巴结转移灶VEGF-A、C的表达状况.结果 VEGF-A、C在正常大肠黏膜中无阳性表达,在大肠腺瘤有少量表达,大肠腺癌原发灶中VEGF-A、C阳性表达率分别为57.14%、55.56%,明显高于正常组织和腺瘤(p＜0.05);19例大肠癌原发灶和淋巴结转移灶中VEGF-C高表达阳性率分别为42.11%(8/19)、73.68%(14/19),两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF-A、C的过度表达与大肠腺瘤恶变及转移有密切关系,VEGF-C突出地与区域淋巴结转移明显相关.
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大鼠盆神经节-膀胱神经通路的研究
目的探讨大鼠膀胱和盆神经节之间的神经通路及盆神经节内投射至膀胱的神经元的化学性质.方法正常雄性SD大鼠(250～300 g),辣根过氧化物酶(HRP)注射至膀胱,逆行神经追踪,经钨酸钠-四甲基联苯胺(TMB)-HRP法显色反应后再行免疫组织化学(胆碱乙酰转移酶ChAT、血管活性肠肽VIP、P物质SP、酪氨酸羟化酶TH)和辅酶Ⅱ(NADPH-d)酶组织化学法.结果支配膀胱的神经元多位于盆神经节主体部,大多数为ChAT(52.6%)和TH(23.3%),少数为VIP(5.7%),偶见一氧化氮合成酶NOS(5.6%)及SP(4.1%).结论在盆神经节中支配膀胱的神经细胞中存在ChAT、TH、VIP、SP和一氧化氮(NO)多种神经递质.膀胱功能多因素调节,乙酰胆碱(Ach)和TH为其经典递质,神经肽(VIP,SP)和NO在其中起重要作用,盆神经节是排尿反射的各级中枢的后通路.
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血管内皮生长因子-阿霉素脂质体的制备及体外靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞的研究
目的利用包裹阿霉素的血管内皮生长因子(VEGF)-脂质体于体外靶向杀伤肿瘤血管内皮细胞.方法利用体外细胞毒实验四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),检测VEGF-阿霉素脂质体对肿瘤血管内皮细胞的杀伤作用.结果连有VEGF的阿霉素脂质体可与表达血管内皮生长因子受体(VEGFR)的肿瘤血管内皮细胞特异结合,结合率可达非特异性脂质体的2倍.载药的VEGF-脂质体可特异杀伤肿瘤血管内皮细胞.48 h细胞毒试验连有VEGF的阿霉素脂质体对肿瘤血管内皮细胞的杀伤作用优于无VEGF的阿霉素脂质体(P<0.05),而对非靶细胞(人血管平滑肌细胞)的杀伤作用两者相近.0.5 h预处理试验表明:缩短药物与细胞接触时间后,VEGF-阿霉素脂质体仍保持较强的杀伤肿瘤血管内皮细胞的作用.结论 VEGF-脂质体可特异性的识别肿瘤血管内皮细胞,并作为良好载体将阿霉素带入细胞,实现其杀伤作用.
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氟他胺耐受性前列腺癌细胞系LNCaP-flu的建立
目的建立氟他胺耐受前列腺癌细胞系LNCaP-flu,并初步研究其细胞特性.方法在体外氟他胺作用下,连续培养LNCaP细胞,得到可在10-7mol/L氢化氟他胺中稳定生长的LNCaP亚系,LNCaP-flu.使用相差显微镜,电子显微镜,流式细胞仪,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、放免法和transwell穿膜实验对细胞特性进行鉴定.结果:建立氟他胺耐药细胞系LNCaP-flu,与普通LNCaP细胞相比,在氟他胺作用下,此细胞株(65.0±1.7)%处于G1期,明显少于对照组的(82.7±2.3)%(P<0.05);前列腺特异性抗原分泌活力无变化,LNCaP-flu为(11.25±2.23) ng/L,LNCaP为(10.15±0.86) ng/L(P>0.05);穿膜侵袭能力未受氢化氟他胺明显影响,LNCaP穿膜数为(35.21±4.52)个/高倍视野,LNCaP-flu为(26.15±3.69)个/高倍视野,(P>0.05).结论 LNCaP细胞经长时间体外培养可在氟他胺中稳定生长,LNCaP-flu细胞可在体外模拟前列腺癌细胞由氟他胺敏感转化为氟他胺不敏感的过程.
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骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死
目的探讨自体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)移植对急性心肌梗死后心脏功能及结构的影响.方法中国小型猪16头,随机分为对照组(n=6)及移植组(n=10).建立急性心肌梗死模型后,分别注入BM-MNCs/生理盐水.两组动物于术中监测血流动力学指标,术后进行影像学检查.移植组分别于2、4周后获取心脏标本,检测移植细胞标记物Hoechst33342.结果心梗4周后,移植组心梗范围较对照组显著缩小(P<0.01);血流动力学指标较对照组明显改善;局部室壁运动评分优于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05).在术后2周获得的心肌标本内,可见多量Hoechst33342和MHC双阳性细胞.结论成体BM-MNCs移植后,有可能抑止心室重构的发展,提高心室运动功能.
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应用激光共聚焦显微镜研究光敏剂CDHS801亚细胞定位
目的研究新型光敏剂CDHS801在膀胱癌T24细胞内的亚细胞定位.方法将传代培养的膀胱癌T24细胞与CDHS801共同孵育,采用激光共聚焦显微镜为成像工具,应用线粒体荧光探针MitoTracker RED CMXRose 和MitoTracker Green FM来进行CDHS 801的亚细胞定位分析.结果激光共聚焦显微镜下CDHS801、MitoTracker RED CMXRose和MitoTracker Green FM发出的荧光都位于细胞浆内,在细胞核周围呈点状散在分布.结论 CDHS801经膀胱癌T24细胞摄取后,定位于细胞浆内,主要分布线粒体内.
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褪黑素对鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的探讨不同浓度褪黑素预处理对成年大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 32只成年SD大鼠(350～400 g)随机分为4组(n=8),利用Langendorff模型灌注其离体心脏,对照组平衡30 min后缺血再灌注,实验组用不同浓度褪黑素预处理液灌注30 min后缺血再灌注.各组均为常温(37 ℃)缺血25 min,复灌60 min.观察各组冠脉流出液中心肌肌钙蛋白(cTnI)、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及心肌细胞超微结构的变化.结果复灌后,cTnI含量(μg/L)Ⅰ组为2.69±0.18,Ⅱ组为1.75±0.13,Ⅲ组为1.06±0.08,Ⅳ组为0.45±0.11;心肌组织SOD(nu/mg蛋白)和MDA(nmol/mg蛋白)含量Ⅰ组为207.4±7.9和1.815±0.018,Ⅱ组为238.3±2.9和1.472±0.518,Ⅲ组为268.3±5.7和1.122±0.263,Ⅳ组为315.6±9.0和0.961±0.223.心肌细胞电镜观察显示预处理组心肌细胞损伤轻于对照组.结论褪黑素预处理对成年大鼠缺血再灌注心肌有保护作用.
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雌激素促进合成型大鼠血管平滑肌细胞增殖并诱导细胞周期特异性凋亡
目的研究17β雌二醇(E2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与凋亡的影响及其可能机制.方法应用流式细胞术检测不同浓度E2 (0～100nmol/L)对传代VSMC增殖周期、细胞凋亡及其相关蛋白Cyclin D1、bcl-2和bax表达的影响;并采用荧光组化技术和共聚焦激光扫描荧光显微镜术对bax的分布进行定位.结果 E2(1～100 nmol/L)促进VSMC从G1期向S过渡(G0/G1期比率显著低于对照细胞,而S期比率显著高于对照细胞,P<0.05),并伴随Cyclin D1蛋白的表达显著增高;与此同时,当浓度达到10 nmol/L以上时,E2以时间和剂量依赖的方式导致G2/M期VSMC的凋亡率增高,并伴随bax蛋白表达及bax/bcl-2比值上升.结论 E2对合成型VSMC具有双重效应,即通过影响Cyclin D1表达加速G1～S期转换,从而促进VSMC增殖;同时通过上调bax蛋白的表达选择性地诱导G2/M期细胞凋亡.
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冷/热缺血再灌注损伤对大鼠肝脏细胞能量状态、凋亡和胀亡的影响
目的研究冷/热两种条件下肝脏缺血再灌注损伤细胞能量状态与细胞死亡方式的关系,探讨减少此类损伤的措施.方法建立SD大鼠肝门阻断热缺血再灌注模型及大鼠原位肝移植冷缺血再灌注模型,测定术后缺血1 h、再灌注1、12、72 h肝组织能量物质变化,凋亡、胀亡和坏死细胞,观察组织病理学变化.结果热缺血期肝组织损伤重,肝脏细胞内ATP迅速下降为对照组的21%,肝脏细胞死亡方式以胀亡为主;再灌注后,ATP开始恢复,细胞死亡方式逐渐转为以凋亡为主.而冷缺血肝脏细胞缺血期肝组织损伤相对轻,ATP仅下降为对照组的68%,细胞死亡以凋亡为主;再灌注后12 h ATP即完全恢复,凋亡也达到顶峰,于72 h逐渐下降.相关分析表明:ATP、能荷与胀亡细胞数量呈显著负相关(r＝-0.774,P<0.01;r=-0.789,P<0.01),与凋亡细胞数量无明显相关.结论 (1)缺血再灌注发生后,以能量状态为中心环节,轻度损伤时细胞以凋亡为主,自主清除DNA受损的细胞;损伤严重时则胀亡为主,被动清除受损细胞,提示术前或术中给予能量物质可能有利于减少胀亡及炎症反应,延长肝门阻断时间.(2)单纯以凋亡或胀亡作为衡量组织功能的唯一指标值得探讨.
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梗阻性黄疸大鼠肺血红素氧化酶-1 mRNA表达及一氧化碳含量的变化
目的探讨梗阻性黄疸时肺血红素氧化酶(HO)-1 mRNA表达及一氧化碳(CO)含量变化的意义.方法健康雄性Wistar大鼠48只,随机等分成4组:假手术对照组(CG)、梗阻性黄疸7 d组、梗阻性黄疸14 d组和梗阻性黄疸21d组.应用原位杂交技术行HO-1 mRNA表达检测,采用双波长分光光度计法测定大鼠血浆及肺组织匀浆中CO含量.结果 7 d组大鼠肺泡上皮细胞HO-1 mRNA表达呈中度阳性,14 d组支气管黏膜上皮细胞、血管内皮细胞中HO-1 mRNA高表达,而21d组其表达进一步增强;14 d和21 d组血浆中CO含量均较CG组增高(P<0.05,P<0.01),梗阻性黄疸各组肺组织匀浆中CO含量均较CG组明显升高(P<0.01);7、14及21 d组肺组织匀浆中CO含量的升高分别与同时间组肺HO-1 mRNA表达变化呈显著正相关.结论梗阻性黄疸时肺HO-1 mRNA的高表达及CO产生增多,有助于扩张肺血管并改善肺微循环,从而减轻梗阻性黄疸时肺损害的程度.
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人酪氨酸羟化酶和胶质细胞源性神经营养因子双转基因工程细胞对MN9D细胞内多巴胺含量的影响
目的建立一种可同时高效稳定表达酪氨酸羟化酶(TH)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的双基因工程细胞,探讨其在帕金森病(PD)基因治疗中的作用.方法应用分子克隆技术构建真核表达载体PcDNA3.1/hGDNF和PcDNA3.0/hTH,并同时转染至SH-SY5Y细胞系,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定筛选出的阳性细胞克隆TH和GDNF的表达水平,将双转工程细胞与MN9D细胞共培养,高效液相色谱分析工程细胞对MN9D细胞生长状态及细胞内单胺类递质含量的影响.结果双转基因工程细胞可防止MN9D细胞退变死亡,与对照组相比较,DA、HVA和DOPAC提高了1.9、2.1和1.7倍(P＜0.01).双转基因工程细胞可对抗MPP+对MN9D的毒性损伤作用,与对照组相比较,DA、HVA和DOPAC提高了3.3、1.7和2.0倍(P＜0.01),而且其效果明显优于TH单基因工程细胞.结论成功构建可分泌人TH和GDNF的双转基因工程细胞,其对多巴胺能神经元具有明显的保护作用,其在PD基因治疗中可能具有防治兼顾作用.
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表皮细胞膜片与猪去细胞真皮基质复合的移植
目的观察鼠表皮细胞膜片与猪去细胞真皮基质复合移植修复全层皮肤缺损的可行性和效果.方法以SD乳鼠的第3代表皮细胞制备细胞膜片,高渗盐水/氢氧化钠法制备猪去细胞真皮基质.36只SD大鼠全层皮肤缺损创面,分别行去细胞真皮基质与表皮细胞膜片复合移植和单纯表皮细胞膜片移植.结果两组创面术后均未见对移植物的急性期免疫排斥反应,第2、4、6周复合植皮组移植物成活率分别为(77.05±4.69)%、(83.12±5.13)%、(90.66±4.87)%,与细胞膜片移植组差异无统计学意义(P＞0.05),但移植物收缩率显著减低,分别为(9.84±2.33)%、(18.97±3.40)%、(25.92±3.11)%(P＜0.05).复合植皮组上皮化良好,胶原纤维排列有序,基底膜结构完整.结论复合移植适用于修复全层皮肤缺损,能改善创面愈合质量.
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去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤nm23、基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2的影响
目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤nm23、基质金属蛋白酶(MMP)-2和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2的影响.方法在培养人胆囊癌GBC-SD细胞的基础上建立荷瘤鼠胆囊癌模型并进行移植瘤抑制实验,实验分为空白对照、5-氟脲嘧啶(FU)、NCTD、NCTD+5-FU 4组,观测荷瘤鼠移植瘤大小改变、抑瘤率和细胞nm23、MMP-2、TIMP-2蛋白表达.结果 NCTD对荷瘤鼠胆囊癌移植瘤有明显的抑制作用;NCTD组呈棕褐MMP-2染色的细胞明显减少,胞浆着色变淡,表达率显著降低(P<0.05);而呈nm23、TIMP-2表达棕褐染色的细胞数明显增多,胞浆着色变深、变浓,表达率显著增高(P<0.05);其中均以NCTD+5-FU组的作用明显(P<0.05).结论 NCTD可明显抑制人胆囊癌的侵袭和转移,若与5-FU联合应用则具协同作用.其机制可能与NCTD影响转移和基质溶解相关基因蛋白表达有关.
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干扰素-α1b对激活鼠贮脂细胞的影响
目的研究干扰素(IFN)-α1b 治疗肝纤维化的作用机制.方法将体外培养大鼠贮脂细胞分为对照组、肿瘤坏死因子(TNF)-α组、IFN-α1b组和TNF-α+ IFN-α1b组,应用免疫组织化学和透射电镜观察各组贮脂细胞形态学改变及过氧化物酶增生激活受体(PPAR)-α的表达.结果肿瘤坏死因子α在50 U/ml浓度时,贮脂细胞吸光度值(A)为0.401±0.27,增殖率为450.3±309.1(P<0.01);透射电镜显示IFN-α1b组细胞形态改变符合凋亡的早期形态特征;免疫组织化学观察到贮脂细胞中PPAR-α的阳性单位值(PU)为24.69±4.88,较对照组和其余两组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 IFN-α1b对肿瘤坏死因子α促进贮脂细胞增殖激活的过程有抑制作用,作用机制可能是通过诱导肝脏贮脂细胞凋亡而产生.
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应用异体脱细胞尿道基质修复尿道缺损
目的探讨应用同种脱细胞尿道基质修复尿道缺损的可行性.方法将14只雄性新西兰兔分为两组,切除实验组长约1.0～1.5 cm的尿道,用相应长度脱细胞尿道基质修复;对照组行假手术.术后行尿道造影并取尿道标本作病理检查.结果 12只实验兔的脱细胞基质移植物没有移位,除2例狭窄、2例尿瘘外,其余满意效果.病理检测示,术后3周尿道管腔上皮化,6个月基质中平滑肌及血管再生明显.结论同种脱细胞尿道基质材料可以修复兔尿道部分缺损.
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转化生长因子-β1 在梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化中的作用
目的探讨转化生长因子 (TGF) -β1在梗阻性肾病(UUO)大鼠梗阻肾中致肾小管间质进行性纤维化的作用.方法成年SD大鼠制成UUO模型,在梗阻后3、7、10、14 d处死.免疫组织化学染色法对其肾内α-平滑肌肌动蛋白(SMA)沉积量及侵入肾内的单核巨噬细胞数进行分析;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)对大鼠TGF-β1 mRNA、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1 mRNA及IV型胶原(Col-IV) mRNA转录量进行分析.结果随梗阻时间延长,侵入梗阻肾内单核巨噬细胞数、α-SMA沉积、Col-IV mRNA及TIMP-1 mRNA含量增加;示肾小管间质存在进行性纤维化.同时TGF-β1 mRNA含量明显增加,差异统计学意义(P<0.05).结论 TGF-β1促使梗阻性肾病大鼠肾小管间质进行性纤维化.
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钙池操纵的钙通道抑制剂对大鼠肝细胞钙池操纵的钙通道电流的影响
目的探讨钙池操纵的钙通道(SOC)抑制剂(2-APB)对大鼠肝细胞SOC电流(Isoc)的影响.方法急性分离大鼠肝细胞,应用全细胞膜片钳记录技术测定大鼠肝细胞Isoc,并观察2-APB对该电流的影响.结果在急性分离的大鼠肝细胞记录到Isoc,从其电流-电压(IV)曲线可以看出该Isoc的反转电位为-2.5 mV左右.在钳制电位为-100 mV时,该Isoc为(-664.52±140.44) pA(n＝8);20、40、60、80、100 μmol/L 的2-APB分别使Isoc由给药前的(-664.52±140.44) pA下降至给药后的(-564.80±111.01)、(-490.11±73.97)、(-362.01±55.91)、(-295.64±50.03)、(-232.12±46.47) pA,给药前后比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);2-APB的抑制作用呈浓度依赖性增强,其EC50为(64.63±10.56) μmol/L.结论 2-APB对急性分离的大鼠肝细胞Isoc具有显著的抑制作用,这对于进一步深入进行肝细胞钙超载的发生机制和防治具有重要意义.
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脑胶质瘤中环氧化酶-2和血管内皮生长因子的表达及作用
目的研究62例脑胶质瘤细胞中环氧化酶(COX)-2、血管内皮生长因子(VEGF)和第八因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)的表达,探讨COX-2在脑胶质瘤中的作用.方法运用免疫组织化学方法研究COX-2、VEGF和Ⅷ因子相关抗原在脑胶质瘤中的表达.结果 COX-2在脑胶质瘤细胞中的胞浆染色阳性,和胶质瘤的病理级别正相关(r=0.874,P<0.01);在坏死区域周围有COX-2高表达的肿瘤细胞积聚;肿瘤组织中的血管周围有COX-2染色阳性的肿瘤细胞聚集.脑胶质瘤中COX-2和VEGF的表达(r=0.4578),COX-2的表达和MVD之间(r=0.3918)呈正相关性,差异有统计学意义(P<0.01).结论 COX-2的表达和脑胶质瘤的病理分级成正相关,和脑胶质瘤的发生和发展有关系;COX-2的表达和VEGF成正相关,COX-2和微血管密度成正相关,COX-2的表达可促进肿瘤组织新生血管的生成;COX-2可作为判断脑胶质瘤恶性度的辅助生物学标志.
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急性脑死亡对移植供体心脏的影响
目的探讨急性脑死亡(BD)对机体造成的病理生理改变和对心脏造成的损伤及其机制.方法采用30～40 kg体重的猪8只,制造BD前为对照组,BD后为实验组.测定BD前后血流动力学指标和血中生化学指标,并进行心肌活检.结果 BD后心率增加了88%,收缩压升高了132%,心排量增加了80%、肾上腺素和去甲肾上腺素分别升高240%和241%,三碘甲腺原氨酸浓度显著下降,心肌形态学检查发现有心肌损害.结论 BD可造成机体血流动力学的剧烈改变和心肌损害,血中儿茶酚胺含量升高和T3含量下降是造成心肌损伤的重要因素.
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嗅球组织块和细胞悬液移植对脊髓损伤的修复
目的探讨嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植修复脊髓损伤的可行性和疗效.方法将Wistar大鼠做成脊髓半切模型,随机分成3组,髓内分别移植嗅球组织块、嗅球细胞悬液及DMEM培养液,分期进行功能联合行为学评分(CBS)及组织学检查,评价对脊髓修复情况.结果嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植3周后各时段CBS评分明显高于DMEM组(P<0.05),组织学显示前两组有嗅鞘细胞修复的轴突再生.结论嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植修复脊髓损伤不但简化了操作而且有较好的疗效,为临床应用提供了实验依据.
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外源性转化生长因子-β1对骨髓间充质干细胞TβRⅠ、TβRⅡ表达的影响
目的探讨体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中转化生长因子(TGF)-β1受体的表达情况和外源性TGF-β1对MSCs TGF-β1受体表达的影响.方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法法检测不同浓度TGF-β1对MSCs增殖的影响,对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测不同浓度TGF-β1以及同一浓度不同作用时间对MSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,免疫细胞化学染色观察MSCs 中TGF-β1受体表达情况,Western blot检测TGF-β1作用早期TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达的变化.结果外源性TGF-β1对MSCs增殖的抑制、ALP活性的促进具有剂量依赖性,在5 μg/L时达到平台期;在5 μg/L TGF-β1刺激下,随着刺激时间延长,ALP表达量逐渐增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);MSCs同时表达TβRⅠ、TβRⅡ,在TGF-β1刺激早期TβRⅡ蛋白表达量无明显变化(P>0.05),TβRⅠ随TGF-β1刺激时间延长,蛋白表达量逐渐增加(P<0.05),TβRⅠ/TβRⅡ比例增加,与ALP的表达变化呈正相关.结论在TGF-β1刺激早期,MSCs通过TβRⅠ、TβRⅡ表达量和TβRⅠ/TβRⅡ相对比例的阶段性、适应性的改变来调节自身对TGF-β1的反应性,启动成骨分化.在此过程中,TβRⅠ作为一限制性因子发挥着重要的作用.
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主、肺动脉自体心包补片术后的转归
新鲜自体心包补片的优点是取材方便,柔韧无孔隙,塑形性好,不易漏血;无炎症、免疫反应;不传播病毒性疾病.但对自体心包补片术后远期效果尚有争议且对其转归规律知之甚少.我们在犬血管高低压腔作新鲜自体心包补片,于术后3个月观察心包补片的大体形态学、钙含量、电镜变化,旨在探讨自体心包在心血管高低压腔应用的可行性及转归的机制.
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全反式维甲酸诱导脑胶质瘤化疗的旁观者效应
自杀基因抗肿瘤研究中已公认存在旁观者效应.但有关肿瘤化疗是否存在旁观者效应,目前国内外鲜见报道.本研究旨在探讨VM-26在治疗胶质瘤细胞过程中是否存在旁观者效应,及其与肿瘤细胞缝隙连接细胞间通讯功能(GJIC)的关系.
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骨形态发生蛋白复合肌瓣的自体气管的移植
移植段气管局部应用骨形成蛋白(BMP)可诱导软骨生成,抑制移植段软骨吸收[1],其血供仍不满意.我们采用肌瓣包绕自体气管移植段,促进移植段血液循环建立,并复合BMP进行自体气管移植实验研究.
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金属硫蛋白对供心细胞bcl-2、bax和Fas蛋白表达的影响
金属硫蛋白(MT)是普遍存在于各种生物体内的具有多种生物学功能的可诱导蛋白,多种生理及病理情况下均有MT的变化[1].B淋巴细胞瘤/白血病2蛋白(bcl-2)、bcl-2家族bax蛋白、肿瘤坏死因子Fas抗原等蛋白的表达在细胞凋亡中起重要作用,近来研究亦表明MT与细胞凋亡密切相关[2],其对供心保存后bcl-2,bax和Fas等相关凋亡蛋白表达的影响尚未可知,我们通过腹腔注射ZnSO4诱导MT在心肌的表达就此做进一步研究.
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MRI引导下立体定向海马纵向穿刺术
我院自2001年7月至2004年3月,设计应用磁共振(MRI)扫描定位、立体定向颞角下沿海马纵向穿刺技术,对32例颞叶癫痫患者的海马实施深部电极脑电监测、活检和射频毁损治疗,取得了较好的临床效果.
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一种简便快速的染色技术在构建人工血管中的应用
在筛选血管支架材料的过程中,评价材料的生物相容性是非常重要的.我们在比较不同方法的基础上运用甲苯胺蓝染色方法来评价组织工程材料的生物相容性.
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选择性环氧化酶-2抑制剂的抗乳腺癌作用途径
环氧化酶(COX)-2在乳腺癌中呈过度表达,非甾体抗炎药(NSAIDs)通过抑制COX-2干扰致癌作用,但并不是唯一机制.为此,我们选择不表达COX-2的MCF-7乳腺癌细胞株,探讨选择性COX-2抑制剂nimesulide是否通过抑制NF(核因子)-κB的激活,促进肿瘤细胞的凋亡,以探讨其抗肿瘤的作用机制.
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癌胚抗原与B-7.1双表达基因疫苗的构建及表达
基因疫苗是把外源基因连接到真核表达质粒载体上,将重组的质粒DNA注射到动物体内,使外源基因在活体内表达,产生的抗原激活机体免疫系统引发免疫反应.DNA疫苗制备简便、安全长效、可组建多价疫苗并兼有预防和治疗作用.癌胚抗原(CEA)有一定的抗原性,可作为诱导肿瘤免疫的有效靶抗原[1].B7.1分子可促进多种抗原诱导的免疫反应[2].我们选择编码人全长CEA和B7.1的cDNA构建共表达质粒载体,并检测其在体内、外的表达,为增强CEA基因疫苗的免疫效果进行研究.
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组织工程瓣膜天然支架去细胞方法的比较
组织工程心脏瓣膜(TEHV)是瓣膜外科的发展方向[1,2].天然支架因解剖结构接近人体瓣膜,血流动力学良好,被越来越多地用于构建TEHV.低温、胰蛋白酶、去污剂等方法常用于制备天然支架,本实验旨在探讨天然支架较理想的制备方法.
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术中组织间植入125I粒子治疗肝恶性肿瘤
目的评价术中组织间植入125I粒子治疗中晚期肝恶性肿瘤及预防肝癌局部复发的作用.方法根据三维治疗计划系统(TPS),采用125I粒子术中植入不可切除的肝肿瘤或肿瘤切除后的切缘组织,对肿瘤及癌旁组织持续、精确、适形的放射治疗.结果本组15例中14例为肿瘤切除后切缘肝组织预防性粒子植入,1例为肿瘤未切除行瘤体内粒子植入.术后均无并发症发生.随访2～12个月,全部存活,未见肿瘤局部复发.瘤体内粒子植入者,术后随访2月,瘤体缩小.结论术中组织间植入125I粒子具有创伤小,安全,操作简便,疗效确切等优点,对无法切除或行姑息行切除者,可降低术后复发、提高生存率.
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肝脏胰腺成体干细胞的研究进展
肝脏、胰腺/胰岛移植是治疗终末期肝病及糖尿病具有应用前景的方法之一,但由于供体来源不足等原因,大大限制了其临床应用.近年来,对肝脏、胰腺成体干细胞及其增殖分化潜能的研究,为解决此矛盾并为开辟治疗性细胞移植的新途径带来了希望,其中,肝脏成体干细胞与胰腺成体干细胞之间的同源性特征,为成体干细胞的可塑性及其应用研究提供了新的平台.
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同种瓣移植术后免疫反应的作用及其对策
人同种心脏瓣膜移植术后瓣膜的远期功能和寿命仍不理想.既往认为机械性因素是引起同种瓣移植术后退行性变的主要原因,而移植术后免疫排斥反应在瓣膜退行性变中所起的作用一直存在争议.近年来,随研究深入,证实免疫排斥反应是加速同种瓣退行性变的重要因素,通过抗免疫排斥反应的方法来提高瓣膜远期耐久性可以取得较好的疗效.现综述如下.
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大鼠非经胸体外循环模型的建立
目的建立大鼠非经胸体外循环(CPB)模型.方法选体重350～500 g雄性SD大鼠10只,采用颈动脉灌注、腔静脉右心房引流建立CPB,转流时间1 h,监测血流动力学和血气变化.结果 9只大鼠顺利建立CPB,1只死于大出血.CPB期间平均动脉压(MAP)维持在60～80 mm Hg,平均灌注流量(85.0±12.5) ml·kg-1·min-1,动脉血气正常.CPB停止后心肺功能顺利恢复.结论本方法建立的大鼠CPB模型操作简单、经济实用,是进行CPB基础研究的理想模型.
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加强软骨与骨组织工程中关键技术的应用
在体外构建具有生物活性的组织器官,一直是萦绕在人们心中的梦想.20世纪80年代随着细胞生物学与工程材料学等基础学科的深入发展,科学家开始大胆探索这一具有挑战性的医学难题,"组织工程"的概念由此产生.组织工程学是应用工程学与生命科学的原理和方法,制备具有生物活性的替代物,以恢复、维持或提高受损组织功能的一门新学科.
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泌尿系结石研究现况与展望
泌尿系结石作为一种全球性的疾病,其人群患病率为1%～5%,治疗后易复发,10年复发率高达50%.虽然外科治疗已取得了巨大进展,但其发病率和复发率居高不下,尤其是上尿路结石的发病仍有继续升高的趋势.因此,针对其病因的诊断和防治越来越受到重视,并取得了一些进展.
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组织工程骨对羊节段性骨缺损的修复
目的探讨自体骨髓间充质干细胞(MSCs)复合生物活性陶瓷材料β-磷酸三钙(TCP)修复羊跖骨节段性缺损的能力.方法将24只成年中国美利奴绵羊随机分成3组,制备单侧跖骨21 mm长节段性缺损,缺损分别采用相应方法修复:材料+细胞组,缺损区植入β-TCP+MSCs复合体(n=10);单纯材料组,缺损区植入单纯β-TCP(n=10);空白组,缺损区不作处理(n=4).术后1、3和6月处死动物并取材,做大体形态学、组织学、Ⅹ线检查.结果术后6月检查结果显示,在材料+细胞组,骨生成能力明显强于单纯材料组;而空白组仅在骨折断面处生成少量松质骨,骨缺损不能修复.结论生物活性陶瓷β-TCP与MSCs结合能明显提高骨生成速度,在修复长骨干节段性缺损方面具有潜在的临床应用价值.
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动态监测组织工程软骨的体外构建及三维静态培养
目的采用荧光蛋白标记技术,对组织工程软骨的体外构建及三维静态培养进行连续观测,从而确定适宜的体外培养时间.方法将人间充质干细胞进行荧光蛋白标记,以2×107个/ml的细胞密度与可吸收性软骨支架材料在体外构建细胞-材料复合体,再进行三维静态培养,通过倒置荧光显微镜对于接种后4 d、1、2、3和4周的培养物,分别进行荧光强度观察和细胞数量分析.结果逆转录病毒载体pLEGFP-N1成功标记种子细胞;采用沉淀法构建细胞-材料复合体时,容易出现细胞在材料内分布不均匀的缺陷;连续培养复合体时其整体荧光强度会逐渐降低,单个复合体内的细胞数量在4 d时为(1.90±0.12)×106,到第4周时降至(0.70±0.06)×106,差异有统计学意义(P<0.01).结论体外静态培养组织工程软骨在4～7 d时其中的细胞数量高,适时翻转培养物有助于稳定细胞数量.
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离心力在体外构建组织工程软骨中的作用
目的探讨离心力对软骨细胞功能表达和组织工程软骨结构的影响.方法采用组织化学和免疫组织化学观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原表达情况,应用DMMB分光法测定组织工程软骨硫酸化糖胺多糖(GAG)的含量.结果体外培养2、4、8周时,静态培养的组织较离心培养的组织Ⅱ胶原免疫组织化学染色弱;并且其GAG含量低于离心培养组织GAG含量,各组差异均有统计学意义(F分别为:12.3、10.2、9.1,P<0.05).离心培养的组织工程软骨GAG含量于第4周达到高峰,均值为(7.60±0.79)%.结论离心力刺激软骨细胞分泌GAG和Ⅱ型胶原,并且影响组织工程软骨结构的排列.
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胶原凝胶包埋软骨细胞复合聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸支架异体移植修复兔关节软骨缺损
目的探讨胶原凝胶包埋软骨细胞复合聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸(CPPf/PLLA)支架异体移植修复兔关节软骨缺损的有效性和可行性.方法将胶原凝胶包埋的软骨细胞接种CPPf/PLLA支架构建的复合物体外培养3周,行倒置显微镜和扫描电镜观察,并将复合物异体移植入兔关节软骨缺损,术后4、8、12周取材,从大体、组织学和Ⅱ型胶原免疫组织化学对再生软骨组织进行评价.结果复合物体外培养3周,细胞被大量基质包裹,在支架内分布均匀;新形成的组织为透明软骨样组织、表面光滑且与周围组织整合良好、基质内有Ⅱ型胶原分布.结论胶原凝胶包埋软骨细胞接种CPPf/PLLA支架的方法能提高细胞-支架复合物构建质量,胶原凝胶复合CPPf/PLLA支架可作为软骨细胞载体修复关节软骨缺损.
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组织工程支架的力学分析及相关模式探讨
目的探讨Tensegrity模式描述天然骨衍生材料的结构并进行力学性能分析.方法制备天然骨衍生材料,测定力学性能,用Murakami-Nishimura的Tensegrity 模式作分析.结果骨中压力杆羟基磷灰石受到5.91×108dyn/cm2压应力时若尺寸保持不变,由预应力为4.4×108dyn/cm2十二根水平胶原纤维和预应力为2.7×108dyn/cm2六根垂直胶原纤维组成的一阶Tensegrity结构为基本单位形成的n阶右螺旋圆筒结构的极限强度和极限应变等同于骨单元的力学性质.结论 n阶多重右圆筒Tensegrity结构适合作为组织工程支架材料设计的模型.
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重组人骨形态发生蛋白2/脱细胞骨基质材料复合移植修复兔骨缺损的研究
目的观察重组人骨形态发生蛋白2/脱细胞骨基质材料(rhBMP2/ACBM)对体外培养的骨髓基质细胞(MSCs)增殖和分化的影响及兔桡骨骨缺损的修复作用.方法在制备rhBMP2/ACBM复合缓释载体的基础上,取培养第3代MSCs种植到材料上,体外培养4～7 d,观察MSCs的增殖及碱性磷酸酶(AKP)、骨钙素的表达;将自体MSCs-材料复合培养后24 h回植到骨缺损局部,同期观察复合材料及空白对照组,分别于4、8、12周,通过X线、单光子放射计算机断层显象术(SPECT)、及组织学方法评价其对骨缺损的修复效果.结果与单纯体外培养组比较,复合载体在体外对MSCs具有成骨细胞诱导作用,而对细胞增殖无影响.与复合载体植入组比较,细胞材料复合植入组,4周时成骨量明显增多(P<0.05),且12周新骨塑型好.结论复合载体具有良好的体内外诱导成骨作用,细胞载体复合植入对骨缺损修复效果良好.
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外源性人胰岛素样生长因子-1基因在关节软骨细胞中的表达
目的探讨含有绿色荧光蛋白(GFP)的外源性人胰岛素样生长因子(hIGF)-1基因真核表达载体在关节软骨细胞内稳定表达的可行性,建立IGF-1基因工程化的关节软骨细胞.方法利用基因重组技术,将GFP cDNA片段插入pcDNA3.1-hIGF-1载体中,构建重组载体pcGI.然后采用脂质体方法,转染原代关节软骨细胞,经G418筛选后,继续体外单层培养4周.原位杂交和免疫细胞化学检测hIGF-1的表达,荧光显微镜观察GFP的表达,Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测软骨细胞表型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测软骨细胞增殖能力.结果根据重组载体pcGI内的酶切位点,设计采用BamH I酶切显示为线性化,Xba I酶切显示为512 bp、1 768 bp、5 915 bp三个片段,HindⅢ则酶切下3 023 bp、5 172 bp二个片段,证明所构建的质粒方向及大小正确,含有GFP和hIGF-1 cDNA片段.稳定转染pcGI的软骨细胞原位杂交、免疫细胞化学和荧光显微镜证实了hIGF-1和GFP的表达,同时MTT显示转染后的软骨细胞增殖能力增强,并能维持Ⅱ型胶原的表达.结论外源性hIGF-1和GFP基因在关节软骨细胞内获得稳定表达,体外单层培养的转染关节软骨细胞增殖能力增强,同时维持软骨细胞表型.
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筋膜瓣促组织工程骨再血管化及山羊长段骨缺损的修复
目的探讨筋膜瓣在促进组织工程骨再血管化及修复山羊长段骨缺损中的作用.方法中国青山羊体内制备单侧胫骨2 cm的骨膜与骨缺损,采用空白组、珊瑚羟基磷灰石(CHAP)组、组织工程骨组、筋膜瓣组进行修复.于术后2、4、8、12周采用放射性核素骨显像(ECT)、X线、组织学、生物力学等方法进行对比评价,2、3、6、12、18、30个月采用X线、CT对组织工程骨组进行检测.结果空白组与CHAP组未能修复骨缺损,筋膜瓣组修复骨缺损的效果优于组织工程组,12周筋膜瓣组X线光密度比值、生物力学弯曲应力分别为(4.180±0.192)、(13.937±2.199) N/mm2,组织工程组为(3.480±0.453)、(10.123±1.243) N/mm2,8周ECT ROI平均计数筋膜瓣组为26.05±2.61,组织工程组为(16.21±1.46),差异具有统计学意义(P<0.05).组织工程骨12月以后开始塑形,30个月骨髓腔再通.结论采用筋膜瓣包裹的方法能够显著提高组织工程骨再血管化及修复长段骨缺损的能力.
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采用自体成熟关节软骨细胞的软骨组织工程修复
目的探讨使成熟软骨细胞转化成代谢活跃、增殖迅速的再生软骨祖细胞,而后利用这种细胞构建自体源性工程组织,修复成熟关节软骨的缺损.方法成熟兔关节软骨细胞进行普通单层培养和转化生长因子(TGF)-β1、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合诱导培养.培养细胞进行细胞计数、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.将诱导培养的再生软骨祖细胞与聚乳酸载体(PDLLA)一道构建自体源性工程软骨,修复成熟关节软骨缺损.修复组织进行组织形态学和免疫组织化学研究.结果研究发现成熟关节软骨细胞在体外单层培养中增殖缓慢,而联合TGF-β1、bFGF诱导培养可促进成熟软骨细胞的增殖,10 d内细胞增殖189倍.标准单层培养4～5代细胞经密集培养不表达Ⅱ型胶原,而联合细胞因子诱导培养6代的细胞在体外密集培养下,可很快恢复Ⅱ型胶原的表达.利用再生软骨祖细胞构建的自体源性工程软骨可修复软骨缺损,修复组织表达Ⅱ型胶原.结论成熟关节软骨细胞经TGF-β和bFGF联合诱导培养可形成再生软骨祖细胞,此细胞可用于构建自体源性工程组织,修复成熟关节软骨的缺损.
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软骨细胞诱导骨髓基质细胞体内软骨形成
目的探讨软骨细胞在体内非软骨形成部位促进骨髓基质细胞(BMSCs)向软骨分化并形成软骨的可行性.方法猪BMSCs与软骨细胞按一定比例(6∶4或7∶3)混匀,取2.5×107个混合细胞悬浮于0.5 ml 30% Pluronic溶液后注射到裸鼠皮下(n=6).相同数量的单纯软骨细胞或BMSCs同样方法注射,分别作为阳性对照及阴性对照,0.75×107个软骨细胞同样注射作为低浓度软骨细胞对照.各组均8周后取材检测.结果混合细胞组及阳性对照组均形成了成熟的软骨.组织学可见成熟软骨陷窝、异染基质及Ⅱ型胶原表达.两组新生软骨糖胺多糖(GAG)含量差异无统计学意义(P>0.05),两混合组平均湿重分别为(320±48) mg和(294±37) mg,均达到阳性对照组70%以上.BMSCs组仅形成了纤维性组织,低浓度软骨细胞组在局部形成了少量软骨,但新生软骨平均湿重低于阳性对照的30%.结论上述结果提示软骨细胞能诱导BMSCs在体内非软骨形成部位向软骨分化并形成软骨组织.
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组织工程骨软骨复合物的构建与形态学观察
目的探讨采用组织工程技术构建骨软骨复合物的可行性.方法将骨髓基质细胞(BMSCs)成诱导软骨后接种于快速成形的三维支架材料聚乳酸/聚羟乙酸共聚物(PLGA)构建组织工程软骨,经成骨诱导的BMSCs接种于聚乳酸/聚羟乙酸共聚物/磷酸三钙(PLGA/TCP)构建组织工程骨,在体外分别培养2周后,将两种工程化组织及两者以无损伤线缝合形成的组织工程骨软复合体分别植入自体股部肌袋,术后8周取材,行组织学观察.结果术后组织学观察表明,组织工程软骨在体内可形成软骨组织组织工程骨在体内可形成骨组织,两者的复合体在体内可形成骨软骨复合物.结论以骨髓基质细胞为种子细胞、以快速成形的生物降解材料为支架体外构建的组织工程骨软骨复合物,可在体内形成骨软骨组织,有望用于骨软骨缺损的修复.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
