中华实验外科杂志
Chinese Journal of Experimental Surgery 중화실험외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.75
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1001-9030
- 国内刊号： 42-1213/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
Ras相关的C3肉毒素底物1在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用
目的 观察Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)在草酸所致的肾小管上皮细胞氧化损伤中的作用.方法 体外培养犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞)制成爬片后,随机分为空白对照组(A组)、Rac1抑制组(B组)、草酸组(C组)、Rac1抑制+草酸组(D组).B组和D组分别暴露在含Rac1抑制剂NSC23766(100 μmol/L)培养液中,30 min后C组及D组分别更换为含草酸(5 mmol/L)的培养液,余对照更换为磷酸盐缓冲液(PBS).4h后分别测定各组培养液中过氧化氢(H2 O2)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性和细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶活性,免疫细胞化学染色观察细胞Rac1表达,向培养液中加入草酸钙(0.75 mmol/L)15 min后在倒置显微镜下观察细胞对草酸钙结晶的黏附.结果 A组H2O2浓度、LDH活性及细胞NADPH氧化酶活性分别为(24.23±2.44) mmol/L、(0.62 ±0.06) U/ml、(1 042.83±61.00) RLU/(min· mg);B组分别为(24.46±3.39) mmol/L、(0.56±0.06) U/ml、(1 096.67±66.12) RLU/(min· mg);C组分别为(67.84±4.25) mmol/L、(1.71 ±0.08) U/ml、(2 852.50±105.71) RLU/(min· mg);D组分别为(34.79±3.07) mmol/L、(0.96±0.07) U/ml、(1 118.83±57.56) RLU/(min· mg).与A组比较,C组细胞Rac1表达增强(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性明显增强(P＜0.05),细胞对草酸钙结晶的黏附数量增多;而与C组比较,D组细胞Rac1表达降低(P＜0.05),NADPH氧化酶活性、H2O2浓度、LDH活性均显著降低(P＜0.05),黏附在细胞表面的草酸钙结晶数量减少.结论 草酸通过Rac1调节的NADPH氧化酶致肾小管上皮细胞氧化损伤,抑制Rac1可显著减少活性氧物质的产生及细胞损伤.
-
丙戊酸对颅脑损伤大鼠神经功能恢复的影响
目的 观察丙戊酸(VPA)干预颅脑损伤大鼠后神经功能恢复状况及损伤灶周围脑组织形态学变化,探讨VPA对颅脑损伤大鼠神经功能恢复的影响.方法 将健康SD雄性大鼠90只,随机分成正常对照组、单纯损伤组、VPA治疗组,建立大鼠闭合性颅脑损伤模型并进行干预,采用神经系统疾病严重程度评分(NSS)评价各组大鼠不同时间点的神经功能;应用光学显微镜观察损伤灶周围脑组织形态学的改变.结果 颅脑损伤后1d单纯损伤组和VPA治疗组大鼠NSS评分分别为(12.45 ±0.57)、(12.37 ±0.93)分,均高于正常对照组[(1.55±0.37)分],差异有统计学意义(P＜0.05);颅脑损伤后1d单纯损伤组与VPA治疗组大鼠NSS评分差异无统计学意义(P＞0.05);颅脑损伤3d后VPA治疗组大鼠神经功能有不同程度的恢复,VPA治疗后3、7、14、21、28 d大鼠NSS评分分别为(10.19 ±0.37)、(8.82±0.71)、(6.42±0.95)、(5.47±0.87)、(3.45±0.89)分,均优于单纯损伤组的(11.61 ±0.34)、(10.47 ±0.93)、(10.29 ±0.37)、(9.82±0.71)、(9.17±0.43)分,差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查显示单纯损伤组大鼠损伤灶周围脑组织形态受损明显,VPA治疗组受损较轻.结论 VPA能够通过减轻神经细胞损伤,改善创伤性颅脑损伤大鼠神经功能恢复的程度.
-
供心过表达微小RNA-499减轻心脏缺血再灌注损伤的研究
目的 观察供心过表达微小RNA-499 (miR-499)对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)行miR-499转基因小鼠鉴定.分别获取野生型C57BL/6小鼠(WT)和同系(C57BL/6背景)miR-499转基因小鼠(Tg)来源的供心,均置于4℃生理盐水中保存16h,检测保存液中心肌酶谱:肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的释放量.实验分为WT供心组和Tg供心组,建立同系小鼠腹部异位心脏移植模型,通过视诊和触诊观察不同小鼠供心经过冷保存,移植给相同受体后心功能的恢复,并于移植后24h获取供心,行苏木素-伊红(HE)染色,观察移植心脏组织病理学改变.结果 PCR结果显示miR-499转基因小鼠能检测到miR-499基因及相关载体片段,在图中呈现阳性条带;WT小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为(5 043.0±523.8) U/L和(1 068.0±150.0)U/L,Tg小鼠来源心脏的CK和LDH释放值分别为(3 667.0±194.7) U/L和(684.0±19.1) U/L,Tg小鼠心脏在冷缺血过程中,两种心肌酶谱的释放值均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).移植后相同时间点观测结果显示,WT小鼠来源心脏的临床功能评分明显低于Tg小鼠,15 min时的平均评分分别为0.9分和2.3分,24 h的平均评分分别为2.1分和3.4分(P＜0.05).移植后24 h,WT小鼠来源供心有大量炎性细胞浸润并伴有心肌细胞坏死,而Tg小鼠供心的炎性细胞浸润和心肌细胞坏死较少(P＜0.05).结论 供心过表达miR-499能减轻心脏在冷缺血和热灌注过程中造成的炎性损伤和心肌细胞凋亡,有利于再灌注后心功能的恢复,在心脏移植过程中具有保护作用.
-
微小RNA-1Ob沉默抑制胰腺癌细胞表达过氧化物酶增殖体激活受体-α
目的 观察微小RNA(miR)-10b沉默对人胰腺癌细胞AsPC-1细胞(以下简称AsPC-1)表达过氧化物酶增殖体激活受体-α蛋白(PPAR-α)的影响.方法 以脂质体转染法将重组反义真核表达载体pPG-CMV-EGFP-miR-10b转染AsPC-1细胞株,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光显微镜检测载体瞬时表达的效率,细胞增殖实验评价不同组间细胞增殖能力的差异;Western blot 检测细胞PPAR-α蛋白的表达.结果 转染反义组miR-10b减少至对照组的14％.细胞增殖减少至对照组的36％,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞PPAR-α蛋白的表达水平:反义组1 230.5±110.4,对照组2 398.1±156.3和2 603.7±227.5,反义组与对照组差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞凋亡实验:反义组凋亡率为19.4％,对照组凋亡率为10.1％和11.5％.结果提示反义组细胞的凋亡率增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-10b沉默可抑制胰腺癌细胞PPAR-α蛋白的表达,并抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡.
-
Pygo2对肾癌OS-RC-2细胞凋亡的影响
目的 观察Pygo2对肾癌OS-RC-2细胞凋亡的影响.方法 通过慢病毒介导三质粒重组,分为4组:A组:过表达组Pygo2OE(RNA过表达);B组:原始细胞对照组绿色荧光蛋白(GFP);C组:沉默组Pygo2 shRNA(RNA干扰);D组:空白对照组Pygo2 scrRNA(RNA错配).慢病毒感染肾癌OS-RC-2细胞,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Pygo2的抑制效率.碘化丙锭(PI)染色法检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白C-多腺苷二磷酸核糖聚合酶(C-PARP)的表达.结果 Pygo2抑制效率约为80％.PI凋亡率分别为A组6.52％、B组9.01％、C组61.09％、D组6.88％.抑制Pygo2的表达,肾癌OS-RC-2细胞的凋亡率明显升高(P＜0.05).Western blot结果显示C组细胞凋亡蛋白C-PARP表达明显升高,而其他组均无C-PARP的表达(P＜0.05).结论 体外实验中,沉默Pygo2基因能促进肾癌OS-RC-2细胞凋亡;Pygo2可能抑制肾癌OS-RC-2细胞凋亡.
-
灯盏花素对大鼠液压冲击脑损伤的神经保护作用及其机制
目的 观察灯盏花素对大鼠液压冲击脑损伤神经保护作用并探讨其机制.方法 成年雄性SD大鼠80只制作颅脑损伤模型,随机分为两组:模型组和干预组.干预组应用灯盏花素90 mg/kg腹腔注射.两组大鼠均于术后6、12、24 h、3、7d进行神经功能评分和组织学观察,并用干湿重法、免疫组织化学法和Western blot分别测定水肿脑组织含水量及其水通道蛋白4(AQP4)的表达变化.结果 与模型组比较,干预组大鼠神经损伤明显缓解,脑组织水肿程度减轻,以24 h、3d减轻为明显[24 h:(82.54±1.89)％比(80.84±1.08)％;3d:(80.61±0.49)％比(79.11 ±1.14)％];神经功能评分明显改善,以24 h、3、7d3个时间点为显著(24 h:5.83 ±0.41比7.33 ±0.82;3d:6.17 ±0.75比7.50 ±0.55;7 d:7.00±0.63比8.33 ±0.52),同时AQP4蛋白表达也出现不同程度减少,尤以24 h、3、7d显著(24 h:0.83 ±0.03比0.57 ±0.04;3 d:0.91 ±0.02比0.61 ±0.02;7d:0.64±0.05比0.42±0.07).结论 灯盏花素能够改善神经细胞受损程度,通过下调AQP4表达减轻液压冲击脑损伤脑水肿发挥神经保护作用.
-
骨形态发生蛋白2复合人工骨替代材料修复犬种植体周骨缺损的研究
目的 观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)复合β-磷酸三钙(β-TCP)及无机牛骨(Bio-Oss)对骨缺损修复能力的影响.方法 拔除10条Beagle犬下颌前磨牙,3个月骨质愈合后预备种植窝并制备5 mm×4 mm×3 mm骨缺损区,植入种植体,并分别在骨缺损区填入β-TCP、rhBMP-2/β-TCP复合物、Bio-Oss或rhBMP-2/Bio-Oss复合物;空白对照组不充填.术后4、12周处死犬,行大体观察、X线观察和组织形态学分析,应用图像分析软件分析缺损区骨密度改变及新生骨生成率.结果 植入骨替代材料的各实验组均有较好的新生骨.4周后,β-TCP/BMP及Bio-Oss/BMP组缺损区骨密度分别为(36.70±1.73)％和(38.50±1.83)％,高于原材料组[(30.50±1.81)％和(31.48±1.86)％.12周后,β-TCP/BMP及Bio-Oss/BMP组骨密度分别为(52.84±1.85)％和(54.85±1.87)％,也高于原材料组[(43.65±1.81)％和(44.94±1.88)％],且复合rhBMP-2的实验组新骨生成率更高.结论 rhBMP-2与人工骨替代材料复合后能够有效促进种植体周骨缺损的修复.
-
尿激酶联合应用内皮素-1受体拮抗剂对犬急性肺栓塞心肌血流灌注的影响
目的 观察尿激酶联合应用选择性内皮素-1受体拮抗剂BQ-123对急性肺栓塞继发心肌缺血损伤的保护作用.方法 20条Beagle犬随机分为5组:假手术组(Sham组)、肺栓塞组(PE组)、尿激酶溶栓组(UK组)、BQ-123组(BQ组)、尿激酶±BQ-123联合组(UK± BQ组),每组4条.测量各组栓塞前、栓塞后或溶栓后2.0、4.0、6.0h肺动脉平均压(mPAP)、冠状动脉血流量以及栓塞后6h血清肌钙蛋白T(cTnT)含量.结果 (1)肺栓塞0.5h后mPAP显著升高,接受尿激酶、BQ-123治疗后UK组与UK± BQ组mPAP下降,栓塞后4h分别为(26.67 ±2.08)、(20.00±2.00) mmHg(1 mmHg=0133 kPa),显著低于PE组[(37.33 ±4.16) mmHg,P＜0.05];(2)栓塞后6h,UK± BQ组血清cTnT值(611.93 ±97.50) ng/L小于UK组(747.22±62.72) ng/L和PE组[(900.79 ±71.11) ng/L,P＜0.05];(3)冠状动脉血流量显示:PE组下降,UK、BQ、UK+ BQ组不同程度增加,其中UK+ BQ组增加更明显(P＜0.05).结论 在溶栓治疗基础上联合应用内皮素-1受体拮抗剂BQ-123能显著降低肺动脉压力、增加冠状动脉血流量,极大程度上缓解急性肺栓塞继发急性心肌缺血损伤.
-
抑制微小RNA-200a表达对胰腺癌上皮-间充质转化过程的影响
目的 观察微小RNA (miR)-200a在胰腺癌干细胞中的表达,探讨miR-200a在胰腺癌上皮-间充质转化(EMT)过程中的作用.方法 采用流式分析法从胰腺癌细胞株PANC-1中分选出C D24+ CD44+上皮特异性抗原(ESA)+三阳性的胰腺癌干细胞(PCSCs),通过逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PCSCs中miR-200a的表达,通过miR-200a inhibitor转染PANC-1细胞抑制其表达水平,检测miR-200a表达与EMT相关性.结果 PCSCs显示EMT表型,并且其miR-200a的表达(1.0000 ±0.353 0)显著低于PANC-1细胞中miR-200a表达(0.237 1 ±0.107 1).PCSCs呈现EMT相关表型.转染miR-200a inhibitor后PANC-1细胞EMT特征基因的表达发生了改变,N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转录抑制因子锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB1) mRNA的表达显著升高,而E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著降低.miR-200a抑制组、PANC-1对照组以及转染无意义序列组E-cadherin表达分别为0.356 0±0.201 0、1.000 0±0.150 0和1.100 0±0.200 0;N-cadherin表达分另别为2.890 0±0.225 0、1.000 0±0.260 0和0.850 0±0.240 0;ZEB1表达为3.840 0±0.480 0、1.000 0±0.160 0和0.9400 ±0.1400;Vimentin表达分别为3.7500±0.4100、0.9186±0.2100和1.2000±0.1800.PANC-1细胞形态明显向间质细胞形态发生转变.同时,抑制miR-200a表达显著提高了PANC-1的侵袭和迁移能力,分别比对照组升高3.4和2.8倍.结论 miR-200a可能参与胰腺癌EMT过程的调节.
-
吡柔比星诱导人膀胱癌T24细胞凋亡及其作用机制
目的 探讨吡柔比星(THP)对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 使用不同浓度(0、0.1、1.0、10.0mg/L)THP作用膀胱癌T24细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞中生存素(Survivin)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3 mRNA及蛋白的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡.结果 与空白组比较,各THP作用组T24细胞中Survivin mRNA及蛋白水平表达降低,Caspase-3 mRNA及蛋白水平表达增高(P＜0.01);THP可抑制T24细胞的增殖,抑制率分别为(13.74±1.25)％、(36.28±0.75)％、(47.13±1.62)％,并诱导其凋亡,凋亡率为(15.29±0.98)％、(19.56±1.45)％、(23.81±0.81)％,并呈现一定的浓度和时间依赖性(P＜0.05).结论 THP可促进膀胱癌T24细胞的凋亡,其可能通过抑制细胞中Survivin的表达,增强Caspase-3的活性而发挥作用.
-
胃转流术对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽1及小肠黏膜的影响
目的 观察胃转流术(GBP)对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)及小肠黏膜的影响,探讨GBP术降糖机制.方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常手术组(NO组)、正常对照组(NC组)、糖尿病手术组(DO组)、糖尿病对照组(DC组).术前及术后第1、2、4、8周分别检测各组GLP-1、空腹血糖(FPG)、胰岛素.术后2个月苏木素-伊红(HE)染色观察末段回肠黏膜病理变化,测量肠黏膜厚度和绒毛高度.结果 DO、NO组GBP术后第8周空腹GLP-1分别由术前的(7.38±1.71) pmol/L和(7.23±1.59) pmol/L升高到(17.80±1.39) pmol/L和(15.48±1.21) pmol/L(P＜0.05).DO组术后第8周FPG由术前的(17.71 ±1.99) mmol/L下降到(5.95 ±0.51) mmol/L (P＜0.05).术后各时相点DO组GLP-1、FPG明显低于相应时间点DC组(P＜0.05),NO组手术前后FPG无明显变化.DO组术后第8周胰岛素由术前的(11.93±0.75) mmol/L升高到(14.80±0.78) mmol/L(P＜0.05).DO、NO组肠黏膜厚度和绒毛高度均显著高于DC组和NC组(P＜0.05).结论 GBP术后肠黏膜的增生导致GLP-1升高可能为降糖机制之一.
-
荷载白细胞介素-24条件增殖腺病毒诱导黑色素瘤细胞凋亡的机制
目的 探讨荷载白细胞介素(IL)-24的条件增殖腺病毒ZD55-IL-24诱导黑色素瘤细胞凋亡的分子机制.方法 ZD55-IL-24感染人黑色素瘤A375细胞.Western blot和免疫沉淀技术检测细胞的IL-24、B淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)亚硝基化、bcl-2泛素化、bcl-2蛋白表达水平及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)蛋白活性;加入不同浓度的一氧化氮(NO)调节剂改变bcl-2亚硝基化水平,检测其对bcl-2泛素化水平和Caspase蛋白活性及黑色素瘤细胞凋亡的影响.结果 ZD55-IL-24导致A375细胞bcl-2亚硝基化水平下调,泛素化水平上调,bcl-2蛋白水平下降,Caspase 信号通路激活,黑色素瘤细胞凋亡,在作用72 h后细胞凋亡达高峰,细胞凋亡率由对照组的11％上升到72％;NO供体SNP可促进bcl-2亚硝基化、抑制bcl-2泛素化水平从而上调bcl-2蛋白水平,细胞凋亡率由68％下降到19％;SNP拮抗剂DTT则加速ZD55-IL-24介导的肿瘤细胞凋亡,细胞凋亡率上升到93％;NO清除剂PTIO也同样促进黑色素瘤细胞的凋亡,细胞凋亡率上升到85％.结论 IL-24通过抑制bcl-2亚硝基化促进其泛素化降解,导致黑色素瘤细胞凋亡.
-
雷公藤内酯醇对前列腺癌细胞的作用及机制
目的 探讨雷公藤内酯醇(TPL)对前列腺癌DU145细胞株的作用及其机制.方法 分别用0、5、25、50、100 nmol/L浓度的TPL作用于DU145细胞24、48 h.噻唑蓝(MTT)比色法观察TPL对DU145细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;PI染色后激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞核的形态改变;Western blot检测组蛋白3赖氨酸27三甲基化(H3 K27me3)、果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测EZH2基因的表达.结果 TPL对DU145细胞增殖有显著的抑制作用,24 h的半数抑制剂量(IC50)值为(68.71 ±0.15) nmol/L;48 h的IC50值为(36.87 ±5.80) nmol/L,与未加TPL的对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较,随着药物浓度的增加(25、50、100 nmol/L),凋亡率也逐渐增加,早期凋亡率分别为(10.9±1.3)％、(22.4±1.3)％和(31.3±2.4)％,两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).PI染色显示经TPL处理的DU145细胞部分表现出细胞核的高度浓缩,为细胞凋亡的重要特征;用不同浓度的TPL处理细胞24 h后,Western blot检测DU145细胞H3 K27 me3及EZH2的蛋白表达量均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).FQ-PCR检测显示TPL处理组EZH2基因表达量显著降低,并且也表现出浓度-效应关系.结论 TPL可以抑制DU145生长增殖并诱导细胞凋亡,并且可能是通过组蛋白修饰这一表观遗传机制来实现的.
-
白藜芦醇通过抑制纤溶亢进延长大鼠异种心脏移植物的生存期
目的 观察白藜芦醇(RES)对仓鼠→大鼠异种心脏移植发生的延迟性异种排斥反应(DXR)中血液高凝状态的影响.方法 建立仓鼠→大鼠异种心脏移植模型,采用来氟米特(LEF)和FK506联合用药14 d建立DXR模型,并使用RES进行后续治疗.观察移植心脏的存活时间、病理以及凝血6项.结果 对照(Ctrl)组平均生存期为8.5d,而RES组平均生存期达到23.5 d.RES组有效地减少血管壁周围炎性细胞浸润以及血管内血栓的形成,并有效地降低纤维蛋白原(FIB-c)以及纤溶降解产物D-二聚体(D-D)水平,改善血液的高凝状态.结论 RES能通过降低FIB-c的产生以及降低纤维蛋白降解降解产物D-D的水平,改善血液的高凝状态,延长移植物的生存期.
-
微小RNA在大鼠慢性胰腺炎与正常胰腺组织中的表达差异
目的 比较大鼠慢性胰腺炎(CP)胰腺组织与正常胰腺组织微小RNA (miRNA)表达谱的差异,探讨CP发病中潜在的关键调节作用的miRNA及其靶基因功能.方法 将16只SD大鼠随机分为实验组和对照组,分别尾部静脉注射二氯二丁基酯和无菌生理盐水建立模型,8周后检测血清淀粉酶及胰腺组织病理变化.检测分析胰腺组织miRNA表达谱差异,对差异表达的miRNA进行靶基因预测、Gene Ontology(GO)分析和信号通路分析.结果 实验组与对照组血清淀粉酶、病理组织学评分差异有统计学意义(P＜0.05);两组miRNA表达谱差异明显,与对照组胰腺组织比较,实验组胰腺组织中上调miRNA共49个,下调miRNA共37个(变化倍数＞2.0,P＜0.05),上调的部分miRNA参与胰腺组织的纤维化和细胞的凋亡.在差异表达miRNA中有24个(占27.91％)可以找到相应的靶基因,GO分析结果表明靶基因在细胞物质代谢、增殖周期、信号传导、胞外结构活动、细胞器合成等过程中起重要调节作用;信号通路分析表明基因在代谢通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、癌症通路和Hedgehog信号通路等富集有显著变化.结论 慢性胰腺炎大鼠胰腺组织与正常大鼠胰腺组织中miRNA表达谱差异有统计学意义,miRNA通过调节靶基因的表达参与调控代谢通路、MAPK信号通路、癌症通路和Hedgehog信号通路等,在胰腺实质纤维化的进展和癌变中起重要调节作用.
-
右美托嘧啶对大鼠肾脏缺血再灌注后炎性反应的保护作用
目的 探讨右美托嘧啶对大鼠肾脏缺血再灌注后炎性反应的保护作用及其机制.方法 将24只大鼠随机分为3组,每组8只.假手术组:游离双侧肾脏,切除右肾后缝合腹壁;缺血再灌注组:切除右肾,夹闭左肾动、静脉45 min后再灌注24 h,余同假手术组.右美托嘧啶组:夹闭左肾动、静脉前30 min,腹腔注射右美托嘧啶(100 μg/kg),余同缺血再灌注组.再灌注24 h后,检测各组大鼠血清肌酐、尿素氮,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的水平,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB (NF-κB)的表达.结果 在假手术组、缺血再灌注组和右美托嘧啶组中,血清肌酐(μmol/L)分别为17.55±1.02、138.49±6.20、81.98 ±4.24,血清尿素氮(mmol/L)分别为7.00±2.06、27.38±4.37、13.75±3.54,假手术组的血清肌酐、尿素氮水平明显比缺血再灌注组和右美托嘧啶组低(P＜0.05),而缺血再灌注组的血清肌酐、尿素氮水平显著高于右美托嘧啶组(P＜0.05).HE染色可见缺血再灌注组的肾小管上皮细胞明显变性坏死,有大量炎性细胞浸润,而右美托嘧啶可以明显减轻损伤.与假手术组比较,缺血再灌注组和右美托嘧啶组TNF-α、IL-1β、ICAM-1、TLR4、NF-κB水平均显著升高,而右美托嘧啶组的上述指标明显低于缺血再灌注组.结论 右美托嘧啶可以减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤导致的炎性反应,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路的表达有关.
-
新型高柔顺主动脉覆膜支架实验研究
目的 探讨新型高柔顺主动脉覆膜支架在动物模型中使用的安全性和可靠性.方法 12只绵羊分为2组,每组6只,分别进行胸主动脉覆膜支架实验和腹主动脉覆膜支架实验.10 mm人工血管与绵羊腹主动脉吻合,然后经人工血管植入输送器和支架,在胸主动脉释放支架.存活30d后行胸主动脉造影,观察支架位置、形态;然后处死绵羊,进行大体解剖和病理检查.结果 所有支架均释放在所需位置,术中造影无支架移位及内漏.胸主动脉支架组有1只羊术后无法站立,术后5d死亡,尸体解剖可见支架部位血管腔内血栓形成,堵塞管腔.腹主动脉支架组有1只羊术后无法站立,术后30 d后处死,尸体解剖同样发现支架部位血管腔内血栓形成,堵塞管腔.其余羊均术后即可站立,正常活动,饮食无异常.1个月后造影,支架部位管腔通畅,支架固定在释放位置,无移位、内漏及造影剂外漏.病理检查结果证实:植入的支架与血管结合紧密,支架内壁组织光滑.结论 新型高柔顺主动脉覆膜支架在动物实验中表现了良好性能,具有安全性和可靠性.
-
B7-H1沉默联合肿瘤抗原负载的新型树突状细胞疫苗体外抗膀胱癌免疫效应的研究
目的 通过慢病毒介导B7-H1沉默与负载肿瘤抗原结合的方法构建新型树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外抗膀胱癌的免疫效应.方法 分离健康人外周血单个核细胞,体外诱导培养DC,感染含B7-H1短发卡RNA(shRNA)序列的慢病毒载体.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测感染后DC B7-H1的表达,流式细胞术分析DC表型,混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞增殖能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其分泌白细胞介素(IL)-10和IL-12的水平.然后将DC负载膀胱肿瘤抗原,与T细胞共培养诱导细胞毒性T细胞(CTL),乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对膀胱癌细胞的体外杀伤活性.结果 DC慢病毒感染效率约为75％,感染后DC上B7-H1表达受到明显抑制,而DC表型却并未受影响.DC疫苗对T细胞诱导增殖效应及IL-12分泌能力明显增强,而IL-10分泌明显减少,同时负载膀胱肿瘤抗原的DC疫苗诱导产生的CTL对膀胱癌T24细胞的杀伤活性[E/T=5∶1时为(12.80±1.06)％,E/T=10∶1时为(23.44±2.40)％,E/T=20∶1时为(36.27±3.06)％]明显高于对照组(P＜0.05).结论 慢病毒介导的B7-H1沉默联合肿瘤抗原负载的新型DC疫苗可有效诱导体外特异性抗膀胱癌:免疫效应.
-
微小RNA-421下调叉头框蛋白O4促进结直肠癌细胞增殖的研究
目的 探讨微小RNA(miR)-421对结直肠癌细胞系SW480增殖的影响及其作用机制.方法 分别上调及干扰miR-421在结直肠癌细胞株SW480中的表达,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖能力;同时采用Western blot检测miR-421与叉头框蛋白O4(FOXO4)的关系.结果 miR-421表达上调325.0％后,连续观察4d,CCK-8结果表明细胞的吸光度值分别为0.309、0.471、0.595、0.687,与阴性对照组(0.306、0.409、0.491、0.554)相比,增殖能力明显增强(P＜0.05);而干扰组miR-421表达下调75.0％,细胞的吸光度值分别为0.303、0.332、0.417、0.473,增殖能力明显减弱(P＜0.05).同时,miR-421过表达及干扰能使FOXO4表达相应的减弱及增强.结论 miR-421表达有助于促进结直肠癌细胞的增殖,其作用机制与其调控FOXO4表达相关.
-
骨形态发生蛋白-2修饰纳米羟基磷灰石-聚乳酸-羟基乙酸工程骨的研究
目的 通过基因工程、细胞工程和组织工程学,构建一种能够具有更高成骨能力的工程骨.方法 利用贴壁法分离鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),以BMSCs为靶细胞,进行骨形态发生蛋白(BMP)基因转染.将BMSCs及转染细胞与nano-羟基磷灰石(HA)/聚乳酸羟基乙酸(PL GA)支架材料复合,观察细胞与支架材料的复合情况.结果 转染结果显示空白质粒转染率为39.1％、BMP-2组为38.4％.扫描电镜观察,支架材料的孔径为100～400 μm,大部分孔径为250～ 300 μm.细胞的黏附和生长发现接种5d后细胞黏附在支架孔壁上,细胞伸展良好,各组细胞黏附数量在nano-HA/PLGA复合支架材料的上下差异无统计学意义(P＞0.05),细胞分泌较多胶原样物质,并可见细胞周围有钙结节形成,以BMP-2质粒转染组细胞周围钙结节较多.结论 虽然nano-HA/PLGA支架材料目前仍不能完全满足骨组织工程基质材料的要求,但生物相容性良好,其富含微孔的结构令人满意,在材料力学方面增韧、增强的效果明显.
-
阿斯匹林诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究
目的 探讨阿斯匹林诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的作用及其机制.方法 体外培养SH-SY5Y和CHLA-119神经母细胞瘤细胞株细胞,不同浓度的阿斯匹林(0 ～ 10 mmol/L)处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖抑制作用,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡率,流式细胞学检测细胞凋亡率,蛋白印记检测阿斯匹林诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9/-3活化,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解,以及对B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-xL、髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)表达的影响.结果 不同浓度的阿斯匹林处理神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y和CHLA-119细胞72 h,50％增殖抑制率(IC50)分别为4.8mmol/L和4.6mmol/L.阿斯匹林(5mmol/L)处理SH-SYSY和CHLA-119细胞48 h,在两株细胞中可分别诱导45％和46％的髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)细胞死亡.流式细胞仪检测结果显示,阿斯匹林(5 mmol/L)处理SH-SY5Y和CHLA-119细胞24 h,细胞的凋亡率分别为46％和42％.Western blot检测结果显示,阿斯匹林(5 mmol/L)处理SH-SYSY和CHLA-119细胞24 h,可诱导Caspase-9、-3活化,PARP裂解,以及诱导bcl-2抗凋亡家族蛋白Mcl-1、bcl-xL表达的下调.结论 阿斯匹林能够诱导神经母细胞瘤细胞Mcl-1和bcl-xL表达下调,疏通凋亡信号传导,到达强效的凋亡诱导作用.
-
下调Krüppel样因子8表达抑制肺癌细胞株A549侵袭
目的 探讨Krüppel样因子8(KLF8)对肺癌细胞株A549侵袭能力的影响及机制.方法 应用短发卡RNA (shRNA)瞬时转染肺癌细胞株A549干扰KLF8表达,形成A549、Mock及sh-KLF8 3个亚组,采用Western blot检测KLF8蛋白表达,Transwell法检测癌细胞侵袭能力,Western blot法检测上皮-间充质转化相关蛋白表达.结果 shRNA干扰肺癌细胞株A549中KLF8表达后,KLF8蛋白水平表达下调下降90.3％ (P＜0.01);A549细胞侵袭能力下降[(87±5)个比(16±7)个,P＜0.01];上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)上调4.9倍(P＜0.05)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)下调44.5％ (P ＜0.05)及波形蛋白(Vimentin)下调62.1％ (P＜0.01).结论 干扰肺癌细胞株A549的KLF8后可抑制癌细胞的迁移,其作用机制可能是通过上皮-间充质转化通路实现的.
关键词： 肺癌 Kruppel样因子8 -
热休克蛋白90-细胞外信号调节激酶-血管内皮生长因子通路在肠癌所致血管内皮细胞迁移和管状生成中的作用及机制
目的 探讨热休克蛋白90(HSP90)-细胞外信号调节激酶(ERK)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在肠癌所致血管内皮细胞迁移和管状生成中作用及可能机制.方法 改变肠癌细胞HCT116中HSP90的表达水平,观察对下游分子ERK磷酸化激活和VEGF表达的影响;肠癌细胞条件培养上清刺激人脐静脉血管内皮(HUVECs)细胞,观察HUVECs细胞在该培养液中迁移和管状生成的能力;同时采用ERK抑制剂U0126和人重组VEGF蛋白,观察可否部分逆转因肠癌细胞中HSP90表达改变对血管细胞活性的影响.结果 TNM分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的肠癌患者癌组织中VEGF表达量高于对应癌旁组织.高表达HSP90增加了VEGF介导的HUVECs细胞迁移和血管生成的能力.U0126处理肠癌细胞后,抑制ERK的激活,可部分逆转因HSP90表达增加而引起的肠癌细胞中VEGF表达量的增加.结论 HSP90-ERK-VEGF通路在肠癌所致血管生成中发挥中重要作用.
-
兔外周血检测早期内皮祖细胞方法的比较
目的 对内皮祖细胞(EPCs)检测中常用的密度梯度离心法和两种裂解红细胞的方法进行比较,探索对血液中EPCs进行以鉴定数量、含量为目的的简便、经济、准确的实验方法.方法 取新西兰白兔动脉血存储于含肝素的真空采血管中,分别采用淋巴细胞分离液、流式细胞溶血素和红细胞裂解液对血液进行预处理.所获细胞采用抗小鼠藻蓝蛋白(APC)荧光素标记的CD3(CD3-APC)、抗小鼠藻红蛋白(PE)荧光素标记的CD45(CD45-PE)、抗小鼠异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD133 Prominin-1[CD133-(Prominin-1)-FITC]进行标记后通过流式细胞仪检测早期EPCs含量.结果 3种方法检测早期EPCs含量差异无统计学意义(P＞0.05),其中流式细胞溶血素法所需的血液、处理液、试管和仪器少,方法简便,操作中影响实验结果的因素少,有利于重复处理和测试.结论 流式细胞溶血素法是检测外周血EPCs预处理方法中容易实施的一种方法.
-
缺氧预处理对大鼠脊髓损伤后炎性反应和细胞凋亡的影响
目的 观察缺氧预处理(HP)对大鼠脊髓损伤后炎性因子、细胞凋亡的影响.方法 将154只成年雌性Wistar大鼠随机分为脊髓损伤组、脊髓损伤±缺氧预处理(HP)组、假手术组,利用免疫组织化学法检测各组脊髓损伤后2、6、12h和1、3d各时点肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β表达水平.于6h、1、3、7、14 d各时间点,用原位末端转移酶标记(TUNEL)法和免疫组织化学法检测脊髓损伤区域神经细胞凋亡数和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达,采用大鼠运动功能评分(BBB评分)对各组大鼠进行后肢运动功能评分.结果 HP组TNF-α积分吸光度(IA)值在6、12 h较脊髓损伤组降低(5.187±0.628比7.962±2.185;3.219±0.724比5.361±1.246,P＜0.05),IL-1β IA值6、12h、1d较脊髓损伤组降低(3.845±1.669比6.674±1.537;6.241±1.142比9.961 ±2.814;2.264±1.476比4.418±0.973,P＜0.05).HP组bcl-2蛋白IA值在各时间点较脊髓损伤组表达明显升高(4.335±0.563比3.256±1.024;6.873±2.032比5.029±1.537;11.869±2.560比6.893 ±2.164;10.340±1.469比8.074 ±2.175;8.143 ±2.376比5.238±1.467,P ＜0.05),平均细胞凋亡指数(AI)在1、3、7、14 d较脊髓损伤组减少(20.63±5.86比26.37±4.76;29.85±8.12比37.96 ±3.81;31.56 ±4.01比41.74 ±6.69;22.66 ±5.24比32.87±9.90,P＜0.05).HP组BBB评分在7、14d较脊髓损伤组升高[(5.68±1.83)分比(3.06±1.21)分;(10.21 ±2.64)分比(6.45±1.97)分],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HP可以拮抗局部损伤组织的炎性反应,并通过高表达bcl-2蛋白减少细胞凋亡,从而促进神经功能恢复.
-
茯苓酸对梗阻性肾积水间质纤维化的作用
目的 探讨茯苓酸(PA)改善梗阻性肾积水后导致的肾间质纤维化的作用及其机制.方法 将28只C57雄性小鼠按照随机列表法分为4组:A组:假手术组;B组:模型组;C组:茯苓酸小剂量组;D组:茯苓酸大剂量组.建模及给药7d后,处死小鼠并取材,苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏病理损伤变化,天狼猩红染色检测间质胶原纤维的表达,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测间质中胶原纤维蛋白-1(COI-1)、纤维粘连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1),磷酸化Smad2/3(pSmad2/3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 输尿管梗阻(UUO)小鼠给予茯苓酸治疗7d后,HE染色显示肾脏病理改变较对照组减轻.天狼猩红染色可见肾间质纤维化程度较对照组明显减轻,且大剂量组减轻更明显.免疫组织化学结果显示COI-1、FN、α-SMA在梗阻后表达明显升高,给予茯苓酸治疗可降低基质中COI-1、FN、α-SMA的表达.Real-time PCR结果显示,在模型组、小剂量茯苓酸组、大剂量茯苓酸组COI-1 mRNA水平相对表达量分别为4.20±1.42、2.30±0.76、1.70 ±0.70;FN在mRNA水平相对表达量分别为5.20 ±2.22、3.00±1.70、1.70±1.06;α-SMA在mRNA水平相对表达量分别4.60±1.23、2.30 ±0.98、1.40 ±0.70.给药组与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示茯苓酸可下调TGF-β1、pSmad2/3、MMP-9的表达.结论茯苓酸可改善单侧肾积水导致的间质纤维化,可能是通过下调TGF-β1、pSmad2/3、MMP-9的表达来实现的.
-
高表达四跨膜蛋白CD81在食管癌侵袭转移中的作用
目的 探讨四跨膜蛋白CD81表达和食管癌细胞侵袭转移的关系.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测正常食管上皮细胞与3株不同转移潜能的食管癌细胞中CD81的表达;免疫组织化学检测12例食管癌及相应癌旁组织中CD81表达;慢病毒干扰CD81表达,研究CD81对食管癌细胞侵袭的影响;并研究CD81表达与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的关系;后通过免疫组织化学法检测食管癌组织中CD81与E-cadherin表达,以进一步验证.结果 CD81在食管癌细胞中表达明显高于正常食管上皮细胞(mRNA:1.87±0.09比1.25 ±0.05;蛋白:1.53 ±0.06比0.39±0.02),在食管癌细胞KYSE150、KYSE450、KYSE510中CD81 mRNA表达分别为2.40 ±0.11、2.10±0.08与1.10 ±0.09,蛋白表达为1.73 ±0.10、2.21 ±0.07与0.64±0.01;免疫组织化学检测显示12例癌组织中表达明显均高于癌旁组.食管癌细胞中干扰CD81表达后,细胞的侵袭能力下调(121 ±23比45 ±19;152 ±48比75 ±37),E-cadherin表达上调.食管癌组织中高表达CD81伴E-cadherin表达下调.结论 高表达四跨膜蛋白CD81可能通过下调E-cadherin蛋白表达促进食管癌侵袭.
-
过表达人载脂蛋白M基因对GK大鼠胰岛素敏感性的影响
目的 探讨过表达人载脂蛋白M(ApoM)基因是否改善Goto-Kakizaki (GK)大鼠胰岛素敏感性.方法 以慢病毒(LV)为载体,构建含人ApoM基因的重组慢病毒[LV4 (GFP)-ApoM].转染293T细胞24 h后,采用聚合酶链反应(PCR)芯片分析2型糖尿病相关基因;将10只GK大鼠随机分为ApoM阴性慢病毒组和ApoM阳性慢病毒组,每组5只.尾静脉注射5×108 TU慢病毒,用实时定量PCR(Real-time PCR)法检测ApoM mRNA水平,胰岛素耐量实验评价GK大鼠胰岛素敏感性.结果 (1)相较于ApoM阴性慢病毒组,293T细胞ApoM阳性慢病毒组ApoM mRNA水平增加79.43倍(P＜0.01);同时,与胰岛素抵抗相关的基因丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)下调了2.11倍(P＜0.05),胰岛素样生长因子2(IGF2)下调1.23倍(P＜0.05).(2)ApoM阳性慢病毒组GK大鼠肺组织中人ApoM mRNA表达较为明显;第14天GK大鼠空腹血糖水平和对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05),但胰岛素耐量实验结果显示ApoM阳性慢病毒组GK大鼠血糖浓度下降50％的时间(60 min)明显早于ApoM阴性对照组(90 min).结论 过表达ApoM基因有可能增强2型糖尿病个体的胰岛素敏感性.
-
超氧化物歧化酶清除自由基对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制
目的 建立小鼠心脏缺血再灌注损伤模型,分别给予两种超氧化物歧化酶(SOD)类似物进行干预治疗,观察心肌组织缺血再灌注以及缺血再灌注后心脏的功能状态.方法 建立小鼠心脏缺血再灌注模型,分别在灌注前5 min给予小鼠SOD类似物及磷酸盐缓冲液(PBS).通过Evans蓝和氯化三苯基四氮唑(TTC)双染色测定梗死心肌面积,激光多普勒测定心肌缺血再灌注后心肌血流量和心功能变化,观察小鼠缺血再灌注心脏损伤变化.结果 采用小鼠心脏冠状动脉左前降支结扎,成功构建小鼠心肌缺血再灌注损伤模型,模型成功率达96％.采用SOD类似物在缺血再灌注前进行干预,可明显减少小鼠心脏再灌注过程中心功能损伤,其中心肌梗死面积由65％下降至37％,平均动脉血压(MABP)平均变化率由33.3％降低为18.9％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 氧自由基分子是心肌缺血再灌注损伤的关键分子,SOD类似物可以通过清除氧自由基来发挥对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.
-
金属硫蛋白-3表达对A549肺癌株生物学功能的影响
目的 观察金属硫蛋白-3(MT-3)表达对A549肺癌细胞株的增殖、凋亡和生物学功能的影响.方法 应用基因转录方法检测MT-3表达对A549肺癌细胞株的抗增殖作用和生物学功能的影响;通过免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测MT-3 mRNA在A549肺癌株中的表达水平,半定量RT-PCR(SqRT-PCR)测定转染后A549肺癌细胞中c-fos、c-jun mRNA水平表达变化,并通过显微镜、苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜等观察凋亡细胞的形态学改变.结果 RT-PCR和免疫细胞化学证实转染后A549肺癌细胞中有MT-3稳定表达;SqRT-PCR证实转染后A549肺癌细胞中c-fos、c-jun mRNA水平显著降低(x2=2.536,P＜0.05).噻唑蓝(MTT)比色法表明随着MT-3与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(x2=2.795,P＜0.05).MT-3作用于肺癌细胞24 h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死.结论 体外制备的MT-3对肺癌A549细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用,其可能是通过负性调控信号通路降低A549肺癌细胞株中c-fos、c-jun的表达.
-
白细胞介素-15及树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞表型及功能的影响
目的 观察白细胞介素-15(IL-15)和树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的免疫表型及细胞毒性的影响.方法 体外培养C57BL/6小鼠脾脏单核细胞,利用干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2和CD3抗体刺激诱导CIK细胞,采集小鼠骨髓单核细胞,诱导产生DC.在CIK诱导过程中分别予以IL-15、DC或两者共同刺激,获得CIK、IL-15-CIK、DC-CIK、DC/IL-15-CIK细胞.通过流式细胞术(FCM)鉴定各组CIK细胞中CD3+ CD8+和CD3+ NK1.1+表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测其对肝癌Hepal-6细胞的细胞毒性.结果 体外刺激前C57BL/6小鼠脾脏单核细胞中CD3+ CD8+和CD3+ NK1.1+阳性细胞的比例分别为(12.3±2.1)％和(1.1±0.5)％.体外培养14d后,CIK、IL-15-CIK、DC-CIK和DC/IL-15-CIK组的CD3+ CD8+细胞比例分别为(18.8±2.4)％、(22.1±2.0)％、(28.2±2.6)％和(34.7±2.3)％;CD3+ NK1.1+细胞比例分别为(17.1±2.6)％、(18.9±3.4)％、(22.5.±1.5)％和(25.9±1.8)％.其中DC处理组和IL-15联合DC处理组与单纯CIK对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).在2.5∶1.0～ 20.0∶1.0的效靶比范围内,DC-CIK和DC/IL-15-CIK细胞对肝癌细胞的杀伤率显著高于CIK细胞对照组(P＜0.01),在效靶比为20.0∶1.0时,DC-CIK和DC/IL-15-CIK细胞对Hepa1-6肝癌细胞杀伤率分别为(54.9±3.1)％和(58.8±4.3)％.结论 IL-15和骨髓源性DC均可增加CIK细胞中CD3+ CD8+和CD3+ NK1.1+阳性细胞比例,且两者具有明显的叠加效应.DC刺激增加CIK细胞抗肿瘤细胞的活性,IL-15作用下DC-CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性进一步增强.
-
感染骨段灭菌后异位再血管化的研究
目的 探讨感染骨段灭菌后异位再血管化的可行性.方法 60只中国白兔随机分为两组.实验组:制备胫骨感染模型,模型建立后,截取1.5 cm感染胫骨,活力碘灭菌处理;胫骨残端扩创,小腿钢板短缩内固定.将灭菌后的骨段置于同侧隐动脉滋养的股内侧肌与股直肌间隙并固定.对照组:在相同部位截取等长健康兔胫骨,其余步骤同实验组.术后4、6、8周行解剖学观察,墨汁动脉灌注观察骨表面墨染,病理切片观察骨段内血管管腔数量,并行统计学处理.结果 术后4周:骨表面形成一薄层结缔组织膜,灌注可见骨表面散在点片状墨染区域,病理切片见血管管腔数量少,正常骨、对照组、实验组血管管腔计数分别为(11.10 ±2.26)、(10.20 ±2.10)、(10.01±1.91)个/视野,差异无统计学意义(P＞0.05).6周:两组骨均可见表面结缔组织膜增厚,骨表面墨染面积增大,分布不均匀,病理切片可见大量血管管腔.管腔数量对照组[(21.70 ±1.77)个/视野]高于实验组[(17.60 ±2.72)个/视野],差异有统计学意义(P＜0.05).8周:两组骨表面均形成较厚结缔组织膜,墨染范围扩散至全骨.病理切片见血管管腔密集分布,对照组、实验组血管管腔计数分别为(26.40±1.96)、(24.60±2.91)个/视野,两组差异无统计学意义(P＞0.05),6周及8周时,两组血管管腔计数均多于正常骨(P＜0.05).同组内管腔数量,随着时间的延长而增加(P＜0.05).结论 兔感染骨段经活力碘浸泡处理,能够达到理想的灭菌效果.灭菌后的感染骨段置于有知名血管的血供丰富的组织内,8周可完成再血管化过程,重建骨血液循环,为二期回植修复骨缺损创造条件.
-
缺氧条件下血红素氧合酶-1对肠黏膜屏障的保护作用
目的 观察缺氧条件下血红素氧合酶-1(HO-1)对肠黏膜屏障功能的影响.方法 HO-1真核过表达载体转染Caeo-2细胞,分为常氧组、缺氧组、转染组、质粒对照组.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot方法检测肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和HO-1的mRNA和蛋白的表达水平变化.免疫荧光法观察Occludin在细胞内的分布.结果 与常氧组比较,缺氧组Occludin的mRNA(0.43±0.03比1.0,P＜0.01)、蛋白(0.62±0.07比1.0,P＜0.01)表达水平均明显降低;与缺氧组比较,转染组Occludin的mRNA(0.65 ±0.04比0.43 ±0.03,P＜0.05)、蛋白(0.89±0.06比0.62 ±0.07,P＜0.05)表达水平明显升高;缺氧组与质粒对照组Occludin的mRNA(0.43±0.03比0.40±0.05,P＞0.05)、蛋白(0.62 ±0.07比0.61 ±0.04,P＞0.05)表达无明显变化.免疫荧光染色见Occludin沿细胞膜分布,呈线性荧光,缺氧引起其形态破坏,转染HO-1后破坏减轻.结论 缺氧条件下,HO-1可增加肠道紧密连接蛋白Occludin的表达水平,减轻缺氧对肠黏膜屏障的损伤.
-
pIRES2-EGFP-hTGF-β3真核表达载体的构建及鉴定
目的 构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人转化生长因子β3(hTGF-β3)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hTGF-β3基因,构建TGF-β3基因和报告基因EGFP基因真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计法测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3酶切后显示空载体和hTGF-β3基因片段长度分别为5 300 bp和1 251 bp,PCR扩增hTGF-β3基因片段长度为1 251 bp,紫外分光光度计法测定空载体和含hTGF-β3基因的质粒浓度分别为382 mg/L和411 mg/L,测序证实pIRES2-EGFP-hTGF-β3载体序列正确.结论 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hTGF-β3,可为后续的骨修复基因治疗的研究奠定基础.
-
沙漠干热环境创伤失血性休克大鼠血清炎性因子和肺组织环氧化物酶-2的变化
目的 探讨沙漠干热环境创伤失血性休克大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肺组织环氧化酶-2(COX-2)mRNA的变化与肺脏继发性损伤的关系及其机制.方法 将140只雄性SD大鼠随机分为干热环境和常温环境创伤失血性休克组,每组又分别设对照组、休克后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0组7个亚组,每组10只,建立创伤失血性休克模型后,留取血清和肺组织,观察肺组织病理学改变,酶联免疫分析(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6浓度及实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测肺组织COX-2 mRNA表达量.结果 干热组各时间点肺组织病理学评分较高,干热组休克后各时间点血清IL-1β、IL-6及肺组织COX-2 mRNA表达量(3.46±0.19)均高于常温组(2.13±0.13),干热组血清IL-1β、COX-2 mRNA峰值出现在休克后1.5h,常温组峰值则出现在2.0h,而干热组与常温组IL-6峰值出现均较IL-1β推迟,血清IL-1β、IL-6及COX-2 mRNA表达与肺损伤病理学评分呈正相关.结论 在沙漠干热环境中创伤失血性休克继发性肺损伤时,肺脏损伤较常温环境下严重、损伤提前,血清IL-1 β、IL-6、COX-2在沙漠干热环境创伤失血性休克继发性肺损伤过程中可能起重要作用.
-
内皮祖细胞在肾癌中的变化及动员特征
目的 检测肾癌(RCC)小鼠外周血(PB)、癌组织(TT)和癌旁组织(AT)中内皮祖细胞(EPCs),探讨其在RCC进展中的动员特征及机制.方法 雄性BALB/c裸鼠随机分为3组即RCC组、假手术组(Sham组)、正常组(Normal组).分别在移植肿瘤细胞后21、28、35、42、49 d处死小鼠,获取血和组织标本.评估循环内皮祖细胞(CEPCs)、血浆中血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)以及正常肾组织(NT)、假手术肾组织(ST)、AT和TT的EPCs、VEGF和SDF-1基因的表达.结果 与Normal以及Sham组比较,RCC组CEPCs和血浆VEGF、SDF-1表达水平明显升高(P＜0.05),CEPCs和血VEGF、SDF-1之间呈正相关(r1=0.584,r2=0.579).AT中EPCs水平明显高于TT及NT(P ＜0.05),与CEPCs之间呈正相关(r=0.857).AT中VEGF和SDF-1表达显著高于TT及NT(P ＜0.05),且与血浆VEGF、SDF-1呈正相关(r1 =0.618,r2=0.421).结论 AT中VEGF和SDF-1在EPCs动员中具有重要作用.
-
Toll样受体3-小分子RNA干扰对人肺腺癌细胞A549增殖分化及免疫逃逸的影响
目的 观察Toll样受体3(TLR3)对人肺腺癌细胞A549的增殖、抗凋亡及免疫逃逸方面的影响.方法 给予TLR3-RNA干扰(RNAi)慢病毒转染组、未转染组和空载对照组TLR3的配体Poly(I∶C)刺激后,分别通过流式细胞术检测B7-H1的表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测前列腺素E2(PGE-2)的表达,Western blot检测磷酸化p38的含量,并采用膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染色法检测A549细胞的凋亡.结果 在Poly(I∶C)刺激时间及浓度相同的情况下,转染TLR3-RNAi慢病毒载体的A549细胞组中B7-H1阳性细胞百分比、PGE-2的表达以及磷酸化p38的百分比相对值均低于未转染组和空载对照组(P＜0.01).凋亡实验显示,转染TLR3-RNAi慢病毒载体的A549细胞组细胞凋亡率[(44.40 ±1.41)％]明显高于未转染慢病毒载体组(34.70±0.89)％]和空载对照组[(36.50±1.12)％,P＜0.01.结论 TLR3基因沉默抑制了A549细胞中p38、PGE-2、B7-H1的表达,并降低了细胞的抗凋亡能力.
-
Jagged1活化Notch通路促进破骨细胞分化并抑制其增殖
目的 观察Jagged1通过活化Notch通路对人外周血CD14+单核细胞破骨分化、增殖的影响.方法 免疫组织化学法检测Jagged1在肺癌骨转移标本中的表达,Ficoll法联合磁珠分选法分离人外周血CD14+单核细胞,分别加入Jagged1重组蛋白、Jagged1重组蛋白及γ-分泌酶抑制剂(DAPT)分组培养,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测组织蛋白酶K(CK)、抗酒石酸性磷酸酶(TRAP)、降钙素受体(CTR)及Notch靶基因发状分裂相关增强子-1(HES-1)、HES相关YRPW主题-1(HEY-1)mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能.细胞计数法(CCK-8)检测CD14+单核细胞增殖.结果 Jagged1在肺癌骨转移标本中高表达,癌旁组织无或低表达;Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP+细胞数较对照组及DAPT组明显升高(P＜0.05),而DAPT组与对照组比较均无明显变化;细胞培养48 h,Jagged1组细胞增殖较对照组及DAPT组明显抑制.结论 Jagged1通过活化Notch通路促进破骨前体细胞分化、抑制其增殖.
-
缺血前预处理对机体内一氧化氮表达的影响
目的 观察缺血前预处理对机体内一氧化氮(NO)表达的影响.方法 选择成年健康Wistar沙土鼠50只,建立离体Langendorff灌流模型,按照缺血前处理方法的不同平分为5组,正常对照组选择恒压灌流105 min;缺血再灌注组进行平衡20 min,停灌45 min后再灌注60 min;预处理组在停灌45 min后,再灌注60 min前给予6个循环的30 s缺血(R)/30 s再灌注(Ⅰ);预处理+依达拉奉组或丹参组使用含依达拉奉或丹参的灌流液于停灌前灌注10 min,并至再灌注结束.结果 正常对照组、缺血再灌注组、预处理组、预处理+依达拉奉组与预处理+丹参组在灌注60 min时冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性分别为(352.12±9.63)、(615.36±66.36)、(473.19±50.18)、(412.39±35.48)、(399.54±45.89) mU.与正常对照组比较,缺血再灌注组再灌注60 min时冠脉流出液中LDH活性显著升高(P＜0.05),而预处理能显著降低冠脉流出液中LDH酶活性(P＜0.05).正常对照组苏木素-伊红(HE)染色显示心肌细胞有序排列,无炎性细胞浸润;缺血再灌注组心肌细胞排列杂乱,细胞肿胀,有少量炎性细胞浸润;预处理3组的细胞损害程度明显低于缺血再灌注组.与正常对照组比较,再灌注60 min后缺血再灌注组心肌组织内NO含量与总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性显著升高(P＜0.05),而预处理能显著降低心肌组织内NO含量与TNOS和iNOS活性(P＜0.05);依达拉奉与丹参的处理使预处理对心肌组织内上述指标的降低作用更显著(P＜0.05).结论 缺血前预处理可减少离体培养心肌组织的LDH释放,从而表现出对心肌细胞的保护作用,该作用可能是通过对NO-iNOS信号通路进行调节而实现的,依达拉奉与丹参的应用能更加有效发挥预处理作用.
-
微小RNA-101靶向果蝇zeste基因增强子同源物2基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响
目的 观察微小RNA-101(miR-101)通过靶向抑制果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因对人前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响.方法 应用miR-101模拟物转染PC-3细胞;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测转染后miR-101和EZH2的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染色法测量细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 miR-101在PC-3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,EZH2 mRNA和蛋白在PC-3细胞中的表达显著高于RWPE-1细胞,miR-101的表达量与EZH2表达量呈负相关(P＜0.05).miR-101模拟物转染PC-3细胞后,细胞中的miR-101表达上调(P＜0.05),而EZH2 mRNA和蛋白表达水平也明显降低(P＜0.05).MTT法显示:转染后48、72、96 h miR-101模拟物转染组细胞增殖明显低于两个对照组(P＜0.05);流式细胞仪测定结果显示:转染后48 h,miR-101组发生了G0/G1期阻滞(P＜0.05);细胞凋亡率检测结果显示:空白对照组、阴性对照组及miR-101模拟物转染组PC-3细胞凋亡率分别为(2.53±0.36)％、(2.71±0.42)％、(9.84±0.83)％,转染组凋亡率明显高于两个对照组(P＜0.01).划痕实验显示:miR-101模拟物转染组细胞迁移能力明显低于两个对照组(P＜0.01).Transwell侵袭实验结果显示:miR-101组穿过Matrigel凝胶的细胞数显著少于两个对照组(P＜0.01).结论 miR-101负向调控EZH2基因,上调miR-101可抑制PC-3细胞中EZH2的表达,具有显著的肿瘤抑制效应.
-
一种兔持续负压引流的实验方法
我们结合有效的抗菌素和通过持续负压引流的方法局部病灶清除术治疗,探讨兔慢性骨感染的治疗效果.一、材料与方法日本大耳白兔20只,兔股骨慢性骨髓炎模型成功建立后,麻醉备皮消毒铺单.沿原切口进入感染灶,清除脓液、坏死组织.制作负压引流装置(按照本研究团队设计简易负压吸引装置[1]).用石膏将兔躯干后半段和双后肢固定为一个整体,引流管道从石膏后缘穿出.进水管通过注射器接生理盐水灌注,每天500 m];出水管通过橡皮管接电动吸引器,保持负压在125 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)[2].
关键词： -
碱性成纤维细胞生长因子在儿童先天性巨结肠组织中的表达
我们观察儿童先天性巨结肠(HD)组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白水平的表达,现报道如下.一、资料与方法1.一般资料:收集吉林大学第一医院小儿外科2003年1月至2009年12月共39例手术治疗的HD组织标本(其中新鲜标本13例,病理科存档组织蜡块26例).全部标本均经术后病理诊断符合HD论断.其中,男30例,女9例.年龄2个月～5岁.所有病例均为散发,近系亲属无HD患者,且无其他伴发畸形.
关键词： -
骨髓干细胞治疗心肌梗死后慢性心功能不全
我们以细胞移植剂量为主要变量,探讨干细胞移植治疗慢性缺血性心脏病的临床疗效.一、材料与方法1.一般资料:选取2009年2月至2011年10月我院诊治的心肌梗死后慢性心功能不全患者40例,随机分为4组,每组10例.A组为对照组,给予正规药物治疗;B、C、D组为移植组,除了同样给予正规药物治疗外,均行不同数量的自体骨髓间充质干细胞移植,B组:5×104/kg,C组:5×105/kg,D组:1×106/kg.
关键词： -
中下段直肠癌远侧端肠壁非平行浸润特点的病理学研究
肿瘤远侧端肠壁根治性切除同时保留更多肛门直肠功能所需的短切除长度是保肛问题核心[1].我们对36例中下段直肠癌手术切除标本进行病理学研究并探讨肿瘤肠壁内浸润特点对确定肿瘤远侧端肠壁手术切除距离的临床意义.
关键词： -
微小RNA-106b在喉癌组织中的表达及对Hep-2细胞株增殖的影响
喉鳞状细胞癌(LSCC)是头颈部常见的恶性肿瘤之一,对喉癌进行早期诊断,并在基因水平寻求新的治疗手段成为当前急需解决的问题.Ivanovska等[1]研究结果显示,微小RNA(miRNA,miR)-106b属于miR-106b～ 25基因簇,能够促进细胞周期进展,而抑制miR-106b则可逆转该作用.本研究旨在探讨miR-106b在喉癌组织和Hep-2细胞中的作用及机制.
关键词： -
褪黑激素对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子-β/Smads信号通路的影响
转化生长因子(TGF)-β/Smads信号转导通路对增生性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡有非常重要的调控作用[¨.本研究旨在观察褪黑激素对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β/smads信号通路的影响.一、材料与方法1.一般资料:经患者知情同意后收集南昌大学第一附属医院烧伤整形科手术切除的12例烧伤患者的增生性瘢痕组织,患者手术前均未接受药物及放射治疗.将组织随机分成4组:褪黑激素组、Luzindole组、褪黑激素+Luzindole组、空白对照组.
关键词： -
慢病毒介导可调控表达维甲酸诱导基因G的肺癌细胞A549的建立
为了进一步研究维甲酸诱导基因G(RIG-G)基因,特别是RIG-G基因的肿瘤抑制功能是否可以复现在肺癌细胞中,我们采用Tet-on表达系统,利用慢病毒载体介导RIG-G基因转染肺癌细胞株A549细胞,建立RIG-G可调控表达的稳转细胞株,观察RIG-G在肺癌细胞A549中的表达及生物学作用.
关键词： -
第10组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系及其临床意义
淋巴结微转移是指恶性肿瘤在发展过程中,播散并存在于淋巴结中的肿瘤细胞尚未形成结节,常规病理检查难以发现的微小转移.我们通过对常规病理检查没有发现转移的第10组淋巴结采用间断连续切片法结合角蛋白20(CK20)免疫组织化学方法进行微转移的检测,探讨第10组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系.
关键词： -
N-乙酰氨基半乳糖转移酶3高表达细胞株的建立及其对细胞迁移的影响
蛋白质异常糖基化是导致细胞黏附、肿瘤转移和血管生成的重要因素[1-2].N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GalNAc-T3)能够催化N-乙酰氨基半乳糖连接到蛋白质丝氨酸或苏氨酸残基的羟基上,是黏蛋白型O-糖基化修饰的起始糖基转移酶.我们前期的研究成果显示,在低表达GalNAc-T3肺腺癌组织内,肿瘤细胞分化程度较低,预后较差[3].我们利用慢病毒载体,构建高表达GalNAc-T3肺腺癌A549细胞株,观察GalNAc-T3的表达对肺腺癌转移的影响.
关键词： -
血管生成抑制因子Vasohibin-1在结直肠癌组织中的表达
Vasohibin-1是近年来发现的一个重要的血管生成抑制因子[1].本研究旨在探讨其在结直肠癌中的表达及意义.一、资料与方法收集我院2013年6月至2013年12月收治的60例结直肠癌患者的癌组织与癌旁组织标本及临床病理资料.采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法进行免疫组织化学染色.检测指标包括Vasohibin-1、血管内皮生成因子(VEGF-A)及微血管密度(MVD).
关键词： -
右美托咪定对大鼠心肌缺血再灌注时三磷酸腺苷酶的影响
有研究认为,右美托咪定(Dex)可减轻大鼠局部心肌缺血再灌注损伤,但其机制尚未完全阐明[1].细胞内钙超载是诱发心肌缺血再灌注损伤的重要原因,而三磷酸腺苷(ATP)酶在保持细胞内外Na+、K+、Ca2等多种离子平衡,维持细胞钙稳态方面发挥着重要作用.本研究旨在观察Dex后处理对大鼠心肌缺血再灌注时ATP酶活性的影响,探讨其减轻心肌缺血再灌注损伤的机制.
关键词： -
大鼠脑损伤后18000转运蛋白的表达及与小胶质细胞的关系
线粒体膜18 000转运蛋白(TSPO)因参与急慢性中枢神经系统病变而备受关注[1],我们通过建立大鼠重型外伤性脑损伤(TBI)模型,检测TSPO和小胶质细胞标记Ⅲ型补体受体(OX-42)的表达,探讨TSPO的表达变化及其与小胶质细胞的关系.
关键词： -
声诺维检测乳腺癌前哨淋巴结的研究
核素法联合应用染料检测乳腺癌前哨淋巴结已成为乳腺癌前哨淋巴结的活检(SLNB)的金标准,但仍有缺陷[1].超声造影术能人为地增大待查部位与周围组织之间的差异,便于诊断[2].我们通过在兔可移植性鳞癌(VX2)乳腺癌模型肿瘤周围皮下注射超声造影剂,观察探测淋巴管和前哨淋巴结的价值.
关键词： -
F框/WD-40域蛋白7及c-Myc在胃癌中的表达及临床意义
本实验旨在探讨F框/WD-40域蛋白7(CDC4)、c-Myc的表达与胃癌临床病理学特征之间的关系及临床意义.一、资料与方法1.一般资料:收集重庆医科大学附属第一医院胃肠外科2010年10月至2011年9月确诊为胃癌的临床手术标本40例.每例标本均取癌组织、癌旁组织(距肿瘤边缘1.5 ～2.0 cm)及正常胃黏膜组织(距肿瘤边缘≥6 cm).将每例标本分为3份,2份放入液氮中保存,供逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测,一份用4％多聚甲醛固定,石蜡包埋后供免疫组织化学检测.鼠抗人CDC4单克隆抗体(Abcam公司)、兔抗人c-Myc多克隆抗体(北京博奥森公司)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)配制试剂盒(碧云天公司).
关键词： -
缺氧诱导因子-1α和信号传导和转录活化因子3与胃癌侵袭、转移及预后的关系
本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与信号传导和转录活化因子3(STAT3)在胃癌组织中的表达及其与胃癌浸润、转移、预后的关系,现报道如下.一、资料与方法1.资料与方法:收集2000年6月至2005年7月无术前放化疗、手术切除的胃癌标本123例,行免疫组织化学染色,随访时间截至2013年10月.阳性结果判定标准:HIF-1α、STAT3阳性染色主要定位于细胞核,呈棕黄色颗粒.按阳性细胞率及显色程度评分:无论染色强度如何,细胞阳性率≤10％为阴性;2～3分为弱阳性(+);4～5分为中度阳性(++);6～7分为强阳性(+++).
关键词： -
肾移植受者巨细胞病毒感染后B细胞活化因子信号增强
人巨细胞病毒(HCMV)感染是肾移植术后一种常见并发症.HCMV的独特生存方式使得被感染机体将长期产生抗HCMV IgG型抗体[1].由于产生效应的信号通路之间存在串话,病毒抗原刺激B细胞产生特异性抗体的过程对于同种抗原特异性B细胞的活化是否起了促进或推动作用尚待深入研究.B细胞活化因子(BAFF)属于肿瘤坏死因子超家族.BAFF与其受体的结合将促进B细胞生存、分化、增殖;刺激B细胞分泌抗体等.研究亦已发现BAFF信号参与肾移植术后抗体介导的免疫排斥[2];TLRs介导的天然免疫应答与BAFF表达水平有关[3].本研究旨在探讨肾移植受者HCMV感染与BAFF信号活化的相关性,现报道如下.
关键词： -
全氟辛酸在大鼠胰腺炎模型中的炎症调节作用
全氟辛酸(PFOA)是聚四氟乙烯等化工产品的关键原材料,作为一种啮齿动物的致癌剂,PFOA是引起环境污染的重要全氟化合物.本研究旨在观察全氟辛酸在大鼠胰腺炎模型中的炎症调节作用.一、材料与方法1.实验分组:60只雌性SD大鼠随机分为6组:(1)对照组;(2)雨蛙素(CRL)组:雨蛙素以4 nmol/(kg·h)的速度于颈静脉插管给药2h.对照组用磷酸盐缓冲液(PBS)给药;(3)PFOA组:颈静脉给药20 min前皮下注射PFOA(150 mg/kg);(4)氯苯丁酯组:颈静脉给药20 min前皮下注射PPAR-α激动剂氯苯丁酯(100 mg/kg);(5) CRL +PFOA组:皮下注射PFOA,雨蛙素持续给药2h;(6) CRL+氯苯丁酯组:大鼠皮下注射氯苯丁酯,雨蛙素持续给药2h.
关键词： -
慢性移植物肾病中C4d沉积与抗波形蛋白抗体的相关性
慢性移植物肾病(CAN)是导致移植肾丢失的主要原因[1],其中体液免疫是导致这一现象的主要因素之一[2].抗波形蛋白抗体是一种常见的非人类白细胞抗原(HLA)抗体及自身抗体,在CAN进展中检测到抗波形蛋白抗体的存在.沉积于肾微血管部位的C4d分子是抗体介导的排斥反应的标志物.本研究旨在探讨CAN进展中抗波形蛋白抗体与C4d沉积的相关性.
关键词： -
输血相关性急性肺损伤大鼠模型髓系细胞触发受体-1的表达
输血相关性急性肺损伤(TRALI)是输血过程中的常见严重并发症[1],其确切的发病机制尚不清楚.髓系细胞触发受体(TREM-1)是表达于中性粒细胞等髓系细胞表面的胞膜受体,可以触发并放大炎性反应,是炎性反应信号传导通路的重要介质,但其与TRALI的关系尚不明确.我们通过“二次打击”法建立TRALI大鼠模型,观察TREM-1在TRALI肺组织中的表达变化.
关键词： -
骨形成发生蛋白-4在胶质母细胞瘤的多药耐药中的作用及机制
骨形成发生蛋白(BMPs)是转化生长因子-β家族中的一员,在BMP家族中,包含30个成员,BMP-4是BMP家族的一个重要成员,它在1988年第1次被单克隆合成[1],研究证实:BMP-4与多种肿瘤相关[2],而在胶质瘤中已经发现BMP-4可以降低肿瘤细胞在裸鼠体内的成瘤率[3],体外实验则证实BMP-4可以抑制胶质瘤细胞的增殖[4],本研究旨在探讨其在胶质瘤多药耐药中的作用机制.
关键词： -
诱捕受体3在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义
本研究旨在探讨诱捕受体3(DcR3)在膀胱尿路上皮癌(BUC)发生和演变过程中的作用,现报道如下.一、材料与方法1.一般资料:选取我院2004年1月至2006年10月收治的BUC患者154例,尸体解剖收集正常膀胱46例,构建组织芯片,均经病理检查确诊.BUC中男131例、女23例;年龄27 ～ 96岁,平均61.5岁.病理分级低级别95例、高级别59例;非肌层浸润60例、肌层浸润94例;无淋巴结转移146例、淋巴结转移8例;73例采用电话进行随访6 ～40个月,其中死亡11例,复发54例.
关键词： -
DNA甲基转移酶1和DNA甲基转移酶3B基因单核苷酸多态性与结直肠癌易感性的关系
近研究结果显示DNA甲基转移酶(DNMTs)异常激活与人类恶性肿瘤的发生发展密切相关[1],我们将DNMT在结肠癌发生过程中的调控作用作为切入点,采用病例-对照的分子流行病学方法,应用Sequenom MassArray质谱分析技术对DNMT1和DNMT3B的10个单核苷酸多态性位点(SNP)与结直肠癌易感性进行研究,探讨其与结直肠癌易感性的关系及表遗传学的调控机制.
关键词： -
钛基表面纳米银复合涂层体外抗菌及缓释性能研究
我们应用脉冲电化学方法,在钛表面制备羟基磷灰石纳米银(HA/Ag)复合涂层,体外行金黄色葡萄球菌抗菌实验;应用石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS),检测银离子在模拟体液(SBF)中的释放量,探讨材料的抗菌作用及银离子的缓释性能.一、材料和方法1.体外抑菌分析:将不同浓度银溶液制备的1、2、3号样品(0、1.0、0.5 mmol)体外作黄色葡萄球菌抑菌实验.
关键词： -
喉鳞状细胞癌中K-ras基因的低甲基化及其蛋白表达
目的 观察喉鳞状细胞癌中K-ras基因启动子甲基化及其蛋白的表达.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测55例喉鳞状细胞癌及其癌旁组织中K-ras基因启动子甲基化状态,并采用Western blot法检测K-ras蛋白的表达.结果 55例喉鳞状细胞癌组织中24例(43.6％) K-ras基因低甲基化,而癌旁组织中仅8例(14.5％)为低甲基化;喉鳞状细胞癌组织中K-ras基因启动子甲基化水平明显低于癌旁组织(P＜0.05);喉鳞状细胞癌组织K-ras基因低甲基化与年龄、性别及淋巴结转移等临床病理特征无明显相关(P＞0.05);而与分化程度及临床分期间明显相关(P＜0.05).此外,喉鳞状细胞癌组织中K-ras蛋白表达水平明显高于癌旁组织.结论 K-ras基因启动子低甲基化可能对喉鳞状细胞癌的发生发展具有重要作用,并可能是喉鳞状细胞癌中K-ras蛋白高表达的原因之一.
-
树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞自体免疫细胞治疗对转移性大肠癌患者血清微小RNA-29a的影响
目的 探讨树突状细胞(DC)-细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合化疗对转移性大肠癌患者外周血微小RNA (miRNA)-29a表达的影响.方法 将39例转移性大肠癌患者随机分为两组,DC-CIK组23例采用XELOX方案+DC-CIK进行治疗,对照组16例采用XELOX方案进行治疗,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测治疗前及3个周期后两组患者miRNA-29a表达的水平,并观察患者的疗效及评分.结果 经3个周期治疗后,DC-CIK组、对照组miRNA-29amRNA相对表达量均下降,分别为0.515±0.216比1.556±0.228;1.116 ±0.186比1.569±0.289,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,实验组下降更明显(P＜0.05).处理组有效率(73.9％)明显高于对照组(31.3％,P ＜0.05).两组Ⅲ+Ⅳ度白细胞减少率的比较差异有统计学意义(P＜0.05).Kamofsky评分比较,DC-CIK组提高优于对照组(P＜0.05).结论 DC-CIK细胞可有效提高大肠癌整体治疗疗效.下调miRNA-29a是其重要机制之一.
-
胃癌轴突导向受体蛋白2和Ras相关区域家族2A基因甲基化状态研究
目的 探讨轴突导向受体蛋白2(ROBO2)和Ras相关区域家族2A (RASSRA)基因在胃癌及正常组织中甲基化状态及与家族史关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应方法(MSP)检测36例家族史阳性和33例家族史阴性胃癌和癌旁组织ROBO2和RASSRA基因启动子区甲基化状态,分析其与临床病理特征关系.结果 ROBO2基因启动子甲基化在胃癌组织中发生率(30％,21/69)显著高于癌旁正常组织(0),差异有统计学意义(P＜0.05);RASSRA基因启动子区甲基化在胃癌组织发生率(26％,18/69)也显著高于癌旁正常组织(0),差异有统计学意义(P＜0.05).家族史阳性胃癌ROBO2基因启动子甲基化发生率(17％,6/36)明显低于家族史阴性(41％,15/33),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ROBO2和RASSRA基因甲基化是胃癌中频发分子事件,ROBO2基因甲基化可能与散发胃癌发生相关.
-
CD105及血清中可溶性CD105表达检测对胶质瘤的诊断价值
目的 检测不同级别胶质瘤患者肿瘤组织中CD105及其血清中可溶性CD105(sCD105)表达,探讨其在胶质瘤诊断中的价值.方法 随机选择2011年1月至2012年1月期间住院治疗的脑胶质瘤患者62例,采用免疫组织化学法检测胶质瘤组织中CD105表达,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测患者术前血清sCD105和白细胞介素(IL)-10的水平.结果 CD105在胶质瘤组织及正常脑组织中表达平均值分别为34.26±12.61和2.75 ±1.28;高级别胶质瘤、低级别胶质瘤患者及健康人血清中sCD105平均值分别为(26.63±1.16)、(15.90±0.37)、(7.26 ±0.30) g/L;胶质瘤组织中CD105及其血清sCD105表达水平均高于健康对照组(P＜0.05).血清sCD105表达与胶质瘤CD105表达呈正相关;血清sCD105、IL-10与胶质瘤病理级别密切相关.结论 CD105在胶质瘤组织中呈高表达,与胶质瘤恶性程度呈正相关.
-
手汗症患者胸交感神经旁路纤维超微结构的研究
目的 观察各型胸交感神经链旁路纤维组成,探讨胸交感神经链切断术(ETS)治疗手汗症是否需要切断旁路纤维.方法 对50例ETS治疗手汗症患者的胸交感神经旁路纤维进行腔镜下观察,并进一步行透射电镜对超微结构观察.结果 胸腔镜下观察胸2～4肋骨表面可见至少1种类型旁路纤维的概率为81％.透射电镜超微结构研究结果显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型旁路纤维有髓神经纤维占纤维总数百分比分别为66.44％、8.60％、8.88％;有髓神经髓鞘厚度分别为(1.07±0.15)、(0.62±0.15)、(0.59±0.12) μm.结论 Ⅰ型旁路纤维不属于交感神经系统,Ⅱ型及Ⅲ型均为无髓的节后神经纤维束,ETS治疗手汗症单纯切断交感神经链即可,没有必要切断旁路纤维.
-
胰腺癌患者外周血血管抑素和内皮抑素的表达及意义
目的 探讨胰腺癌患者外周血抑血管生成因子血管抑素及内皮抑素的浓度变化与临床病理特征之间的关系.方法 酶联免疫吸附试验测定胰腺癌可切除患者60例、胰腺癌不可切除患者43例、健康人30例外周血血管抑素及内皮抑素浓度,分析血管抑素及内皮抑素浓度与胰腺癌患者性别、年龄、病理分级、肿瘤大小、淋巴结及远处转移、血管侵犯及临床分期的关系.结果 对照组和胰腺癌组外周血内皮抑素浓度分别为(35.1±5.4)、(83.9±16.1)μg/L,血管抑素浓度分别为(2.4±1.5)、(10.1 ±4.9)nmol/L;可切除组较不可切除组及术后1周内皮抑素浓度分别为(61.9±11.4)、(102.0±20.3)、(31.2±2.9)μg/L,血管抑素浓度分别为(8.1±4.9)、(16.3±7.8)、(2.4±0.7) nmol/L,差异均有统计学意义(P＜0.05);血管抑素与血管侵袭及肿瘤大小相关.结论 抑血管生成因子与胰腺癌不同时期的血管生成调控密切相关.
-
乳腺浸润性导管癌组织中转录因子Twist和缺氧诱导因子-1α表达与上皮-间充质转化的关系
目的 探讨转录因子Twist、缺氧诱导因子(HIF)-1α在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其与上皮-间充质转化的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测90例乳腺浸润性导管癌组织及其对应癌旁组织标本中Twist、HIF-1α、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 在乳腺癌组织中Twist、HIF-1α、E-cadherin和Vimentin的阳性率分别为73.3％、68.9％、15.6％和64.4％,癌旁组织中的阳性率分别为7.8％、8.9％、75.6％和34.4％.该4种蛋白在肿瘤组织中的表达率与癌旁组织之间差异均有统计学意义(P＜0.05).Twist与HIF-1α的表达均与组织学分级和腋窝淋巴结转移有关(P＜0.05).Twist与HIF-1α的表达呈正相关(P＜0.05).Twist、HIF-1α的表达也均与E-cadherin的低表达和Vimentin的高表达密切相关(P＜0.05).结论 Twist、HIF-1α和Vimentin在乳腺癌组织中呈高表达,而E-cadherin呈低表达.HIF-1α可能通过上调Twist表达,促进上皮-间充质转化发生,成为乳腺癌浸润转移的途径之一.
-
非小细胞肺癌患者血清中胰岛素样生长因子-1水平的变化
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达水平及其在NSCLC疗效评价中的临床价值.方法 采用放射免疫分析法(RIA法)检测63例NSCLC患者及32例健康体检者血清IGF-1水平,并比较44例NSCLC患者手术前后血清IGF-1水平.结果 血清IGF-1水平与NSCLC患者性别、年龄、病理类型无明显相关,与临床分期明显相关;NSCLC患者血清IGF-1水平为(258.22±52.49) μg/L明显高于健康查体者[(155.04 ±21.37) μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.01);Ⅳ期NSCLC血清IGF-1水平[(322.0S ±27.46) μg/L]明显高于Ⅲ期患者[(2S0.42 ±26.12) μg/L]、Ⅲ期患者明显高于Ⅱ期[(241.59 ±22.84) μg/L]、Ⅱ期患者明显高于Ⅰ期患者[(195.20±19.27) μg/L]、Ⅰ期明显高于正常对照组,两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);NSCLC患者手术后血清IGF-1水平[(59.17 ±6.06) μg/L]明显低于手术前[(59.17 ±6.06) μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血清IGF-1可作为NSCLC病情及疗效评估的参考指标.
关键词： 非小细胞肺癌 胰岛素样生长因子-1 -
微小RNA-17-5p在特发性少精症患者睾丸组织中的表达及其意义
目的 探讨微小RNA (miR)-17-5p在特发性少精症患者睾丸组织中的表达及其意义.方法 对25例特发性少精症患者和10例正常男性为对照组,分别采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测miR-17-5p基因和E2F1蛋白在其睾丸组织中的表达,应用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸组织切片中生精细胞凋亡率.结果 Real-time PCR显示miR-17-5p基因表达在特发性少精症患者睾丸组织中较正常生育能力的睾丸组织显著减少(0.38),明显低于对照组(1.00,P＜0.05),Western blot结果显示特发性少精症患者组睾丸组织中凋亡蛋白E2F1条带灰度值显著高于正常对照组(P＜0.05),凋亡率检测结果示特发性少精症组凋亡指数(AI)为(50.8±0.9)％,显著低于正常对照组的(1.3±1.2)％(P＜0.05).结论 miR-17-5p表达减少可能通过上调凋亡蛋白E2F1表达,而促进睾丸生精细胞过度凋亡,导致特发性少精.
-
转移性雄激素非依赖性前列腺癌患者生存预后研究
目的 分析转移性雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)患者生存资料,探讨影响其生存预后相关因子.方法 分析2005年6月至2012年12月本院收治的132例晚期转移性前列腺癌在内分泌治疗期间进展为AIPC的病例.应用统计学软件进行生存预后分析,采用Kaplan-Meier法行生存函数分析,采用Cox回归模型比较多种因素对生存时间的影响,采用Log-rank法进行显著性检验.结果 末次随访时20例生存,102例死亡,10例失访.中位生存时间为(25.0±3.1)个月.1、2、3年生存率分别为85％、53％、23％.单因素及多因素Cox回归模型分析显示基线前列腺特异性抗原(PSA)、AIPC时血红蛋白(Hb)、AIPC时碱性磷酸酶(ALP)、AIPC时乳酸脱氢酶(LDH)、二线内分泌治疗中PSA低值、AIPC时PSA倍增时间(PSADT)、一线内分泌治疗有效时间是晚期转移性AIPC独立预后因素.结论 基线PSA、一线内分泌治疗有效时间、AIPC时Hb、AIPC时ALP、AIPC时LDH、AIPC时PSADT、二线内分泌治疗中PSA低值为AIPC独立预后因素.
关键词： 雄激素非依赖性前列腺癌 预后因子 -
单层连续胰肠端端吻合联合大网膜环形包裹在胰十二指肠切除术中的应用
目的 探讨在胰十二指肠切除术(PD)中采用单层连续胰肠端端吻合联合大网膜环形包绕对预防胰瘘的作用.方法 本治疗组61例PD中,应用传统胰空肠套入式32例,单层连续胰肠端端吻合29例,分析两组胰肠吻合时间、胰瘘等情况.结果 患者均顺利完成手术,胰肠吻合时间传统法为(26.0±5.0)min,单层连续法为(12.8±1.3) min;胰瘘发生率传统法为12.50％,单层连续法为6.89％;传统法出现消化道出血2例,两组均无胆瘘及围手术期死亡病例,术后住院时间:传统法为(17.3±4.1)d,单层连续法为(15.6±3.8)d.结论 单层连续胰肠端端吻合联合大网膜环形包裹术,操作简单,吻合时间短,能降低胰瘘发生率.
-
异氟醚对肾下型腹主动脉瘤患者心肌的保护作用
目的 探讨非体外循环下异氟醚麻醉对肾下型腹主动脉瘤患者心肌的保护作用.方法 80例腹主动脉瘤患者,行常温非体外循环下腹主动脉置换术,随机分为异氟醚组和七氟醚组,各40例,记录入手术室时、切皮时、进入腹腔时及手术结束时心率(HR)、平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)和术中心血管不良事件发生;检测切皮时、手术结束时、术后2h及术后4h血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)及心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的浓度.结果 异氟醚组心血管不良事件(52例)与七氟醚组(65例)发生率差异无统计学意义(P＞0.05);进入腹腔时异氟醚组HR[(63.5 ±5.0)次/分]及MAP[(84.3±3.9)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]高于七氟醚组[(59.5±5.0)次/分及(78.4±4.1) mmHg,P＜0.05],手术结束时异氟醚组MAP[(73.8±3.1) mmHg]高于七氟醚组[(70.8±5.8) mmHg,P＜0.05];手术结束时异氟醚组cTnⅠ[(0.99±0.22) μg/L]低于七氟醚组[(1.17±0.29) μg/L,P＜0.05],术后2h异氟醚组CK-MB[(2.33 ±0.67) U/L]和cTnⅠ[(1.03 ±0.31) μg/L]低于七氟醚组[(2.98 ±0.36) U/L和(1.38±0.33) μg/L,P＜0.05],术后4h异氟醚组CK-MB[(3.09±0.51) U/L和cTnⅠ[(1.15 ±0.42) μg/L]也低于七氟醚组[(5.87 ±0.23) U/L和(1.53 ±0.62) μg/L,P ＜0.05].结论 在常温非体外循环下行腹主动脉瘤开放手术时,麻醉药物异氟醚具有较好的保护心肌,减轻心肌缺血再灌注损伤的作用.
-
基于超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术的膀胱癌患者尿液代谢组学分析
目的 通过尿液代谢组学分析,探讨能早期识别膀胱癌的尿液生物标志物.方法 选取膀胱癌确诊患者23例以及正常体检对照者21例,利用超高效液相色谱-高分辨率质谱联用技术(UPLC-HRMS)分析并比较膀胱癌患者与正常人尿液代谢物指纹图谱.采用正交偏小二乘法判别法(OPLS-DA)分析早期膀胱癌患者与正常人尿液的差异代谢产物,利用UPLC-QTOF对差异产物进行结构确证.分析受试者工作特征(ROC)曲线,比较差异代谢产物在膀胱癌早期诊断中的价值.结果 尿液代谢谱分析共发现17种潜在差异代谢物,并通过结构鉴定其中5种代谢物.ROC分析终确定2种具有潜在诊断能力的代谢物:2-辛烯二酸[OEA,FC=4.63,P＜0.01;曲线下面积(AUC) =0.787],2-羟基-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙酸(VA,FC=0.22,P＜0.01;AUC=0.762).利用两者比值则可达到更好诊断性能(OEA∶ VA,AUC=0.867).结论 基于UPLC-MS代谢组学技术对膀胱癌患者尿液代谢谱进行分析,探讨了膀胱癌发生过程中代谢变化规律,并发现2种尿液代谢标志物.
-
p16和Smad4表达缺失在肺腺癌预后的意义
目的 探讨p16和Smad4在人肺腺癌组织中的表达缺失及其与临床病理特征和预后的关系.方法 免疫组织化学法检测p16、Smad4蛋白在120例肺腺癌组织中的表达缺失,探讨p16和Smad4缺失表达与肺腺癌患者临床病理因素及预后的关系.结果 p16和Smad4在肺腺癌组织中的表达缺失率分别为45.0％和62.5％.p16的表达缺失与肿瘤的淋巴结转移(P＜0.01)和临床病理分期明显相关(P＜0.01),Smad4的表达缺失与肿瘤大小(P＜0.05),淋巴结转移(P＜0.05)以及肿瘤分化程度(P＜0.05)明显相关.p16和Smad4的表达缺失率与患者总生存期呈负相关(P＜0.01),p16和Smad4表达共缺失者的总生存期短(P＜0.01).p16的表达缺失率与Smad4的表达缺失率呈正相关(r =0.182,P＜0.05).结论 p16和Smad4在肺腺癌中表达缺失与肺腺癌的恶性生物学行为和不良预后有关.
-
胰岛素样生长因子-1在大肠癌患者血清中的表达及临床意义
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在大肠癌患者血清中的表达及其临床意义.方法 采用放射免疫分析法(RIA法)检测32例正常人及62例大肠癌患者手术前血清IGF-1水平,并对42例大肠癌患者手术前后血清IGF-1水平进行比较.结果 血清IGF-1水平与大肠癌患者临床分期、细胞分化程度明显相关,与大肠癌患者性别、年龄无明显相关;大肠癌患者血清IGF-1水平[(255.85 ±56.59) μg/L]明显高于正常对照组[(155.04 ±21.37) μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.01);Ⅳ期大肠癌患者血清IGF-1水平[(309.09 ±50.95) 上g/L]明显高于Ⅲ期患者[(274.40±44.47) μg/L]、Ⅲ期患者明显高于Ⅱ期患者[(236.17 ±35.36) μg/L]、Ⅱ期患者明显高于Ⅰ期患者[(201.50 ±38.51) μg/L]、Ⅰ期患者明显高于正常对照组,两者差异有统计学意义(P＜0.05);肿瘤细胞分化程度较差(低分化腺癌、印戒细胞癌、黏液腺癌)大肠癌患者血清IGF-1水平[(272.60±53.80) μg/L]明显高于肿瘤细胞分化程度较好(高分化腺癌、中分化腺癌)者[(232.65±52.89) μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.05),大肠癌患者术后血清IGF-1水平[(229.83±46.08) μg/L]明显低于术前[(235.24 ±45.98) μg/L],两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血清IGF-1可能与大肠癌的发生发展有关.
关键词： 大肠癌 胰岛素样生长因子-1 -
肺癌患者血浆、支气管肺泡灌洗液中TMS1/ASC基因启动子甲基化状态研究
目的 探讨肺癌患者血浆和支气管肺泡灌液(BALF)中甲基化诱导静止基因TMS1/ASC启动子甲基化状态及其在肺癌诊断中的价值.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测92例肺癌患者和20例肺部良性病变患者血浆和BALF中TMS1/ASC基因启动子甲基化状态.结果 肺癌组血浆和BALF中TMS1/ASC基因启动子甲基化阳性率分别为27.2％和32.6％.肺良性病变组血浆和BALF中均未检测到TMS1/ASC基因启动子甲基化(x2值分别为6.997、8.908,P＜0.05).TMS1/ASC基因启动子甲基化状态与肺癌患者的性别、病理类型、临床分期和有无淋巴结转移无明显相关.结论 血浆和BALF中TMS1/ASC基因启动子甲基化检测有助于肺癌诊断.
-
细胞外信号调节酶5与微小RNA-145在前列腺癌组织中表达的关系
目的 探讨细胞外信号调节酶5(ERK5)与微小RNA-145(miR-145)在前列腺癌组织中表达及两者之间的关系.方法 分别采用免疫组织化学和原位杂交的方法检测组织芯片上40例前列腺癌患者80点前列腺癌组织以及15点周围正常组织中ERK5与miR-145的表达,并与临床病理特征进行统计学分析.结果 ERK5在前列腺癌组织中阳性表达率为77.5％,而在癌旁组织阳性表达率为26.7％,两者表达差异有统计学意义(P＜0.05).miR-145在前列腺癌组织表达率为27.5％,在癌旁组织阳性表达率为62.5％,两者差异有统计学意义(P＜0.05).ERK5表达与患者的Gleason评分、前列腺特异抗原(PSA)水平、临床分期明显相关(P＜0.05).miR-145在Ⅱ期的前列腺癌患者的表达率明显高于Ⅲ期,ERK5与miR-145在前列腺癌中呈负相关.结论 ERK5与miR-145在前列腺癌中表达呈负相关,提示miR-145与ERK5在前列腺癌发生及进展中密切相关.
-
炎性反应后二次感染打击免疫机制研究进展
创(烧、战)伤、休克、感染、外科大手术等是常见的引起严重急性炎性反应的疾病.经过积极治疗,部分患者在病情控制数天或数周后常因继发二次院内感染引发多器官系统衰竭(MOF)死亡[1].这一现象的共同点可概括为:首发全身炎性反应为“第一次打击”,引起一系列免疫反应变化后,再次受到致病微生物侵入,继发“二次感染打击”.其病情进展快,患者对治疗反应差,病死率很高.
关键词： -
乳腺癌干细胞相关基质研究进展
2003年,美国学者Al-Hajj等[1]发现仅100个表型为CD44+ CD24的乳腺癌干细胞(BCSCs)就可形成肿瘤.随后,有研究也表明乳腺癌的形成主要是由BCSCs始动形成,对乳腺癌的治疗需要根除BCSCs[2].肿瘤发展是肿瘤细胞和其周围微环境相互作用的一个过程,微环境中的基质细胞和细胞外基质对肿瘤的生长和转移起决定性作用.所以BCSCs也必然受到基质细胞和细胞外基质的影响,现就微环境中影响BCSCs的基质细胞和基质成分综述如下.
关键词： -
体外诱导滑膜间充质干细胞成软骨分化研究进展
间充质干细胞(MSCs)是一种成体干细胞,具有多向分化潜能等优点,作为种子细胞,在软骨损伤修复中有广阔的应用前景.MSCs来源丰富,可以从骨髓、脂肪、骨膜、肌肉以及滑膜等多种组织中获得.滑膜间充质细胞(SMSCs)由于来源广泛,取材方便,增殖能力强,而且具有比骨髓、骨膜、脂肪及肌肉来源的MSCs更好的成软骨能力,近年来深得广大研究学者的青睐.如何调控SMSCs高效地向软骨细胞分化是目前研究的重点之一.现就体外诱导SMSCs成软骨分化的研究作一综述.
关键词： -
机械应力对脂肪组织中细胞的影响的研究进展
自1957年Neumann报道软组织扩张器以来,通过不断的改进和推广,软组织扩张术已成为整形外科的常规治疗手段之一.皮肤软组织扩张器是通过间断地向扩张囊内注射液体以增加扩张器容量,使其对表面皮肤软组织产生压力.体外负压吸引装置通过应用来自外部的负压扩张皮肤和软组织,即通过持续、低水平的负压产生一个向外的牵张力来刺激乳房组织的增生,以达到隆乳的目的,它的主要优势是外部装置,排除了外科手术[1].一个压力装置产生的力通过各种机械应力作用,包括剪切力、拉伸、紧张、牵引和压缩,传递到细胞和亚细胞结构,通过一系列传导路径转变成生物信号[2].目前已经证实应用的机械应力能影响组织生长、细胞功能和甚至存活[3].
关键词： -
Apelin/孤儿受体信号通路概况及其在心血管疾病中的研究进展
1993年,孤儿受体(APJ)在人类基因组文库中被发现,是7次跨膜G蛋白耦联受体家族成员之一.其氨基酸序列与人血管紧张素Ⅲ1型受体(AT1 R)的同源性达到31％,但它不与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)结合.APJ没有亚型,是目前唯一已知的Apelin受体.Apelin是于1998年从牛胃中分离提取的内源性肽段,其前体由77个氨基酸组成,可被血管紧张素转换酶(ACE)裂解成一系列多肽,包括Apelin-13、Apelin-16、Apelin-17、Apelin-19、Apelin-36及焦谷氨酸型Apelin-13([Pyr1]-Apelin-13)[1].Apelin和APJ构成的信号通路广泛表达于不同组织,包括心脏、肾脏及血管,在心血管系统中尤甚[2].
关键词： -
细胞诱导肝移植免疫耐受的研究进展
肝移植作为治疗急性肝功能衰竭和终末期肝病的有效的方法,已得到广泛认可.但是,肝移植术后的急性和慢性排斥反应一直是术后肝功能缺失的主要原因之一.现就常见的细胞移植对移植肝功能的修复和诱导免疫耐受的作用作一综述.
关键词： -
雷帕霉素靶蛋白信号通路在肝脏恶性肿瘤中的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路在细胞的代谢、生长、增殖中发挥关键作用,是肝细胞性肝癌(HCC)主要的肿瘤启动信号通路之一,在超过50％的HCC中高表达.现对mTOR信号通路的生化过程及成瘤机制,特别是在肝脏恶性肿瘤中的研究进展做一综述.
关键词： -
布-加综合征并发肝细胞肝癌研究进展
布-加综合征(B-CS)是由肝静脉和/或下腔静脉梗阻而引起的门静脉高压症和/或下腔静脉高压综合征,可造成急慢性的肝功能损伤[1].研究表明,B-CS是肝细胞肝癌(HCC)的危险因素[2],在所有HCC患者中以B-CS作为病因的约占0.7％[3].由于B-CS独特的病理生理特点,B-CS并发的HCC与其他病因所致的HCC有着不同之处.B-CS患者中HCC的发病率为2.0％～51.6％不等,累计发病率可达17.6％[4].但是B-CS并发HCC的机制尚不明确,现就其影响因素的研究进展做一综述.
关键词： -
膜联蛋白家族与胃癌的相关性研究进展
胃癌的发生涉及多种基因及其蛋白产物的异常变化,是一个多步骤、多因素、进行性发展的过程.膜联蛋白家族(Annexins)是一类广泛分布于动、植物各种组织和细胞中的Ca2+依赖磷脂结合蛋白家族,具有与磷脂膜可逆结合及与钙离子结合的能力.Annexins分为A、B、C、D、E5个家族,由2个结构域组成,即守恒的C端结构域和1个可变的N端结构域.Annexins C端结构域高度保守,它是由4个或者8个氨基酸序列组成基团的重复,每个基团由70个氨基酸残基携带Ca2+和磷脂结合位点.N端包含20～ 200个氨基酸残基[1],是更可变的结构,不同的Annexins亚型其N端结构域显著不同.Annexins参与细胞信号传导、钙离子通道的形成、炎性反应、肿瘤细胞的增殖与分化、细胞骨架蛋白间的相互作用和维持细胞外基质的完整性等[2].近年来的研究结果显示,Annexins与胃癌的发生、侵袭、转移等病理过程密切相关,本文旨总结Annexins与胃癌发生发展的相关性,为临床和基础研究提供参考.
关键词： -
大鼠低氧血症性二次脑损伤模型的建立
目的 建立创伤性轴索损伤(TAI)合并低氧血症性二次脑损伤(SBI)大鼠模型,探讨低氧血症SBI损伤机制.方法 应用自制的TAI致伤装置,对致伤后大鼠给予10％浓度氧30 min制成低氧血症性SBI模型,对大鼠伤后生理学、病理学进行分析评价,同时测定伤后脑组织的丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)水平.结果 合并低氧血症SBI大鼠伤后海马存活神经元减少(104个比134、186个),脂质过氧化(LPO)增强(24 h时MDA:7.60 nmol/mg蛋白比5.43、2.77 nmol/mg蛋白;SOD:77.20 U/mg蛋白比99.93、116.37 U/mg蛋白),与单纯TAI组及低氧血症组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 该模型较好的复制了低氧血症SBI的临床特征,具有良好的稳定性和重复性.
-
高分子心瓣膜材料的体内评价:一种新型大动物模型
目的 建立无需体外循环,同时在体循环和肺循环植入高分子心瓣膜材料的实验模型,对比研究材料在体循环和肺循环中的生物相容性和耐久性.方法 雄性绵羊5只,体质量为(22.4±1.8) kg.左胸后外侧切口,将超微孔膨体聚四氟乙烯(ePTFE)单瓣植入到降主动脉起始部和左肺动脉开口处.术后饲服阿司匹林1个月.随访20周后尸检.结果 5只羊手术均成功,均存活到20周.ePTFE薄膜除1个在左肺动脉处贴壁外,其余均保持张开状态,且无论在降主动脉还是左肺动脉,均无血栓、钙化或降解.左肺动脉ePTFE上有明显新生内膜,致其增厚、欠柔软;降主动脉ePTFE无新生内膜,表面光滑、柔软.结论 该模型提供了一种对高分子心瓣膜材料行体内评价的有效、安全的方法,既节约动物数量,又能对照观察材料在体循环、肺循环中的不同表现.
-
AGO1调节p53表达与肝细胞癌根治性切除患者预后的相关性
目的 探讨AGO1在肝细胞癌中的表达、功能及根治性切除术后的预后价值.方法 检测不同转移潜能的肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97L和HepG2中AGO1 mRNA和蛋白表达.利用小干扰RNA,检测AGO1表达抑制后对HCCLM3和HepG2增殖侵袭功能和p53表达的影响.在200例行根治性切除的肝细胞癌患者肿瘤组织芯片中进行免疫组织化学染色,分析AGO1表达与患者预后的关系.结果 AGO1在人肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97L及HepG2的mRNA表达量分别为0.400±0.025、0.188 ±0.022及0.154 ±0.019,高转移潜能肝癌细胞株表达显著高于低转移潜能肝癌细胞株(P＜0.05).细胞增殖、侵袭及p53表达在AGO1表达抑制后显著下降.肿瘤组织中AGO1表达与较小的年龄(P＜0.05)、较高的血清甲胎蛋白(AFP)值(P＜0.01)、HBeAg阳性状态(P＜0.05)、肝硬化(P＜0.05)、肝内或肝外复发(P＜0.01)呈正相关,且为总体生存率(OS,P＜0.01)和无瘤生存率(DFS,P＜0.01)的独立危险因素.结论 AGO1可能提高了肝癌的增殖转移能力,且与p53通路相关.AGO1可能成为肝细胞癌的预后指标.
-
载肝细胞生长因子的纳米粒子对大鼠移植肝细胞生存的影响
目的 探讨载肝细胞生长因子(HGF)的聚乳酸-氧-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子对大鼠肝细胞移植后移植肝细胞生存的影响.方法 Seglen原位两步灌流法分离大鼠肝细胞,培养24 h后分别将5ml常规胶原大鼠肝细胞悬液(5.0×107个细胞,下同)(A组)、5 ml PLA-O-CMC纳米粒子大鼠肝细胞(B组)、5 ml载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子大鼠肝细胞(C组)移植到大鼠腹腔内,5 ml PLA-O-CMC纳米粒子大鼠肝细胞腹腔移植加每日静脉注射HGF 10 μg/kg ×7 d(D组).观察各组培养1d和腹腔肝细胞移植后移植肝细胞的超微结构变化.观察移植前培养液和受体腹腔渗液丙氨酸转移酶(ALT)和门冬氨基转移酶(AST)水平变化.流式细胞仪检测培养和移植肝细胞凋亡率、坏死率及存活率.结果 移植肝细胞的存活时间以C组长,达7d,术后3～7 d移植肝细胞的电镜变化A组核质浓缩为明显,C组内质网为丰富.移植后1d时腹腔渗液ALT A组＞C组(1 002.68 ±229.37) U/L比(770.62 ±120.77) U/L,P＜0.05].移植后1、3、5d,活率B、C、D组＞A组(P＜0.05),其中5d时C组[(59.51±1.59)％]＞D组[(55.98±2.27)％,P＜0.05];移植后3、5d凋亡率A组＞B、C、D组(P＜0.05);移植后1、5d,坏死率A组＞B、C、D组.结论 载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞腹腔内移植后有提高移植肝细胞活率的作用,延长其生存时间并促进其功能表达.
-
乙肝相关性肝移植受者术前树突状细胞表型、功能的研究
目的 观察乙肝相关性肝移植受者术前体外培养的单核细胞来源的树突状细胞(DC)免疫表型、功能变化.方法 通过DC生成培养基体外诱导健康人(对照组)和拟行肝移植的乙肝患者(患者组)DC,并分别负载乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝核心抗原(HBcAg)诱导成熟,比较两组DC形态、表型、刺激淋巴细胞的增殖能力及培养上清中白细胞介素(IL)-12、IL-10分泌量的变化,并检测患者组中负载HBsAg和HBcAg抗原成熟的DC(负载组,n=9)与未负载抗原成熟的DC(未负载组,n=9)诱导辅助性T细胞(Th)极化的能力.结果 患者组和对照组的CD83阳性率分别为(53.10±16.23)％、(81.91±9.20)％ (P ＜0.01),人类白细胞DR抗原(HLA-DR)及CD40/CD80/CD86等共刺激信号分子阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05).患者组DC刺激自体T细胞增殖能力降低(P＜0.05).患者组IL-12、IL-10浓度分别为(141.94±58.81)、(12.86±5.72) ng/L,与健康组比较差异无统计学意义(P＞0.05).未负载组与负载组诱导T细胞极化(Th1)比例分别为(7.59±2.62)％、(11.17±1.11)％(P＜0.05).结论 乙肝相关性肝病肝移植患者术前DC的表型、功能受到一定的抑制,但在体外有效的负载抗原后亦能有效的诱导Th1应答,从而激活细胞免疫,提高患者主动免疫力.
-
脂肪酸合酶在肝癌中的表达及对其生物学功能的影响
目的 研究脂肪酸合酶(FASN)在肝癌细胞中的表达及其功能.方法 (1)采用免疫组织化学染色检测肝癌组织中FASN表达,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法,检测正常肝细胞及不同肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、SK-Hep-1)中FASN表达.(2)构建FASN ShRNA真核表达载体,干扰肝癌细胞SK-Hep-1中FASN表达后,检测对肝癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响.结果 (1)与癌旁组织比较,FASN在肝癌组织呈高表达(P＜0.05);与正常肝细胞系7702比较,FASN在肝癌细胞系均呈高表达,高转移性的肝癌细胞系MHCC97H与SK-Hep-1中FASN表达高于较低转移性的肝癌细胞系(P＜0.05).(2)干扰肝癌细胞SK-Hep-1中FASN后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制,而细胞凋亡不受影响.结论 (1)FASN在肝癌组织及肝癌细胞系中高表达,且高转移肝癌细胞系表达高于低转移肝癌细胞系;(2)FASN促进了肝癌细胞的增殖,侵袭和迁移,提示FASN可能与肝癌的发生及转移相关.
-
骨髓间充质干细胞移植干预大鼠肝纤维化/肝癌模型中转化生长因子-β1的作用
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植干预肝纤维化是否以转化生长因子-B1(TGF-β1)为作用靶点,并观察BMSCs对肝癌生长的影响.方法 建立四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型(n=16)和二乙基亚硝胺诱发性大鼠肝癌模型(n=16),分析TGF-β1在BMSCs移植减轻纤维化中的作用以及对肝癌发生的影响.结果 在大鼠肝纤维化模型中,模型组与干预组肝脏炎症活动度Scheuer评分均值为3.58和0.42(u=-4.22,P＜0.01),纤维化程度Schmid M评分为5.17和1.58分(u=-3.65,P＜0.01),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)评分为2.25和0.58分(u=-2.93,P ＜0.01),TGF-β1含量在两组间差异有统计学意义(F=11.024,P＜0.05).在大鼠肝癌模型中,BMSCs移植可以抑制细胞周期(G1期:P＜0.01,G2期:P＜0.01,S期:P＜0.01),但不能减少肝癌发生(P＞0.05),TGF-β1的含量在两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs移植可能通过抑制TGF-β1的分泌、减少肝星状细胞激活而减缓肝纤维化;BMSCs移植可以抑制细胞周期,其作用并非通过TGF-β1途径.
-
人脐带间质干细胞体外条件下调控人肝细胞生长及功能的研究
目的 探讨人脐带间质干细胞体外条件下调控人原代肝细胞增殖及功能的作用及其机制.方法 实验组将人脐带间质干细胞/原代肝细胞按1 ×105/1 ×105(个/孔)的比例接种于Transwell共培养板上下层共培养;对照组为原代肝细胞单独培养;共培养1、3、7d后应用流式细胞仪分析细胞周期;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白蛋白(ALB)和尿素的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALB、细胞角蛋白-18(CK18)、肝细胞生长因子(HGF)及c-met mRNA的表达.结果 共培养1、3、7d后原代肝细胞处于S期细胞比例与对照组比较明显增多,且增殖作用随共培养时间的增多而加强,差异有统计学意义(55.71％ ＞44.53％ ＞36.02％ ＞29.13％,P＜0.05);共培养组ALB分泌量(μg/L)明显增加,差异有统计学意义(21.18＞ 17.12,30.90＞ 13.46,15.14＞8.80,P ＜0.05),尿素分泌量(mg/L)得出同样的结果(211.18＞ 190.40,280.84＞ 75.64,152.06＞ 33.90,P ＜0.05),在共培养各组别中,共培养3d时,尿素及白蛋白达到峰值,差异有统计学意义(P＜0.05),而且共培养7d时仍保持较高水平的尿素及白蛋白分泌水平,与共培养1d比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组比较,共培养各组别(1、3、7d)均可上调细胞内ALB、CK18、HGF及c-met mRNA的表达,共培养3d时原代肝细胞(PHHs)细胞内ALB mRNA上调显著,而CK18、HGF及c-met mRNA的表达上调则在共培养7d时为显著.结论 人脐带间质干细胞在体外条件下可通过旁分泌机制促进人原代肝细胞的生长增殖,保护其细胞功能,上调人原代肝细胞内HGF及其受体的表达可能是其中的机制之一.
-
血管内皮细胞培养上清对肝癌细胞Hep3B增殖、侵袭影响
目的 观察血管内皮细胞培养上清对肝癌细胞Hep3B增殖及侵袭转移能力的影响,探讨肿瘤微环境中内皮细胞在肝癌发生、发展中的作用.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养上清为条件培养液(CM),以内皮细胞培养液(EBM)为对照组,分别对Hep3B细胞进行干预.观察其对肝癌细胞Hep3B增殖、迁移和侵袭能力的影响,并检测相关信号通路分子.结果 与对照细胞比较,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验结果显示CM促进肝癌细胞的增殖(P＜0.01);细胞划痕实验和迁移实验也分别显示CM明显促进肝癌细胞迁移能力[(33.65±1.22)％比(57.85±2.20)％,P ＜0.01;(51.2±3.1)个比(28.4±4.6)个,P＜0.01];侵袭实验显示CM明显诱导肝癌细胞侵袭能力[(16.2±2.3)个比(5.4±1.5)个];同时CM干预的肝癌细胞侵袭转移相关基因,如基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、骨桥蛋白(OPN)和簇分化抗原44(CD44)表达及丝氨酸/酪氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白磷酸化水平均被明显上调.结论 血管内皮细胞培养上清体外促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭转移,提示血管内皮细胞可通过旁分泌机制参与肝癌侵袭转移过程.
-
肝尾状叶代偿功能的研究
目的 探讨选择性结扎大鼠除肝尾状叶以外的门静脉分支,使尾状叶增生代偿后,再行仅保留尾状叶的次全肝切除术的可行性和安全性.方法 将40只SD雄性大鼠随机分成实验组(结扎尾状叶以外的门静脉分支)和假手术对照组(仅开腹而不行门静脉结扎),术后第3、7、14、21天两组各5只大鼠采血检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白、总胆红素、直接胆红素水平,并处死大鼠,测量尾状叶比重.苏木素-伊红染色,光镜下观察实验组结扎侧与非结扎侧肝叶的病理形态变化,用免疫组织化学方法检测肝细胞增殖核抗原(Ki-67)的表达.另取实验组与对照组各20只大鼠第1次手术同前,但术后第21天均行仅保留肝尾状叶的次全肝切除术,术后统计两组生存率.结果 实验组大鼠ALT在术后第3、7、14天明显高于对照组[(57.28 ±8.95)比(165.07±19.15) U/L、(67.03±13.46)比(131.24±9.51) U/L、(67.03±13.46)比(100.16±5.20) U/L,P＜0.01],AST在术后第3、7、14天也高于对照组[(148.89±37.64)比(853.61±276.33) U/L、(146.34±39.06)比(730.19±169.81) U/L,P＜0.01;(143.13±23.30)比(129.82±18.80) U/L,P＜0.05],白蛋白在术后第7天有所降低[(39.65±2.49)比(25.91±2.21) g/L,P＜0.01].胆红素值两组差异无统计学意义(P＞0.05).肝尾状叶在术后前3d代偿增生速度迅速,在术后7～14d达到平台期.行仅保留尾状叶的次全肝切除术后,实验组10d生存率为80％ (16/20),高于对照组的20％(4/20),两组的生存时间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过选择性结扎SD大鼠除尾状叶以外的门静脉分支,使尾状叶代偿性增大后再行肝大部切除术安全可行.
-
神经菌毛素-1促进肝星状细胞活化对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭能力的影响
目的 观察神经菌毛素-1(NRP-1)通过促进肝星状细胞(HSC)活化增殖进而对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 构建NRP-1腺病毒载体pDC315-NRP-1-3 Flag,感染LX2细胞;Western blot检测NRP-1蛋白表达水平,细胞免疫化学法检测LX2中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及NRP-1表达水平;通过噻唑蓝(MTT)、Transwell间接共培养检测LX2及HepG2细胞增殖能力,Transwell实验检测HepG2细胞侵袭和迁移能力.结果 构建人NRP-1基因重组过表达腺病毒pDC315-NRP-1-3Flag,佳感染滴度为2.0×106 PFU/ml,48 h感染效率可达90％以上,Western blot示感染后LX2细胞NRP-1表达增高,转染48 h后NRP-1表达较高水平,细胞免疫化学显示转染组LX2的α-SMA及NRP-1表达增高.MTT检测显示NRP-1过表达组LX2增殖能力强于空载体组及未转染组,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞共培养实验证实LX2可促进HepG2的增殖、侵袭及迁移能力,NRP-1过表达组LX2对HepG2的促进作用更为明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人NRP-1基因重组腺病毒可稳定转染LX2细胞,NRP-1可促进LX2的活化及增殖,继而促进HepG2细胞增殖及侵袭、迁移能力.
-
甲基泼尼松龙对外科型慢加急性大鼠肝衰竭的作用
目的 观察糖皮质激素甲基泼尼松龙(简称甲强龙)对外科型慢加急性大鼠肝衰竭的治疗作用.方法 在大鼠胆总管双重结扎梗阻性黄疸14 d模型的基础上进行下一步造模,第2次手术为胆十二指肠内引流、肝缺血再灌注30 min、30％肝部分切除,并经门静脉及尾静脉注射甲强龙,术后6h检测大鼠的肝功能、细胞因子水平、肝组织病理学特点和肝细胞超微结构,并观察24 h生存率.结果 对照组大鼠丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)值及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)水平分别为(2436.5±518.1)、(3519.1±414.6)、(156.3 ±33.7) U/L;(419.6±162.1)、(581.3±178.1) ng/L,肝组织病理和电镜超微结构表明符合肝衰竭特点.与对照组比较,分别尾静脉和门静脉注射甲强龙均可以显著提高肝衰竭动物的24 h生存率,显著降低其ALT、AST、TBIL水平,降低TNF-α、IFN-γ,减轻肝脏组织病理损伤和肝细胞线粒体的肿胀程度,并且经门静脉注射明显优于经尾静脉注射(P＜0.05).结论 甲强龙对外科型慢加急性肝衰具有保护治疗作用,且经门静脉给药效果佳.
-
供受体白细胞介素-6 rsl800796位点单核苷酸多态性与肝移植术后患者他克莫司浓度/剂量比值的关系
目的 探讨白细胞介素-6(IL-6) rsl800796位点单核苷酸多态性(SNPs)对肝移植术后他克莫司(FK506)浓度/剂量(C/D)比值的影响.方法 采用酶联免疫吸附试验试剂盒,检测79例肝移植患者术后FKS06的全血浓度,并记录术后4周内全血谷浓度和给药剂量.检测供受体rsl800796位点的SNPs,并比较该位点SNPs对FKS06 C/D值的影响.采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组织化学染色检测供肝组织IL-6 mRNA和蛋白表达.结果 肝移植术后第2和3周,仅供体IL-6 rs1800796位点SNPs与FK506相关(P＜0.05),而与受体无相关.快代谢组供肝组织IL-6表达(△Ct值6.6±1.2)高于慢代谢组(△Ct值7.7±1.1),差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学显示IL-6在快代谢组肝组织的中等表达率为80.0％(24/30),高于慢代谢组[48.4％(15/31)],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体IL-6 rs1800796位点SNPs与肝移植术后早期他克莫司C/D值密切相关.
-
甲胎蛋白抗原肽修饰的白细胞介素-15慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 构建甲胎蛋白(AFP)抗原肽修饰的白细胞介素-15(IL-15)基因慢病毒表达载体,包装慢病毒,体外感染人B细胞淋巴瘤细胞(BJAB)细胞,使之能够高效地表达甲胎蛋白抗原肽AFP158-166及IL-15,为体外大量扩增特异性T淋巴细胞建立实验基础.方法 通过聚合酶链反应(PCR)方法获得IL-15基因片段,定点突变方法在过渡质粒信号肽序列中插入AFP158-166表达基因,双酶切后克隆到第3代慢病毒载体pEZ-Lv201,酶切、测序鉴定正确后命名为CCS-afpIL15-Lv201.重组质粒与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒,体外感染BJAB细胞,ELISA检测IL-15的表达,液相色谱-质谱联用技术检测AFP抗原肽表达.结果 酶切、测序显示CCS-afpIL15-Lv201载体序列正确,制备成慢病毒感染BJAB细胞后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-15的表达,24、48 h表达量分别为892.7 ng/L和1 232.6 ng/L.液相色谱-质谱联用技术检测到AFP抗原肽表达,其相对分子质量为1 204.65.结论 成功构建协同表达AFP、IL-15的慢病毒载体,并制备了具有感染性的慢病毒,实现了其在肿瘤细胞的高效表达.
-
吲哚菁绿试验对巴塞罗那临床肝癌分期B期肝癌患者手术风险评估
目的 分析巴塞罗那临床肝癌分期(BCLC)-B期行手术切除的肝癌患者的临床资料,探讨吲哚菁绿试验对于评估肝癌切除术后围手术期出现肝功能衰竭的价值.方法 分析62例行吲哚菁绿试验并行非规则肝切除术的BCLC-B期肝癌患者的临床资料.评估吲哚菁绿试验15 min留滞率(ICG-R15)对于围手术期出现肝功能衰竭的价值.结果 术后肝功能衰竭组与非肝功能衰竭组对比,ICG-R15、Child-Pugh分值行t检验,差异有统计学意义(P＜0.05).对ICG-R15和Child-Pugh分级分别进行x2检验,差异有统计学意义.ICG-R15对于评估术后出现肝功能衰竭的敏感性为90.0％.ICG-R15与Child-Pugh分级呈正相关(r=0.68,P＜0.01).结论 ICG-R15是评估肝脏储备功能的敏感指标,ICG-R15与Child-Pugh分级呈正相关,ICG-R15结合Child-Pugh分级能更好的评估肝脏功能,预测术后肝功能衰竭.对于BCLC-B期肝癌患者,结合术前肝脏功能的综合分析,当ICG-R15＜15％、Child-PughA级时,可行非规则肝切除术;当ICG-R15＞ 20％、Child-PughB级时,禁忌手术;介于两者之间的患者,可先行保肝治疗后,再考虑手术治疗.
-
热休克蛋白70和葡萄糖调节蛋白78在肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的 检测热休克蛋白70 (HSP70)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其与临床病理资料及预后的关系.方法 采用Western blot和免疫组织化学染色的方法检测HCC及其癌旁肝组织中HSP70和GRP78的表达,分析其与临床病理特征的关系;应用Kaplan-Meier法及多因素Cox比例风险模型分析HSP70和GRP78表达与预后的关系.结果 HSP70及GRP78蛋白在HCC组中的相对表达量明显高于癌旁肝组织(0.879±0.556比0.240±0.156,P＜0.01;0.515±0.353比0.202±0.132,P＜0.01);HSP70阳性表达与肿瘤的大小、乙型肝炎病毒(HBV)感染、Edmondson分级、分化及TNM分期密切相关(P＜0.05),GRP78阳性表达与Edmondson分级、分化、微血管侵犯、TNM分期及复发密切相关(P＜0.05).单因素生存分析显示HSP70和GRP78蛋白阳性表达组生存率明显低于阴性表达组(P＜0.05);多因素Cox回归分析结果显示TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤大小及复发是反映肝癌患者预后的独立危险因素,其相对危险度分别为1.502、1.971、2.267及4.746.结论 HSP70和GRP78过表达参与了HCC的发生和发展.
-
细胞增殖抑制基因对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖与凋亡的影响
目的 观察细胞增殖抑制基因(HSG)对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖与凋亡的影响.方法 制备携带HSG基因的重组腺病毒载体,瞬时转染至大鼠肝星状细胞HSC-T6,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测细胞中HSG信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析HSG对细胞周期和凋亡状态的影响,Western blot检测HSG对细胞周期蛋白激酶抑制剂p21、p27及细胞增殖核抗原(PCNA)的作用.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染组HSG的mRNA(14.93 ±1.10比1.03±0.33,14.93±1.10比1.00 ±0.15)和蛋白表达量明显增加(P＜0.05);转染后细胞生长减缓,细胞增殖活性明显受到抑制(P＜0.05);转染组G0/G1期细胞比例和凋亡率分别为[(66.57±1.29)％、(23.88 ±0.96)％],与空白对照组[(49.32±2.86)％、(3.38±0.16)％]和阴性对照组[(52.46±3.17)％、(3.54±0.24)％]比较明显增高(P＜0.05);转染后细胞周期调控蛋白p21、p27表达升高,PCNA表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HSG基因过表达可有效的抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6的增殖,使其阻滞于G0/G1期并诱导其凋亡,并可能是通过参与细胞周期的调节发挥作用.
-
猪骨髓间充质干细胞与肝细胞共培养的比较蛋白质组学研究
目的 比较猪骨髓间充质干细胞(MSCS)与原代肝细胞构建共培养体系前后肝细胞内蛋白质表达谱的差异.方法 体外建立肝细胞与MSCS适共培养体系.流式细胞仪分选共培养肝细胞),并设立肝细胞、MSCS单纯培养组作为对照.采用双向凝胶电泳分离后,将差异蛋白点进行胶内原位切割、酶解后,获得肽质指纹谱.并通过Western blot技术进一步验证.结果 经质谱鉴定出34个蛋白点,Western blot检测证实囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)、白细胞介素(IL)-6、人高迁移率族蛋白(HMG)-1变化水平与蛋白质组结果基本一致.结论 这些功能蛋白的差异表达可能与MSCS和原代肝细胞体外共培养下肝细胞特异性功能改善、细胞生存时间延长、免疫调节存在必然联系.
-
膜联蛋白A5在肝细胞肝癌患者外周血及癌组织中的表达
目的 探讨膜联蛋白A5(ANXA5)在肝细胞肝癌患者外周血及癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法 将148例患者分为肝细胞肝癌组及正常对照组,其中肝细胞肝癌组82例,正常对照组66例,包括肝血管瘤患者47例、肝内胆管结石7例、肝挫裂伤12例;收集两组患者的血清及组织标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组患者外周血中ANXA5的含量,免疫组织化学法检测组织标本中ANXA5的表达.结果 肝细胞肝癌患者血清中ANXA5的含量为(46.22 ±21.02) μg/L,明显高于正常对照组的(33.13 ±12.44) μg/L(P＜0.05),肝细胞肝癌组中ANXA5的阳性表达率为68.29％,正常对照组为22.72％(P＜0.05);甲胎蛋白(AFP)值较高、分化程度较低、肿瘤直径较大、感染乙型肝炎病毒(HBV)以及发生复发转移的肝癌患者癌组织中ANXA5的表达显著升高(P＜0.05);但患者血清中ANXA5的浓度与AFP浓度之间无明显相关(P＞0.05).结论 ANXA5的高表达可能与肝细胞肝癌的发生发展密切相关.
-
骨髓间充质干细胞在移植肝中的定居
目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)在移植肝中的定居.方法 通过密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,应用流式细胞仪鉴定细胞表面抗原(CD45、CD44、CD90)的表达,分别用0.5、1.5、2.5 mg/L浓度的4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对间充质干细胞标记12h,在荧光显微镜下观察细胞标记情况,用佳标记浓度标记的细胞在肝移植门静脉套管前注入移植肝中,分别在7、12d取冰冻病理标本,在荧光显微镜下观察间充质干细胞的定居情况.结果 密度梯度离心法成功分离培养出间充质干细胞,流式细胞仪鉴定结果显示CD90、CD44、CD45阳性表达率分别为97.1％、87.4％、1.1％.3种浓度的DAPI均能标记间充质干细胞,其中1.5 mg/L标记率高,达95％.移植术后7、12 d的病理标本中均能观察到荧光.结论 BMSCs能够成功定居在肝移植术后的肝脏中.
-
下调微小RNA-1表达对人肝癌血管内皮细胞生物学行为的影响
目的 通过构建慢病毒介导的微小RNA(miRNA)-1-小干扰RAN (siRNA),观察下调miR-1表达对人肝癌血管内皮细胞(TEC)生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-1-siRNA-GV159转染TEC,实验分为3组:(1)下调组(miRNA-1-siRNA,MD组);(2)阴性对照组(NC组);(3)空白对照组(CON组).分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 MTT结果显示MD组细胞在转染miRNA-1-siRNA-GV159后的第1、2、3、4、5天5个时间点均表现出吸光度值降低,与NC组及CON组比较差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞仪检测凋亡结果显示CON、NC、MD组凋亡率分别为(2.03±0.30)％、(2.18±0.15)％、(6.32±0.33)％,MD组细胞凋亡率比其他两组明显明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);而细胞周期检测结果显示3组之间差异无统计学意义(P＞0.05);划痕实验结果显示划痕12h后CON、NC、MD3组细胞的迁移距离分别为(270.6 ±44.5)、(299.5 ±28.7)、(198.4 ±49.6)μm,MD组和其他两组比较迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下调miRNA-1表达可抑制TEC的增殖能力,增加TEC的凋亡并降低其迁移能力.
-
肝癌实验研究的现状
肝细胞癌(简称肝癌)是常见的恶性肿瘤,在世界范围内为致死率第3位的恶性肿瘤,我国是肝癌的高发病地区,目前在我国是第2大肿瘤死亡原因[1].近年来围绕肝癌的发病机制及转移和复发开展了大量的研究,取得了一些喜人的成果,对于进一步的后续研究具有重要的指导作用.现概述近年来关于肝癌发病机制及治疗的实验研究现状,并探讨未来发展方向.
关键词： -
大数据时代我国实验外科发展的机遇和挑战
人类社会已经迈入大数据时代,生物医学领域的知识也呈现爆发式增长,“数据科学”应运而生.现代医学越来越依赖于数据、信息的服务支持,要解决当前生命科学的问题,需要从大数据进行解读.实验外科领域的很多研究与大数据密切相关,故应认真研究大数据的理论体系和相关技术,寻找大数据与外科科研的契合点,从而转变观念,建立互联网思维,开拓大数据实验外科的新阶段.
关键词：
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 |
